Abstract
脱毛症は、男性型脱毛、多嚢胞性卵巣症候群、および円形脱毛症など、さまざまな条件で発生する可能性が脱毛の一般的な形式です。脱毛症は、癌患者における化学療法の副作用として生じ得る。本研究では、私たちの目標は、研究者が正確に評価し、脱毛症のこれらの様々な形態のための新たな治療アプローチを比較することができるようになりますマウスでの脱毛を、定量化するための一貫性と信頼性の高い方法を開発することであった。この方法は、マウスに黒（または灰色）の毛髪の量にラフ比例して発生する光吸収を測定する、マウスの画像を取得し、処理するための標準的なゲルイメージャを利用しています。このようにして定量化されたデータは、その後、標準的な統計的手法（ すなわち、ANOVA、T検定）を用いて分析することができる。この方法は、ワックスの化学療法誘発性脱毛症、円形脱毛症および脱毛症のマウスモデルにおいて試験した。このレポートでは、詳細なプロトコルは、PRESですマウスのC57BL / 6及びC3H / HEJ株からの検証データを含む、これらの測定を行うために取得済み。この新技術は、相対アプリケーションのシンプルさ、ほとんどの研究室で容易に利用可能である機器への依存、そして客観、主観的な評価よりも堅牢である定量的な評価を適用するなど、多くの利点を提供しています。マウスにおける毛髪成長の定量化の改善は、脱毛症モデルの研究を改善し、前臨床試験で有望な新しい治療法の評価を容易にする。
Introduction
脱毛（抜け毛）は複数の原因と心理的、感情的苦痛イベントになることができます。男性型脱毛症は35歳1によって男性の約2/3に影響を及ぼし、脱毛症の最も一般的な原因である。抜け毛の同様のパターンは、多嚢胞性卵巣症候群の女性において観察することができる。これらの疾患の両方において、脱毛はアンドロゲン媒介性である。脱毛症はまた、人口2の1.7％に影響を与える自己免疫疾患、円形脱毛症、として発生する可能性があります。脱毛症は、化学療法3のようないくつかの医学的治療の副作用として発生する可能性があります。化学療法患者の割合が高い（65から85までパーセント）は、脱毛症4,5ある程度の経験する。脱毛の心理的な影響は十分に化学療法の設定で研究されている。化学療法誘発性脱毛症、不安、抑う つ、負の身体イメージをもたらすことができ、自尊心と6,7-幸福の減少感を低下させた。高いPE女性のがん患者のrcentage（百分の47から58）は脱毛は、化学療法の最も外傷側面であると考えて、そして脱毛4,6の恐れのための最大8％の下落治療。脱毛8,9の心理的にも医学的結果を減少させるための治療をサポートするための男性ホルモン性脱毛症における証拠もある。同様に、円形脱毛症は、重度の心理的な影響2、及び脱毛の斑点状の性質が脱毛の他のほとんどの原因はより不快化粧結果につながることが報告されている。
穏やかな抗アンドロゲン作用（ すなわち、スピロノラクトン）を有する薬剤が脱毛症の治療などの限られた成功を収めて使用されていたが、脱毛症のための最初の効果的な薬物療法は、ミノキシジル10だった。この血圧降下は、毛髪の成長を引き起こすの観察された副作用を有しており、現在脱毛症の多くの形態のための局所療法として使用される。しかし、応答はいくつかの科目だけ遅く表示で、しばしば不完全である脱毛ではなく、実際の再成長の10る。フィナステリドは、部分的な全身のアンドロゲン遮断を犠牲にしてアンドロゲン性脱毛症の改善で、その結果、ジヒドロテストステロンのII5α還元酵素をブロック変換を入力する競合的アンタゴニストである。長期的（10年）療法との回答率は50％前後11である。全体として、この分野におけるかなりの研究にもかかわらず、脱毛のための適切な治療は依然として存在しない。
何十年もの間、科学者や臨床医は、臨床試験で頭皮毛髪の成長を測定する方法を検討した。脱毛症を治療する薬剤の開発により、毛髪の成長と、治療に対する特異的応答を測定する、信頼性の高い経済的な低侵襲手段に対する大きな必要性があった。脱毛障害を有する患者における毛髪密度の正確な定量化のための画像解析技術がtechniquの様々な方法を用いて、過去に一貫して有効な結果が得られた定義された頭皮領域14に毛量を定量化するためのデジタル画像12の解析、個々の毛髪及び皮膚病変13、および顕微鏡走査の画像解析を含むエス。
上記の方法論は、臨床試験における発毛促進介入のための有効性の改善された評価を提供している残念ながら、これらの方法は、前臨床研究において、げっ歯類の研究に適用されていない。我々の目的は、研究者は、より正確に脱毛症の種々の形態のための新たな治療アプローチを評価し、比較することを可能にするであろう、マウスにおいて、脱毛を定量化するために一貫して信頼性の高い方法を開発することである。私たちは、茶色や黒い髪を持つマウスにおける毛髪密度の迅速かつ信頼性の高い定量化が可能になりますほとんどの実験室で容易に利用可能な機器を使用して方法論を開発した。この方法はwaxinから化学療法誘発性脱毛症、円形脱毛症、および脱毛症のマウスモデルにおいて試験されているグラム。詳細なプロトコルは、マウスのC57BL / 6及びC3H / HEJ株からの検証データを含む、これらの測定を実行するために提示されている。この技術は、毛幹中での顔料の光吸収を検出することに依存しているように、白マウス又はアルビノマウスにおける発毛を検出するために使用することができない。
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Protocol
倫理声明：動物に関わるすべての研究は施設のIACUCによって承認されなければならない（以下のデータについては、プロトコルは、モンテフィオーレIACUC、プロトコル＃11-6-240と＃13-7-100によって承認された）。撮影時まだそれらを維持する唯一の目的のために示されているように、動物が軽い麻酔を提供され、このプロトコルに必要ない痛みを伴う手続きはありません。
写真の1.取得
- 印刷されたテキストと紙を用いたゲルイメージャのためのビューのフォーカスとフィールドを設定します。撮影した地域全体の光源の均一性を確認してください。均一性を確保するために、反射写真撮影のための光源を内蔵したゲルイメージャを使用しています。これはさらにグレースケールの分析には適していない動物のシルエットを作成すると同じように、透照光源を使用しないでください。
注：これは関心領域（ROI）との意志を越え、光の平均化を提供する、やや焦点の外にマウスを置きます興味のある非常に小さい（ すなわち、<10ピクセル）の領域について量子的エラーを減らすのに役立ちます。関心の大きな領域は、このマイナーな焦点調節によって影響されず、またそれらは、動物の大きさの違いによって影響される。 - これは急速な麻酔効果および迅速な回復を提供し、複数の動物を撮影するために最適であるように、：ケタミン（100mg / mlの）/キシラジン（20 mg / ml）で（1 2）を使用して動物を麻酔。
注記：動物が静止画撮影を可能にするのに十分であるときに麻酔が確認された。動物は一般的に10〜15分以内にこの光麻酔から回復したように、獣医師は眼軟膏の使用をお勧めしていません。 - （できるだけ平行に近い）の垂直配向ゲルイメージャーで麻酔した動物を置きます。
- 背写真の場合は、延長手足と腹臥位で動物を配置。
- 腹写真のために、動物が横方向に回転しないように注意しながら、仰臥位で動物を配置。
- 撮影した領域でのグレースケール標準を置きます。
- 閉じるアクセスドア。重要：周囲光露光の変化を導入することができる。
- 取得の直線範囲内の関心領域を配置露光Fストップを設定する（Fストップを読み取る）。
注：画像が飽和している場所ほとんどのシステムが表示されます。 - 写真を撮る。
- 変更標準および関心領域の両方を取得（参照の直線範囲内に留まるように、1からFストップを増加または減少させることによって、直線範囲内の関心領域を配置し、別の露出設定にFストップF-停止）。
- 写真を撮る。
- 撮影が完了すると、加温テーブルに動物を配置し、それらが伏臥を維持できるようになるまで監視。ケージに動物を返します。一度、すべての動物が完全に回復している動物施設への動物のグループを返します。
光の吸収2.定量</ pの>
- 使用した動物の画像上で関心のマーク領域は、ゲルイメージャのためのソフトウェアを提供した。
- 全動物の背ビューについては、可能な限り横方向に限り延長、下肢への上肢から延びる長方形または楕円形のイメージを使用するように、 図1Aに示すように、箱のいかなる部分も、動物の背中を越えて延びていない。
NOTE：一つは、フリーハンド描画ツールを使用して、関心のある領域をマークできた。 - 骨盤領域をカバーする1と図1（b）に示すように胸のエリアをカバーする1：全体の動物腹ビューについては、2の長方形を使用しています。
- 必要に応じて、関心、 すなわち、薬剤投与の位置、マークのより小さな領域のために。
- 全動物の背ビューについては、可能な限り横方向に限り延長、下肢への上肢から延びる長方形または楕円形のイメージを使用するように、 図1Aに示すように、箱のいかなる部分も、動物の背中を越えて延びていない。
- グレースケール吸収規格上の関心のマーク領域（複数可）。
- 関心のマークされた領域のそれぞれからレコード吸収。
3.分析
吸収レベルobtaine関心領域の研究開発は、写真間の比較のために、バックグラウンドの標準に正規化する必要があるかもしれない。吸収への曝露の関係は両対数（ すなわち、関係がログ（曝露の間に線形である）とログ（吸収））である。この関係を用いて、関心領域の吸収は、吸収が異なる時点（試験プロトコル内、すなわち、連続測定）で撮影されたものを含む別の写真の間で直接比較することを可能にする標準的なバックグラウンド値に正規化することができる。これらの補正を実行するための手順は、オプションのステップ3.1および3.2に詳述されている。
- グレースケールの吸収標準から得られた値を使用して、ログ対ログの（オプション）プロット曲線（露出）（吸収）。
- 次のように（オプション）各写真の標準の変動を調整します。
- 秒で決定されるように（参照のためおよびFストップ（ステップ1.6で決定されるように）読み取るためFストップを選択1.8）をTEP。
- 読んでFストップは全く写真に標準の平均吸収を計算します。この平均値は参考基準値（RSV）である。
- （デルタ-ROI-1、デルタ-ROI-2 ... ..delta-ROI-X）規格（デルタ-S）のために、各定義されたROIのためにそれぞれの写真に写っている読書と参照F-ストップ設定間の吸収の差を計算する
- *（デルタROI-X / - F-ストップ+（F-ストップを読んで、標準の吸収RSV）を読んで補正吸収（ROI-X）=吸収（ROI-X）：次のように各ROIに対する補正吸収を計算しますデルタS）
- 実験データをコンパイルし、連続変数（ すなわち、ANOVA、T検定）のための標準的な統計的手法を用いてデータ解析を行う。
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Representative Results
この技術は、C3H / HEJ生着マウス、16円形脱毛症のマウスモデルを用いて検証した。これらの動物は、時間をかけて徐々に進行するグローバル脱毛を開発する。しかし、脱毛パッチで発生し、かなりの変動を導入し、定性的な評価を妨げ、次の1匹のマウスから異なる場合があります。このモデルは、有効性の評価として、マウスの異なる位置での光学密度の測定値の間の相関をテストする機会を提供した。
同じマウス上の非重複領域とは別のエクスポージャー、ROIの境界設定の変動、およびROIのを使用して対策が相関していた場合、最初の質問だった。マウスの背側表面上の長方形の対楕円形の規格（ 図4A）で定義されたROIを比較して見て有意な相関（P <0.0001）がありました。同様に高い相関関係は、動物上の異なる部位にとdiffeで見られた露光レベルを借り（図示せず）。これは、これらの測定の精度の高い程度を示す。矩形のROI（P <0.0001、 図4B）を使用して、バックの背側表面上のF-停止2.0 対 1.2での吸収の間に有意な相関があった。同じマウスた（p <0.0001、 図4C）の背側と腹面との間の吸収測定値を比較するときに有意な相関も観察された。 C3Hに予想通り、これらのデータは、同じ動物上の異なる部位から採取された吸収測定が相関しているという証拠を提供/ HEJマウスモデルを移植され、これらの相関は、脱毛の広い範囲にわたって線形のままである。これは、グレースケールの測定値の妥当性を確立するのに役立ち、また、画像取得及び解析技術の変化に、この技術のロバスト性を確立する。
から取られた一連の測定の間の一貫性がある場合に第二の質問はなかった異なる時点での同じ動物。これを評価するために、イメージはC3H / HEJの入手した3週間、週単位でマウスを移植さ。 C3H / HEJ移植したマウスは、この時間をかけて段階的な脱毛を表示することが予想される。腹面（胸部、箱形ROI）上のグレースケール分析は、次の（ 図5）の 1つの時点から一貫した傾向で、この予想される毛髪損失を示した。注目すべきは、C3H / HEJ移植されたマウスの唯一の80％が脱毛を示し、最も高いグレースケール値を有するものが、この減少を示し、むしろ実験期間全体で一貫性のある結果を示さない。いいえ脱毛と動物での測定のこの一貫性もC57BL / 6マウス19で確認した。腹側表面の大腿部の領域に背側表面に対して同じ分析が時間にわたって同様の結果を示した（図示せず）。
C3Hでこの技術のアプリケーションからこれらの有望な結果と/ HEJは、動物に移植されたさらなる研究は、異なる動物モデル、化学療法誘発性脱毛症の一つで行った。シクロホスファミドの3毎週コースを受けるC57BL / 6マウスを可変グローバル薄毛や脱色素を開発します。本明細書に記載のグレースケール分析技術は、これらの変化を定量するために、および治療 的介入17への応答を評価するために使用した。このモデルでは、グレースケール分析は被毛における化学療法誘発性の変化の定量的評価を提供するのに強力なツールであることが判明し、統計的解析により、治療効果の検証を可能にした。化学脱毛症の別のモデルでは、このグレースケール分析を利用する上で特別な課題があった。毛包が成長期VIステージに入り、化学療法剤18に最大限に敏感であるている場合は、このモデルでは、動物は、9日後にシクロホスファミドの単回投与で処置し、その後、毛包を同期させるために、背側表面にワックスを塗っている。ワックス地域は、研究のための関心領域ですが、ワックスがけの面積が可変サイズであるかもしれない。ワックス領域内にROIを制限することは、シクロホスファミド投与19後の毛髪の喪失と再生の両方の定量を可能にする。さらに、この技術は、実験的療法の治療応答の用量依存性の違いの正確な評価を可能にする。このアプリケーションは、この技術でROIを定義する柔軟性を持つことの利点を示している。
さらに提供されるこの技術の応用を説明するために、毎週のシクロホスファミド投与のプロトコルを利用したC57BL / 6における進行中の研究の暫定的データ分析は上記に示されている。 8週齢のマウスを、3週間ビヒクルまたは50mg / kg /日週シクロホスファミドで処理した。ビヒクル処置動物は正常な被毛（ 図6A）を有していた化学療法で処置されたマウスは、2ヶ月後に視覚的に明らかな脱毛を示した。グレースケール解析は当たりだった化学療法マウスおよびビヒクル対照（ 図6B）との間に有意な（p <0.05）差を示し、上記のように形成された。
図1：背部の毛の変更のグロスビューおよびC3H / HEJの腹面には、円形脱毛症のマウスモデルをマウスに移植した動物は、時間をかけて徐々に進行するグローバルな脱毛を開発する注意（A）背ビュー、代表境界を持つ。。手入れ領域に対応する、整えられエリア、または大腿部に対応する、胸のグレースケール解析のための関心の異なる領域で示すように楕円形または長方形のグレースケール解析のための関心領域（ROI）、（B）腹ビューの。
図2：Tiffenの数の標準対グレースケール解析上のピクセルレベルの標準Tiffenのチャートが示さF-停止でゲルイメージャーで撮影されたピクセルレベル対 Tiffenの数の（A）は、グラフ、期待対数関係を示す（B。。。 ）対数変換は、この範囲内の非線形の関係に従うことを続けています。
図3：F-ストップ対グレースケール解析上のピクセルレベルの標準Tiffenのチャートが示されているF-停止でゲルイメージャーで撮影した。プロットされたF-ストップ対いくつかの異なるTiffenの基準に見られる画素レベルの変化である。修正がphotogra間の基準を揃えることを示す、線が平行でないことに注意してくださいPHSは、個別に各関心領域毎に計算する必要がある。
図4：グレースケール解析の異なる写真技術と関心領域との相関同じC3Hから採取した、示された測定技術との間の相関がある示さ/ HEJ、同じ時点でマウスを移植した対の楕円形の領域の長方形の（A）相関。背ビューの利息。Fの（B）の相関関心の矩形領域を使用して、2.0 対 1.2を停止します。背側と腹側のビューからの階調値の（C）の相関、関心の矩形領域。線形回帰分析した（p <0.0001）によって決定されたすべての相関は統計的に有意であった。
図5は：C3H / HEJでグレースケール解析を用いて吸収の変化の時間経過は、マウスを移植された色は個々のマウスからのシリアルの測定値を示している。。 1の時点から次の各マウスのための一貫性に注意してください。
図6：化学療法誘発性脱毛症におけるグレースケール分析 6週齢のC57BL6 / Jマウスに、ビヒクル（N = 6）またはシクロホスファミドの3週単位投与量（50mg / kgの）のいずれかで処置した（N = 6）した（A）。治療群の各々から3匹のマウスの代表的なグループは、化学療法開始後2ヶ月を撮影した。（B）コンパイル済みデータをグレースケール解析から各グループから、図シクロホスファミド投与した（p <0.05）の吸収を減少させた。目に見える髪の間の相関関係に注意してくださいパネルAにおける損失とパネルBの吸収の統計的に有意な減少
| 次のように吸収値は次のとおりです。 | |||
| 写真 | Fストップ | ROI | 吸収 |
| 1 | 2 | スタンダード | 90 |
| 1 | 2 | ROI-1 | 100 |
| 1 | 2 | ROI-2 | 200 |
| 1 | 3 | スタンダード | 150 |
| 1 | 3 | ROI-1 | 160 |
| 1 | 3 | ROI-2 | 230 |
| 2 | 2 | スタンダード | 110 |
| 2 | 2 | ROI-1 | 120 |
| 2 | 2 | ROI-2 | 210 |
| 2 | 3 | スタンダード | 160 |
| 2 | 3 | ROI-1 | 170 |
| 2 | 3 | ROI-2 | 235 |
| F-停止2.0として選ば読書、リファレンスFストップ3.0として選ばれた。 | |||
| 参考基準値（RSV）= F-停止2.0、RSV =平均（90、110）= 100で、写真1、写真2の標準の吸収の平均 | |||
| 写真1の場合： | |||
| デルタS = 150から90 = 60 | |||
| デルタROI-1 = 160から100 = 60 | |||
| デルタROI-2 = 230から200 = 30 | |||
| ROI-1を補正し、吸収= 100 +（100から90）*（60分の60）= 110 | |||
| 写真2の場合： | |||
| デルタS = 160から110 = 50 | |||
| デルタROI-1 = 170から120 = 50 | |||
| デルタROI-2 = 235から210 = 25 | |||
| ROI-1を補正し、吸収= 120 +（100から110）*（50 /）= 110 | |||
| ROI-2について修正吸収= 210 +（100から110）*（50分の25）= 205 | |||
表1：写真間の露出の違いを補正するためのサンプル計算は表には、写真間の規格（オプションのステップ3.2）の吸収の小さな違いを補正する方法の例を示している。
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Discussion
本報告書では詳細な説明は、げっ歯類で脱毛を定量化するための新しい技術の提供されています。この技術は、ほとんどの実験室で容易に利用可能である画像取得と分析のためのゲルイメージャ、機器を利用する。測定は、技術（ 図4から5）における小さな変化に対してロバストであることが示されており、治療モデルにおける視覚脱毛（ 図6）の程度によく相関している。これらの技術は、正常に脱毛17のための実験的治療の評価に用いられてきた。
げっ歯類で髪の成長を評価するための定量的なツールは、脱毛症の治療薬の研究を進める上で非常に貴重なことができます。脱毛症のための多くのマウスモデルは、それが困難な治療的介入の主観的評価に関する結果を基にすることができる固有の可変性を有している。同様に、フォームで結果を提供する定量的評価連続的な測定値のグループの平均値と標準偏差/標準誤差で要約することができ、標準的な統計的手法（ANOVA、T検定）を用いて試験することができる。この定量的評価は、一連の時間点にわたって応答を測定するために利用することができ、試験化合物の用量反応曲線を生成するのに使用することができる。定量分析は、このように開発が進められている治療薬の有効性のエビデンスに基づいた評価をすることができます。
この技術は、被毛、多くのマウス系統に存在する皮膚との間の色の違いを利用する。黒い髪を持つマウスの場合、毛の密度、光吸収のより多くの量が大きくなる。この光吸収は、ウエスタンブロット分析におけるタンパク質の量を定量化するために関心のある特定領域内の光吸収を評価するために設計されたゲル撮影装置を用いて定量化することができる。ウェスタンブロット分析と同様に、得られた吸収測定は肛門であることができるマウスのグループ間の毛髪密度（ すなわち、制御対処理）を比較するために、標準的な統計的手法を使用してyzed。
ウェスタンブロット分析は、一般に、その画像上に設けられた基準と比較して分析される単一の画像に対して行われる。しかし、このアプリケーションでは、異なる時間に撮影することができる異なる画像間の比較を行うことが必要となる。非常に一貫性のある写真の技術では、写真間のばらつきを最小限に抑えることができる。写真間の露出のわずかな変動を補償することができるならば、実験的なアプリケーションのために、それは便利です。したがって、グレースケール規格写真に含まれることが重要である（ すなわち、Tiffenのグレースケールチャート15）。しかし、吸収と露光との間の関係は、ターゲット（ 図2A）の光学密度に依存して変化する。したがって、グレースケール規格がta異なる光学濃度を有する場合目標、適切な補正が異なる場合があります。対数補正は便利ですが、この問題（ 図2B）に最適なソリューションを提供しない。 2つの異なるF-停止で写真を撮影することで、人は写真にグレースケール標準用と各ターゲットの線形近似を計算するため、個々のターゲットのための補正の適切なスケーリングを提供することができます。 図3は 、異なる光学とどのように目標を示している密度は、2つの異なるFストップにおける各ターゲットの吸収の違いから補間することができる別の補正係数を有することになる。したがって、一つは150の値に規格を標準化することを望む場合、光学密度Tiffen 19の目標が148であるように、Tiffen 18一つが140になり、Tiffen 17における一つように119である、となる。むしろグラフィカルにこれらの補正を解決するよりも、1はグレースケール標準との間で、ターゲットとの間の斜面の比率を使用することができます2はfoの補正を計算するために、F-停止するrは各ターゲット、提供された例で説明したように（ 表1）。
全ての技術と同様に、グレースケール解析による毛髪成長の定量分析は、いくつかの制限がある。まず第一に、この技術の応用において重要な計算の複雑さがある。これは、ゲルイメージャ解析ソフトウェアは別の実験として、各図を分析するために最適化されていることに起因する。このように、手動で画像間のエクスポージャー内の任意の変動を補正するための要件がある。このような補正のための線形化された近似値は、このプロセスを簡素化しない。例を表1に提供されますで撮影された写真の2セット、のシミュレートされたデータの共通規格で、2.0と3.0のF-停止。写真の各セットは、セットの間で比較する必要がある2のROIを有する。撮影条件における小さな変化が第2の設定よりもわずかに大きい露出を有するように、写真の最初のセットを引き起こして、evideNT共通規格の吸収のわずかな違いによって。
例では、撮影条件に若干の違いが所定のROIでの吸収の明らかな違いを作成する方法を示しているが、これらの画像の2セットの間で異ならないのROIでの吸収を示し、この場合には、参照標準を用いて補正することができる。
それは、常に直接抜け毛や髪の成長のために誤解されるかもしれない髪脱色素または他の色の変化の量に相関しない光吸収のその変化に注意することが重要である。比較するとのゴールドスタンダードは、現在存在しないため、残念ながら、この技術の精度を評価することはできない。明らかな脱毛がある場合しかし、この技術は、期待される結果（ 図6）を生成しない。最後に、現在、この技術を用いた結果は、潜在的な治療薬の臨床試験における転帰と相関するかどうかを評価するためのデータがない。
<p個のクラスは= "jove_content">脱毛症の様々な形態で脱毛を定量化するためのグレースケール解析が脱毛症のモデルを特徴付けるため、および潜在的な治療へのテスト応答のための方法を改良し、標準化する機会を表す。この技術の適用は、脱毛症のためのより効果的な治療法の同定および開発を強化する必要があります。Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| KODAK Gel Logic 100 Imaging System | Eastman Kodak Company, Rochester, NY, USA | Gel imager for obtaining and analyzing photographs, must have built in light source for reflective photography. | |
| The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale |  Imatest |
Greyscale standard | |
| C57BL/6J Mice | Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine | Mice for representative study | |
| C3H/HeJ engrafted mouse | Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine | Mice for representative study |
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