Abstract
नवजात कृन्तकों में Thymectomy प्रतिरक्षाविज्ञानी अध्ययन के लिए एक स्थापित और विश्वसनीय प्रक्रिया है। हालांकि, वयस्क चूहों में, फुफ्फुस विघटन से नकसीर और वातिलवक्ष की जटिलताओं के एक महत्वपूर्ण मृत्यु दर में परिणाम कर सकते हैं। इस प्रोटोकॉल एक मिनी sternotomy और अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण इस्तेमाल करता है कि चूहे thymectomy का एक सरल तरीका है। इंटुबैषेण एक गैर-आक्रामक और आसानी से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य विधि के साथ पूरा किया और वातिलवक्ष को रोकने के लिए सकारात्मक दबाव वेंटिलेशन और फुफ्फुस व्यवधान को कम से कम करने के लिए सावधान थाइमस विच्छेदन के लिए पर्याप्त समय की अनुमति देता है कि एक नियंत्रित airway के लिए अनुमति देता है। अभी थाइमस का पूरा दृश्य प्रदान करते हुए एक 1.5 सेमी sternal चीरा, mediastinal वाहिकाओं और फुस्फुस का आवरण के साथ संपर्क कम हो जाती है। मध्यस्थानिका के प्रदर्शन के बाद, थाइमस बढ़ाई तहत कुंद विच्छेदन द्वारा हटा दिया जाता है। फुफ्फुस अंतरिक्ष तो शल्य गोंद के आवेदन के बाद पूर्व सांस की नली की मांसपेशियों के सिवनी बंद होने से बंद है।छाती तो त्वचा के सिवनी बंद होने के द्वारा पीछा उरोस्थि के सिवनी बंद करने, द्वारा बंद कर दिया है। प्रवाह cytometry द्वारा भोले टी कोशिकाओं के immunohistochemical (आईएचसी) mediastinal ऊतक के धुंधला हो जाना, और अभाव से सबूत के रूप में सभी thymectomies पूरा थे, और प्रक्रिया एक 96% जीवित रहने की दर थी। कम से कम जटिलताओं के साथ पूरा thymectomy athymic वयस्क चूहों में आगे प्रतिरक्षाविज्ञानी अध्ययन के लिए वांछित है जब इस विधि उपयुक्त है।
Introduction
1960 के दशक के बाद से, थाइमस केंद्रीय प्रतिरक्षक सहिष्णुता के विकास में इसकी महत्वपूर्ण भूमिका के लिए मान्यता दी गई है। कृंतक thymectomy allograft प्रत्यारोपण और ट्यूमर मेटास्टेसिस की सेटिंग में लिम्फोसाइट भेदभाव, आत्म-सहिष्णुता, और immunotolerance में थाइमस की भूमिका को परिभाषित करने में एक आवश्यक प्रक्रिया साबित हो गया है। चूहे थाइमस को हटाने के टी सेल कमी या देशी भोले टी कोशिकाओं की फिर से उद्भव के बिना परिभाषित टी सेल आबादी के दत्तक हस्तांतरण शामिल अध्ययन के लिए अनुमति देता है।
नवजात कृन्तकों में Thymectomies विश्वसनीय परिणामों एक साथ एक चूषण तकनीक का उपयोग कर पूरा किया जा सकता है। वयस्क चूहों में इस तकनीक का एक अनुमानित 20% मृत्यु दर के साथ जुड़ा हुआ है और अक्सर एक अधूरी thymectomy 2 में परिणाम है। लगातार वयस्क चूहों में पूरा thymectomy को प्राप्त करने के लिए, एक मंझला sternotomy के माध्यम से मध्यस्थानिका की खुली लोगों तक पहुंचाने के लिए आवश्यक है। हालांकि, इस6% 2- 4 - प्रक्रिया 1.5 से लेकर एक समग्र मृत्यु दर के लिए अग्रणी सांस की नली में चोट, रक्तस्राव और वातिलवक्ष शामिल है कि जटिलताओं के साथ जुड़ा हुआ है।
