Introduction
대동맥 산소화 된 혈액과 신체의 다른 부분들과 유사한 몸체 공급 심혈관 기능의 중추적 인 역할을하는 질병에 민감하다. 일반 대동맥 질환 다이어트, 흡연, 앉아있는 생활 습관 하나를 포함하여 유전 적, 환경 적 요인의 결과이다 죽상 동맥 경화증과 동맥류를 포함한다. 죽상 경화증은 전형적 만성 고지혈증이있는 환자에서 발견 대동맥 벽 칼슘 및 지질 계 플라크의 침착이다. 궁극적 세 동맥류 파열로 이어질 수 대직 다음 대동맥과 용기 벽의 박막화의 구성 부품의 분해에 의해 특징 지어진다.
동물 모델은 질병과 잠재적 치료 효과의 메커니즘을 연구하는 데 중요한 도구입니다. 심혈관 연구에 사용 된 일반적인 동물 모델은, 구체적으로는 혈관 및 대사 장애를 조사 조회예컨대 아포지 단백질 E 유전자 녹아웃 및 저밀도 지단백질 수용체 유전자 녹아웃 마우스 (4)와 같은 지질 수준을 변경할 수있는 유전자 변형 마우스를 포함한다. 질병 및 치료의 효능을 평가하는 메커니즘 방법 중 대부분은 대동맥의 분리 및 절제를 포함한다.
대동맥 지역화 및 격리되면, 형태 계측 학적 분석은 동맥류의 존재하에, 일반적으로 직경 5 이상, 50 % 증가로 정의 된 바와 같이 결정될 수있다. 계내 분석 필요가 완료된 후, 대동맥을 적출 추가 분석 할 수있다. 절개 된 대동맥 단백질 및 / 또는 유전자 발현 분석법 또는 분자 연구를 수행 할 수있는 냉동 플래시 4 % 파라 포름 알데히드를 사용하여 고정 이상, 매립 단면 조직 학적 분석을 위해 염색. 대동맥의 조직 학적 분석은 구조 저하, 플라크 형성하고, 백혈구의 침투와 같은 대동맥 질환의 공통적 인 특징을 보여줄 수있는 <SUP> 6,7. 또한 대동맥 절개이어서 관내 연구 (7)의 다양한 사용될 수 내피 및 평활근 세포를 포함한 일차 세포주를 분리 할 수있다.
현재, 대동맥 질환이 심도있는 특성을 제공 할뿐만 아니라 추가로 심혈관 질환을 연구하는 도구와 연구자를 제공 할 다른 방법이 없습니다. 자기 공명 영상, 컴퓨터 단층 촬영과 같은 초음파 이미징을 그러나 이것은 작은 동물 어렵고 적절한 기술 취득 장치 8 비싸 형태학 대동맥을 평가하는 가장 가까운 방법이다. 불멸화 세포주는하지만이 세포의 인공 자연 세포 생존 구간 및 아폽토시스 9 효과를 연구에 제한되는 질병의 치료 효능의 잠재적 기전을 조사하기 위해 구입할 수있다.
의 전반적인 목표이 원고는 심혈관 질환의 조사에 쥐의 대동맥의 무균 분리 및 절단을 입증하는 것입니다.
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Protocol
모든 동물의 절차는, 신시내티 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회와 국립 보건원 (National Institutes of Health)에서 실험 동물의 관리 및 사용을위한 설명서에 따라 승인 (NIH 공개 제 85-23으로 수행 하였다 ) 1996 개정.
1. 마우스를 준비
- 마취의 supratherapeutic 복용량에 동물을 노출시켜 안락사, 이소 플루 란은 효과를 흡입. 유해 자극으로 발가락 핀치를 통해 주 안락사를 확인합니다. 안락사, 다이아 프램 절단의 보조 방법은, 곧 단계에서 발생합니다. 다른 방법도 사용할 부여 안락사 수득 될 수있다.
