Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

Compleet thymectomie bij volwassen ratten met niet-invasieve Luchtpijpintubatie

Published: December 29, 2014 doi: 10.3791/52152

Abstract

Thymectomie in neonatale knaagdieren is een gevestigde en betrouwbare werkwijze voor immunologische studies. Echter, bij volwassen ratten, complicaties van bloeding en pneumothorax van pleurale verstoring kunnen leiden tot een aanzienlijke mortaliteit. Dit protocol is een eenvoudige methode rat thymectomie een mini-sternotomie en endotracheale intubatie gebruikt. Intubatie wordt bij een niet-invasieve en gemakkelijk reproduceerbare werkwijze en maakt beademing pneumothorax te voorkomen en een gecontroleerd luchtweg voldoende tijd voor zorgvuldige thymus dissectie pleurale verstoring te minimaliseren maakt. Een 1,5 cm borstbeen incisie vermindert het contact met mediastinale schepen en borstvlies, maar met behoud van volledige visualisatie van de thymus. Na blootstelling van het mediastinum, wordt de thymus verwijderd door stompe dissectie onder vergroting. De pleurale ruimte wordt vervolgens afgedicht door hechtdraad sluiting van de pre-tracheale spieren gevolgd door het aanbrengen van chirurgische lijm. Dethorax wordt vervolgens gesloten door hechting sluiting van het borstbeen, gevolgd door hechting sluiten van de huid. Alle thymectomies waren voltooid blijkens immunohistochemische (IHC) kleuring van mediastinale weefsel, en afwezigheid van naïeve T-cellen door flowcytometrie en de procedure had een 96% overlevingspercentage. Deze methode is geschikt voor het compleet thymectomie met minimale complicaties is gewenst voor verdere immunologische studies in athymic volwassen ratten.

Introduction

Sinds de vroege jaren 1960, is de thymus is erkend voor zijn cruciale rol in de ontwikkeling van het centrale immunologische tolerantie. Knaagdier thymectomie blijkt een essentiële procedure definiëren van de rol van de thymus lymfocyten differentiatie, zelf-tolerantie en immuuntolerantie in de omgeving van allograft transplantatie en tumor metastase. Verwijdering van de thymus rat zorgt voor studies met T-cel depletie of de adoptieve overdracht van bepaalde T-cel populatie zonder dat de hernieuwde opkomst van inheemse naïeve T-cellen.

Thymectomies in neonatale knaagdieren kan worden bewerkstelligd met behulp van een zuigtechniek met betrouwbare resultaten 1. Bij volwassen ratten, wordt deze techniek gepaard met een geschatte 20% sterfte en vaak resulteert in een incomplete thymectomie 2. Om consequent te bereiken volledige thymectomie bij volwassen ratten, wordt geopend blootstelling van het mediastinum via een mediane sternotomie vereist. Echterprocedure is geassocieerd met complicaties tracheale letsel, bloedingen en pneumothorax leidt tot een algemene mortaliteit van 1,5 omvatten - 6% 2- 4.

In de afgelopen twee decennia verbeteringen in thymectomie technieken perioperatieve complicaties zijn gedaald en zijn overlevingskansen verbeterd. Luchtpijpintubatie waardoor voor positieve druk ventilatie heeft pneumothorax tarieven 5 verminderd. Methoden van intubatie eerder beschreven bereik van open blootstelling aan de luchtpijp naar minder invasieve methoden met behulp van directe stembanden visualisatie. Complicaties in verband met de intubatie procedure onder tracheale verwonding, stembanden breuk, onbedoelde oesofageale intubatie en bloedingen als gevolg van cardiale punctie of scheuring van de vena cava superior. Bovendien kan nabijheid van de onderste thymus lobben aan de pleurale voering gevolg pneumothorax.