पिछले दो दशकों में thymectomy तकनीक में सुधार PeriOperative जटिलताओं में कमी आई है और जीवित रहने की दरों में सुधार हुआ है। सकारात्मक दबाव वेंटिलेशन के लिए अनुमति अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण वातिलवक्ष दरों 5 कम है। इंटुबैषेण के तरीके में पहले से प्रत्यक्ष मुखर गर्भनाल दृश्य का उपयोग कर कम आक्रामक तरीकों की श्वासनली के लिए खुला जोखिम से सीमा का वर्णन किया। इंटुबैषेण प्रक्रिया से संबंधित जटिलताओं हृदय पंचर या बेहतर रग कावा की पंगु बनाना से उत्पन्न सांस की नली में चोट, मुखर गर्भनाल टूटना, अनायास ही esophageal इंटुबैषेण, और नकसीर शामिल हैं। इसके अलावा, फुफ्फुस परत को कम Thymic पालियों की करीब निकटता वातिलवक्ष में परिणाम कर सकते हैं।
यहाँ हम में से एक तकनीक का वर्णनएक पा अंत angiocatheter और Transcutaneous सांस की नली रोशनी का उपयोग कर अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण का एक सरल विधि के बाद एक न्यूनतम इनवेसिव 2 सेमी त्वचा चीरा के माध्यम से thymectomy। thymectomy एक 1.5 सेमी sternotomy और मध्यस्थानिका मुहर और नकसीर और सांस की जटिलताओं की घटनाओं को कम करने के लिए शल्य चिकित्सा गोंद आवेदन के साथ एक तीन परत बंद होने के शामिल है। Thymectomy और आईएचसी धुंधला पर Thymic ऊतक के अभाव निम्नलिखित सीडी 4 + और सीडी 8 + भोले टी कोशिकाओं के लापता होने के सबूत के रूप इस विधि को मज़बूती से पूरा thymectomy में यह परिणाम है। ऑपरेटिव बार और पेरी-प्रक्रियात्मक मृत्यु दर एक न्यूनतम करने के लिए रखा जाता है।
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Protocol
नोट: चूहों के उपयोग से जुड़े सभी प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं ड्यूक विश्वविद्यालय के पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार किया गया।
Tracheal इंटुबैषेण प्रवेशनी 1. तैयारी
- चिमटा काटने के साथ एक 2 इंच 14 जी angiocathether सुई की सुई अंत काट दिया।
- सुई के लुमेन सुई नाक सरौता के साथ बंद हुए चुटकी।
- काटने सरौता के साथ खुले लुमेन हिस्से के किनारे करने के लिए नीचे pinched अनुभाग में कटौती, और फिर 30 पर शेष अंत के दोनों किनारों पर किनारों में कटौती - सुई किनारे करने के लिए 45 डिग्री के कोण।
- सीधे पर्ची संयुक्त सरौता के खुले क्षेत्र में प्रवेशनी के 4 मिमी और एक मामूली ऊपर की ओर वक्र अंत में गठन किया गया है, जब तक ऊपर की तरफ खींच - नीचे 3 रखें।
नोट: यह श्वासनली (चित्रा 1) में कैथेटर निर्देशन की सुविधा होगी। - प्रवेशनी के अंत में किनारों नीचे सुचारू करने के लिए ठीक sandpaper का प्रयोग करें।
2. पूर्व सर्जिकल प्रक्रियाएं
- ऑपरेटिंग क्षेत्र से अधिक 10x बढ़ाई के लिए सेट एक ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप रखकर प्रक्रिया के लिए साइट सेट करें।
- ऑपरेटिंग क्षेत्र पर एक वार्मिंग पैड प्लेस और एक साफ अवशोषण पैड के साथ कवर किया।
- शल्य चिकित्सा क्षेत्र के पास एक दिल की दर और रक्त oxygenation मॉनिटर सेट करें।
- वजन आधारित दवा खुराक (जैसे, पश्चात एनलजेसिया, एंटीबायोटिक दवाओं, या लिम्फोसाइट घट एंटीबॉडी) के लिए चूहे वजन।
नोट: - 450 ग्राम ठेठ वयस्क चूहों 350 के बीच वजन। - एक प्रेरण कक्ष का उपयोग कर वाष्पीकृत 3 isoflurane%-ओ 2 (3 एल / मिनट) के साथ शांत चूहा सक्रिय लकड़ी का कोयला युक्त बर्बादी संवेदनाहारी गैस सफाई व्यवस्था करने के लिए दिए। संज्ञाहरण शामिल करने के लिए 5 मिनट अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण के लिए आवश्यक गहरी संज्ञाहरण प्रदान करने के लिए अनुमति दें।
