Abstract
העכבר הוא עכשיו בעלי החיים העיקריים המשמשים למודל מגוון של מחלות ריאה. כדי לחקור את המנגנונים העומדים בבסיס פתולוגיות כגון, יש צורך בשיטות פנוטיפי שיכול לכמת את השינויים פתולוגיים. יתר על כן, על מנת לספק את הרלוונטיות translational למודלים של העכברים, מדידות מסוג זה צריכה להיות בדיקות שיכולים להיעשות בקלות בבני האדם ועכברים. למרבה הצער, בספרות בהווה יש לי כמה מדידות פנוטיפי של תפקוד ריאות יישום ישיר לבני אדם. חריג היחיד הוא היכולת לשדר לפחמן חד חמצני, שהוא מדידה שנעשית באופן שיגרתי בבני אדם. בדו"ח הנוכחי, אנו מתארים אמצעים למדידת יכולת לשדר את זה בעכברים במהירות ובפשטות. ההליך כרוך אינפלציה קצרה ריאות עם גזים נותב בעכבר הרדים, ואחרי זמן ניתוח גז 1 דקות. בדקנו את היכולת של שיטה זו כדי לזהות כמה פתולוגיות ריאה, כולל אמפיזמה, סיסטיק, פציעת ריאות חריפה, ושפעת וזיהומים פטרייתיים ריאות, כמו גם התבגרות ריאה ניטור בגורים צעירים. תוצאות מראות ירידה משמעותית בכל פתולוגיות הריאות, כמו גם עלייה ביכולת לשדר עם התבגרות ריאה. מדידה זו של קיבולת לשדר ריאות ובכך מספקת בדיקת תפקוד ריאתי שיש לו בקשה רחבה עם היכולת שלה לזהות שינויים מבניים פנוטיפי עם רוב דגמי ריאות פתולוגיים הקיימים.
Introduction
העכבר הוא עכשיו בעלי החיים העיקריים המשמשים למודל מגוון של מחלות ריאה. כדי לחקור את המנגנונים שנמצאים בבסיס פתולוגיות כגון, יש צורך בשיטות פנוטיפי שיכול לכמת את זה שינויים פתולוגיים. למרות שיש מחקרים רבים שבם עכבר מכניקת אוורור נמדדות, מדידות אלה הן בדרך כלל אינן קשורות להערכות סטנדרטי של תפקוד הריאתי נעשו בדרך כלל בבני אדם. זה מצער, שכן היכולת לבצע מדידות מקבילות בעכברים ובני אדם עשוי להקל על התרגום של תוצאות במודלים של עכברים למחלות בבני אדם.
אחת המדידות הנפוצות ביותר ונעשו בקלות בבני אדם הוא היכולת לשדר לפחמן חד חמצני (DLCO) 1,2, אך מדידה זו כמעט ולא נעשתה רק במודלים של עכברים. באותם מחקרים שבם זה כבר דווח 3-7, לא חלו מחקרי מעקב, בין שאר משום שהנהלים הם לעתים קרובות מסורבלים או עשוי require ציוד מורכב. גישה נוספת היא להשתמש בשיטה CO rebreathing במערכת במצב יציבה, שבו יש את היתרון של להיות מסוגל למדוד דיפוזיה CO בעכברים מודעים. עם זאת שיטה זו היא מסורבלת מאוד, ותוצאות יכולות להשתנות עם רמת האוורור של העכבר כמו גם O 2 ו- CO 2 ריכוזים 8,9. קשיים אלה נראים שמנעו שימוש שיגרתי בלשדר יכולת לזהות פתולוגיות ריאות בעכברים, למרות כמה יתרונות משלה.
כדי לעקוף בעיות עם מדידה של קיבולת לשדר בעכברים, פרטים של אמצעים פשוטים למדוד את זה בעכברים כבר דיווח לאחרונה 10. ההליך מבטל את הבעיה הקשה של דגימת גז alveolar שאינו נגוע בדגימת נפח שווה לגז ההשראה כל מהירות. תוצאות הליך זה במדידה מאוד לשחזור, כינו את גורם דיפוזיה לפחמן חד חמצני (DFCO), כי הוא רגיש למארח של הרשות הפלסטיניתשינויי thologic בפנוטיפ הריאות. DFCO מחושב כך כ1 - (CO 9 / CO ג) / (Ne 9 / Ne ג), שבו ג ו9 התחתיים מתייחסים לריכוזים של גזי הכיול המוזרקים והגזים הוסרו לאחר זמן לעצור את נשימת 9 שניות, בהתאמה. DFCO הוא משתנה ממדים, אשר משתנה בין 0 ל -1, כאשר 1 משקף ספיגה של כל CO מלא, ומשקפים 0 אין ספיגה של CO.
במצגת זו אנו מראים כיצד לבצע מדידת קיבולת לשדר זה, וכיצד ניתן להשתמש בו כדי לתעד שינויים כמעט בכל האחד מהמודלים הקיימים ריאות עכבר המחלה, כולל אמפיזמה, ציסטיק, פציעת ריאות חריפה, וזיהומים נגיפיים ופטריות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
הערה: כל פרוטוקולי בעלי החיים אושרו על ידי ועדת אוניברסיטת הטיפול בבעלי חיים והשימוש בג'ונס הופקינס.
1. הכנת בעלי החיים
- הכן עכברי 6 C57BL / 6 שליטה למדידת DFCO, על ידי הרדמתם עם קטמין וxylazine כפי שמתוארת בשלב 2.3 להלן.
- הכן את כל עכברים האחרים עם פתולוגיות ריאות השונות מוצגות בטבלה 1 על ידי שימוש באותו הליך כלבקרה. פרטים ספציפיים הנחוצים להקמה כל אחד ממודלים אלה נמצאים באזכור הרלוונטי. עכברי בקרה ואלה בקבוצות פתולוגיים האחרות הם כל 6-12 השבועות של גיל.
2. מדידה של פקטור Diffusion לפחמן חד חמצני (DFCO)
- להגדיר את מודול כרומטוגרף גז המסופק עם המכשיר למדידת פסגות לחנקן, חמצן, ניאון, ופחמן חד חמצני. לשימוש ביישום זה רק את נתוני הניאון וCO.
הערה: מכשיר זה משתמש בs מולקולריתטור ieve עם הליום כגז מוביל, עם 12.00 מיקרומטר סרט, מזהה מיקרומטר 320.00 ו -10 מ 'אורך. יש עמודת כרומטוגרף נפח של 0.8 מיליליטר, אבל השתמשנו 2 מיליליטר כדי להבטיח סליקה נאותה של צינורות חיבור עם המדגם. - בתחילתו של כל יום ניסיוני, לפני ביצוע מדידות של דגימות מהעכברים, לקחת דגימת 2 מיליליטר ישירות משקית תערובת גז המכילה כ -0.5% Ne, CO 0.5%, ולאזן אוויר, ולהשתמש במדגם זה לכייל גז כרומטוגרף.
- הרדימי עכברים עם קטמין (90 מ"ג / קילוגרם) ו xylazine (15 מ"ג / קילוגרם), ולאשר הרדמה על ידי היעדר תנועת רפלקס. החל משחה טרינריים המשפיעה על העיניים כדי למנוע יובש. Tracheostomize עכברים עם צינורית מחט בדל (18 G במבוגרים או 20 G בעכברים צעירים מאוד).
הערה: DFCO הושלם בתוך פחות מ -10 דקות לאחר הרדמה ולפני כל הנשמה מלאכותית או הליכים אחרים. - בעכברים יותר מ -6 שבועות של גיל, השתמש t מזרק 3 מיליליטרo לסגת 0.8 מיליליטר של גז משקית תערובת גז. חבר את המזרק לצינורית לקנה הנשימה ולנפח את הריאות במהירות. שימוש במטרונום, לספור 9 שניות, ולאחר מכן במהירות למשוך את 0.8 מיליליטר (אוויר ננשף).
- לדלל 0.8 מיליליטר למשיכה זו נשף אוויר עד 2 מיליליטר עם אוויר חדר, לאפשר לו לנוח לפחות 15 שניות. אז להזריק את כל המדגם לגז כרומטוגרף לניתוח.
- תוך ניתוח מדגם DFCO הראשון, לנפח את ריאות עכבר עם 0.8 מיליליטר שני משקית תערובת גז, ולאחר מכן לעבד מדגם זה זהה למדגם הראשון. ממוצע שתי מדידות DFCO.