Hier beschrijven we een techniekthymectomie via een minimaal invasieve 2 cm incisie in de huid na een eenvoudige methode van endotracheale intubatie met behulp van een afgestompte-end angiocatheter en transcutane tracheale verlichting. De thymectomie omvat een 1,5 cm sternotomie en een drielaags sluiting met chirurgische lijm aanbrengen op het mediastinum verzegelen en het minimaliseren van de incidentie van bloeding en ademhalingsproblemen. Deze werkwijze methode stelselmatig volledige thymectomie zoals blijkt uit het verdwijnen van CD4 + en CD8 + naïeve T-cellen na thymectomie en het ontbreken van thymusweefsel op IHC kleuring. Operatieve tijden en peri-procedurele mortaliteit worden tot een minimum beperkt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

OPMERKING: Alle experimentele procedures die het gebruik van ratten werden uitgevoerd in overeenstemming met protocollen door de Animal Care en gebruik Comite van Duke University goedgekeurd.

1. Voorbereiding van de tracheale intubatie canule

  1. Snijd de naald einde van een 2 inch 14 G angiocathether naald met kniptang.
  2. Knijp het lumen van de naald gesloten met naald-nosed tang.
  3. Snijd de kneep gedeelte neer aan de rand van het open lumen gedeelte met kniptang, en snijd de randen aan beide zijden van het andere uiteinde op 30 - 45 ° hoek met de naald rand.
  4. Plaats de bodem 3 - 4 mm van de canule in de open ruimte van rechte schuifdeuren tang en omhoog trekken tot een lichte opwaartse curve is gevormd aan het einde.
    Opmerking: Dit vergemakkelijkt het richten van de katheter in de luchtpijp (figuur 1).
  5. Gebruik fijn schuurpapier gladstrijken van de randen aan het uiteinde van de canule.

2. Pre-chirurgische ingrepen

  1. Het opzetten van de site voor de procedure door het plaatsen van een operationele microscoop set 10x vergroting boven het werkgebied.
  2. Plaats een warming pad op het werkgebied en dek af met een schone absorberende pad.
  3. Het opzetten van een hartslag en bloedoxygenatie monitor in de buurt van de chirurgische veld.
  4. Weeg de rat voor gewicht gebaseerde dosering medicatie (bv postoperatieve pijnstilling, antibiotica, of lymfocyt afbrekende antilichaam).
    OPMERKING: Typische volwassen ratten wegen tussen de 350-450 g.
  5. Bezadigde de rat met verdampte 3% isofluraan-O 2 (3 l / min) met behulp van een inductie kamer afgevoerd naar een verspilling narcosegas opvangsysteem; met actieve kool. Laat 5 min voor anesthesie inductie tot diepe narcose nodig is voor endotracheale intubatie te voorzien.
  6. Dien Carprofen of Meloxicane (4,4 mg / kg) subcutaan aan de rat voordat u verdergaat met intubatie en chirurgie.
  7. Gebruik elektrische tondeuse aan de hals en de borst van de verdoofde ratten voorafgaand aan intubatie scheren.

3. intubatie

  1. Bereid de intubatie ingesteld door wrijven een kleine hoeveelheid smeermiddel (bijv KY gel) aan het uiteinde van de canule intubatie. Zet de ventilator om de stroom van isofluraan gas beginnen door het aansluitbuizensysteem.
  2. Breng de rat aan de intubatie apparatuur en de rat op de metalen staaf op te schorten door de bovenste snijtanden (Figuur 2A).
    OPMERKING: Bepaalde intubatie apparaten kunnen online worden gekocht. De hier getoonde model is zelfgemaakt met behulp van een acryl plaat gegoten rond secties van een 2 x 4 inch lumbale stuk met behulp van een butaan fakkel, en versterkingen zijn bevestigd met chloroform. De bar (of metalen draad) wordt bevestigd door het boren van gaten in afplakband geplaatst op de side van de acryl te splinteren of barsten te verhinderen.
  3. Trans-verlichten nek van de rat door het plaatsen van een flexibele hoge intensiteit lichtbron 1-2 cm van het ventrale oppervlak van de hals (figuur 2B).
  4. Gebruik een paar student standaardpatroon tang om de tong zachtjes naar boven en aan de zijkant van de onderste tanden trekken. Pak de tong tussen de duim en wijsvinger van één hand terwijl het plaatsen van het vlakke binnenoppervlak van een zijde van de tang tegen het onderste uiteinde van de tong. Druk ventraal aan de epiglottis en opening van het strottenhoofd (figuur 2C) bloot.
  5. Visualiseer de stembanden en begeleiden de omgekeerde, afgestompte einde van de intubatiecanule voren door de open glottis in de luchtpijp tot aan de naaf van de angiocatheter raakt de snijtanden.
  6. Verwijder de metalen stylet, en bevestig de anesthesie slang aan op de angiocatheter opening naar ventilatie beginnen met isofluraan.
    OPMERKING: De typische zuurstof flow tarief voor de ventilator is 3 l / min met 3% isofluraan.
    1. Stel de ventilator met een snelheid van 60 ademhalingen / min in een volume gecontroleerde ventilator modus die een druk van ~ 12 bereikt - 14 mmHg. Gebruik een positieve eind-expiratoire druk (PEEP) van 3 cm H 2 O.
  7. Let bilaterale borstwand expansie synchroon met de ventilator om juiste plaatsing van de endotracheale tube te waarborgen.
  8. Solliciteer-dierenarts aanbevolen oogzalf voor de ogen van de rat tot droog te voorkomen, terwijl onder narcose.
  9. Solliciteer dierenarts zalf op de ogen van de rat tot droog te voorkomen, terwijl onder narcose.
  10. Bevestig de endotracheale tube aan het hoofd van de rat met een strook doek tape. Zorgen voor een stevige verbinding tussen de endotracheale buis en de verdoving instroom slang.
  11. Bevestig de bloedoxygenatie en hartslagmeter aan de voet van de rat en beginnen monitoring. Bevestig de juiste verdoving door te bevestigen is er geen reactie op tee-snuifje.

