Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

تقييم الجدوى من الدهون الإنسان الحقن في الفئران عارية مع مايكرو-التصوير المقطعي

Published: January 7, 2015 doi: 10.3791/52217
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1,2, 1,2
1Hagey Laboratory for Pediatric Regenerative Medicine, Department of Surgery, Plastic and Reconstructive Surgery Division, Stanford University School of Medicine, 2Institute for Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Stanford University School of Medicine
* These authors contributed equally

Abstract

Lipotransfer هو أداة حيوية في عتاد الجراح لعلاج العجز الأنسجة اللينة من جميع أنحاء الجسم. الدهون مثالية حشو أنسجة لينة كما هو متاحة بسهولة، يمكن الحصول عليها بسهولة، وغير مكلفة، وحيويا بطبيعتها. 1 ومع ذلك، على الرغم من شعبيتها المتنامية، ويعوق تطعيم الدهون التي كتبها نتائج غير متوقعة وبقاء الكسب غير المشروع متغير، مع معدلات الاحتفاظ نشرت تتراوح في أي مكان من 10 -80٪. 1-3

لتسهيل التحقيقات على تطعيم الدهون، وبالتالي قمنا بتطوير نموذج حيواني الذي يسمح للتحليل في الوقت الحقيقي من حقن الاحتفاظ حجم الدهون. لفترة وجيزة، يتم إجراء قطع صغير في فروة الرأس من CD-1 الفأر عارية ويتم وضع 200-400 ميكرولتر من lipoaspirate معالجتها خلال الجمجمة. يتم اختيار فروة الرأس مثل موقع المتلقي بسبب غيابها من الدهون تحت الجلد الأصلي، وبسبب تباين الخلفية الممتاز الذي قدمته القبة، والذي يساعد فيعملية التحليل. ويستخدم التصوير المقطعي الصغيرة المحسوبة (الصغير-CT) لمسح الكسب غير المشروع في الأساس وكل أسبوعين بعد ذلك. وأعيد بناؤها الصور CT، ويتم استخدام برامج التصوير لتحديد حجم الكسب غير المشروع.

تقليديا، وتقنيات لتقييم حجم الكسب غير المشروع الدهون استوجبت القتل الرحيم للحيوان دراسة لتوفير مجرد تقييم واحد من وزنه الكسب غير المشروع وحجم التداول بنسبة قياس البدني خارج الحي. مقارنات البيوكيميائية والنسيجية ويتطلب كذلك الحيوان الدراسة إلى أن الموت الرحيم. هذه التقنية التصوير وصفها تقدم ميزة تصور وموضوعية قياس حجم عند نقاط زمنية متعددة بعد التطعيم الأولي دون الحاجة للتضحية الحيوان الدراسة. وهذه التقنية محدودة بسبب حجم الكسب غير المشروع قادرا ليتم حقنه والجلد خطر الطعوم أكبر ونخر الدهون. هذه الطريقة لها فائدة لجميع الدراسات تقييم الجدوى الدهون الكسب غير المشروع والاحتفاظ الحجم. بشكل خاص مناسبة تماما لprovidiنانوغرام تمثيل مرئي الطعوم الدهون وبعد التغيرات في حجم مرور الوقت.

Protocol

ملاحظة: تم استعراض البروتوكولات التجريبية ونماذج موافقة المرضى للحصول على الدهون والموافقة عليها من قبل جامعة المؤسسي مجلس مراجعة ستانفورد (بروتوكول # 2188). وقد وافق جميع الإجراءات الحيوانية من جانب الفريق الإداري ستانفورد على رعاية الحيوان المعملية (APLAC) تحت بروتوكول # 9999. وأجريت جميع التجارب مع الالتزام الصارم سلامة الحيوان والمبادئ التوجيهية الرعاية الإنسانية.