הערה: למדידות בעכברים צעירים כמו 2 שבועות של גיל, השתמש בהיקף של 0.4 מיליליטר, מאז 0.8 מיליליטר גדול מדי נפח לבצע מדידות בריאות של עכברים צעירים מאוד. עדיף להשתמש בנפח 0.8 מיליליטר לעכברים מבוגרים מ -6 שבועות, ושאם יש צורך בנפח 0.4 מ"ל לכמה עכברים, יש להשתמש בו באופן עקבי לכל העכברים בקבוצה הנחקרים. - לחשב DFCOכ1 - (CO 9 / CO ג) / (Ne 9 ג / Ne), שבו subscripts ג ו9 מתייחס לריכוזים של גזי הכיול המוזרקים והגזים הוסרו לאחר זמן לעצור את נשימת 9 שניות, בהתאמה.
- לנתח ולהשוות הבדלים עם ANOVA חד-כיווני ולהעריך את הרמה מובהקת עם התיקון של Tukey להשוואות מרובות בכל עכברי העוקבה. שקול p <0.05 ערך משמעותי כ.
הערה: כל העכברים משמשים כאן היה חלק ממחקרי ניסויים מעורבים מספר מדידות עוקבות של אוורור ריאות, מכניקה, שטיפת ריאות, או היסטולוגיה, אשר אינן מדווחות כאן. בנוסף, מאז השיטה היא זהה בכל הדגמים הניסיוניים כפי שנעשה לעיל בעכברי השליטה, רק התוצאות מדגמי פתולוגיים השונים מוצגות. מידע נוסף על דגמים אלה מוצג בטבלה משלימה. - להרדים בעלי החיים על ידי anesthe העמוקמנת יתר של טיקים ואחריו נקע או עריפת ראש צוואר רחם. במידת צורך, להסיר את תאי ריאה ו / או רקמות מהעכברים המתים עבור ביולוגי נוספים או עיבוד היסטולוגית וניתוח.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
איור 1 מציג את מדידות DFCO מהעכברים הבוגרים בקבוצות A, B, C, D, E, ופ היו ירידה משמעותית בשני זיהומי אספרגילוס ושפעת, כמו גם לירידה משמעותית בfibrotic, emphysematous, ואקוטי מודלים פציעת ריאות. איור 2 מראה את השינויים בקבוצה G התפתחותיים בDFCO לאורך זמן כמו עכברים מגיל 2-6 שבועות. יש עלייה קלה אך משמעותית עם התפתחות ריאות על מהלך הזמן הזה. ההשפעה של שימוש קטן יותר בנפח אינפלציה גם הייתה די ברורה בנקודת הזמן 6 השבוע. הייתה נטייה לנקבות יש DFCO מעט גבוה יותר, אבל זה היה רק משמעותי בנקודת זמן 5 בשבוע.
| קבוצה | פתולוגיה או מצב | תגובות |
| C57BL / 6 פקדים (8-10 שבועות), n = 6 | עכברים בריאים </ Td> | |
| B | C57BL / 6 עכברים שקבלו 25 TCID50 של נגיף שפעת A (PR8) intranasally, n = 10 | מודל שפעת, למד 6 ו -8 ימים לאחר הדבקה |
| C | C57Bl / 6 עכברים שקבלו 5.4 elastase לבלב U intratracheally, n = 6 | מודל אמפיזמה 10,13 למד 21 ימים לאחר אתגר אלסטט |
| D | C57BL / 6 עכברים שקבל 0.05 בליאומיצין U intratracheally, n = 6 | מודל פיברוזיס 14 למד 14 ימים לאחר אתגר בליאומיצין |
| E | בקרות CFTR null ואלו שנדבקו בשאיפת תרסיס של fumigatus Aspergillus (AF293 זן), n = 6 | מודל זיהום פטרייתי 11,17 למד 12 ימים לאחר זיהום פטרייתי |
| F | C57BL / 6 עכברים שקבל LPS BW / g 3 מיקרוגרם (coli Escherichia) intratracheally, n = 6 | פגיעה מודל החריף ריאות (ALI) 15 למדבימים 1 ו -4 לאחר עלבון LPS |
| G | C57BL / 6 עכברים זכרים ב2-6 שבועות של גיל, n = 5 בכל גיל | מודל פיתוח ריאות |
טבלה 1: רישום של המודלים השונים של העכברים שבי DFCO נמדד.
איור 1:. מדידה של DFCO בC57BL השליטה / 6 העכברים (קבוצה) ובכל אחד 5 דגמי פתולוגיים שונים מוצגים הם תוצאות 6 ו -8 ימים לאחר שפעת PR8 (הקבוצה B), 21 ימים לאחר אלסטט intratracheal (קבוצה C), 14 ימים לאחר בליאומיצין intratracheal (הקבוצה D), 12 ימים לאחר הדבקת אספרגילוס בעכברי CFTR null (הקבוצה E), ו 1 ו -4 ימים לאחר החדרת LPS (הקבוצה F). * מציין P <0.01 לעומת שליטה, # מציין P <0.01 בין 6 ו8 עכברי שפעת היום והעכברים LPS היום 1 ו -4, ו+ מציין P <0.05 לעומת שליטה.
איור 2: מדידה של DFCO בC57BL / 6 עכברי זכרים מ2 עד 6 שבועות של גיל (הקבוצה G) המדידות נעשו בכל העכברים עם אינפלציה נפח של 0.4 מיליליטר, ובעכברי 6 בן שבוע מדידה שנייה הייתה. עשה עם 0.8 מיליליטר. עם 0.4 מיליליטר הנפח, היו עליות משמעותיות בDFCO בין זכר 2 שבוע ואלה בבית 4, 5, ו -6 שבועות (P <0.05).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
בעבודה הנוכחית, שהגדרנו מדד חדש לכמת את יכולת גז החלפה של ריאות העכבר. מדד זה מקביל ליכולת לשדר, מדידה קלינית נפוצה המודדת את התפקיד העיקרי של הריאות, כלומר, יכולתו להחליף גז. היכולת לשדר היא מדידת הריאות רק פונקציונלית, כי יכול לעשות זאת בקלות ובמהירות בשני עכברים ובני אדם. לגילוי מחלת ריאות בעכברים, מטרה העיקרית היא לכמת שינויים בתפקוד ריאות בין השליטה וחברים ניסיוניים. כדי להשיג מטרה זו, יש לנו מוגדר ונצלו את DFCO להפגין את יכולתה של quanitfying שינויים פנוטיפי ברוב הדגמים הנפוצים ביותר של מחלת ריאות בעכברים, לרבות שינויים פונקציונליים עם התפתחות ריאות.
אחת השערות הגלומות בגישה שמפשטת את מדידת DFCO בעכברים היא כי ההשפעה של גז השראה צרוף בשטח המת אנטומיים וציוד הוא IGNכבדתי. עם זאת, תאר 10 כמו בעבר, השימוש בנפח 0.8 מיליליטר האינפלציה מציג שגיאה קטנה אך עקבית בכל המידות. סדר הגודל של שגיאה זו הוא פונקציה של הגודל היחסי של האינפלציה וכרכי שטח מתים. בגישה הנוכחית, שגיאה זו ממוזערת על ידי ביטול השטח המת בברזים למיניהם או T-מחברים, וכפי שניתן לראות בסרטון, פשוט משתמשת באצבע כדי לאטום את המזרק ולהקל על העברת גז. הליך זה גורם לדירות גבוהות בין מדידות. ההשפעה הקטן יותר הנדרשים בעכברים הצעירים האינפלציה הנפח הבהירה בעכברים הישנים 6 שבוע שמוצגים באיור 2, שבו מבחן 0.4 מיליליטר הראשוני מייד אחריו עם מבחן 0.8 מיליליטר בכל עכבר. עם 0.8 מיליליטר ערך DFCO בהיה בטווח עבור C57BL / 6 עכברים בקבוצות האחרות, אבל המדידה עם 0.4 מיליליטר היא באופן עקבי קטנה יותר. זהו ביטוי ישיר של העובדה שעם הנפח הקטן יותר, recovereיש מדגם שניות ד 9 חלק גדול יותר של אוויר השטח המת, שרק מורכב מריכוזי גז השליטה. עובדה זו באה לידי ביטוי כשינוי קטן השבר בריכוז CO, שמקרב אותו השינוי בריכוז Ne. עם יחס מוגבר של CO / Ne, DFCO המחושב (1 - יחס זה) הוא כך קטן.
בדגמים הרבים של פתולוגיה ריאות מוצגים באיור 1, היו ירידה משמעותית נצפתה בDFCO. עם זאת, יש כמה סיבות שונות מדוע DFCO ירידות בדגמים השונים אלה. בסיסטיק נגרמים על ידי המנה בודדת של bleomycin, יש דלקת ועיבוי של מחסום דיפוזיה שמוביל לירידה ביכולת לשדר 16. באמפיזמה, יש אובדן של שטח פנים פועל ישירות על מנת להפחית את השטח הפנים לדיפוזיה ונפח הדם בנימים שהיו בקירות נהרסו. אין יחסי מנה-תגובה עם elastasדואר מוצגים כאן, אבל נתונים שלא פורסמו מראים קורלציה טובה של DFCO עם רמת נזק emphysematous. עם זיהום השפעת, יש מצטמצם לשדר יכולת סבירה כתוצאה משני עיבוי של מחסום דיפוזיה וגידול באזורים מאווררים המאוחדים של ריאות. במודל שפעת PR8 משמש כאן, זה מחמיר עם זמן (כפי שבאו לידי ביטוי בירידה המשמעותית נוספת בDFCO ביום 8), והעכברים בדרך כלל מתים סביב יום 10. בעכברי null CFTR, היה DFCO קטן יותר בתחילת המחקר , אבל עכברים אלה נעשים על רקע גנטי מעורב 17, כך שעשויה להיות הבדלים מבניים עם פקדי C57BL6. עם זאת, זיהום Aspergillus גרם לירידה משמעותית יותר משמעותית בDFCO, וסיבות לירידה בזיהום פטרייתי צפויות דומות לאלה עם השפעת. תוצאות LPS בדלקת חריפה שגורמת לירידה משמעותית DFCO, סביר להניח מעיבוי בצקים של diמחסום ffusion ואזורים מאווררים של ריאות מלאות בנוזל. עם המנה של LPS משמשת, הירידה בDFCO היא הגדולה ביותר ביום 4 או 5 ולאחר מכן משחזרת חזרה לשליטה על ידי יום 10 (מידע לא מוצג).
לניתוח של שינויים בDFCO עם צמיחת ריאות בעכברים הצעירים, 0.4 מיליליטר האינפלציה הנפח בבירור אפשר מדידות לשחזור, והצליח להראות עלייה איטית ביכולת לשדר כפירעון מבוגר הריאות הגיעו (איור 2). ההשפעה של שימוש אינפלציה 0.4 מיליליטר קטן יותר נפח בהפחתת DFCO המחושב היא גם מה שהיה צפוי, אבל הגדול יותר 0.8 מיליליטר הנפח לא ניתן להשתמש בעכברים הקטנים יותר. אבל שינויים בפיתוח או פתולוגיה עדיין צריכים להיות reproducibly לזיהוי אפילו עם 0.4 מיליליטר הנפח.
לסיכום, בסרטון זה וכתב יד המצורפת מראה כיצד להשיג מדידה פונקציונלית בעכברים שדומה למה שניתן למדידה בבני אדם. המדד משקף אתbility של הריאות להחליף גז עם מגוון רחב של שינויים מבניים ריאות הנגרמים על ידי פתולוגיות הנפוצות ביותר למדו. גורם דיפוזיה זה לפחמן חד חמצני (DFCO) הוא מאוד לשחזור, ורגיש מספיק כדי לזהות שינויים תפקודיים ומבניים עם פתולוגיות המושרית ביותר בניסוי בעכברים צעירים או זקנים. העובדה שזה ישירות מקביל למדידות דומות שנעשו בבני אדם כדי להעריך מחלת ריאות, עושה את זה בדרך פשוטה להשיג מדד רלוונטי מאוד לphenytype פתולוגיות ריאות עכבר.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
אין ניגודי אינטרסים, ומה למסור.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Gas Chromatograph | Inficon | Micro GC Model 3000A | Agilent makes a comparable model |
| 18 G Luer stub needle | Becton Dickenson | Several other possible vendors | |
| 3 ml plastic syringe | Becton Dickenson | Several other possible vendors | |
| Polypropylene gas sample bags | SKC | 1 or 2 L capacity works well | Other gas tight bags will work well |
| Gas tank, 0.3% Ne, 0.3% CO, balance air; (size ME) | Airgas, Inc | Z04 NI785ME3012 | This is the standard mixture used for DLCO in humans |
| 25 TCID50/mouse of influenza virus A/PR8 diluted in phosphate buffered saline. | |||
| Porcine pancreatic elastase | Elastin Products, Owensville, MO | 5.4 U | |
| Bleomycin | APP Pharmaceuticals, Schaumburg, IL | 0.25 U | |
| Escherichia coli LPS | Sigma L2880 | 3 μg/g body weight; O55:B5 | |
| Aspergillus fumigatus (isolate Af293) conidia were collected from mature colonies grown on potato dextrose agar. |
References
- Ogilvie, C. M., Forster, R. E., Blakemore, W. S., Morton, J. W. A standardized breath holding technique for the clinical measurement of the diffusing capacity of the lung for carbon monoxide. J Clin Invest. 36 (1 Pt 1), 1-17 (1957).
- Miller, A., Warshaw, R., Nezamis, J. Diffusing capacity and forced vital capacity in 5,003 asbestos-exposed workers: Relationships to interstitial fibrosis (ILO profusion score) and pleural thickening. Am J Ind Med. 56 (12), 1383-1393 (2013).
- Enelow, R. I., et al. Structural and functional consequences of alveolar cell recognition by CD8(+) T lymphocytes in experimental lung disease. J Clin Invest. 102 (9), 1653-1661 (1998).
- Hartsfield, C. L., Lipke, D., Lai, Y. L., Cohen, D. A., Gillespie, M. N. Pulmonary mechanical and immunologic dysfunction in a murine model of AIDS. Am J Physiol. 272 (4 Pt 1), 699-706 (1997).
- Wegner, C. D., et al. Intercellular adhesion molecule-1 contributes to pulmonary oxygen toxicity in mice: role of leukocytes revised. Lung. 170 (5), 267-279 (1992).
- Reinhard, C., et al. Inbred strain variation in lung function. Mamm Genome. 13 (8), 429-437 (2002).
- Sabo, J. P., Kimmel, E. C., Diamond, L. Effects of the Clara cell toxin, 4-ipomeanol, on pulmonary function in rats. J Appl Physiol. 54 (2), 337-344 (1983).
- Depledge, M. H. Respiration and lung function in the mouse, Mus musculus (with a note on mass exponents and respiratory variables). Respir Physiol. 60 (1), 83-94 (1985).
- Depledge, M. H., Collis, C. H., Barrett, A. A technique for measuring carbon monoxide uptake in mice. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 7 (4), 485-489 (1981).
- Fallica, J., Das, S., Horton, M. R., Mitzner, W. Application of Carbon Monoxide Diffusing Capacity in the Mouse Lung. J Appl Physiol. 110 (5), 1455-1459 (2011).
- Chaudhary, N., Datta, K., Askin, F. B., Staab, J. F., Marr, K. A. Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator regulates epithelial cell response to Aspergillus and resultant pulmonary inflammation. Am J Respir Crit Care Med. 185 (3), 301-310 (2012).
- Foster, W. M., Walters, D. M., Longphre, M., Macri, K., Miller, L. M. Methodology for the measurement of mucociliary function in the mouse by scintigraphy. J Appl Physiol. 90 (3), 1111-1117 (2001).
- Yildirim, A. O., et al. Palifermin induces alveolar maintenance programs in emphysematous mice. Am J Respir Crit Care Med. 181 (7), 705-717 (2010).
- Collins, S. L., Chan-Li, Y., Hallowell, R. W., Powell, J. D., Horton, M. R. Pulmonary vaccination as a novel treatment for lung fibrosis. PLoS One. 7 (2), e31299 (2012).
- Alessio, F. R., et al. CD4+CD25+Foxp3+ Tregs resolve experimental lung injury in mice and are present in humans with acute lung injury. J Clin Invest. 119 (10), 2898-2913 (2009).
- Martinez, F. J., et al. The clinical course of patients with idiopathic pulmonary fibrosis. Ann Intern Med. 142 (12 Pt 1), 963-967 (2005).
- Zhou, L., et al. Correction of lethal intestinal defect in a mouse model of cystic fibrosis by human CFTR. Science. 266 (5191), 1705-1708 (1994).