4. Thoracotomie en thymectomie

  1. Volg standaard aseptische techniek voor het geheel van de procedure.
    1. Reinig het werkgebied en de operatietafel en te desinfecteren met een 70% ethanol oplossing.
    2. Gebruik steriele chirurgische handschoenen tijdens de procedure, en autoclaaf alle instrumenten en materialen die worden gebruikt tijdens de procedure.
    3. Solliciteer providon-jodium om de hele borst en laat ze drogen. Reinig het oppervlak van de huid met 70% ethanol op gaas. Bedek de rat met doorzichtige plastic wrap snijden van een gat om de steriele operationele veld bloot.
  2. Identificeer de suprasternal inkeping in de bovenste thoracale regio. Maak een 2 cm middellijn incisie door de huid begint 2-3 mm boven de suprasternal notch en uitbreiding van distaal middellijn langs het borstbeen met behulp van stompe getipt Shea schaar.
  3. Voer een 1,5 cm mediane sternotomie uit de suprasternal inkeping opnieuw met stompe getipt Shea schaar. Keep de onderrand van de schaar net onder het borstbeen en verder langzaam.
  4. Steek een kleine Alm oprolmechanisme net onder het gescheiden borstbeen en open naar de pre-tracheale riem spieren (sternohyoid en sternothyroid spieren) te onthullen. Scheid de pre-tracheale riem spieren met behulp van stompe Graefe pincet. OPMERKING: Op dit punt, de luchtpijp te zien, en de intubatiebuis worden gevisualiseerd in de luchtpijp.
  5. Plaats de tanden van de kleine Alm oprolmechanisme onder de gescheiden riem spieren en borstbeen. Open de retractor de superieure aspect van de thymus bloot.
  6. Gebruik fijne Dumont tang om de zijkanten van de thymus weefsel los te maken en bloot de lagere thymus lobben.
  7. Trek de zwezerik zachtjes superieur in de open incisie site, zorg ervoor dat het contact met de vena cava superior, subclavia en de halsslagader schepen te voorkomen, en om verstoring van de delicate pleura voering tussen de thymus en de longen te minimaliseren.
  8. Als thij thymus schepen worden ontleed en onthulde, gebruik van micro-schaar om ze te verdelen. Gebruik een wattenstaafje om de druk te houden op de schepen voor hemostase indien nodig.
  9. Lever de onderste thymus lobben in de incisie en dan scherp lyseren de achterste bijlagen. Verwijder de intacte thymus en zorgvuldig te inspecteren de verwijderde thymus voor eventuele ontbrekende onderdelen.
    OPMERKING: Kleine thoracale lymfklieren worden gevisualiseerd rond de thymus en zijn vaak moeilijk te onderscheiden van thymusweefsel. Dit zullen discrete ronde knopen met een gelijkaardige verschijning aan thymusweefsel maar zal niet in continuïteit met de thymus.
  10. Verwijder de Alm oprolmechanisme en sluit de sternohyoid en sternothyoid spieren met twee onderbroken 5-0 Maxon hechtingen.
  11. Breng 2 druppels van chirurgische kwaliteit cyanoacrylaat weefsel lijm over de hechtingen aan het mediastinum onder positieve druk ventilatie af te dichten.
    LET OP: Dit zal de incidentie van pneumothorax en hematoom verlagen.
  12. Sluit de sternum met twee onderbroken 4-0 zijde hechtingen op een scherpe naald. Steek de naald door openingen tussen de ribben, en zorg dat de naald te begeleiden net onder het borstbeen aan de onderliggende spierlaag voorkomen.