- Subcutaneously चूहे करने से पहले इंटुबैषेण और शल्य चिकित्सा के साथ आगे बढ़ने के लिए Carprofen या Meloxicane (4.4 मिलीग्राम / किग्रा) प्रशासन।
- इंटुबैषेण करने से पहले anesthetized चूहे की गर्दन और सीने दाढ़ी बनाने के लिए बिजली कतरनी का प्रयोग करें।
3. इंटुबैषेण
- इंटुबैषेण प्रवेशनी के अंत पर स्नेहन की एक छोटी राशि (उदाहरण के लिए, केंटकी जेल) रगड़ से इंटुबैषेण सेटअप तैयार करें। कनेक्टर ट्यूबिंग के माध्यम से isoflurane गैस का प्रवाह शुरू करने के लिए वेंटीलेटर पर मुड़ें।
- इंटुबैषेण तंत्र को चूहे स्थानांतरण और इसके ऊपरी कृन्तक (2A चित्रा) द्वारा धातु पट्टी पर चूहा रोक देते हैं।
नोट: कुछ इंटुबैषेण apparatuses ऑनलाइन खरीदा जा सकता है। यहाँ दिखाए गए मॉडल एक ब्यूटेन मशाल का उपयोग कर एक 2 x 4 इंच काठ का टुकड़ा के वर्गों के आसपास ढाला एक एक्रिलिक शीट का उपयोग कर घर का बना है, और सुदृढीकरण क्लोरोफॉर्म के साथ जुड़ी हुई हैं। बार (या धातु के तार) पर रखा मास्किंग टेप से अधिक ड्रिलिंग छेद से जुड़ा हुआ हैएक्रिलिक के आईडीई टूटने या खुर को रोकने के लिए। - गर्दन (चित्रा 2 बी) के उदर सतह से 2 सेमी - एक लचीला उच्च तीव्रता प्रकाश स्रोत 1 स्थिति से चूहे की गर्दन ट्रांस रोशन।
- धीरे ऊपर की ओर और नीचे के दांत की ओर करने के लिए जीभ खींचने के लिए छात्र मानक पैटर्न संदंश की एक जोड़ी का उपयोग करें। पकड़ अंगूठे और एक हाथ की तर्जनी जीभ के निचले अंत के खिलाफ संदंश के एक तरफ के फ्लैट के अंदर की सतह रखने, जबकि बीच में जीभ। प्रेस औदरीयता गला (चित्रा -2) की उपकंठ और एपर्चर बेनकाब करने के लिए।
- मुखर रस्सियों कल्पना और angiocatheter का हब कृन्तक छू तक श्वासनली में खुला उपजिह्वा के माध्यम से पूर्व से इंटुबैषेण प्रवेशनी की upturned, पा अंत गाइड।
- धातु ख़ंजर निकालें, और isoflurane के साथ वेंटिलेशन शुरू करने के लिए angiocatheter उद्घाटन करने के लिए संज्ञाहरण ट्यूबिंग देते हैं।
नोट: ठेठ ऑक्सीजन फ़्लोवेंटीलेटर डब्ल्यू दर 3% isoflurane के साथ 3 एल / मिनट है।- 14 एमएमएचजी - ~ 12 के दबाव को प्राप्त होता है कि एक मात्रा नियंत्रित वेंटीलेटर मोड में 60 respirations / मिनट की दर से वेंटीलेटर सेट करें। 3 सेमी एच 2 ओ का एक सकारात्मक अंत निःश्वास दबाव (झलक) का प्रयोग करें
- अंतःश्वासनलीय ट्यूब के उचित स्थान सुनिश्चित करने के लिए वेंटीलेटर के साथ सिंक में द्विपक्षीय छाती दीवार के विस्तार को ध्यान से देखें।
- संज्ञाहरण के तहत जबकि सूखापन को रोकने के लिए चूहे की आंखों को पशु चिकित्सक की सिफारिश की आंख मरहम लागू करें।
- संज्ञाहरण के तहत जबकि सूखापन को रोकने के लिए चूहे की आंखों पर पशु चिकित्सक मरहम लागू करें।
- कपड़ा टेप की एक पट्टी के साथ चूहे के सिर के अंतःश्वासनलीय ट्यूब सुरक्षित। अंतःश्वासनलीय ट्यूब और संवेदनाहारी आमद ट्यूबिंग के बीच एक फर्म कनेक्शन सुनिश्चित करें।
- चूहे के पैर करने के लिए रक्त oxygenation और दिल की दर पर नजर रखने के लिए देते हैं और निगरानी शुरू करते हैं। कोई प्रतिक्रिया करने के लिए वहाँ की पुष्टि के द्वारा उचित anesthetization की पुष्टि करेंई-चुटकी।
4. thoracotomy और Thymectomy
- प्रक्रिया की सम्पूर्णता के लिए मानक सड़न रोकनेवाला तकनीक का पालन करें।
