Abstract
Her præsenterer vi en protokol for forberedelse af akutte hjerneskiver. Denne procedure er et kritisk element for elektrofysiologiske patch-clamp-forsøg, der i høj grad bestemmer kvaliteten af resultaterne. Det er blevet vist, at udeladelse af afkølingstrin under skæring procedure er fordelagtig i at opnå sunde skiver og celler, især når det drejer sig meget myelinerede hjernens strukturer fra voksne dyr. Selvom den præcise mekanisme, hvorved forhøjet temperatur understøtter neurale sundhed kan kun spekuleret på, det er indlysende, at når det er muligt, skal temperaturen i hvilken udskæring udføres være tæt på fysiologiske betingelser for at forhindre temperatur relaterede artefakter. En anden vigtig fordel ved denne metode er den enkelhed af proceduren og derfor den korte forberedelsestid. I påvist metode anvendes voksne mus, men den samme fremgangsmåde kan anvendes med yngre mus såvel som rotter. Også de følgende patch clamp Forsøget udføres på horisontale cerebellare skiver, men den samme fremgangsmåde kan også anvendes i andre fly samt andre posteriore områder af hjernen.
Introduction
Formålet med den foreliggende fremgangsmåde er at få høj kvalitet akutte hjerneskiver til in vitro elektrofysiologiske eksperimenter, især når anvendelse af voksne eller endda gamle dyr.
Den akutte hjerne udskæring metode, som beskrevet af Skrede og Westgaard 1 i to elegante sætninger, er blevet en del af grundlaget for den moderne neurovidenskabelig forskning og er ansat i utallige variationer over hele verden. Kvaliteten af skiverne afspejles i antallet af levende neuroner pr skive, den periode, hvor cellerne holde deres elektrofysiologiske og morfologiske egenskaber såvel som i integritet af vævet. Desuden er den maksimale varighed for stabile optagelser afhænger af kvaliteten af skiverne. Således langs årtier, den oprindelige udskæring metoden er blevet videreudviklet af individuelle forskergrupper at forbedre skive genopretning efter opskæring 2-10, ofte ved komplekse ændringer af sammensætningen af opskæring or recovery løsninger (såsom tilføjelse ascorbat, thiourinstof eller endda H 2 O 2) samt intra-kardiale pre-perfusion af dyret med afkølede fysiologiske opløsninger.
Som det for nylig blevet vist 11, fysiologisk temperatur under udskæring synes at være mere fordelagtig end afkøling til neuronal sundhed; forbedringen er mest slående, når man arbejder med voksne (2-8 måneder) gnavere. Undgå dramatiske temperaturændringer forhindrer artefakter som følge af temperaturafhængige processer i celler, såsom plasticitet 13 og ionkanaler kinetik 13,14. Sådanne ændringer kunne påvirke membran spænding og intracellulært calcium signalering, spike tærskel, og spike form.
"Hot" akut skive forberedelse metode præsenteres her er en generel procedure for opnåelse af høj kvalitet akutte hjerneskiver fra enhver hjerne region, herunder lillehjernen, cortex og hippocampus, hjernestammer 16 </ Sup> samt lugtekolben, både i rotter og mus.
Især den fysiologiske temperatur udskæring procedure kræver, at klingen vibrerer næsten perfekt vandret og er uden strukturelle defekter. Sådan præcision ikke kan opnås med ældre pålægsmaskine modeller; i sådanne tilfælde anbefaler vi at udføre forberedelse skive i frostvejr kolde betingelser som den lave temperatur synes at gøre vævet mere modstandsdygtige over for mekaniske skader, selvom på bekostning af metaboliske aberration.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle eksperimentelle procedurer, der er beskrevet i denne protokol blev godkendt af Hebrew University Animal Care og brug Udvalg.
1. Forberedelse af løsninger og værktøjer til udskæring
- Forbered 1 L standard fysiologisk opløsning (SPS), som indeholder ioner, der er beskrevet i tabel 1.
- Fremstille en stamopløsning indeholdende saltene ved 10 gange den endelige koncentration på forhånd i et lager glasflaske fyldt med 1.000 ml deioniseret vand (ledningsevne af 0,055 uS / cm). Tilføj salte (NaCl, KCl, KH 2 PO 4 og MgSO4) og omrør indtil den er helt opløst. Opbevar stamopløsning i 4 ° C.
- Gør endelig SPS løsningen på dagen for eksperimentet. Tilsættes 100 ml af stamopløsningen til 700 ml renset vand, opløse glucose (3,6 g) og NaHCO3 (2,18 g) under anvendelse af magnetisk omrører og derefter tilføje renset vand op til 1 L.
- Ækvilibrere solutipå ved gasning med 95% O2 / 5% CO 2 for ~ 20 min. Efter dette, tilsættes 2 ml 1 M CaCl2-opløsning.
- Saml følgende værktøjer (figur 1).
- Forbered store saks eller andet værktøj for halshugning, små kirurgiske sakse til åbning af kraniet, fine spids pincet til løftning af kraniet for at blotlægge hjernen, skalpel med bladet for at dissekere den ønskede del af hjernen skiver og en lille spatel for at manipulere dissekerede hjerne dele.
- Desuden forberede små stykker filtrerpapir til fjernelse af overskydende væske fra hjernen, to små petriskåle til hjernen dissekeres i to glas 500 ml bægerglas for indhold opvarmet renset vand og SPS og cyanoacrylatlim til limning hjernen til udskæring fase.
- Forbered en lille børste til håndtering af skiver under udskæring og en bred åbning glas Pasteur pipette til at flytte skiverne fra udskæring badet til inddrivelse chamber. Desinficere værktøjer til at forhindre bakterievækst i det varme skive bade. Brug desuden rene laboratoriehandsker.
- Forbered en neddykket skive opsving kammer som beskrevet af Gibb og Edwards 15. Kontinuerligt gas enkeltbetalingsordningen i det med 95% O 2/5% CO 2 og holde ved 36 ° C. Sørg for, at gasning ikke resulterer i små bobler fanget i bad, der kan beskadige skiver.
- Varm ~ 300 ml af SPS til 36 ° C på en varmeplade med magnetomrører eller i et vandbad. Hvis der anvendes en varmepladen, passe på at forhindre, at løsningen fra overophedning, hvilket kan resultere i ion nedbør. Hvis det sker, varm fersk SPS i stedet for afkøling den gamle.
- Bring ~ 500 ml renset vand til at koge ved hjælp af en el-kedel, og i et bæger, kombinere 300 ml af det med koldt vand for at opnå lidt varmere vand end udskæring temperatur. Brug denne varmede renset vand under halshugning og bruge remaining af kogt vand senere for at opretholde fysiologisk temperatur udskæring bad.
- Bedøve mus ved at injicere 0,1 ml pentobarbital (60 mg / ml) intraperitonealt. Efter et par minutter kontrollere, at dyret ikke reagerer på stærke tå eller hale kniber at fastslå den manglende fornemmelse.
2. dissekere hjernen
- Halshugge musen hurtigt ved at skære halsen med de store saks nær bagsiden af kraniet, og lad hovedet falde ned i bægeret med opvarmet renset vand for at skylle overskydende blod.
- Expose foramen magnum i kraniet under nakkemusklerne og hud, eventuelt fjerner mere af halsen med en lille saks.
- Trække huden på toppen af kraniet at være i stand til klart at se kraniet suturer for at styre åbning af kraniet.
- Skær kraniet åben ved at indsætte den nedre spids af en lille saks gennem foramen magnum og straks dreje dem modden laterale side. Skæres forsigtigt langs sidekant parietalknoglen op til en placering bag øjnene og frontoparietal sutur; derefter tænde mod midten af kraniet og tværs af midterlinjen til den anden side af kraniet (se grøn stiplet linie i figur 2A).
- Brug af fin spids pincet, løfte kraniet fra frontoparietal hjørne og træk den skråt op og sideværts at udsætte hjernen (se gul stiplede pil i figur 2A). Sørg for, at kraniet ikke er knyttet til nogen knogle eller hud af hovedet, så hjernen vil forblive på plads, når kraniet løftes. I tilfælde af, at hjernen bevæger sig med kraniet, bruge en lille saks til at fjerne enhver bindevæv mellem kraniet og hjernen.
- Når hjernen er udsat for, tillader ikke hjernen til at være tør. Således udføre de næste skridt og samtidig holde kraniet og hjernen i en petriskål fyldt med opvarmet, gassede SPS.
- Frigør den del af hjernen, der anvendes til eXperiment fra resten af hjernen ved hjælp af en skalpel og en spatel. I tilfælde af anvendelse af cerebellum, løsnes fra forhjernen ved et enkelt snit gennem midthjernen og pons (sammen røde linier i figurerne 2B-D) og flytte det til en lille petriskål, der indeholder frisk, gasset SPS.
- Fjern hjernestammen for at danne en lige og bred base til limning hjernen til at skære tidspunkt, hvor skæring af lillehjernen i vandret plan. Kortvarigt placere lillehjernen på en våd stykke filtrerpapir så den side, der blev skåret fra forhjernen vender nedad.
- Skær hjernestammen med en skalpel for at danne base (som angivet med den blå linie i figur 2B), og returnerer cerebellum til SPS. Når der er behov for andre planer skæring, trimme lillehjernen blok tilsvarende (blå linjer i figur 2C & D).
3. udskæring Brain
- Forbered skæretrinnet ved at konstatere, at det er DRy, før du anvender en lille dråbe superlim i midten af scenen.
- Løft hjernen blok fra SPS ved hjælp af en spatel med rigtige side opad, og fjern eventuel overskydende væske fra hjernen ved hjælp af små stykker filtrerpapir. Derefter, med en enkelt bevægelse glide hjernen fra spatlen på dråbe lim på scenen.
- At forhindre hjernen fra tørring og limen fra kører op på siderne af vævet, anvende et par dråber af SPS med en Pasteur-pipette og placere skæretrinnet i udskæring kammer. Juster hjernen blokken, at regioner af interesse (fx cerebellare cortex) vender bladet og derfor vil blive udsat for et minimum af mekanisk tryk, før de skiver.
- Skær hver skive i henhold til producentens instruktioner, mens konstant gasning SPS i skærekammeret samt opretholdelse af temperaturen på 34-37 ° C. Holde temperaturen af skærekammeret på dette område ved at fylde external kammer slicer med opvarmet renset vand og udskiftning af vand, når temperaturen falder for lavt.
BEMÆRK: udskæring parametre skal eksperimentelt findes for hver type væv og neuroner, der er ved at blive undersøgt. I tilfælde af Campden SMZ 700 slicer med keramiske knive og cerebellare Golgi celler bruge 0,75 mm vibrationsamplitude ved 65 Hz og fremme hastighed på 0,05 mm / sek; for cerebellare neuroner nukleare højere amplitude og frekvens (1 mm og 90 Hz henholdsvis) og langsommere forhånd hastighed (0,01-0,02 mm / sek) anbefales. For både Golgi og cerebellare nukleare neuroner bør skive tykkelse på 300 um. - Under udskæring, tillader ikke skiverne til at folde på sig selv. Undgå dette ved forsigtigt at støtte dem med en blød børste, fortrinsvis røre skive kun i regioner, der ikke er af interesse for eksperimentet. Pas på, at børsten rører vibratome klinge; især i tilfælde af de keramiske knive, selv en let kontaktkan beskadige bladet.
- Flyt hver skive fra udskæring kammer til et opsving / holdekammer hjælp af en bred mund, brand poleret glas Pasteur pipette.
- Lad skiverne hvile i kammeret i mindst 1 time før start af forsøget. Dette giver mulighed for nedbrydning af beskadigede eller døende væv og celler og dermed resulterer i en renere skive overflade. I den første time, holde temperaturen af SPS i kammeret i området 34-36 ° C; sikre, at skiverne ikke bliver ramt af luftbobler, der kan beskadige skiver eller gøre dem flyde.
4. Eksperiment
- Efter 1 time, lad genindvindingskammeret temperatur køle ned til stuetemperatur (17-25 ° C).
BEMÆRK: Dette kan forlænge den periode, hvor skiverne kan anvendes ved at bremse væksten af bakterier samt cellulær metabolisme. Denne periode afhænger af hjernen regionen og celletype. For eksempel kan visse typer af Golgi-celler anses for at være sund i skiver8 timer efter opskæring mens andre typer kun vare 6 timer. - Efter 1 time er gået fra udskæring, skal du bruge skiver til forskellige elektrofysiologiske eksperimenter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Skiver fremstillet på den beskrevne måde kan anvendes til forskellige elektrofysiologiske og optogenetic eksperimenter. I figur 3A og 3C viser vi et repræsentativt eksempel på en horisontal cerebellar skive og en koronale cerebral kortikal skive henholdsvis set under differentiel interferens (DIC) optik. I cerebellar skive, kan flere typer af cerebellare neuroner let genkendes ved deres placering og celle kropsform, tillader målrettet elektrofysiologiske optagelser. I figur 3B og 3D, eksempel spor fra hel-celle patch-clamp optagelser i strømtang tilstand fra en spontant aktiv cerebellar Golgi celle og kortikal pyramideformede celle er vist. Kan findes yderligere eksempler på kvaliteten af elektrofysiologiske og optogenetic optagelser opnået fra hot-skiver hjerner i Huang og Uusisaari 11 og Lefler et al. 16.
| koncentration [mM] | vægt (g / L) | |
| NaCl | 124 | 72,5 |
| KCI | 3 | 2.23 |
| KH 2 PO 4 | 1.2 | 1.63 |
| MgSO4 * 6H 2 O | 1.9 | 4.3 |
| Glucose | 20 | 3.6 |
| NaHCO3 | 26 | 2.18 |
| CaCl2 | 2 | 1.109 |
Tabel 1. Sammensætning af standard fysiologisk opløsning.
Figur 1. Placering af værktøjerne. 1. Store saks, 2. Små kirurgiske sakse, 3. Skalpel med klinge # 11, 4. fin spids tang, 5. Småt spatel, 6. Small petriskåle, 7. glasbæger for deioniseret vand, 8. glasbæger for varmes Gassed fysiologisk opløsning, 9. Super lim, 10. Thin børste 11. Pasteur pipette 12. Lille sprøjte 13. pentobarbital, 14. Filter papirer, 15. Cutting fase.
. Figur 2. Skematisk repræsentation af kraniet og hjernen dissektion (A) tegning, der viser åbning af kraniet at udsætte hjernen (B - D). Skematiske tegninger beskriver planer skære hjernen for de tre store udskæring planer. Den blå linie repræsenterer planet på hvilket hjernen vil blive limet på.
Figur 3. Repræsentative resultater af fremgangsmåden. (A) en horisontal cerebellar skive obtained med påvist metode. De tre vigtigste lag af cerebellar cortex (granulat cellelag, GC lag; Purkinje neuron lag, PN lag; molekylære lag, ML) samt hvid substans (WM) er angivet. En patch-clamp-elektrode er skematisk tegnet på en Golgi celle (GOC) (skala bar: 40 pm). (B) eksempel optagelse fra Golgi cellen vist i A. Optagelsen opnås med en patch-clamp elektrode i strøm-clamp tilstand. (In sort: repræsentativ spor ud af seks grå spor). (C) en koronale cerebral kortikal skive opnået med den påviste metode. Kortikale pyramideformede celler er vist sammen med en skematisk tegning af en patch-clamp-elektrode. (D) eksempel patch clamp optagelse, i strømtang tilstand fra den pyramideformede celle vist i (C). Klik her for at se en større udgave af dette figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vi viser en fremgangsmåde til fremstilling af akutte hjerneskiver fra mus i fysiologisk stedet iskold temperatur.
Det er blevet vist 11 at kvaliteten af skiver opnået under varme forhold er overlegen sammenlignet med dem, der fremstilles med kolde forhold, forudsat at slicer blad har minimal lodret vibration. Udskæring i fysiologisk temperatur kan forhindre fysiologiske artefakter forårsaget af den lave temperatur, såsom dem relateret til ændringer i metaboliske processer 17-19, der kan manifestere i aberrationer af encellede samt netværk adfærd. Desuden, selvom udskæring procedure naturligvis bør være afsluttet uden unødige forsinkelser, er der ingen grund til at skynde sig med udskæring (som det er, når udskæring i iskolde betingelser for at afslutte skæring før løsninger bliver for varm, og for at forhindre skader fra langvarig frysning af væv). Således kan langsommere skærehastigheder være osed. Dette kan være gavnligt i tilfælde af skæring meget sarte strukturer. Endelig udelade køletrin både løsninger og hjernen reducerer mængden af tid, der kræves for proceduren samt dens kompleksitet. Afkølingen af opløsningen til iskold temperatur kræver omtrent 40 min mere end opvarmning af opløsningen til fysiologisk temperatur, så der bliver mere tid til selve forsøget.
Det er blevet vist 20, at intensiteten af fluorescens i corticale neuroner i GAD67-GFP mus er stærkere, når behandlingen af skiver skåret i 20 ° C sammenlignet med de skæres i 0 ° C. Dette støtter yderligere den opfattelse, at udskæring i iskold temperatur udøver en skadelig indflydelse på levedygtigheden af neuroner. På den anden side er det i det samme papir blev vist, at tætheden af fluorescerende neuroner blev reduceret i skiver opnået ved 37 ° C i forhold til de skåret ved 20 ° C. Kontroversen med resultaterne måske arise af, at z-afbøjning ikke blev taget under overvejelser. Som nævnt ovenfor, z-afbøjning har en stærk indflydelse på vævet kvalitet, når skæring i fysiologisk temperatur, ud over kvaliteten af bladet og hastighed og andre indstillinger af slicer.
Et af de afgørende dele af den procedure indebærer en finjustering af pålægsmaskine klinge før udskæring. I modsætning til når du bruger iskolde løsninger, hvor udskæring sandsynligvis involverer både vandret skæring samt vertikal "cracking" af de stive lipidmembraner, under fysiologiske betingelser enhver bevægelse af pålægsmaskine klinge i z-retningen vil forårsage skader i vævet. For at minimere dette bør bladet være så hård og lige som muligt; vores erfaring, konventionelle barberblade har for mange mangler til at være brugbare. Høj kvalitet rustfrit stål knive specielt designet til vibratome forbrug er bedre, men for de bedste resultater foreslår vi single-skrå Ceramic knive. Desuden anbefaler vi at bruge en betydelig mængde tid til perfekt horisontal justering af bladene, da det direkte påvirker skive kvalitet. Vi bruger Campden 700SMZ slicer der tillader tuning af bladet tilpasning, således at vibrationen i z-planet er mindre end 0,5 um. Faktisk den mest afgørende begrænsning af den varme udskæring metode er dens afhængighed af slicer klinge kvalitet og stabilitet. Hvis disse krav ikke kan opfyldes, er det tilrådeligt at bruge den traditionelle iskold kapningsmetode i stedet, på trods af de ulemper i udskæringen i iskold opløsning såsom varierende osmolaritet fra at være delvist frosne.
Fremgangsmåden vist anvendes til at opnå horisontale skiver af cerebellum; med enkle modifikationer samme metode kan bruges til at få skiver i enten den koronale eller sagittale plan, fra mange andre regioner i forgrunden - eller midthjernen samt hjernestammen. For skiver af de mest forreste dele af forhjernen og olfactory systemet skal kraniet skæres mere anterior at forhindre beskadigelse af disse dele. Vi målrettet holde fremgangsmåden så enkel og kort som muligt og ikke anvender pre-perfusion af dyret, heller ikke vi erstatte komponenter i fysiologisk opløsning til skæring. Dette tillader den metode, der skal modificeres i overensstemmelse med den specifikke neuronale undertype af interesse. Det er sandsynligt, at ændringer af de skærende løsninger (som beskrevet i henvisningerne i indledningen) yderligere kan forbedre levedygtigheden af skiver og robusthed resultater. Generelt bør metoden være kompatibel med de fleste andre almindelige fysiologiske løsninger, der almindeligvis anvendes til elektrofysiologiske optagelse.
I fremgangsmåden er vist her, er skiver skæres 300 um tyk. Den optimale skivetykkelse afhænger skåret område af hjernen, og cellerne af interesse. For nettets integritet betragtninger bør skiverne ikke være tyndere end 250 um, og på grund af diffusionsbegrænsninger oppr grænse skivetykkelsen er ~ 400-450 um.
Et afgørende skridt i denne metode angår limning hjernen til skæretrinnet, da selv små ustabilitet i væv kan resultere i ujævne eller ubrugelige skiver. Således bør der drages omsorg for at sikre, at hjernen overflade har ingen overskydende SPS, når den sænkes ned på limen drop; også vil for meget lim resultere i hjernen liggende ujævnt på scenen og eventuelt frigørelse fra scenen under skæring. Også, kan overskydende lim krybe op på væv langsider og ud over at indføre inhomogenitet i skiver, kan beskadige bladet.
Der er et par problemer, der kan stige, når du ændrer udskæring protokol fra iskold metode til den påviste hot metode. En af de vanskeligheder, er fremkomsten af bakterier i skiver. Af denne grund er det vigtigt at desinficere værktøj, kammeret og udskæring bad med ethanol før proceduren. Også drejeoff varmesystemet i aflåst bad efter 1 time bremser væksten bakterier.
Endelig skal det understreges, at den forbedrede sundhed neuroner i skiver skåret i fysiologisk temperatur også kan resultere i ændringer i deres iboende egenskaber. Derfor er det tilrådeligt at udføre en første sammenligning af de opnåede resultater fra skiver med både kolde og varme metoder, især hvis forsøgene er en del af en længere projekt med tidligere værker udført ved hjælp af den kolde metode.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Pentobarbital | CTS | 170066 | Concentration: 60 mg/ml in physiological saline. |
| Big scissors | FST | 14001-16 | Any large scissors or a guillotine with sufficiently sharp edges can be used for decapitation |
| Iris scissors | Prestige medical | 48,148 | Any fine tip scissors can be used, provided the scissor blades are not longer than 1.5–2 cm |
| Fine tip forceps | FST | 11254-20 | |
| Scalpel | FST | 91003-12 | |
| Scalpel blade #11 | FST | 10011-00 | |
| Small spatula | Fisher | 2350 | |
| Filter paper | Any laboratory brand can be used. | ||
| Petri dishes | Duroplan | Z231509-1 | |
| Glass beakers | SCHOT | 10022846 | |
| Pasteur pipette | Maple Leaf Brand | 14672-029 | |
| Super glue | LOCTITE | 4091361/1 | |
| Slicer | Campden | 7000-smz | |
| Ceramic slicing blade | Campden | 7550-1-C | |
| Magnetic heater/stirrer | For heating up the SPS for the procedure | ||
| Electric kettle | For heating up water for temperature control | ||
| Slice recovery chamber + heating unit | Warner instruments | BSC-HT + BSC-BUW | Home-built models may also be used. |
| Thermometer | For monitoring SPS temperature during dissection and slicing |
References
- Skrede, K., Westgaard, R. The transverse hippocampal slice: a well-defined cortical structure maintained in vitro. Brain Research. 35, 589-593 (1971).
- Aghajanian, G., Rasmussen, K. Intracellular studies in the facial nucleus illustrating a simple new method for obtaining viable motoneurons in adult rat brain slices. Synapse. 3, 331-338 (1989).
- Gueritaud, J. Electrical activity of rat ocular motoneurons recorded in vitro. Neuroscience. 24, 837-852 (1988).
- Lipton, P., et al. Making the best of brain slices: comparing preparative methods. Journal of Neuroscience Methods. 59, 151-156 (1995).
- Richerson, G., Messer, C. Effect of composition of experimental solutions on neuronal survival during rat brain slicing. Experimental Neurology. 131, 133-143 (1995).
- Brahma, B., Forman, R., Stewart, E., Nicholson, C., Rice, M. Ascorbate inhibits edema in brain slices. Journal of Neurochemistry. 74, 1263-1270 (2000).
- Moyer, J. R., Brown, T. H. Patch-clamp techniques applied to brain slices. In: Patch-clamp analysis: advanced techniques. Springer. , 135-193 (2002).
- Ye, J. H., Zhang, J., Xiao, C., Kong, J. Q. Patch-clamp studies in the CNS illustrate a simple new method for obtaining viable neurons in rat brain slices: glycerol replacement of NaCl protects CNS neurons. J. Neuroscience Methods. 156, 251-259 (2006).
- Bischofberger, J., Engel, D., Li, L., Geiger, J., Jonas, P. Patch-clamp recording from mossy fiber terminals in hippocampal slices. Nature Protocols. 1, 2075-2081 (2006).
- Zhao, S., et al. Cell type–specific channelrhodopsin-2 transgenic mice for optogenetic dissection of neural circuitry function. Nature Methods. 8, 745-752 (2011).
- Huang, S., Uusisaari, M. Y. Physiological temperature during brain slicing enhances the quality of acute slice preparations. Front. Cell. Neurosci. 7, (2013).
- Ohe, G. C., Darian-Smith, C., Garner, C. C., Heller, H. C. The Journal of Neuroscience. 26 (41), 10590-10598 (2006).
- Voets, T., et al. The principle of temperature-dependent gating in cold- and heat-sensitive TRP channels. Nature. 430, 748-754 (2004).
- Coulter, D. A., Huguenard, J. R., Prince, D. A. Calcium currents in rat thalamocortical relay neurones: kinetic properties of the transient, low-threshold current. The Journal of Physiology. 414, 587-604 (1998).
- Gibb, A. J., Edward, F. A. Patch clamp recording from cells in slice tissues. Microelectrode Techniques: the Plymouth workshop handbook. , 2nd edition, Company of Biologists. Cambridge, UK. (1994).
- Lefler, Y., Yarom, Y., Uusisaari, M. Y. Cerebellar Inhibitory Input to the Inferior Olive Decreases Electrical Coupling and Blocks Subthreshold Oscillations. Neuron. 81 (6), 1389-1400 (2014).
- Bourne, J. N., Kirov, S. A., Sorra, K. E., Harris, K. M. Warmer preparation of hippocampal slices prevents synapse proliferation that might obscure LTP-related structural plasticity. Neuropharmacology. 52, 55-59 (2007).
- Kirov, S. A., Sorra, K. E., Harris, K. M. Slices have more synapses than perfusion-fixed hippocampus from both young and mature rats. J. Neurosci. 19, 2876-2886 (1999).
- Kirov, S. A., Petrak, L. J., Fiala, J. C., Harris, K. M. Dendritic spines disappear with chilling but proliferate excessively upon rewarming of mature hippocampus. Neuroscience. 127, 69-80 (2004).
- Tanaka, Y., Tanaka, Y., Furuta, T., Yanagawa, Y., Kaneko, T. The effects of cutting solutions on the viability of GABAergic interneurons in cerebral cortical slices of adult mice. J. Neurosci. Methods. 171, 181-125 (2008).