  13. Sluit de huidlaag met een lopende 4-0 Nylon hechtdraad. Staak de isofluraan op dit punt aan de postoperatieve anesthesie herstelperiode te verkorten.
  14. Reinig de incisie en de omliggende huid met zoutoplossing bevochtigd gaas.
  15. Breng enkele druppels bupivicaine (0,25%) voor plaatselijke verdoving, gevolgd door 1-2 druppels cyanoacrylaatlijm de incisie aan de incisie dichten.
  16. Blijven ventileren totdat de rat toont tekenen van onafhankelijke inspanning luchtwegen en begint aan zijn ledematen bewegen. Extuberen de rat en laten herstellen in observatie in een kooi geplaatst op een warming pad.
  17. Dien Buprenorfine (0,01-0,05 mg / kg) subcutaan aan de ratten onmiddellijk na operatie en herhaal elke 8-12 uur gedurende 48 uur post-operatief (normaal 5 totale doses). Op 24 en 48 uur na de operatie, beheren Carprofen of Meloxicane (4,4 mg / kg) subcutaan (3 totale dosis inclusief de pre-operatieve dosis).
  18. Blijf controleren totdat de rat bewegen van de kooi. Bij tekenen van ademnood uitvoeren re-intubatie en opnieuw verkenning van de borst.
    1. Heeft een dier niet onbeheerd achter, totdat het voldoende weer bij bewustzijn is om borstligging behouden.
    2. Heeft een dier dat een operatie heeft ondergaan om het gezelschap van andere dieren tot volledig hersteld niet meer terug.
  19. Verwijder de huidlaag hechtingen 1 week na de operatie.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Deze procedure werd uitgevoerd op volwassen Lewis-ratten (n = 26). De gemiddelde operatietijd was 15 ± 3 min. Er was geen intra-operatieve mortaliteit. De gemiddelde intubatie tijd - van de plaatsing van de rat op de intubatie apparaat voor de vestiging van de ventilatie - was 45 ± 5 sec. 24 ratten hadden een volledig herstel van de operatie met geen bewijs van ademhalingsmoeilijkheden of bloeding door postoperatieve dag (POD) 14. Een rat ontwikkeld ademhalingsmoeilijkheden op POD 4 en onderging re-operatie om het mediastinum te verkennen. De rat bleek een ingeklapte long kwab hebben. Na opnieuw expansie van de longen, het mediastinum werd opnieuw afgesloten met chirurgische lijm onder beademing en de borst werd opnieuw gesloten. De rat hersteld met volledig zonder verdere respiratoire afwijkingen. Een rat stierf op POD 7 van onbekende oorzaken.

De post-thymectomie mediastinum werd geïnspecteerd behouden thymus en de verwijderde thymus weefsel was visually gecontroleerd op ontbrekende secties en later histologisch onderzocht. Bij autopsie, werd thoracale weefsel onderzocht door hematoxyline-eosine (H & E) vlek. Immunohistochemie (IHC) voor cytokeratine werd vervolgens uitgevoerd om overblijfsel thymusweefsel van thoracale lymfeknopen (LN), met bijzondere aandacht secties met hogere nucleaire kleuring van H & E volgens normaal thymus weefsel onderscheiden. Cytokeratine kleuring werd uitgevoerd met konijnen pan anti-cytokeratine als primaire ab, gevolgd door gebiotinyleerd geit anti-konijn IgG en Vectastain Elite ABC kit objectglaasjes werden tegen gekleurd met hematoxyline voor evaluatie microscopie. Thymusweefsel kunnen worden onderscheiden van thoracale LNS door dichtere nucleaire kleuring op H & E (Figuur 3A & 3B) en een karakteristieke kanten patroon van cytokeratine kleuring, die verschilt van de afwezigheid van cytokeratine kleuring gezien in LNS (Figuren 3C en 3D).