- कार्य क्षेत्र और ऑपरेटिंग मेज साफ और एक 70% इथेनॉल समाधान के साथ कीटाणुरहित।
- प्रक्रिया के दौरान बाँझ सर्जिकल दस्ताने का प्रयोग करें, और प्रक्रिया के दौरान इस्तेमाल सभी उपकरणों और सामग्री आटोक्लेव।
- पूरे छाती क्षेत्र के लिए providone आयोडीन लागू करें और यह शुष्क करने की अनुमति देते हैं। तो धुंध पर 70% इथेनॉल के साथ त्वचा की सतह को साफ। बाँझ परिचालन क्षेत्र का पर्दाफाश करने के लिए एक छेद काटने स्पष्ट प्लास्टिक की चादर के साथ चूहे को कवर किया।
- ऊपरी वक्ष क्षेत्र में suprasternal पायदान पहचानें। Suprasternal निशान से ऊपर 3 मिमी और कुंद इत्तला दे दी प्रकार का वृक्ष कैंची का उपयोग उरोस्थि साथ distally midline के विस्तार देने - 2 शुरू होने वाले त्वचा के माध्यम से एक 2 सेमी midline चीरा बनाओ।
- फिर कुंद इत्तला दे दी प्रकार का वृक्ष कैंची का उपयोग suprasternal पायदान से एक 1.5 सेमी मंझला sternotomy प्रदर्शन करते हैं। कश्मीरबस धीरे उरोस्थि और अग्रिम के नीचे कैंची के नीचे बढ़त EEP।
- पूर्व सांस की नली का पट्टा मांसपेशियों (sternohyoid और sternothyroid मांसपेशियों) प्रकट करने के लिए सिर्फ अलग हो उरोस्थि और खुले नीचे एक छोटा सा Alm के प्रतिकर्षक डालें। कुंद Graefe संदंश का उपयोग पूर्व सांस की नली का पट्टा मांसपेशियों को अलग करें। नोट: इस बिंदु पर, श्वासनली देखा जा सकता है, और इंटुबैषेण ट्यूब ट्रेकिआ के अंदर कल्पना की जानी चाहिए।
- अलग कर पट्टा मांसपेशियों और उरोस्थि के नीचे छोटे Alm के प्रतिकर्षक की prongs के रखें। थाइमस की बेहतर पहलू का पर्दाफाश करने प्रतिकर्षक खोलें।
- कम Thymic पालियों थाइमस ऊतक के पार्श्व किनारों जारी है और पर्दाफाश करने के लिए ठीक Dumont संदंश का प्रयोग करें।
- बेहतर रग कावा, अवजत्रुकी और मन्या वाहिकाओं के साथ संपर्क से बचने के लिए, देखभाल करने के लिए खुला चीरा साइट में धीरे से ऊंचा थाइमस खींचो, और थाइमस और फेफड़ों के बीच नाजुक फुफ्फुस अस्तर के विघटन को कम से कम करने के लिए।
- टी के रूप मेंवह जहाजों विच्छेदित और पता चला रहे हैं Thymic उन्हें विभाजित करने के लिए सूक्ष्म कैंची का उपयोग करें। अगर जरूरत रक्तस्तम्भन के लिए जहाजों पर दबाव रखने के लिए एक कपास झाड़ू का प्रयोग करें।
- चीरा में कम Thymic पालियों देने और फिर तेजी से पीछे संलग्नक lyse। बरकरार थाइमस निकालें और ध्यान से किसी भी लापता वर्गों के लिए हटा दिया थाइमस का निरीक्षण किया।
नोट: लघु वक्ष लिम्फ नोड्स थाइमस आसपास के कल्पना और अक्सर Thymic ऊतक से अलग करने के लिए मुश्किल हो जाता है हो सकता है। ये Thymic ऊतक के लिए एक समान दिखने के साथ असतत दौर नोड्स हो जाएगा, लेकिन थाइमस के साथ निरंतरता में नहीं होगा। - Alm के प्रतिकर्षक निकालें और दो 5-0 Maxon टांके बाधित साथ sternohyoid और sternothyoid मांसपेशियों को बंद कर दें।
- सकारात्मक दबाव वेंटिलेशन के तहत मध्यस्थानिका सील करने के लिए टांके भर में शल्य ग्रेड cyanoacrylate ऊतक चिपकने के दो बूँदें लागू करें।
नोट: यह वातिलवक्ष और रक्तगुल्म की घटनाओं में कमी होगी। - सेंट बंद करेंदो के साथ ernum एक काटने सुई पर 4-0 रेशम टांके बाधित। अंतर्निहित मांसपेशियों परत से बचने के लिए बस उरोस्थि के तहत सुई का मार्गदर्शन करने के ख्याल रख रही है, पसलियों के बीच अंतराल के माध्यम से सुई डालें।
- एक चल 4-0 नायलॉन सीवन के साथ त्वचा की परत को बंद करें। पोस्ट ऑपरेटिव संज्ञाहरण वसूली की अवधि को छोटा करने के लिए इस बिंदु पर isoflurane रोक दें।
- खारा-सिक्त धुंध के साथ चीरा साइट और आसपास की त्वचा को साफ करें।
- चीरा सील करने के लिए चीरा पर cyanoacrylate गोंद के 2 बूँदें - 1 द्वारा पीछा स्थानीय संज्ञाहरण के लिए Bupivicaine (0.25%) की कई बूँदें, लागू करें।
- चूहे स्वतंत्र सांस प्रयास के संकेत से पता चलता है और उसके हाथ-पाँव स्थानांतरित करने के लिए शुरू होता है जब तक हवादार करने के लिए आगे बढ़ें। चूहे Extubate और यह एक वार्मिंग पैड पर रखा एक पिंजरे में बंद निगरानी में ठीक करने के लिए अनुमति देते हैं।
- Buprenorphine प्रशासन (0.01-0.05 मिलीग्राम / किग्रा) subcutaneously चूहे को तुरंत बाद operatively और 48 घंटा पीओ के लिए हर 8-12 घंटा दोहरानेसेंट-ऑपरेशन (सामान्य रूप से 5 कुल खुराक)। 24 और 48 घंटा में बाद operatively, Carprofen या Meloxicane (4.4 मिलीग्राम / किग्रा) subcutaneously (पूर्व ऑपरेटिव खुराक सहित 3 कुल खुराक) प्रशासन।
- चूहा पिंजरे के आसपास घूम रहा है जब तक निगरानी जारी है। श्वसन संकट के किसी भी संकेत पर, फिर से इंटुबैषेण और छाती की फिर से अन्वेषण प्रदर्शन करते हैं।
- यह sternal अवलंबन बनाए रखने के लिए पर्याप्त होश आ गया है जब तक पहुंच के बाहर एक जानवर मत छोड़ो।
- पूरी तरह से ठीक है जब तक अन्य जानवरों की कंपनी के लिए सर्जरी आया है कि एक जानवर वापस नहीं करते।
- त्वचा की परत टांके एक सप्ताह बाद operatively निकालें।
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Representative Results
यह प्रक्रिया वयस्क लुईस चूहों (एन = 26) पर प्रदर्शन किया गया था। मतलब संचालन समय 15 ± 3 मिनट था। कोई intraoperative मृत्यु दर हुई थी। मतलब इंटुबैषेण समय - वेंटिलेशन की स्थापना के लिए इंटुबैषेण तंत्र पर चूहे की नियुक्ति से - 45 ± 5 सेकंड था। 24 चूहों पोस्ट ऑपरेटिव दिन (Pod) पॉड 4 पर 14. एक चूहा विकसित सांस की कठिनाई के माध्यम से सांस की कठिनाइयों या नकसीर का कोई सबूत के साथ आपरेशन से एक पूरी वसूली की थी और मध्यस्थानिका पता लगाने के लिए फिर से ऑपरेशन कराना पड़ा। चूहे एक ढह फेफड़ों पालि है पाया गया था। फेफड़ों के फिर से विस्तार के बाद, मध्यस्थानिका सकारात्मक दबाव वेंटिलेशन के तहत शल्य गोंद के साथ फिर से सील किया गया था और सीने में फिर से बंद कर दिया था। चूहा आगे नहीं श्वसन असामान्यताओं के साथ पूरी तरह से बरामद किया। एक चूहे अज्ञात कारणों के पॉड 7 पर मृत्यु हो गई।
पोस्ट-thymectomy मध्यस्थानिका बरकरार रखा थाइमस के लिए निरीक्षण किया गया था और हटाया थाइमस ऊतक वी थाisually वर्गों लापता के लिए निरीक्षण किया और बाद में histologically की जांच की। शव-परीक्षा पर, वक्ष ऊतक hematoxylin-eosin (एच एंड ई) दाग द्वारा जांच की गई थी। Cytokeratin के लिए immunohistochemistry (आईएचसी) तो थाइमस ऊतक के लिए सामान्य है के रूप में विशेष रूप से एच एंड ई द्वारा परमाणु धुंधला के उच्च स्तर के साथ वर्गों पर ध्यान केंद्रित वक्ष लिम्फ नोड्स (एल.