- Sanitizie 수분의 포인트에 70 % 에탄올로, 초기 상처가 될 것이다 복부, 함께 모피를 분사하여 마우스의 외부 표면은되도록 모피 에탄올 젖은이며 느슨한 / 마른 머리카락은 입력하지 지역.
- 쉬르에 마우스를 배치합니다상부 및 하부 부속와 앙와위에서 학적 보드 바깥쪽으로 확장.
- 수술 테이프를 사용하여 보드에 대한 보안 부속.
심장 및 대동맥 2. 분리
- 마우스를 적절하게 배치 한 후, 찾아 흉골의 칼 모양의 과정에 불과 열등한 복부 피부를 분리하기 위해 집게를 사용합니다.
- 똑바로 피부를 들어 올려 긴장을 만들고 복막 및 흉강의 열등한 부분의 우수한 부분을 노출, 표피를 제거하기 위해 가위를 사용합니다.
- 칼 모양의 과정을 들어 올리고 subcostal 여백 따라 처리 단지 열등한 측면 절개하여 복강을 입력합니다.
- 심장이나 주요 혈관을 괴롭히다하지 확인되고, 다이어프램을 통과, 흉강들로 해부하다.
- 흉곽의 앞쪽 부분을 제거하는 단계 2.3 두개쪽으로에서 만든 횡 절개를 확장 할 수 있습니다. 면필요에 무딘 절개를 이용하여 전방 흉벽에서 심장 무료.
- 물질을 흡수하는 멸균 거즈를 사용하여 외부 피와 유체의 흉강을 청소합니다. 지역이 더 눈에 보이는되면, 더 나은 심장과 대동맥을 노출 폐를 제거합니다.
심장 및 대동맥 3. 관류
참고 :이 단계 그래서 그냥 전에해야, 혈액을 심장 천자를 통해을 구하십시오.
- 살균 얼음 차가운 1X 인산 완충 용액 (PBS)의 10 ㎖로 10 CC 주사기를 가득 채운 후 주사기에 25 게이지 바늘을 연결합니다.
- 조심스럽게 심장의 좌심실에 바늘을 삽입합니다.
- 관류에서 압력 상승을 완화하기 우심방을 잘라. 3 분 - 2 위에 마우스로 주사기의 내용을 관류.
- 관류 액을 흡수 우심방에서 개막식에서 멸균 거즈를 사용합니다.
대동맥 4. 분리 및 절제
- PE 완료되면rfusion, 흉강 내 시야를 흐리게 남아있는 액체를 흡수하는 멸균 거즈를 사용합니다.
- 치골 상부 지역에 절개를 확장, 복부 벽을 통해 꼬리 쪽 절단하여 위장 내용을 노출. 양자 아래로 고정 또는 절제 할 수 있습니다 피부 플랩을 만들 낮은 사지를 향해 더 절개를 확장합니다.
- 더 나은 대동맥을 시각화 간, 췌장, 위, 비장, 창자의 로브를 제거합니다. 대동맥은 신장 동맥의 가지에서 피상적으로, perirenal 지역 근처 해부 할 때주의하십시오.
참고 : 정확한에서이 단계를 수행하고 위장관 오염에 대한 성향을 증가 세균이 풍부으로 방법을 진학. - 1X PBS와 지역을 씻어 멸균 거즈로 흡수에 의해 모든 유체를 제거합니다.
- 멸균 microscissors과 microforceps를 사용하여 척추의 등쪽과 복부 식도에서 대동맥을 구분합니다.그것은 무딘 해부 및 이에 대한 해부 현미경을 이용를 사용하는 것이 가장 좋은 방법입니다.
참고 : 대동맥을 분리에서 장골 분기에 꼬리 쪽 시작하고 꼬리 쪽 해부 경동맥과 완두 동맥에서 두개쪽으로 두개쪽으로 청소 및 공동의 등면에서 대동맥을 분리 이동하거나 시작합니다. 어느 방법이 적절한 지와 연구자의 편안함에 달려있다. - 대동맥 벽의 일부를 제거하지 않도록 확인되는 미세 microscissors를 사용하여 혈관 주위 지방 조직을 제거합니다. 이것은 대동맥 평활근 세포를 배양 할 때 섬유 아세포 오염 가능성을 최소화하는 것이 필수적이다.
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Representative Results
절차가 완료되면, 여전히 (그림 1A)에 부착 된 신장 동맥 흉부 및 복강으로 내려 심장에서 발생하는 손상 대동맥이 될 것입니다. 여기에서, 대동맥이 복부 대 동맥류 (그림 1B 및 1C)의 연구에서 진단이다 형태 학적 변화를 정량화하기 위해 현장에서 이미징 할 수있다. 그 후, 대동맥, 제거 고정 및 조직 학적 변화를보고 염색 할 수있다. 대동맥 일반적인 공통 얼룩이 마톡 실린 및 에오신 염색 (도 2a 및도 2b)이다. 또한, 대동맥의 구조적 무결성 질적 엘라스틴 밴드 (그림 2C 및 2D)를보고 Verhoff 반 Geison 염색을 사용하여 정량화 할 수있다. 대신 조직 학적 분석을 얻기의, 깜박일 수 있습니다 연구자 후속 단백질과 리보 핵산의 expre의 대동맥을 동결ssion. 조사자에 대한 마지막 옵션은 일차 전지 격리를 획득하기 위해 대동맥을 사용하는 것이다. 이러한 세포 배양 (도 3a)에서 성장 및 생존 연구 (도 3B) 및 단백질 현지화 (도 3C)를 포함한 체외 다양한 연구에 사용될 수있다.
쥐의 대동맥의 현장 대표 이미지에서 그림 1. (A) 심장과 신장을 포함하여 대동맥의 분리 후 정상 마우스 해부학의 묘사를. (B) 일반 그대로 쥐의 복부 대동맥의 이미지를 확대했습니다. (C) 부신에서 동맥류와 병에 걸린 복부 대동맥의 이미지 확대 지역. 일의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오그림입니다.
쥐의 대동맥 2. 조직 학적 분석을 그림. 20 배 배율 (A) 건강 부신 대동맥의 정상 헤 마톡 실린 및 에오신 얼룩의 대표 이미지입니다. (B) 20 배 배율에서 헤 마톡 실린 및 에오신 염색 후 교내 혈전 동맥류 부신 대동맥의 대표 이미지입니다. (C)의 대표 이미지 10 배 배율에서 정상 부신 대동맥의 탄력 밴드를 강조 Verhoff 반 Geison 얼룩. (D) 선화과 엘라스틴 밴드와 농축의 striating에 의해 언급 부신 대동맥 개발 질병의 탄력 밴드를 강조 Verhoff 반 Geison 얼룩의 대표 이미지 외막 층의. 제발 CLI이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 CK.
그림 3. 주요 대동맥 근육 세포는 대동맥에서 배양. (A) 복부 대동맥으로부터 수득 20X 배율에서 배양 주 대동맥 근세포의 대표 화상. (B)로부터 얻어지는 20X 배율로 H 2 O (2)의 500 μM을 처리 한 후 트립 판 블루 배제 분석법 중 주 대동맥 근세포의 대표 화상 복부 대동맥. (C) 복부 대동맥에서 차 분리 대동맥 평활근 세포에서 알파 액틴에 대한 면역 조직 화학 염색의 대표 이미지. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Disclosures
저자가 공개하는 게 없다.
Acknowledgments
저자는 어떤 승인이 없습니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane | Med-Vet International | #RXISO-250 | |
| 70% ethanol | Fisher | 07-678-001 | |
| Phosphate buffered saline | Sigma Aldrich | P5368-10PAK | |
| Surgical tape | 3M | 1527-1 | |
| Sterile gauze | Dukal Corporations | 1312 | |
| 25 gauge needle | BD | 305122 | |
| 10 ml syringe | BD | 309604 |
References
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