Perifere bloedmonsters verkregenvan ratten gedood werden geanalyseerd aanhoudende depletie van naïeve T-cellen. In het kort werden rode bloedcellen gelyseerd met ACK lyserende buffer en perifeer bloed leukocyten (PBL) werden tweemaal gewassen met PBS 2% FBS voor gekleurd met antilichamen gedurende 30 minuten bij 4 ° C. PBL's werden vervolgens gefixeerd met 4% w / v paraformaldehyde in neutrale pH-gebufferde zoutoplossing voorafgaand aan analyse door multi-color flowcytometrie. De totale T-cellen werden geïdentificeerd door kleuring PBMC (perifere bloed mononucleaire cellen) met anti-CD45 + en CD3 + en naïeve T-cellen werden geïdentificeerd door kleuring met anti-CD45RC, anti-CD62L en ofwel anti-CD4 of anti-CD8. De percentages van elke T-cel subpopulatie werden vermenigvuldigd met het absolute aantal lymfocyten (verkregen door Hertog Dierenarts klinische diagnostische Lab) naar cel tellingen te bepalen. Representatieve naïeve CD4 + en CD8 + T-cellen en de totale T-cel tellingen worden weergegeven in figuur 4. Gethymectomiseerde ratten gehandhaafd totale T-cel aantallen vergeleken r besturenats maar toonde verlies van de naïeve T-celpopulaties.

Figuur 1
Figuur 1. Ontwerp van de intubatie canule. De canule wordt gevormd door afstomping het einde van het stilet van een 14 G x 2 inch angiocatheter. De distale 3 mm van de stylet is licht gebogen om de katheter ventraal begeleiden naar tracheale intubatie te vergemakkelijken. (A) Zijaanzicht van metalen stylet. (B) Zijaanzicht van angiocatheter dan stylet. (C) Vergrote weergave van afgestompte punt van stylet.

Figuur 2
Figuur 2. Een hellende intubatie platform wordt gebruikt om de rat voor intubatie te positioneren. De rat is opgehangen aan de metalen staaf van de intubatie platform door de bovenste snijtanden. Een lichte source zal dan worden gepositioneerd ventrale om de nek van de rat tot trans-verlichting van de keelholte. Forceps worden gebruikt om de mond te houden en de opening van het strottenhoofd bloot. (A) Bovenaanzicht en (B) Zijaanzicht van intubatie platform. (C) Diagram van de visualisatie van de glottis na schorsing van de rat en de blootstelling van het strottenhoofd . Het strottenhoofd in het schema is van een dia gekocht van Motifolio.

Figuur 3
Figuur 3. H & E kleuring en cytokeratine mediastinale weefsel thymus onderscheiden van lymfeknopen. Hematoxyline en eosine (H & E) kleuring van normale thymus (A) en thoracale LN (B). Cytokeratine kleuring van thymusweefsel (C) en een thoracale LN hersteld na thymectomie Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

Figuur 4
Figuur 4. Uitval van perifeer bloed naïeve T-cellen na thymectomie. Totaal T cel naïeve CD4 + T-cellen en naïeve CD8 + T cellen waarin gekwantificeerd uit PBL's door flow cytometrie in pre-thymectomie (Pre) en ratten 4 weken na thymectomie (Voeg ). De gegevens worden getoond voor één ratten per groep en zijn representatief algemene resultaten verkregen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Het huidige protocol voor volledige thymectomie biedt een minimaal invasieve benadering met een drie lagen incisie sluiting met chirurgische lijm applicatie ontworpen om complicaties te beperken. Volledige verwijdering van de thymus werd aangetoond door het verlies van naïeve T-cellen en door IHC kleuring van mediastinale lymfoïde weefsel voor cytokeratine.