1. الدهون الحصاد

  1. باستخدام الإجراء كولمان 17-19، الحصول على الأنسجة الدهنية لجسم الإنسان من البطن، الجناح، و / أو المناطق الفخذ من المرضى من النساء الأصحاء تمر شفط الدهون انتخابي.
  2. لمعالجة lipoaspirate للتطعيم، تبدأ من خلال السماح للدهون ليستقر لمدة 30 دقيقة.
  3. Lipoaspirate يستقر عادة إلى ثلاث طبقات، مع النفط في الجزء العلوي، والدهون في الوسط، والدم في الأسفل. نضح وتجاهل طبقة النفط العليا والطبقة السفلى الدم.
  4. لمزيد من إزالة أي tumesc المتبقيةالسوائل والأنف والحنجرة أو الحطام الخلية، جهاز طرد مركزي الدهون لمدة 5 دقائق في 350 x ج و 4 ° C، ونضح طبقة المائية أسفل.
  5. حساب كمية الدهون اللازمة للتطعيم، والسماح للخطأ تسليم 20٪، ونقل حجم المطلوب من الدهون إلى 50 مل المخروطية (ق). اضرب 400 من قبل عدد من الفئران في الدراسة للحصول ميكرولتر من الدهون اللازمة للتطعيم.
  6. عند هذه النقطة، إذا أداء الخلية بمساعدة Lipotransfer 20،21، وحجم المكان من الدهون للتطعيم على الجليد. ثم حصاد الخلايا الدهنية المشتقة اللحمية (ASCS) من الدهون المتبقية باستخدام تقنية القياسية التي وصفها Zuk وآخرون 22.

2. الدهون التطعيم

  1. الحصول على الإناث، متماثل CD-1 الفئران عارية للدراسة التجريبية. اختيار الفئران بين 8-12 أسابيع من العمر.
  2. للحث على التخدير ومكان الماوس في مربع ضربة قاضية مع 2.5٪ خليط الأيزوفلورين / الأكسجين في 2 لتر / دقيقة لحوالي 10 دقيقة. يرجى ملاحظة أن قوات العمليات الخاصة العراقية الموصى بهاجرعة lurane يختلف مع سلالة الماوس.
  3. عندما يكون معدل التنفس من الفأرة قد تباطأ، تأكيد التخدير الكافي مع قليل أخمص قدميه. تطبيق البيطري التشحيم مرهم للعين لكلتا العينين من الفأرة.
  4. إذا كان الماوس لا تتوانى في استجابة لقرصة أخمص قدميه، وهذا يؤكد طائرة كافية من التخدير. وضع الأنف الماوس، الى الرؤوس تقديم 2.5٪ خليط الأيزوفلورين / الأكسجين في 1-2 لتر / دقيقة. إذا تتراجع الماوس من قرصة أخمص قدميه، والعودة إلى مربع ضربة قاضية وإعادة الاختبار بعد 5 دقائق.
  5. إنشاء حقل معقمة تحت الماوس ومن ثم تعقيم فروة الرأس مع 2.5٪ بوفيدون اليود تليها 70٪ محلول الإيثانول. كرر مرتين أخريين.
  6. وضع الستائر الجراحية خلال الماوس وتوخي الحذر للحفاظ على حقل معقمة. أدوات معقمة، والقفازات، ومعدات الوقاية الشخصية ينبغي أن تستخدم في جميع الأوقات.
  7. إذا حجم الدهون ليتم المطعمة وضعت سابقا على الجليد، والسماح الدهون لضبط أول من RT قبل التسليم.
  8. Backload 1 مل بالتركيبة قفل المحاقن مع 1 ملمن الدهون.
  9. توصيل 14 G، 8 سم الدهون طويلة تطعيم قنية إلى نهاية الحقنة.
  10. نظام رئيس بالضغط على المكبس حقنة حتى بين 200 و 400 ميكرولتر من الدهون لا يزال في المحقنة. في حين تضغط على المكبس حقنة تأكيد أن قنية قد ملأت تماما مع الدهون من خلال مراقبة الدهون الخروج من حفرة قنية البعيدة.
  11. باستخدام ملقط غرامة، ورفع الجلد الظهري في خط الوسط تغمر الذيلية أقصى الجانب من الجمجمة. جعل 1.5 مم قطع في الجلد باستخدام مقص غرامة.
  12. وضع واحدة خياطة 6-0 النايلون خلال منتصف قطع التي سيتم لاحقا تستخدم لجلب الجرح حواف معا بعد يتم إجراء التطعيم. لا ربط الخيط.
  13. إنشاء جيب تحت الجلد فوق الجمجمة عن طريق إدخال قنية من خلال شق الجلد واجتياز قنية ذهابا وإيابا في نمط على شكل مروحة فوق الجمجمة لتحرير أي مرفقات النسيج الضام في الجلد المغطي.
  14. مرة واحدة وقد تم إنشاء جيب، ضع جannula في خط الوسط من الماوس مباشرة عبر الجمجمة حتى غيض تقع في منقاري أقصى الجانب من جيب التي ينبغي أن تكون خلف خط مرسوم بين العينين. (الشكل 1A)
  15. حقن ببطء الدهون بطريقة الوراء، ودفع المكبس في حين سحب قنية الظهر. باستخدام ملقط، وجلب حواف الجرح معا ورفع عنها للحفاظ على أي الدهون من تسرب من الجيب.
  16. ربط الخيط الذي تم وضعه سابقا، والتأكد من أن عقدة الأولى تكمن بخفة على الجلد. ربط ثلاثة عقدة مربعة وقطع الخيط مع 3 مم الذيل. (الشكل 1B)
  17. مع تأكيد التصور والجس اليدوي أن جيب لا مملوء والجلد المغطي للجيب ليست متوترة. إذا كان قد تم مملوء الجيب، وقطع الخيط، وإزالة جميع الدهون من داخل الجيب. غسل جيب خارجا مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) ودرجة الحموضة 7.4 وإعادة حقن-حجم أصغر من الدهون.
  18. إزالة الماوس منnesthesia ومكان على ظهرها أو الجانب في قفص نظيفة في حد ذاته. مراقبة الحيوان للتنفس منتظم، والحركات الطبيعية، وغياب النزيف، وعلامات الألم أو الضيق. إدارة البوبرينورفين 0.1 ملغ / كغ تحت الجلد كل 6 ساعات لمدة تصل إلى 48 ساعة إذا كان الحيوان في الألم.
  19. تأكد من أن الحيوان قد استيقظ بما فيه الكفاية للحفاظ على الاستلقاء القصية قبل تركها دون حراسة. لا تضع حيوان في قفص مع غيرها من الحيوانات حتى تعافى بشكل كامل.
  20. بعد 4 ساعات، وضمان أن الحيوان قادر على تناول الطعام والشراب، ونقل، والتنفس بشكل طبيعي وأنه لا يوجد نزيف من موقع المنطوق. إعادته إلى مرفق رعاية الحيوان.