एन.), से बचे हुए Thymic ऊतक अंतर करने के लिए प्रदर्शन किया था। मूल्यांकन माइक्रोस्कोपी के लिए पहले haematoxylin साथ काउंटर दाग रहे थे cytokeratin धुंधला biotinylated बकरी विरोधी खरगोश आईजीजी और Vectastain संभ्रांत एबीसी किट स्लाइड्स द्वारा पीछा प्राथमिक एबी के रूप में विरोधी cytokeratin खरगोश, पैन का उपयोग किया गया था। Thymic ऊतक एच एंड ई (चित्रा 3 ए व 3 बी) पर सघन परमाणु धुंधला और LNS (आंकड़े -3 सी और 3 डी) में देखा cytokeratin धुंधला की अनुपस्थिति से अलग है जो cytokeratin धुंधला, की एक विशेषता लैस का पैटर्न द्वारा वक्ष LNS से प्रतिष्ठित किया जा सकता है।
परिधीय रक्त के नमूने प्राप्तसे euthanized चूहों भोले टी कोशिकाओं की लगातार कमी के लिए विश्लेषण किया गया। संक्षेप में, लाल रक्त कोशिकाओं एसीके lysing बफर और परिधीय रक्त ल्यूकोसाइट (PBLs) के साथ lysed गया पीबीएस के साथ दो बार धोया गया 2% 4 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए एंटीबॉडी के साथ दाग को FBS के पहले। PBLs तो 4% प्रवाह cytometry बहु रंग से विश्लेषण करने से पहले तटस्थ पीएच बफर खारा में / वी paraformaldehyde के w के साथ तय किया गया। कुल टी कोशिकाओं विरोधी CD45RC, विरोधी CD62L और या तो विरोधी सीडी 4 या विरोधी सीडी 8 के साथ धुंधला द्वारा की पहचान की गई विरोधी CD45 + और CD3 +, और भोले टी कोशिकाओं के साथ PBMCs (परिधीय रक्त कोशिकाओं mononuclear) धुंधला द्वारा की पहचान की गई। प्रत्येक टी सेल उप-जनसंख्या के प्रतिशत सेल मायने रखता है निर्धारित करने के लिए (ड्यूक व्यावसायिक शिक्षा और प्रशिक्षण नैदानिक नैदानिक लैब द्वारा प्राप्त) पूर्ण लिम्फोसाइट गिनती से गुणा किया गया। प्रतिनिधि भोले सीडी 4 + और सीडी 8 + टी सेल और कुल टी कोशिकाओं की गिनती 4 चित्र में दिखाए जाते हैं। Thymectomized चूहों समग्र टी कोशिकाओं की गिनती आर नियंत्रण की तुलना में बनाए रखाएटीएस लेकिन भोले टी सेल आबादी के नुकसान का प्रदर्शन किया।
चित्रा इंटुबैषेण प्रवेशनी 1. डिजाइन। प्रवेशनी एक 14 जी एक्स 2 इंच angiocatheter के ख़ंजर के अंत blunting द्वारा बनाई है। ख़ंजर के बाहर 3 मिमी सांस की नली इंटुबैषेण की सुविधा के लिए पेट के बल कैथेटर मार्गदर्शन करने के लिए थोड़ा तुला हुआ है। धातु ख़ंजर की (ए) की ओर देखें। ख़ंजर से अधिक angiocatheter (बी) की ओर देखें। ख़ंजर की पा टिप (सी) बढ़ाया देखें।
चित्रा 2. एक sloped इंटुबैषेण मंच इंटुबैषेण के लिए चूहे की स्थिति के लिए प्रयोग किया जाता है। चूहा इसके ऊपरी कृन्तक द्वारा इंटुबैषेण मंच की धातु पट्टी से निलंबित कर दिया है। एक प्रकाश sourcई तो चूहे की गर्दन को उदर तैनात किया जाएगा ग्रसनी पार रोशन। संदंश जीभ पकड़ और गला एपर्चर को बेनकाब करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं। (ए) के शीर्ष दृश्य और इंटुबैषेण मंच (बी) की ओर देखें। उपजिह्वा के दृश्य (सी) आरेख गला चूहे के निलंबन और प्रदर्शन के बाद । चित्र में गला Motifolio से खरीदा एक स्लाइड से है।
चित्रा 3. एच ई और mediastinal ऊतक के cytokeratin धुंधला लिम्फ नोड्स से थाइमस भेद कर सकते हैं। Hematoxylin और eosin (एच एंड ई) एक सामान्य थाइमस (ए) और वक्ष एलएन (बी) के धुंधला हो जाना। Thymic ऊतक (सी) और एक वक्ष एलएन की cytokeratin धुंधला के बाद thymectomy बरामद
पोस्ट-thymectomy परिधीय रक्त भोले टी कोशिकाओं की चित्रा 4. उदासीनता। कुल टी सेल, भोले सीडी 4+ टी कोशिकाओं और भोले सीडी 8 + टी कोशिकाओं पूर्व thymectomy (पूर्व) और चूहों 4 हफ्तों के बाद thymectomy में प्रवाह cytometry द्वारा PBLs से मात्रा निर्धारित जहां (पोस्ट )। डेटा समूह के प्रति एक चूहे के लिए दिखाया गया है और प्राप्त समग्र परिणाम के प्रतिनिधि होते हैं।
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Discussion
पूरा thymectomy के लिए वर्तमान प्रोटोकॉल जटिलताओं को कम से कम करने के लिए डिजाइन शल्य गोंद आवेदन के साथ एक तीन परत चीरा बंद होने के साथ एक न्यूनतम इनवेसिव दृष्टिकोण प्रदान करता है। थाइमस का पूरा हटाने भोले टी कोशिकाओं के नुकसान से और cytokeratin के लिए mediastinal ल्य्म्फोइड ऊतक के आईएचसी धुंधला द्वारा प्रदर्शन किया गया।
20% के कारण फुस्फुस, दिल और साथ थाइमस के निचले पालियों की अंतरंग एसोसिएशन के कारण कर रहे हैं, जिनमें से अधिकांश पेरी-ऑपरेटिव जटिलताओं को - वयस्क चूहे thymectomy की प्रक्रिया में 1.5 से लेकर मृत्यु दर से जटिल कर दिया गया है प्रमुख mediastinal जहाजों 2-4। श्वासनली की हवा निकाल दी है, जहां ओपन सांस की नली इंटुबैषेण तकनीक, एक 6% मृत्यु दर 2 है। गैर इनवेसिव सांस की नली इंटुबैषेण का उपयोग ना और सह कार्यकर्ताओं द्वारा सूचित किया गया है; हालांकि, जीवित रहने की दरों में 5 की सूचना दी नहीं थे। यहाँ के रूप में वर्णित प्रवेशनी साथ इंटुबैषेण तैयारTranscutaneous सांस की नली रोशनी के साथ लगातार सफल intubations के लिए मुखर रस्सियों का स्पष्ट दृश्य परमिट। कोई आधुनिक उपकरणों के अन्य गैर इनवेसिव तकनीक 2,5- 8 सूचना दी से अलग है जो प्रस्तुत विधि, के लिए आवश्यक है। एक angiocatheter सुई के अंत blunting और अंत में एक ऊपर की ओर मोड़ बनाने की हमारी विधि यह आसान अनजाने esophageal इंटुबैषेण से बचने के लिए बनाता है और सांस की नली आघात को कम करता है। ये एक संशोधित angiocatheter 9 का उपयोग भी इंटुबैषेण के पहले वर्णित विधि से सुधार कर रहे हैं।
हम थाइमस के पूरी तरह हटाने के लिए पर्याप्त जोखिम की अनुमति है जबकि एक न्यूनतम करने के लिए sternal चीरा रखते हुए प्रमुख mediastinal जहाजों के साथ संपर्क और रक्तस्राव के जुड़े जोखिम कम हो जाती हैं। सिद्धांततः, छोटा चीरा भी पोस्ट-प्रक्रियात्मक दर्द और वसूली समय को कम करना चाहिए। आतंच गोंद का उपयोग पहली बार एक खुली सांस की नली इंटुबैषेण के एक संशोधन के रूप में सूचित किया गया थाप्रक्रिया वातिलवक्ष और airway चोट दो को रोकने के लिए। हम सकारात्मक दबाव आवेदन करते समय sutured पूर्व सांस की नली मांसपेशियों पर गोंद की एक छोटी राशि के आवेदन के लिए पर्याप्त रूप फुफ्फुस गुहा जवानों और पोस्ट ऑपरेटिव सांस की जटिलताओं को रोकने में मदद करता है कि मिल गया है।
इसलिए प्रक्रिया को सफलतापूर्वक किया जा सकता है उजागर करने के लिए महत्वपूर्ण हैं कि प्रोटोकॉल के कुछ पहलू हैं। ऐसा लगता है कि सर्जन के हाथों चूहे के सिर के पास तैनात कर रहे हैं और दृश्य केवल माइक्रोस्कोप के तहत शल्य साइट पर ध्यान केंद्रित कर रहा है के रूप में आपरेशन के दौरान गैस के प्रवाह को डिस्कनेक्ट करने के लिए संभव है क्योंकि पर्याप्त टेप के साथ संज्ञाहरण ट्यूबिंग सुरक्षित करने के लिए महत्वपूर्ण है। इंटुबैषेण करने से पहले प्रवेशनी के लिए लागू न्यूनतम संभव स्नेहन घेघा में फिसल से प्रवेशनी रोकता है। बहु परत बंद करने के दौरान, यह भी एक सिरिंज, के साथ एक छोटे गेज सुई के माध्यम से cyanoacrylate ऊतक चिपकने वाला लागू करने के लिए मदद करता है जो सटीक आवेदन की अनुमति देता है और अधिक से अधिक आवेदन गोंद का आकस्मिक रोकता है।
यह प्रक्रिया कहीं और 10 में वर्णित किया गया है जो एक प्राप्तकर्ता चूहे, में हटा थाइमस के फिर से vascularization की अनुमति नहीं है। हम यह भी अक्सर प्रतिरक्षा अध्ययन के लिए उपयोग किया जाता है जो चूहों में इस प्रक्रिया का प्रयास नहीं किया। वयस्क चूहों में thymectomy प्रक्रिया का सबसे हाल के विवरण उच्च वयस्क चूहों में जटिलता दर, या हमारी प्रक्रिया 11,12 करने के लिए इसी तरह की है कि एक विच्छेदन विधि है, जो प्रदर्शन के बाद थाइमस, दोनों में से किसी निर्वात आकांक्षा शामिल है। बंद करने की परतों में नहीं किया जाता है, और संज्ञाहरण इंटुबैषेण जनादेश नहीं है जो pentobarbital की intraperitoneal इंजेक्शन द्वारा हासिल की है। किसी भी कृंतक में thymectomy प्रक्रिया का मुख्य सीमाएं बहुत महंगा हो सकता है, जो एक ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप, के लिए आवश्यकता कर रहे हैं, और जरूरत के तकनीकी विशेषज्ञता बढ़ाई के तहत काम करते हैं और जल्दी से कार्यविधि को पूरा करने के लिए।
सामग्री "> वयस्क चूहों में पूरा thymectomy athymic चूहों 13- 15 में टी सेल कमी को शामिल प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रत्यारोपण और ट्यूमर के अध्ययन में टी सेल विकास, टी सेल जेट और सहिष्णुता शामिल अध्ययन, और अध्ययन की सुविधा।Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2 inch 14 G angiocatheter | |||
| Operating microscope | Zeiss | ||
| Warming pad | |||
| Heart rate and blood oxygenation monitor for rodents with foot sensors | Harvard Apparatus | ST1 72-8010, ST1 72-8098 (Rat foot sensor) | |
| Intubation apparatus (plastic with metal bar at the top) | See Figure 2 | ||
| Small animal anesthesia system with induction box, isoflurane tank and O2 tank | Harvard Apparatus | ST1 72-6420 | |
| Small animal ventilator with tubing | CWE | 12-02000 (ventilator) and 12-04000 (external valve assembly for mice/rats) | |
| High-intensity fiber optic Illuminator | Dolan Jenner | EEG 2823M | |
| Student standard pattern forceps | Fine Science Tools | 91100-16 | |
| Fine straight scissors | Fine Science Tools | 14060-09 | |
| Blunt-tipped Shea scissors | Fine Science Tools | 14105-12 | |
| Small Alm retractor (for sternum) | Fine Science Tools | 17008-07 | |
| Blunt Graefe forceps | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Fine Dumont forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| 5-0 Maxon sutures | Ethicon | ||
| 4-0 Silk sutures (with cutting needle) | Ethicon | ||
| 6-0 Nylon suture | Ethicon | ||
| Cyanoacrylate glue (Endermil) | |||
| Lubrication gel | Akorn Animal Health | NDC 17478-162-35 |
References
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