De procedure van volwassen ratten thymectomie wordt bemoeilijkt door sterfte variërend 1,5-20% door peri-operatieve complicaties, waarvan de meeste zijn toegeschreven aan de intieme associatie van de onderste lobben van de thymus van de pleura, het hart en de grote mediastinale schepen 2-4. Open tracheale intubatie technieken, waarbij de luchtpijp wordt aangeprikt, hebben een 6% sterftecijfer 2. Het gebruik van niet-invasieve tracheale intubatie gerapporteerd door Na en medewerkers; werden echter overlevingscijfers niet gemeld 5. Intubatie met de canule bereid zoals beschrevenmet transcutane tracheale verlichting maakt duidelijke visualisatie van de stembanden voor consequent succesvolle intubatie. Een geavanceerde apparatuur nodig voor de gepresenteerde methode, die verschilt van andere gemelde niet-invasieve technieken 2,5- 8. Onze werkwijze botmakende het einde van een angiocatheter naald en creëren een opwaartse buiging aan het einde vergemakkelijkt onbedoelde slokdarm intubatie vermijden en minimaliseert tracheale trauma. Deze verbeteringen zijn een eerder beschreven werkwijze voor intubatie ook met een aangepaste angiocatheter 9.

We zien dat het houden van de sternale insnijding een minimum afneemt contact met mediastinale grote schepen en daarmee verbonden risico van bloedingen terwijl adequate blootstelling voor volledige verwijdering van de thymus. In theorie zou de kleinere incisie ook het verminderen van post-procedurele pijn en hersteltijd. Het gebruik van fibrinelijm werd voor het eerst als een modificatie van een open tracheale intubatieprocedure om pneumothorax en luchtwegen letsel 2 te voorkomen. Wij hebben gevonden dat de toepassing van een kleine hoeveelheid lijm via gehecht pre-tracheale spieren terwijl die positieve druk voldoende dicht de pleurale holte en helpt postoperatieve ademhalingsproblemen te voorkomen.

Er zijn een aantal aspecten van het protocol dat van belang te benadrukken dat de procedure met succes uitgevoerd worden. Het is belangrijk om de anesthesie buis vast met geschikte tape omdat het mogelijk is om de gasstroom los tijdens de operatie als de handen van de chirurg worden gepositioneerd nabij het hoofd van de rat en visualisatie is alleen gericht op de chirurgische lokatie onder de microscoop. De laagst mogelijke smeermiddel aangebracht op de canule voor intubatie voorkomt dat de canule uit te glijden in de slokdarm. Tijdens de meerlaagse sluiting, helpt ook om de cyanoacrylaat weefsellijm toepassing via een kleine gauge naald met een injectiespuit, die zorgt voor een precieze toepassing en voorkomt per ongeluk over-toepassing van lijm.

Deze procedure is niet van re-vascularisatie van de verwijderde thymus toelaten in een ontvanger rat, die elders 10 is beschreven. We hebben ook geen poging deze procedure bij muizen, die vaak worden gebruikt voor immunologische studies. De meest recente beschrijvingen van de thymectomie procedure volwassen muizen gemoeid vacuümaspiratie van de thymus na blootstelling, hetgeen veel complicaties bij volwassen ratten of dissectie methode die vergelijkbaar is met onze procedure 11,12 heeft. De sluiting wordt niet uitgevoerd in lagen en anesthesie wordt bereikt door intraperitoneale injectie van pentobarbital, die niet mandaat intubatie. De belangrijkste beperkingen van de thymectomie procedure in een knaagdier zijn de vereiste van een operatiemicroscoop, die zeer duur zijn, en de technische deskundigheid die nodig is om onder vergroting en snel uit te voeren procedure.

content "> Complete thymectomie bij volwassen ratten faciliteert immunologische studies met T-cel ontwikkeling, T-cel reactiviteit en tolerantie in transplantatie en tumor studies en studies met T-cel depletie in athymic ratten 13- 15.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
2 inch 14 G angiocatheter
Operating microscope Zeiss
Warming pad
Heart rate and blood oxygenation monitor for rodents with foot sensors Harvard Apparatus ST1 72-8010, ST1 72-8098 (Rat foot sensor)
Intubation apparatus (plastic with metal bar at the top) See Figure 2
Small animal anesthesia system with induction box, isoflurane tank and O2 tank Harvard Apparatus ST1 72-6420
Small animal ventilator with tubing CWE 12-02000 (ventilator) and 12-04000 (external valve assembly for mice/rats)
High-intensity fiber optic Illuminator Dolan Jenner EEG 2823M
Student standard pattern forceps Fine Science Tools 91100-16
Fine straight scissors Fine Science Tools 14060-09
Blunt-tipped Shea scissors Fine Science Tools 14105-12
Small Alm retractor (for sternum) Fine Science Tools 17008-07
Blunt Graefe forceps Fine Science Tools 11050-10
Fine Dumont forceps Fine Science Tools 11254-20
5-0 Maxon sutures Ethicon
4-0 Silk sutures (with cutting needle) Ethicon
6-0 Nylon suture Ethicon
Cyanoacrylate glue (Endermil)
Lubrication gel Akorn Animal Health NDC 17478-162-35

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Hard, G. C. Thymectomy in the neonatal rat. Lab. Anim. 9 (2), 105-110 (1975).
  2. Kobayashi, E., et al. A technique for complete thymectomy in adult rats. J. Immunol. Methods. 1759 (94), 0-3 (1994).
  3. Delrivière, L., Gibbs, P., Kobayashi, E., Kamada, N., Gianello, P. New technique of complete thymectomy in adult rats without tracheal intubation. Microsurgery. 18 (1), 6-8 (1998).
  4. Walker, K. G., Jacques, B. C., Tweedle, J. R., Bradley, J. A. A simpler technique for open thymectomy in adult rats. J. Immunol. Methods. 175 (1), 141 (1994).
  5. Na, N., Zhao, D., Huang, Z., Hong, L. An improved method for rat intubation and thymectomy. Chin. Med. J. (Engl). 124 (17), 2723-2727 (2011).
  6. Kastl, S., et al. Simplification of rat intubation on inclined metal plate). Adv. Physiol. Educ. 28 (1-4), 29-34 (2004).
  7. Weksler, B., Ng, B., Lenert, J., Burt, M. A simplified method for endotracheal intubation in the rat. J. Appl. Physiol. 76 (4), 1823-1825 (1994).
  8. Jou, I. M., et al. Simplified rat intubation using a new oropharyngeal intubation wedge. J. Appl. Physiol. 89 (5), 1766-1770 (2000).
  9. Rivard, A. L., et al. Rat intubation and ventilation for surgical research. J. Invest. Surg. 19 (4), 267-274 (2006).
  10. Zhao, D., et al. A model of isolated, vascular whole thymus transplantation in nude rats. Transplant Proc. 44 (5), 1394-1398 (2012).
  11. AbuAttieh, M., et al. Affinity maturation of antibodies requires integrity of the adult thymus. Eur. J. Immunol. 42 (2), 500-510 (2012).
  12. Reeves, J. P., Reeves, P. A., Chin, L. T. Survival surgery: removal of the spleen or thymus. Curr. Protoc. Immunol. 1 (Unit 1.10), (2001).
  13. Siemionow, M., Izycki, D., Ozer, K., Ozmen, S., Klimczak, A. Role of thymus in operational tolerance induction in limb allograft transplant model. Transplantation. 81 (11), 1568-1576 (2006).
  14. Satoh, E., et al. Immunosuppressive effect of long-term drainage of thoracic duct on immunological memory in adult thymectomized rats. Transplant. Proc. 37 (4), 1947-1948 (2005).
  15. Groen, H., Klatter, F., Pater, J., Nieuwenhuis, P., Rozing, J. Temporary, but Essential Requirement of CD8+ T Cells Early in the Pathogenesis of Diabetes in BB Rats as Revealed by Thymectomy and CD8 Depletion. Clin. Dev. Immunol. 10 (2-4), 141-151 (2003).

Tags

Immunologie Thymus thymectomie rat T-cel depletie endotracheale intubatie immunologie
Compleet thymectomie bij volwassen ratten met niet-invasieve Luchtpijpintubatie
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Rendell, V. R., Giamberardino, C.,More

Rendell, V. R., Giamberardino, C., Li, J., Markert, M. L., Brennan, T. V. Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation. J. Vis. Exp. (94), e52152, doi:10.3791/52152 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter