Summary
Målet med denne præsentation er at vise in vivo og in vitro-teknikker til opdræt af entomopatogen nematoder. In vivo-metoder overveje opdræt af disse nematoder med et insekt vært, mens de in vitro-metoder udnytter rige agar medier.
Abstract
Entomopatogen nematoder (EPN) (Steinernematidae og Heterorhabditidae) har en mutualistisk partnerskab med gramnegative Gamma-Proteobacteria i familien Enterobacteriaceae. Xenorhabdus bakterier er forbundet med steinernematids nematoder mens Photorhabdus er symbionter af heterorhabditids. Sammen nematoder og bakterier udgør en potent insekticid kompleks, som dræber en lang række insektarter i en intim og særligt partnerskab. Heri, vi demonstrere in vivo og in vitro-teknikker, der almindeligvis anvendes i opdræt af disse nematoder under laboratorieforhold. Desuden er disse teknikker udgør vigtige skridt for en vellykket etablering af EPN kulturer, og også danner grundlag for andre bioassays, der udnytter disse organismer til forskning. Produktionen af aposymbiotic (symbiont-fri) nematoder er ofte afgørende for en grundig og mangesidet tilgang til studiet af symbiose. DetteProtokollen kræver ikke tilsætning af antibiotika, og kan udføres i løbet af kort tid med standard laboratorieudstyr. Nematoder er produceret på denne måde, er relativt robuste, selv om deres efterladte i opbevaring kan variere, afhængigt af de anvendte arter. De teknikker, der er beskrevet i denne præsentation, svarer til dem, der er beskrevet af forskellige forfattere og forfinet af P. Stock laboratorium, University of Arizona (Tucson, AZ, USA). Disse teknikker adskiller sig fra kroppen af teknikker, der anvendes i masseproduktion af disse organismer til skadedyrsbekæmpelse formål.
Introduction
Entomopatogen nematoder (EPN) Steinernema og Heterorhabditis spp. (Steinernematidae, Heterorhabditidae) og deres bakterielle symbionter, Xenorhabdus og Photorhabdus arter (enterobakterier) anses en emergent model af landdyr-mikrobe symbiotiske forhold 2-4,6,10,19. Xenorhabdus og Photorhabdus spp. er næret som symbionter i tarmen af den eneste fritlevende fase af nematoder, også kendt som den infektive juvenile (IJ), eller 3. etape inficeret juvenile 8,10,13. Bakterien-nematode par er patogen for en bred vifte af insekter og har med succes blevet gennemført i biologisk bekæmpelse og integreret skadedyrsbekæmpelse programmer verden over 6,8.
Heri viser vi et udvalg af in vivo og in vitro-teknikker, der ofte udnyttes til opdræt af EPN under laboratorieforhold. Jegn vivo-metoder overveje et insekt vært til opdræt af nematoder. Normalt er umodne stadier af forskellige insekt ordrer (dvs. Lepidoptera, Coleoptera, Diptera etc.), Der anses egnede værter. In vivo metoder normalt betragtes til vedligeholdelse af nematoder kulturer i laboratoriet. Denne metode kan ikke være egnet, når man overvejer masseproduktion af nematoder. Kan være nødvendigt med store mængder af insekt værter til dette formål kræver mere tid og yderligere omkostninger i forbindelse med insekt opdræt.
Insektspecifikke nematoder kan også dyrkes in vitro på flere medier. Afhængig af formålet med studiet, in vitro-metoder kan eller overveje inkorporering af de symbiotiske bakterier i medierne. I denne præsentation beskriver vi to almindeligt anvendte metoder til opformering af EPN. Ingredienserne i medierne giver en kilde til næringsstoffer til det symbiotiske bakterie ennd en sterol kilde for nematoder. in vitro-metoder har den fordel, opdræt af EPN uden et insekt vært.
Oprindeligt mange af de in vitro-medier udviklet blev anvendt til formering af EPN når egnede insekt værter er ikke tilgængelige. Men i de seneste år, har in vitro opdrætsmetoder blive anvendt i stort omfang i forskning sigter mod at forstå den mutualistisk forholdet mellem EPN og deres symbiotiske bakterier 17,19.
De teknikker, der er beskrevet i denne præsentation, svarer til dem, der er beskrevet af forskellige forfattere og forbedret af Stock Laboratory, University of Arizona (Tucson, AZ, USA). Disse teknikker adskiller sig fra kroppen af teknikker, der anvendes i masseproduktion af disse organismer til skadedyrsbekæmpelse formål.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. In vivo opdræt af entomopatogen Nematoder med deres Symboitic Bakterier
- Vend en 100 x 15 mm plast petriskål og placere to skiver af filtrerpapir (90 mm) i låget af skålen.
- Fordeler 1 ml IJ (infektive unge) vand suspension (i en koncentration på 1.000-2.000 IJ / ml) på filtrerpapiret.
BEMÆRK: IJs behøver ikke at være overflade-steriliseret. - Tilsæt 10 sidste stadiums larver af den større waxmoth Galleria mellonella til fadet. Målet er at give cirka 100-200 IJs / larve.
- Dæk låget med bunden af petriskålen (figur 1) og etikettere petriskål. Nævn følgende oplysninger: rundorm artsnavn (hvis kendt); isolere kode / betegnelse; dato infektion fælde blev sat.
- Skålen anbringes inde i en løst forseglet plasticpose (for at bevare fugtighed) og holde det i mørke ved enten stuetemperatur eller i en inkubator mellem 20-25 ° C. Check retter dagligt
BEMÆRK: Mørke letter nematodeinfektion, som den efterligner naturlige infektion forhold i jorden. - Efter 3-5 dage, fjernes kadavere med tegn på nematodeinfektion til en modificeret Hvid fælde 7.
BEMÆRK: Hvis kadaverne lugter rådden, kan dette være et tegn på, at dyrkningen ikke var vellykket, og / eller der var forurening. Sæt en ny infektion kammer med et nyt parti af nematoder og insekter.
2. In vitro-opdræt af insektspecifikke Nematoder med deres Symbiotiske Bakterier
- Lever-nyre Agar Metode 9,19
- Hak lever og nyrer i små stykker (2 cm 3 eller mindre) og anbringes i en blender med NaCl, agar og 300 ml vand og blend indtil kødet bliver en flydende masse, tyk pasta eller puré. Derefter overføres blandingen til en 1 L Erlenmeyer-kolbe.
- Tilsæt de sidste 200 ml vand til blenderen beholder, og der dekanteres eventuelle resterende medier iErlenmeyer-kolbe. Autoklaver i 15 minutter ved 121 ° C. Efter autoklavering tillade agar køle af at røre før hælde.
BEMÆRK: Pipettering medium anbefales ikke, da dette medium har tendens til at få bidder af kød. - Hæld ~ 20 ml agar på 5 (eller 6) cm petriskåle, mens hånd omrøring eller hvirvlende Erlenmeyer-kolben mellem hælder til en mere homogen medier. Tillad agar størkne og gemme retter ved 4 ° C indtil brug
BEMÆRK: Brug en flamme-steriliseret metal spatel til at bryde op nogen store bidder af kød hældes i petriskål.
- Lipid Agar Metode 9,19
- Forbered lipid agarmedium ved sammenblanding næringsmedium, agar og gærekstrakt og hæld blandes i en 2 L Erlenmeyer-kolbe. Tilsæt destilleret H2O og MgCl2 • 6H 2 O og autoklave i 15 minutter ved 121 ° C.
- Tilføj steril blanding af majsolie og majssirup mix og røre eller slyng kraftigt og ofte at sprede oliedråber jævnt.
- Hæld ~ 20 ml agar på en 5 (eller 6) cm petriskåle og tillade agar at størkne og gemme retter ved 4 ° C indtil brug.
- Træk det ønskede symbiotiske bakterier på lipid-agarplade og inkuberes pladerne ved 28 ° C i 24-48 timer.
BEMÆRK: Spred 100-200 ml natten over (12-16 timer) LB subkultur. - Dagen efter tilsættes cirka 0,4 ml overfladesteriliseret nematode suspension (æg eller infektiøse unge), og Pladerne inkuberes ved stuetemperatur i mørke eller i en inkubator ved 22 ± 3 ° C.
BEMÆRK: Du må ikke tilføje mere end 0,4 ml nematoder suspension, da det kan skabe en meget våd miljø, der er ugunstig for nematodevækst. - Monitor kulturer dagligt. Kulturer skal producere en ny generation af IJs i omkring 12 dage (Figur 2).
- Overførsel nederste skål med agar når nematoder ses gennemsøgning siderne af skålen (figur 3A) til en modificeret Hvid fælde (se Orozco et al. 12) til at høste IJs (figur 3B). Udfør dette trin under en laminar flow hætte for at reducere forurening af medierne.
- Saml IJs fra den modificerede Hvide fælde ved fremkomsten og skyl IJ affjedring for at fjerne ethvert medie snavs. Opbevar IJ i steriliseret destilleret vand ved 10 ° C (i en kold temperatur inkubator eller et kølerum) eller bruge det samme, hvis det er nødvendigt.
BEMÆRK: Afhængigt af formålet med undersøgelsen, frø pladerne med enten symbiont-koloniserede eller aposymbiotic nematoder.
3. In vitro opdræt af Aposymbiotic (Symbiont-fri) entomopatogen Nematoder
- Inficere 10-20 G. mellonella larver med IJs af de ønskede nematodearter (se afsnit 1). Efter 3 eller 4 dage (på dette tidspunkt IJs skulle have modnettil første generation voksne) indsamle kadavere.
BEMÆRK: Tid til udløb og antal kvinder, der er nødvendige for at opnå et tilstrækkeligt antal æg vil variere efter arten. Inficere flere G. mellonella larver hvis det er nødvendigt og begynde dissektioner så tidligt som i 48 timer efter infektion at vurdere, om de er i den rigtige udviklingsstadiet. - Placer hver cadaver enkeltvis i en petriskål med saltopløsning (M9 buffer 18). Dissekere et lig ved at trække sit hoved med en fin spids pincet.
- Saml mindst 20 GRAVID (med æg inde) kvinder med en fin nål (L-form helst) og placere dem i et urglas indeholdende 10 ml M9 buffer (figur 4A).
- Forbered en axenizing løsning ved at overveje følgende ingredienser: 6,75 ml destilleret vand, 1,25 ml 5 N NaOH og 2,25 ml kommercielt tilgængelig blegemiddel fortyndet til 3% hypochlorit.
BEMÆRK: NaOH er en grundlæggende løsningsorienteret handsker, beskyttelsesbriller og andet passende beskyttelsesudstyrtøj skal bæres.
BEMÆRK: Forbered frisk axenizing løsning hver gang, som blegemiddel nedbrydes i lys. Forbered flere partier af axenizing løsning og udfører overflade sterilisering og høst af æg i flere urglas. - Skyl hunner mindst tre gange med M9-puffer påfyldning urglas med bufferopløsning og suger buffer med en pipette. Sørg for, at hunnerne forbliver i urglas. Gentag dette trin to gange mere.
- Umiddelbart tilføje axenizing opløsning og lad hunnerne at forblive i denne opløsning i ikke mere end 10-15 min. Følg nematode væv begynder at gå i opløsning, mens æg (som er resistente over for axenizing opløsning) forbliver intakte.
- Manuelt forstyrre kvindelige organer til at fremskynde processen, ved at skære dem med en nål eller en skalpel (figur 4B, C). Fjern æg ved pipettering dem i 1,5 ml mikrocentrifugerør, undgå at tilføje noget uopløst væv.
BEMÆRK: Anvendelse som meventuelle mikrocentrifugerør som nødvendigt for at indsamle æg og arbejde hurtigt, da levedygtigheden af æggene vil falde over en længere periode for udsættelse for axenizing løsning. - Vortex rør til 15 sek ved hjælp af "høj hastighed indstilling" for yderligere at fjerne nematoder væv knyttet til æggene. Alternativt, hvis en hvirvel er tilgængelig, pipetteres op og ned flere gange opløsning.
- Udpelleter æg ved centrifugering ved 18.000 g i 2 min. Øg hastigheden, hvis æg ikke i tilstrækkelig grad pellet. Fjern axenizing opløsning og skylles to gange ved at fylde mikrocentrifugerør med sterilt destilleret vand og centrifugeres endnu en gang ved 900 x g i 1 min.
- Efter den sidste vask, resuspenderes æg i 300-500 ul sterilt destilleret vand og placere dem i en steril 3 cm petriskål eller steriliseret urglas. Husk, at æggene er nu overflade-steriliseret, så brug sterile pipetter og / eller pippetter tips og vand for at opretholde renheden af æggene.
- Undersøg æg under et dissektionsmikroskop (30-50X forstørrelse) for at bekræfte de er intakte (figur 4D) og overføre dem til en 5 cm plade med lever-nyre-agar (se afsnit 2.1)
BEMÆRK: Du må ikke tilføje mere end 400 pi af ægget affjedring på pladerne, da det vil gøre agar meget våd. - Label plader med relevante oplysninger og gemme dem oprejst i mørke ved 28 ° C. Klækning af æg, bør være indlysende natten over.
BEMÆRK: Vand kan kondensere på låget af skålen, men det vil fordampe efter 1 eller 2 dage. På dette tidspunkt, anbringes skålen i en plasticpose til at bevare fugten i agar og undgå dets tørring. - Overhold retter med jævne mellemrum og kassere enhver retter, der viser tegn på svampe-eller bakteriel forurening. Når IJs ses migrere op ad væggen af petriskålen, fjern låget og overføre den nederste skål med agar et modificeret Hvid fælde 12. Overvej sterile forhold, når du overfører fadet ind i modifieD Hvid fælde at undgå forurening af den udsatte medier.
- Fortsætte med at overvåge de hvide fælder og høst IJ efter behov.
BEMÆRK: Aposymbiotic nematoder vil fortsætte med at migrere ind i vandet i Det Hvide fælde for mange dage og endda uger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
In vivo opdræt metode bruger levende insekter som værter for nematodevækst og reproduktion. Infektion kamre er en effektiv metode til at afsløre insekter IJs. Dette er den eneste etape i nematoderne livscyklus som vektorer de bakterielle symbionter fra et insekt vært til en anden. Figur 1 viser den sat op til en infektion kammer samt de nødvendige materialer til at bygge dette kammer. In vitro opdrætsmetoder tillade EPN at vokse uden et insekt vært, men er også gennemført for opdræt af aposymbiotic (symbiont-fri) nematoder. Figur 2 viser en lipid agarplade med forskellige nematoder etaper. Lipid agarplader kan også overvejes i krydshybridisering tests, der er nødvendige for at validere nematode identitet baseret på den biologiske arter koncept. Leveren nyre agar metode blev oprindeligt beskrevet af Poinar & Thomas (1966) 14. Denne metode giver nematoderne at modnes og reproduce uden et insekt vært og kan bruges til bageste nematoder, uden at deres symbiotiske bakterier (dvs. producerer aposymbiotic nematoder). En ulempe ved denne metode er, at det er udsat for forurening på grund af deres rige natur tillade uønskede bakterier eller svampe for at vokse. Figur 3A viser lever-nyre-agarplader med IJS gennemsøgning på den side af pladen. På dette stadium den nederste del af petriskålen kan overføres til en modificeret Hvid fælde. 3B viser en lever-nyre plade med Steinernema nematoder i en modificeret Hvid fælde for høst af IJs afkom. 4A viser et urglas med gravide Steinernema hundyr før deres axenization. Figur 4B viser afbrydelse af hunnerne med en dissekere nål. Figur 4C viser forstyrret hunner i axenizing løsning. Figur 4D viser en intakt æg af nematoden Steinernemen carpocapsae.
Figur 1. Opsætning af en infektion kammer til in vivo opdræt af EPN. Øverste række viser en 5 cm petriskål og filterpapir. Den nederste række viser en 10 cm petriskål og filterpapir. Bekendtgørelsens nummer af insektlarver tilsat til hver infektion kammer.
Figur 2. Lipid agar metode til in vitro-opdræt af EPN. Billedet viser et nærbillede (20X forstørrelse) af et fad med voksne nematoder udvikler på mediet.
Figur 3. Lever-nyre agarplade. Billede A til venstre viser en skål med succesfuld vækst af nematoder. Bemærk nematoder gennemsøgning på siden af skålen. Billede B viser en lever-nyre agarplade anbragt i en modificeret Hvid fælde for høst af IJ nematoder.
Figur 4. urglas med GRAVID hunner i axenizing løsning. Billede A viser GRAVID kvinder i axenizing løsning. Billede B viser slibning af hunnerne med en dissekere nål. Billede C Viser forstyrrede kvinder. Billede D viser en intakt æg af nematoden Steinemema carpocapsae.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ved hjælp af en egnet vært er en afgørende faktor for en vellykket in vivo-opdræt af EPN. Normalt kan både steinernematids og heterorhabditids reproducere og fuldføre deres livscyklus i larver af den større voks møl, Galleria mellonella (Lepidoptera: Pyralidae). Dog kan andre insektarter fra forskellige familier og / eller ordrer overvejes. Et par af de aktuelt beskrevne nematodearter vides at have specificitet for et bestemt insekt vært. For eksempel, S. kushidai og S. scarabaei er ikke meget virulent for lepidoptera-larver, og har brug for Coleoptera larverne såsom skarabæ billelarver (Scarabaeidae) for vellykket opdræt i laboratoriet. En anden art, S. scapterisci, foretrækker orthopteran insekter som fårekyllinger eller muldvarp fårekyllinger.
Når en passende vært ikke er tilgængelig, eller når eksperimentelle betingelser kræver det, kan in vitro-metoder anvendes til opdræt af EPN. Disse metoder bruge medierne, der tilbyder en rig kilde til næringsstoffer til nematoder og deres bakterielle symbionter. I denne præsentation beskrev vi to typer af agar (lever-nyre og lipid), der kan udnyttes til succesfuld vækst og reproduktion af EPN med eller uden deres symbiotiske bakterier.
Brugere skal være opmærksomme på, at leveren nyre Agar er et rich media og er derfor let forurenet. Steril teknik anbefales i at håndtere både de axenized æg og de inokulerede plader på alle trin i proceduren. Plader, der er forurenet med bakterier eller svamp skal kasseres straks.
Ved opdræt aposymbiotic Steinernema IJs, bør der udvises forsigtighed til korrekt lysere de kvindelige nematode væv, som de kunne harbor Xenorhabdus bakterier. Også for at validere, at IJ er faktisk fri for symbiotiske bakterier, anbefaler vi formaling af en prøve af friskhøstede IJs i LB med en håndholdt motor-drevet pistil pr (Heungens et al. 2002) 7 og plade suspensionen på NBTA medier 1. Hvis der findes bakteriekolonier (efter inkubering natten over) vil det være enten en indikation af en dårlig axenization teknik eller resultatet af forurening.
Opdræt af aposymbiotic Steinernema nematoder er en teknik, der også kan ses i en bred vifte af procedurer og eksperimenter. Læserne bør være opmærksomme på, at virkningen af opdræt Steinernema nematoder uden symbionter over flere generationer kan have en indvirkning på nematode fitness og overlevelse i løbet generation tider. Enkelte undersøgelser tyder på nødvendigheden af deres parring i naturlige systemer 5,11,15-17. Imidlertid har disse undersøgelser er blevet udført på et begrænset antal arter, og der er behov for yderligere udforskning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen interessekonflikter erklæret.
Acknowledgments
Forfatterne ønsker at takke tidligere medlemmer af Stock lab: Ming-Min Lee, Kathryn Plichta, Victoria Miranda-Thompson og Sam-Kyu Kim for deres bidrag til en forbedring af mange af disse protokoller. Dette arbejde blev finansieret delvist af National Science Foundation tilskud IOS-0840932 og IOS-0724978 til SP Lager
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| For In vivo Infections | |||
| 100 x 15 Petri dishes | VWR | 25384-088 | |
| Filter paper, 9 cm grade 1 cellulose | Whatman/VWR | 28450-081 | Grade 1 filter paper recommended |
| Insect hosts | Timberline | http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG | Galleria mellonella are recommended |
| For Liver-kidney Agar (for 500 ml) | |||
| 60 x 15 mm Petri dishes | VWR | 25384-092 | |
| Beef liver, 50 g | Locally sourced; butcher or supermarket | Remaining may be stored frozen and thawed for future use | |
| Beef kidney, 50 g | Locally sourced; butcher or supermarket | Remaining may be stored frozen and thawed for future use | |
| Sodium chloride 2.5 g (0.5% final concentration) | Acros/VWR | 200002-434 | any research grade NaCl can be used |
| Agar, 7.5 g (1.5% agar, final concentration) | HiMedia/VWR | 95026-642 | any media grade agar can be used |
| 500 ml distilled H2O | |||
| For Lipid Agar (for 1 L) | |||
| 100 x 15 Petri dishes | VWR | 25384-088 | |
| Nutrient broth, 8 g | BD/VWR | 90002-660 | |
| Yeast extract, 5 g | EMD/VWR | EM1.03753.0500 | |
| Magnesium chloride hexahydrate 10 ml (0.2 g/ml) | EMD/VWR | EM-MX0045-1 | |
| Corn oil, 4 ml | Any brand | Locally source; supermarket | Any brand of corn oil can be used |
| Corn syrup, 96 ml combine 7 ml corn syrup in 89 ml heated H2O and swirl for homogeneity | Karo | Locally sourced; supermarket | |
| Agar, 15 g | HiMedia/VWR | 95026-642 | any media grade agar can be used |
| Distilled H2O, 890 ml | |||
References
- Akhurst, R. J. Morphological and functional dimorphism in Xenorhabdus spp., bacteria symbiotically associated with the insect pathogenic nematodes, Neoaplectana and Heterorhabditis. J. Gen. Microbiol. 121, 303-309 (1980).
- Dunphy, G. B., Webster, J. M. The monoxenic culture of Neoaplectana carpocapsae DD 136 and Heterorhabditis heliothidis. Revue Nematol. 12, 113-123 (1989).
- Boemare, N. Biology, taxonomy and systematics of Photorhabdus and Xenorhabdus. Entomopathogenic Nematology. Gaugler, R. , CABI Publishing. Wallingford. (2002).
- Boemare, N. E., Akhurst, R. A. The Genera Photorhabdus and Xenorhabdus. The Prokaryotes. Dworkin, M., Falkow, S., Rosenberg, E., Schleifer, K. -H., Stackebrandt, E. , Springer. New York, NY. 473-488 (2002).
- Ehlers, R. U., Wulff, A., Peters, A. Pathogenicity of axenic Steinernema feltiae. Xenorhabdus bovienii. and the bacto-helminthic complex to larvae of Tipula oleracea (Diptera) and Galleria mellonella (Lepidoptera). Journal Invertebrate Pathology. 69, 212-217 (1997).
- Gaugler, R., Kaya, H. K. Entomopathogenic Nematodes in Biological Control. Boca. , CRC Press. Raton, FL. (1990).
- Heungens, K., Cowles, C. E., Goodrich-Blair, H. Identification of Xenorhabdus nematophila genes required for mutualistic colonization of Steinernema carpocapsae nematodes. Molecular Microbiology. 45, 1337-1353 (2002).
- Kaya, H. K., Gaugler, R. Entomopathogenic nematodes. Annual Review of Entomology. 38, 181-206 (1993).
- Kaya, H. K., Stock, S. P. Techniques in insect nematology. Manual of techniques in insect pathology. Lackey, L. A. , Academic Press. London. 281-324 (1997).
- Koppenhöfer, H. Bacterial Symbionts of Steinernema and Heterorhabditis. Entomopathogenic Nematodes: Systematics, Phylogeny and Bacterial Symbionts. Nguyen, K. B., Hunt, D. J. , Brill. Leiden-Boston. 735-759 (2007).
- Lunau, S., Stoessel, S., Schmidt Peisker, A. J., Ehlers, R. U. Establishment of monoxenic inocula for scaling up in vitro cultures of the entomopathogenic nematodes Steinernema spp and Heterorhabditis spp. Nematologica. 39, 385-399 (1993).
- Orozco, R. A., Lee, M., Stock, S. P. Soil sampling and isolation of entomopathogenic nematodes (Steinernematidae, Heterorhabditidae). J. Vis. Exp. (89), (2014).
- Poinar, G. O. The presence of Achromobacter nematophilus in the infective stage of a Neoaplectana sp (Steinernematidae: Nematoda). Nematologica. 12, 105-108 (1966).
- Poinar, G. O. Jr, Thomas, G. M. Significance of Achromobacter nematophilus sp. nov. (Achromobacteriaceae: Eubacteriales) associated with a nematode. Int. Bull. Bacteriol. Nomencl. Taxon. 15, 249-252 (1966).
- Sicard, M., Brugirard-Ricaud, K., Pagès, S., Lanois, A., Boemare, N. E., Brehéli, M., Givaudan, A. Stages of infection during the tripartite interaction between Xenorhabdus nematophila, its nematode vector, and insect hosts. Appl. Environ. Microbiol. 70, 6473-6480 (2004).
- Sicard, M., Hinsinger, J., LeBrun, N., Pagès, S., Boemare, N., Moulia, C. Interspecific competition between entomopathogenic nematodes (Steinernema) is modified by their bacterial symbionts (Xenorhabdus). BMC Evolutionary Biology. 6, 68-78 (2006).
- Snyder, H., Stock, S. P., Kim, S. K., Flores-Lara, Y., Forst, S. New insights into the colonization and release processes of Xenorhabdus nematophila and the morphology and ultrastructure of the bacterial receptacle of its nematode host, Steinernema carpocapsae. Applied and environmental microbiology. 73, 5338-5346 (2007).
- Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. WormBook. ed, C. .elegans.W. ormB. ook. , Available from: http://www.wormbook.org (2006).
- Stock, S. P., Goodrich-Blair, H. Nematode parasites, pathogens and associated of insects and invertebrates of economic importance. Manual of Techniques in Invertebrate Pathology. Lacey, L. A. , Elsevier. Yakima, WA. 373-426 (2012).