3. مايكرو-CT

  1. الفئران مسح لحجم خط الأساس التي كتبها يوم 3 بعد الجراحة، ثم كرر بالاشعة في أسابيع 2 و 4 و 6 و 8 ما بعد الجراحة.
  2. عندما التصوير الفئران في كل نقطة زمنية، اتبع تخدير ورعاية الحيوان المبادئ التوجيهية قبل وبعد الإجرائية على النحو المبين سابقا في Steps 2،2-2،4 و2،17-2،19.
  3. القيام بمسح على الماسح الضوئي الصغير-CT مع حجم فوكسل إعادة بناء 100 ميكرون أو أفضل.
  4. مع ذروة kilovoltage الأشعة X 80 KVP وتيار الأنود من 450 أمبير، وإدارة جرعة التموينية ما يقرب من 5 centiGy أثناء الفحص 9 دقيقة لكل الماوس. يرجى ملاحظة هذه القيم تختلف تبعا للبروتوكول المسح الضوئي.
  5. قبل إجراء الفحص الأول، ومعايرة الدقيقة CT مع الوهمية التصوير الذي يميز بين الهواء والماء وكثافة العظام.
  6. وضع أربعة الفئران في الماسح الضوئي في موقف بطني مع اثنين من الفئران على رأس واثنين على الجزء السفلي. يمكن بسهولة أن شيدت سرير المسح باستخدام 60 مل المحاقن لعقد جسم الفأر و 10 مل الحقن كما الأقماع الأنف. 23
  7. الحفاظ على الفئران تحت التخدير مع 2.5٪ خليط الأيزوفلورين / الأكسجين في 1-2 L لكل دقيقة.
  8. تأكيد مع صورة الكشفية ان الجمجمة كاملة من الماوس، من الأنف إلى أول فقرة الرقبية، ومن أعلى الجمجمة لقاعدة SKUليرة لبنانية، سيتم تصويرها.

تحليل 4. مايكرو-CT

  1. فتح الصور التي أعيد بناؤها مع CT الجزئي التصوير تحليل البرامج التي تسمح بإنشاء المناطق المهمة (في ROI) عن طريق تحديد voxels باستخدام عتبات كثافة بكسل. البرنامج أيضا يسمح خلق 3D السطوح من خلال الاستيفاء من voxels المحدد، وللتحليل وحدة التخزين.
  2. تبدأ من خلال تحميل الصور CT أعيد بناؤها في ثنائي الأبعاد (2D) الإكليلي، محوري، والآراء السهمي. (الشكل 2A)
  3. باستخدام شريحة المحورية كدليل، انتقل إلى شريحة السهمي الذي يتوافق مع الجانب الأيسر الأكثر من الكسب غير المشروع الدهون. تحديد عتبة العلوية والسفلية لكثافة بكسل الذي يلتقط كل voxels الموافق الكسب غير المشروع الدهون، ولكن هذا لا يشمل الأنسجة المحيطة والعظام. (الشكل 2B)
  4. تعريف العائد على الاستثمار في رأي سهمي الذي يتوافق مع الكسب غير المشروع الدهون باستخدام المحددة سابقا بكسل عتبات كثافة. REPEAT هذا الإجراء كل شريحة السهمي الخامسة، تبحر حتى يتم الوصول إلى أقصى اليمين الجانب من الكسب غير المشروع. (الشكل 2C)
  5. أقحم voxels مختارة من كل من 2D ROI إلى واحد، جنبا إلى جنب ROI 3D. (الشكل 2D)
  6. حجم العائد على الاستثمار قياسي وتحسب على أساس البرامج.
  7. جعل isosurface 3D لتصور نهائي حجم الدهون الكسب غير المشروع. (الشكل 2E)
  8. في تحليلات لاحقة، تأكد للحفاظ على أقصى كثافة بكسل والقيم عتبة الحد الأدنى من نفس تلك المستخدمة لتحليل خط الأساس.

5. الدهون الحصاد

  1. بعد وقد تم تفحص الفئران للأسبوع 8 24،25 نقطة زمنية، تخدير الفئران كما هو موضح سابقا أعلاه في خطوات 2،2-2،4 و2،17-2،19.
  2. المبادئ التوجيهية التالية APLAC، الموت ببطء الفئران عن طريق فصل أعمدتها في العمود الفقري.
  3. ضع الماوس في حقل من المنطوق. باستخدام مقص بضع الوتر، وفتح بعناية جيب وتشريح رانه المغطي الجلد والمرفقات النسيج الضام من الكسب غير المشروع الدهون.
  4. عند هذه النقطة، قد تساعد على استئصال رقعة من الجلد المغطي الظهرية للمساعدة في استخراج الكسب غير المشروع. (الشكل 3A)
  5. الحفاظ طفيفة الجر على الكسب غير المشروع مع ملقط وتحويل الكسب غير المشروع من جانب إلى آخر لتصور نقاط متتالية من التوتر التي تحتاج إلى إصدارها مع مقص.
  6. البقاء على مقربة من الكسب غير المشروع ممكن عندما استئصال للحد من النسيج الضام التي اتخذت مع الكسب غير المشروع. (الشكل 3B)
  7. بعد استئصال الكسب غير المشروع، وقياس كتلة على نطاق وtared هذا هو دقة إلى 0.01 غرام على الأقل.
  8. حساب حجم الكسب غير المشروع الدهون باستخدام القيمة الجماعية قياس ومتوسط ​​كثافة من الدهون البشري (0.9 غرام / مل)، ومعدل التحويل.
  9. قارن حجم المحسوبة الكسب غير المشروع الدهون إلى أن الحصول عليها باستخدام CT الصغيرة.
  10. يمكن معالجة الطعوم الدهون عن الأنسجة أو إجراء مزيد من التحليل إذا لزم الأمر.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

انخفض ترقيع الدهون تدريجيا في حجم على مدار الدراسة، مما أدى إلى متوسط ​​البقاء على قيد الحياة 62.2٪ من أسبوع 8. (الشكل 4A) 24 عند الانتهاء من الفحص أسبوع 8، تم استخراج كل الدهون الكسب غير المشروع في قطعة واحدة. تم استخدام اختبار Wilcoxan مبلغ رتبة لمقارنة الفرق بين قياسات حجم الطعوم الدهون التي حصلت عليها إما الصغير-CT أو تحسب من الكتلة الجسدية. لم يوجد فرق كبير بين هاتين الطريقتين (ع الوجهين -value = 0.9362). (الشكل 4B)

مع 5 centiGy في مسح وخمس نقاط الوقت المسح الضوئي، كل فأر يتلق أي أكثر من ما مجموعه 25 centiGy على مدار الدراسة. واتساقا مع ذلك، فإن أيا من الفئران عرض أي دليل الإجمالي الحروق الجلدية الإشعاع.

الشكل (1)
الشكل 1. (A) (B) الماوس عارية على الانتهاء تطعيم الدهون، مع خياطة النايلون واحدة تستخدم لجلب الجرح حواف معا. وقد شغل في الجيب ولكن ليس متوترا.

الشكل 2
الشكل 2. (A) عرض الصور التي أعيد بناؤها في البداية في محوري، الاكليلية، والآراء السهمي. (ب) استخدام عرض محوري كدليل للانتقال إلى ترك معظم جوانب الكسب غير المشروع على وجهة نظر سهمي. تحديد الحد الأدنى لكثافة بكسل حتى يتسنى لجميع voxels مختارة ضمن نطاق عتبة سيمثل الأنسجة الدهنية، وبالتالي إتاحة الفرصة لترسيم الحدود من حجم الدهون الكسب غير المشروع. (C) المعرفة على وجهة نظر سهمي بدءا من ترك معظم جوانب من الكسب غير المشروع والعائد على الاستثمار المستمر أبداتم إنشاء سطح ثلاثي الأبعاد ذ شريحة الخامسة الانتقال إلى الطرف الآخر من الكسب غير المشروع. (D) جميع voxels مختارة من محرف إلى واحد ROI 3D 2D ROI ل. (E) باستخدام مكعب خدد الاستيفاء لتصور إجمالي حجم الدهون الكسب غير المشروع .

الشكل (3)
الشكل 3. (A) الدهون الكسب غير المشروع قبل explantation، مع التصحيح الظهرية من إزالة الجلد. (B) الدهون الكسب غير المشروع بعد explantation.

الشكل (4)
أظهر تحليل الشكل 4. (A) مايكرو-CT الحجمي الفقدان التدريجي لحجم الكسب غير المشروع الدهون على مدى ثمانية أسابيع. (ب) حجم الدهون الكسب غير المشروع النهائية، مقاسا الدقيقة CT، يتفق بشكل وثيق لكميات محسوبة من جماهير explanted الكسب غير المشروع الدهونالصورة. تم استخدام متوسط ​​كثافة من الدهون البشري (0.9 غرام / مل)، ومعدل التحويل.

الجدول 1
الجدول 1. يحسب مايكرو-CT حجم مقابل الفعلي المقاس حجم الدهون 24

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

حتى هذه النقطة، وقد اعتمدت معظم الباحثين على طرائق غير التصوير لقياس البقاء على المدى الطويل الطعوم الدهون، ولكن هذه الأساليب تتطلب التضحية من الحيوان الدراسة وتسفر عن قياس واحد فقط. تمثل 3،10-12 دراستنا لتحسين أسلوب التحليل الذي يسمح الهدف، في الوقت الحقيقي الكمي للبقاء الكسب غير المشروع الدهون في نموذج الفأر.

ثقلهم في هذه العملية هو ضمان استخدام الفئران المناعة بما فيه الكفاية للدراسة، حيث أن هذا يمنع رفض الكسب غير المشروع التي يمكن أن تحدث في حالة استخدام الفئران مع الجهاز المناعي سليمة. الحفاظ على سلامة الدهون أمر بالغ الأهمية خلال موسم الحصاد، والتجهيز، ومراحل وضع التطعيم. وفقا للمعايير المقبولة تقليديا، ينبغي الحصول على الدهون للتطعيم عن طريق الشفط يساعد شفط الدهون (SAL). خلال التنسيب، وينبغي حقن الدهون بمعدل تدفق ثابت بسرعة لا تزيد على 0.5 مل / ثانية. ويفضل قنية عيار 14 للتطعيم طغ الماوس، ولكن قنية قطرها أكبر ويمكن استخدامها دون أية إصابة في الدهون. قنية وأصغر الإبر، خصوصا تلك-وقياس تثبيط أضيق من 16 خلال التنسيب لأنها قد تسبب الدهون لانهيار بسبب زيادة إجهاد القص. على الرغم من أن وصفنا تقنية المفضلة لدينا لمعالجة أعلاه، أي مزيج من الترسيب، الطرد المركزي، و / أو الترشيح يمكن استخدامها طالما يتم فصل طبقات النفط والدم على نحو كاف للخروج من الدهون قبل التطعيم.

وينبغي أن تكون ترقيع الدهون لا يقل عن 200 ميكرولتر في الحجم لتقليل التباين في النتائج نظرا لطبيعة تتعارض من تطعيم الدهون. ويمكن استخدام الطعوم أكبر تصل إلى 400 ميكرولتر في الحجم، ولكن فوق هذا الحجم، وضعف إمدادات الأوعية الدموية والتوتر المفرط الجلد قد يؤدي إلى الدهون ونخر الجلد. في نهاية المطاف، وسيتم تحديد الحد الأقصى لحجم الدهون الكسب غير المشروع من حيث المساحة السطحية وحجم الجيب. لزيادة حجم الكسب غير المشروع التي يمكن تسليمها بأمان، وبوcket يمكن توسيع تشريح أكثر اتساعا. ومع ذلك، وهذا قد وضع الدهون خارج حدود الجزء العلوي من الجمجمة، الأمر الذي سيجعل من التناقض بين الكسب غير المشروع والأنسجة المحيطة بها أقل وضوحا. وبالتالي، فإن اختيار فوكسل اللاحقة تصبح أكثر صعوبة.

إذا الأولي شق الجلد صغير بما فيه الكفاية، قد لا تكون هناك حاجة لخياطة طالما بقي الدهون احتواء وليس وينظر تسرب من الجيب. إذا تم وضع خياطة، يجب الحرص على عدم يعقدا قرانهما الأولى بإحكام جدا، وإلا قد يحدث انهيار الجلد. ويفضل خياطة حيدة غير قابل للامتصاص مثل النايلون، كما أنه يحد من تفاعل التهابي وأقل عرضة لإيواء العدوى. سوف إعادة الاندمال بتشكل النسيج الظهاري من شق يحدث في غضون 24 إلى 48 ساعة بعد العملية، ويمكن إزالته خياطة في هذا الوقت. لا ينبغي أن تستخدم الغرز للامتصاص ومضفر. ينبغي دائما أن تعالج الجلد مع أقل القوة اللازمة، والجراح يجب الحرص على عدم سحق الجلدبينما يمسك حواف الجرح.

اعتمادا على التصوير برامج التحليل المحققين، والعلاقة الدقيقة بين كثافة بكسل وكثافة الأنسجة قد تختلف. يجب أن المحققين اختيار عتبات كثافة بكسل للحصول على أقصى مدى والحد الأدنى الذي يميز معظم بدقة الكسب غير المشروع الدهون من الأنسجة المحيطة بها. وينبغي أن تستخدم نفس القيم عتبة الحد الأقصى والحد الأدنى من خلال تحليل كل حجم للحفاظ على التناسق.

وهناك طرق متعددة لتحديد حجم الكسب غير المشروع مرة واحدة تم تعيين قيم عتبة كثافة بكسل. على الرغم من أننا نجد اللوحة مع أداة الفرشاة في الرأي سهمي الأفضل في أيدينا، طرق اختيار فوكسل أخرى لإنشاء ROI يمكن استخدامها مثل الرسم باستخدام أداة سين أو اللوحة في عرض محوري. فمن الأفضل إذا كان شخص واحد يقوم بتحليل كل حجم كما الدوام ممكن من أجل الحد من الخطأ قياس.

وعدمطبيعة الغازية لهذا الأسلوب والتصور في الوقت الحقيقي من تطور الكسب غير المشروع توفر مزايا هامة على التقنيات التقليدية. ومع ذلك، هذه التقنية محدودة في قدرتها على تحديد سلامة والصحة الطعوم المتبقية. وعلاوة على ذلك، فإنه لا يمكن إثبات إعادة التوعي النسبية للترقيع. على الرغم من التغيرات في المظهر وكثافة الكسب غير المشروع قد يلمح في نخر الدهون، والعدوى، وتشكيل الكيس، أو تسييل، فإنه من الصعب التوصل إلى استنتاجات دقيقة من الدقيقة CT وحدها.

نأمل أن هذه التقنية بمثابة الأساس الذي تقوم عليه يمكن إجراء الدراسات المستقبلية إلى فهم أفضل للعوامل المسببة في بقاء الكسب غير المشروع الدهون وخسارة. اختلافات حول هذا الموضوع قد توضيح الدور الذي الخلايا الجذعية، عوامل النمو، السيتوكينات، والجينات، وتلعب علامات سطح الخلية في الحفاظ النهائي لحجم الكسب غير المشروع الدهون. مع هذه الأداة محسنة لاختبار الفرضيات المتناقضة، ونحن نتطلع إلى فهم أفضل لنقل الدهون التي transfoRMS تقنية متقلبة لعلاج العجز الأنسجة الناعمة في أحد أكثر قابلية للتنبؤ.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

وأيد هذه الدراسة من قبل مؤسسة البلوط، ومختبر Hagey للأطفال الطب التجديدي، والمعهد الوطني للصحة، منح NIHR21DE019274، NIHR01DE019434، NIHR01DE021683، وNIHU01HL099776 إلى MTLDCW كان مدعوما من زمالة أبحاث ACS فرانكلين H. مارتن كلية، وHagey مختبر للطب الأطفال التجديدي الطب، وجائزة معهد بحوث صحة الطفل بجامعة ستانفورد كلية إجابات. وقد أجريت مايكرو-CT في مركز ستانفورد للإبداع في التصوير في الجسم الحي.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
SAL lipoaspirate
Centrifuge Beckman Coulter, Inc., Pasadena, CA
50 ml conical tubes BD Biosciences, San Jose, CA
CD-1 nude mice (Crl:CD1-Foxn1nu) Charles River Laboratories, Inc., Wilmington, MA
Isoflurane Henry Schein, Dublin, OH
2.5% Betadine Purdue Pharma, L.P., Stamford, CT
70% Ethanol solution  Gold Shield, Hayward, CA
1cc luer-lock syringe BD Biosciences, San Jose, CA
14 gauge cannula Shippert Medical, Centennial, CO
Forceps Fine Science Tools, Heidelberg, Germany
Tenotomy scissors Fine Science Tools, Heidelberg, Germany
6-0 nylon suture Ethicon, Blue Ash, OH
Phosphate buffered saline Gibco, Carlsbad, CA
micro-CT scanner  Siemens Healthcare, Pleasanton, CA
Phantom  TriFoil Imaging, Northridge, CA
Imaging analysis software IRW, Siemens Healthcare, Pleasanton, CA
Scale  Mettler-Toledo International, Inc., Columbus, OH

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Gir, P., et al. Fat grafting: evidence-based review on autologous fat harvesting, processing, reinjection, and storage. Plast Reconstr Surg. 130 (1), 249-258 (2012).
  2. Kaufman, M. R., et al. Autologous fat transfer national consensus survey: trends in techniques for harvest, preparation, and application, and perception of short- and long-term results. Plast Reconstr Surg. 119 (1), 323-331 (2007).
  3. Smith, P., et al. Autologous human fat grafting: effect of harvesting and preparation techniques on adipocyte graft survival. Plast Reconstr Surg. 117 (6), 1836-1844 (2006).
  4. Eppley, B. L., Dadvand, B. Injectable soft-tissue fillers: clinical overview. Plast Reconstr Surg. 118 (4), 98e-106e (2006).
  5. Yarborough, J. M. The treatment of soft tissue defects with injectable collagen. Am J Med Sci. 290 (1), 28-31 (1985).
  6. Baumann, D. P., Butler, C. E. Soft tissue coverage in abdominal wall reconstruction. Surg Clin North Am. 93 (5), 1199-1209 (2013).
  7. Tukiainen, E. Chest wall reconstruction after oncological resections. Scand J Surg. 102 (1), 9-13 (2013).
  8. Zan, T., et al. Surgical treatment of facial soft-tissue deformities in postburn patients: a proposed classification based on a retrospective study. Plast Reconstr Surg. 132 (6), 1001e-1014e (2013).
  9. Bucky, L. P., Percec, I. The science of autologous fat grafting: views on current and future approaches to neoadipogenesis. Aesthet Surg J. 28 (3), 313-321 (2008).
  10. Lee, J. H., et al. The effect of pressure and shear on autologous fat grafting. Plast Reconstr Surg. 131 (5), 1125-1136 (2013).
  11. Kirkham, J. C., et al. The impact of liposuction cannula size on adipocyte viability. Ann Plast Surg. 69 (4), 479-481 (2012).
  12. Medina, M. A., et al. 3rd et al. Polymer therapy: a novel treatment to improve fat graft viability. Plast Reconstr Surg. 127 (6), 2270-2282 (2011).
  13. Horl, H. W., Feller, A. M., Biemer, E. Technique for liposuction fat reimplantation and long-term volume evaluation by magnetic resonance imaging. Ann Plast Surg. 26 (3), 248-258 (1991).
  14. Har-Shai, Y., Lindenbaum, E. S., Gamliel-Lazarovich, A., Beach, D., Hirshowitz, B. An integrated approach for increasing the survival of autologous fat grafts in the treatment of contour defects. Plast Reconstr Surg. 104 (4), 945-954 (1999).
  15. Fontdevila, J., et al. Assessing the long-term viability of facial fat grafts: an objective measure using computed tomography. Aesthet Surg J. 28 (4), 380-386 (2008).
  16. Meier, J. D., Glasgold, R. A., Glasgold, M. J. Autologous fat grafting: long-term evidence of its efficacy in midfacial rejuvenation. Arch Facial Plast Surg. 11 (1), 24-28 (2009).
  17. Coleman, S. R. Structural fat grafts: the ideal filler. Clin Plast Surg. 28 (1), 111-119 (2001).
  18. Coleman, S. R. Structural fat grafting: more than a permanent filler. Plast Reconstr Surg. 118 (3 Suppl), 108S-120S (2006).
  19. Pu, L. L., Coleman, S. R., Cui, X., Ferguson, R. E., Vasconez, H. C. Autologous fat grafts harvested and refined by the Coleman technique: a comparative study. Plast Reconstr Surg. 122 (3), 932-937 (2008).
  20. Matsumoto, D., et al. Cell-assisted lipotransfer: supportive use of human adipose-derived cells for soft tissue augmentation with lipoinjection. Tissue Eng. 12 (12), 3375-3382 (2006).
  21. Yoshimura, K., Suga, H., Eto, H. Adipose-derived stem/progenitor cells: roles in adipose tissue remodeling and potential use for soft tissue augmentation. Regen Med. 4 (2), 265-273 (2009).
  22. Zuk, P. A., et al. Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Eng. 7 (2), 211-228 (2001).
  23. Habte, F., et al. Impact of a multiple mice holder on quantitation of high-throughput MicroPET imaging with and without Ct attenuation correction. Mol Imaging Biol. 15 (5), 569-575 (2013).
  24. Chung, M. T., et al. Micro-computed tomography evaluation of human fat grafts in nude mice. Tissue Eng Part C Methods. 19 (3), 227-232 (2013).
  25. Thanik, V. D., et al. A murine model for studying diffusely injected human fat. Plast Reconstr Surg. 124 (1), 74-81 (2009).

Tags

الطب، العدد 95، ذاتي، الكسب غير المشروع الدهون، حقن الدهون، lipofilling، lipotransfer، واحتباس الصوت، التصوير المقطعي-حسابها الصغرى، والسلامة الكسب غير المشروع، وبقاء الكسب غير المشروع، ورصد الكسب غير المشروع
تقييم الجدوى من الدهون الإنسان الحقن في الفئران عارية مع مايكرو-التصوير المقطعي
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Atashroo, D. A., Paik, K. J., Chung, … More

Atashroo, D. A., Paik, K. J., Chung, M. T., McArdle, A., Senarath-Yapa, K., Zielins, E. R., Tevlin, R., Duldulao, C. R., Walmsley, G. G., Wearda, T., Marecic, O., Longaker, M. T., Wan, D. C. Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography. J. Vis. Exp. (95), e52217, doi:10.3791/52217 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter