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माइक्रो-गणना टोमोग्राफी के साथ नग्न चूहों में मानव फैट इंजेक्शन की व्यवहार्यता का आकलन

Published: January 7, 2015 doi: 10.3791/52217
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1,2, 1,2
1Hagey Laboratory for Pediatric Regenerative Medicine, Department of Surgery, Plastic and Reconstructive Surgery Division, Stanford University School of Medicine, 2Institute for Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Stanford University School of Medicine
* These authors contributed equally

Abstract

Lipotransfer पूरे शरीर के कोमल ऊतक घाटे के उपचार के लिए सर्जन के साधन में एक महत्वपूर्ण उपकरण है। फैट यह आसानी से उपलब्ध आसानी से प्राप्त की, सस्ती, और स्वाभाविक biocompatible है के रूप में आदर्श नरम ऊतक भराव है। एक हालांकि, इसकी बढ़ती लोकप्रियता के बावजूद, वसा कलम बांधने का काम 10 से कहीं भी लेकर प्रकाशित प्रतिधारण दरों के साथ, अप्रत्याशित परिणाम और चर भ्रष्टाचार अस्तित्व आड़े आती है -80%। 1-3

वसा ग्राफ्टिंग पर जांच की सुविधा है, इसलिए हम इंजेक्ट वसा की मात्रा बनाए रखने के वास्तविक समय विश्लेषण के लिए अनुमति देता है कि एक पशु मॉडल विकसित किया है। संक्षेप में, एक छोटे से कट एक सीडी-एक नग्न माउस की खोपड़ी में किया जाता है और प्रसंस्कृत lipoaspirate के 200-400 μl खोपड़ी पर रखा गया है। खोपड़ी क्योंकि जो एड्स calvarium द्वारा प्रदान की उत्कृष्ट पृष्ठभूमि विपरीत, की वजह से देशी वसा की अपनी अनुपस्थिति के प्राप्तकर्ता स्थल के रूप में चुना है, और हैविश्लेषण की प्रक्रिया। माइक्रो-गणना टोमोग्राफी (सूक्ष्म सीटी) आधारभूत में भ्रष्टाचार और उसके बाद हर दो सप्ताह स्कैन करने के लिए प्रयोग किया जाता है। सीटी छवियों को खंगाला जाता है, और एक इमेजिंग सॉफ्टवेयर भ्रष्टाचार संस्करणों यों के लिए प्रयोग किया जाता है।

परंपरागत रूप से, तकनीक पूर्व vivo शारीरिक माप के द्वारा भ्रष्टाचार के वजन और मात्रा का सिर्फ एक ही मूल्यांकन प्रदान करने के लिए अध्ययन पशु euthanizing आवश्यक हो गया है वसा भ्रष्टाचार की मात्रा का आकलन करने के लिए। बायोकेमिकल और histological तुलना इसी तरह euthanized होने के लिए अध्ययन जानवर की आवश्यकता है। यह वर्णित इमेजिंग तकनीक अध्ययन पशु बलि के लिए बिना visualizing और निष्पक्ष प्रारंभिक ग्राफ्टिंग के बाद कई बिंदुओं पर समय की मात्रा बढ़ाता का लाभ प्रदान करता है। तकनीक बड़ा ग्राफ्ट जोखिम त्वचा और वसा नेक्रोसिस के रूप में इंजेक्ट किया जा करने में सक्षम भ्रष्टाचार के आकार के द्वारा सीमित है। इस विधि वसा भ्रष्टाचार व्यवहार्यता और मात्रा अवधारण के मूल्यांकन के सभी अध्ययनों के लिए उपयोगिता है। यह विशेष रूप से providi करने के लिए अच्छी तरह से अनुकूल हैवसा grafts के एक दृश्य प्रतिनिधित्व एनजी और समय के साथ मात्रा में परिवर्तन के बाद।

Protocol

नोट: प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल और वसा प्राप्त करने के लिए रोगी सहमति रूपों की समीक्षा की और स्टैनफोर्ड विश्वविद्यालय संस्थागत समीक्षा बोर्ड (प्रोटोकॉल # 2188) द्वारा अनुमोदित किया गया। सभी पशु प्रक्रियाओं प्रोटोकॉल # 9999 के तहत प्रयोगशाला पशु की देखभाल (APLAC) पर स्टैनफोर्ड प्रशासनिक पैनल द्वारा अनुमोदित किया गया। सभी प्रयोगों पशु सुरक्षा और मानवीय देखभाल के दिशा-निर्देशों का कड़ाई से पालन के साथ आयोजित किया गया।

1. फैट कटाई

  1. कोलमैन प्रक्रिया 17-19 का प्रयोग, वैकल्पिक liposuction के दौर से गुजर स्वस्थ महिला रोगियों के पेट, दिशा, और / या जांघ क्षेत्रों से मानव वसा ऊतकों प्राप्त करते हैं।
  2. ग्राफ्टिंग के लिए lipoaspirate की प्रक्रिया करने के लिए, वसा 30 मिनट के लिए व्यवस्थित करने की अनुमति देकर शुरू करते हैं।
  3. Lipoaspirate आम तौर पर निचले भाग में शीर्ष पर तेल, बीच में वसा और रक्त के साथ, तीन परतों में सुलझेगी। महाप्राण और शीर्ष तेल की परत और नीचे खून परत त्यागें।
  4. आगे किसी भी शेष tumesc निकालने के लिएईएनटी द्रव या सेल मलबे, 350 XG पर 5 मिनट और 4 डिग्री सेल्सियस के लिए वसा अपकेंद्रित्र, और नीचे जलीय परत aspirate।
  5. 20% प्रसव त्रुटि के लिए अनुमति देता है, कलम बांधने का काम के लिए आवश्यक वसा की मात्रा की गणना, और 50 मिलीलीटर शंक्वाकार (एस) के लिए वसा की इच्छित मात्रा हस्तांतरण। ग्राफ्टिंग के लिए आवश्यक वसा की microliters प्राप्त करने के लिए अध्ययन में चूहों की संख्या से 400 गुणा करें।
  6. इस बिंदु पर, प्रदर्शन कर सेल Lipotransfer 20,21 असिस्टेड, तो बर्फ पर कलम बांधने का काम के लिए वसा की जगह मात्रा। तब Zuk एट अल 22 द्वारा वर्णित मानक तकनीक का उपयोग कर शेष वसा से वसा व्युत्पन्न stromal कोशिकाओं (ASCs) फसल।

2. फैट कलम बांधने का काम

  1. महिला, प्रयोगात्मक अध्ययन के लिए समयुग्मक सीडी-एक नग्न चूहों प्राप्त करते हैं। उम्र के 12 सप्ताह - 8 के बीच चूहों चुनें।
  2. लगभग 10 मिनट के लिए 2 एल / मिनट पर 2.5% isoflurane / ऑक्सीजन के मिश्रण के साथ एक पछाड़ना बॉक्स में संज्ञाहरण, जगह माउस को प्रेरित करने के लिए। सिफारिश की है कि isof कृपया ध्यान देंlurane खुराक माउस तनाव के साथ बदलता रहता है।
  3. माउस के श्वसन दर धीमी कर दी है, जब एक पैर की अंगुली चुटकी के साथ पर्याप्त बेहोश करने की पुष्टि करते हैं। माउस की दोनों आंखों के लिए पशु चिकित्सा चिकनाई नेत्र मरहम लागू करें।
  4. माउस पैर के अंगूठे चुटकी के जवाब में विमुख होना नहीं है, तो इस संज्ञाहरण की पर्याप्त विमान की पुष्टि करता है। / मिनट में 1-2 एल में 2.5% isoflurane / ऑक्सीजन मिश्रण पहुंचाने एक nosecone में माउस की नाक रखें। माउस पैर के अंगूठे चुटकी से पलटा, तो 5 मिनट के बाद पछाड़ना बॉक्स और जांचना वापसी।
  5. 70% इथेनॉल समाधान द्वारा पीछा 2.5% povidone आयोडीन के साथ खोपड़ी बाँझ तो माउस के तहत बाँझ क्षेत्र की स्थापना की और। दो बार दोहराएँ।
  6. माउस से अधिक शल्य पर्दे प्लेस और बाँझ क्षेत्र बनाए रखने के लिए सावधान रहना होगा। बाँझ उपकरणों, दस्ताने, और पीपीई सभी समय पर किया जाना चाहिए।
  7. वसा की मात्रा पहले से बर्फ पर रखा गया था grafted किया जाना है, तो पहले प्रसव से पहले आरटी को समायोजित करने के लिए वसा अनुमति देते हैं।
  8. 1 मिलीलीटर के साथ एक 1 मिलीलीटर luer ताला सिरिंज Backloadकी वसा।
  9. सिरिंज का अंत करने के लिए एक 14 जी, 8 सेमी लंबे वसा कलम बांधने का काम प्रवेशनी कनेक्ट करें।
  10. वसा से 200 के बीच और 400 μl तक सिरिंज सवार निराशाजनक द्वारा प्रधानमंत्री प्रणाली सिरिंज में बनी हुई है। सिरिंज सवार निराशाजनक जबकि प्रवेशनी पूरी तरह से बाहर का प्रवेशनी छेद बाहर निकलने वसा देख द्वारा वसा से भर गया है कि इस बात की पुष्टि।
  11. ठीक संदंश का प्रयोग, खोपड़ी की दुम सबसे पहलू overlying midline में पृष्ठीय त्वचा उठा। ठीक कैंची का उपयोग त्वचा में कटौती एक 1.5 मिमी बनाओ।
  12. बाद में कलम बांधने का काम किया जाता है के बाद घाव किनारों साथ लाने के लिए उपयोग किया जाएगा कि कटौती के बीच के माध्यम से एक भी 6-0 नायलॉन सीवन रखें। सीवन टाई नहीं है।
  13. त्वचा चीरा के माध्यम से प्रवेशनी डालने और overlying त्वचा के लिए किसी भी संयोजी ऊतक अनुलग्नकों को मुक्त करने की खोपड़ी पर एक प्रशंसक के आकार का पैटर्न में आगे और पीछे प्रवेशनी गुजर द्वारा खोपड़ी के ऊपर एक चमड़े के नीचे जेब बनाएँ।
  14. जेब बनाया गया है एक बार, सी स्थितिसीधे टिप जब तक खोपड़ी पर माउस के midline में annula सिर्फ आंखों के बीच तैयार की गई एक लाइन के पीछे होना चाहिए जो जेब से व्याख्यान चबूतरे वाला सबसे पहलू पर स्थित है। (चित्रा 1 ए)
  15. धीरे धीरे वापस प्रवेशनी खींच जबकि सवार को आगे बढ़ाने, एक प्रतिगामी फैशन में वसा इंजेक्षन। संदंश का प्रयोग, एक साथ घाव किनारों लाने के लिए और जेब से बाहर लीक से किसी भी वसा रखने के लिए उन्हें ऊपर उठा।
  16. पहले से पहले गाँठ त्वचा के खिलाफ हल्के से निहित है, यकीन है कि रखा गया था कि सिवनी बाँधो। तीन और वर्ग समुद्री मील टाई और एक 3 मिमी पूंछ के साथ सिवनी में कटौती। (चित्रा 1 बी)
  17. दृश्य और जेब overfilled नहीं और जेब overlying त्वचा तनाव नहीं है कि मैनुअल टटोलने का कार्य के साथ की पुष्टि करें। जेब overfilled किया गया है, सिवनी में कटौती और जेब के भीतर से सभी वसा को हटा दें। फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) 7.4 पीएच के साथ जेब बाहर धोने और वसा की एक छोटी मात्रा फिर से इंजेक्षन।
  18. एक से माउस निकालेंअपने आप में एक स्वच्छ पिंजरे में अपनी पीठ या पक्ष पर nesthesia और जगह। नियमित रूप से श्वास, सामान्य आंदोलनों, रक्तस्राव के अभाव, और दर्द या संकट के संकेत के लिए जानवरों की निगरानी करें। पशु दर्द में अगर अप करने के लिए 48 घंटे के लिए buprenorphine 0.1 मिलीग्राम / किग्रा subcutaneously हर 6 घंटा प्रशासन।
  19. जानवर यह नायाब रवाना होने से पहले sternal अवलंबन बनाए रखने के लिए पर्याप्त रूप से जाग गया है कि सुनिश्चित करें। यह पूरी तरह से ठीक हो गया है, जब तक अन्य जानवरों के साथ एक पिंजरे में जानवरों की जगह मत करो।
  20. 4 घंटे के बाद, पशु खाने के और, इस कदम पीते हैं, और सामान्य रूप से सांस लेने में सक्षम है कि यह सुनिश्चित करने और ऑपरेटिव साइट से खून बह रहा है कोई नहीं है। जानवरों की देखभाल की सुविधा के लिए यह लौटें।

3. सूक्ष्म सीटी

  1. स्कैन के बाद सहकारी दिन 3 से आधारभूत मात्रा के लिए चूहों, और फिर पोस्ट ऑपरेटिव सप्ताह 2, 4, 6 और 8 में स्कैन दोहराएँ।
  2. हर समय बिंदु पर चूहों जब इमेजिंग, एस में पहले से उल्लिखित के रूप में पूर्व और बाद प्रक्रियात्मक बेहोश करने की क्रिया और जानवरों की देखभाल के दिशा निर्देशों का पालन करें2.2-2.4 और 2.17-2.19 teps।
  3. 100 माइक्रोन या बेहतर की एक पुनर्निर्माण voxel के आकार के साथ एक सूक्ष्म सीटी स्कैनर पर स्कैन प्रदर्शन।
  4. 80 केवीपी की एक चोटी एक्स-रे kilovoltage और 450 μA की एक anode वर्तमान के साथ, प्रत्येक माउस के लिए एक 9 मिनट स्कैन के दौरान लगभग 5 centiGy के एक राशन खुराक प्रशासन। इन मूल्यों स्कैनिंग प्रोटोकॉल के आधार पर भिन्न कृपया ध्यान दें।
  5. पहला स्कैन प्रदर्शन करने से पहले, हवा, पानी, और हड्डी तीव्रता के बीच अलग है कि एक इमेजिंग प्रेत के साथ सूक्ष्म सीटी जांचना।
  6. दो शीर्ष पर चूहों और तल पर दो के साथ उदर स्थिति में स्कैनर में चार चूहों रखें। एक स्कैनिंग बिस्तर आसानी से माउस शरीर और नाक शंकु के रूप में 10 मिलीलीटर सीरिंज धारण करने के लिए 60 मिलीलीटर सीरिंज का उपयोग का निर्माण किया जा सकता है। 23
  7. प्रति मिनट 1-2 पर एक 2.5% isoflurane / ऑक्सीजन के मिश्रण के साथ संज्ञाहरण के तहत चूहों को बनाए रखें।
  8. स्काउट छवि के साथ की पुष्टि करें कि पहले ग्रीवा बांस नाक से, और खोपड़ी के ऊपर से SKU के आधार करने के लिए माउस की पूरी खोपड़ी,डालूँगा, imaged किया जाएगा।

4. सूक्ष्म सीटी विश्लेषण

  1. पिक्सेल तीव्रता के लिए थ्रेसहोल्ड का उपयोग कर voxels का चयन करके हित के क्षेत्रों के निर्माण की अनुमति देता है कि एक सूक्ष्म सीटी इमेजिंग विश्लेषण सॉफ्टवेयर (आरओआई) के साथ खंगाला छवियों को खोलें। सॉफ्टवेयर भी 3 डी के निर्माण के लिए चयनित voxels के प्रक्षेप के माध्यम से सतहों, और मात्रा विश्लेषण के लिए अनुमति देता है।
  2. दो-आयामी (2 डी) राज्याभिषेक, अक्षीय, और बाण के समान विचारों में खंगाला सीटी छवियों को लोड करने के द्वारा शुरू करो। (2A चित्रा)
  3. एक गाइड के रूप में अक्षीय टुकड़ा का उपयोग करना, वसा भ्रष्टाचार के बाएं सबसे पहलू से मेल खाती है कि बाण के समान टुकड़ा करने के लिए नेविगेट। वसा भ्रष्टाचार के लिए इसी सभी voxels कि कब्जा पिक्सेल तीव्रता के लिए एक ऊपरी और निचले सीमा से चयन करें, लेकिन यह है कि आसपास के ऊतक और हड्डी शामिल नहीं है। (चित्रा 2B)
  4. पहले से परिभाषित पिक्सेल तीव्रता थ्रेसहोल्ड का उपयोग कर वसा भ्रष्टाचार से मेल खाती है कि बाण के समान ध्यान में रखते हुए एक रॉय को परिभाषित करें। आरभ्रष्टाचार के अधिकार सबसे पहलू तक पहुँच जाता है नेविगेट, इस प्रक्रिया के हर पांचवें बाण के समान टुकड़ा EPEAT। (चित्रा -2)
  5. एक एकल, संयुक्त 3 डी आरओआई में सभी 2 डी रॉय से चयनित voxels बैठाना। (चित्रा 2 डी)
  6. सॉफ्टवेयर द्वारा गणना रिकॉर्ड आरओआई मात्रा।
  7. अंतिम वसा भ्रष्टाचार मात्रा कल्पना करने के लिए 3 डी isosurface प्रस्तुत करना। (चित्रा 2 ई)
  8. बाद के विश्लेषण में, पिक्सेल तीव्रता अधिकतम और न्यूनतम सीमा मूल्यों आधारभूत विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया उन लोगों के रूप में ही रखना सुनिश्चित करें।

5. फैट हार्वेस्ट

  1. चूहों सप्ताह 8 24,25 समय बिंदु के लिए स्कैन किया गया है के बाद, जैसा कि पहले कदम में 2.2-2.4 और 2.17-2.19 ऊपर वर्णित के रूप में चूहों anesthetize।
  2. APLAC दिशा निर्देशों के बाद, उनके स्पाइनल कॉलम को अलग करके चूहों euthanize।
  3. सहकारी क्षेत्र में माउस रखें। Tenotomy कैंची का प्रयोग, ध्यान जेब खोलने के लिए और टी काटनावह मोटा भ्रष्टाचार से त्वचा और संयोजी ऊतक संलग्नक overlying।
  4. इस बिंदु पर, यह भ्रष्टाचार की निकासी में सहायता करने के लिए overlying पृष्ठीय त्वचा के एक पैच आबकारी करने में मदद कर सकते हैं। (चित्रा 3A)
  5. हल्के संदंश के साथ भ्रष्टाचार पर कर्षण बनाए रखने और कैंची से जारी होने की जरूरत है कि तनाव के लगातार अंक कल्पना करने के लिए पक्ष की ओर से भ्रष्टाचार की बारी है।
  6. भ्रष्टाचार के साथ लिया संयोजी ऊतक को कम करने के excising जब संभव के रूप में भ्रष्टाचार के करीब रहें। (3B चित्रा)
  7. भ्रष्टाचार excising के बाद, कम से कम 0.01 ग्राम के लिए सही है कि एक tared पैमाने पर बड़े पैमाने पर मापने।
  8. मापा बड़े पैमाने पर मूल्य का उपयोग वसा भ्रष्टाचार की मात्रा और एक रूपांतरण दर के रूप में मानव चर्बी का औसत घनत्व (0.9 ग्राम / एमएल) की गणना।
  9. सूक्ष्म सीटी का उपयोग कर प्राप्त करने के लिए कि वसा भ्रष्टाचार की गणना की मात्रा की तुलना करें।
  10. अगर जरूरत फैट ग्राफ्ट ऊतक विज्ञान या आगे के विश्लेषण के लिए कार्रवाई की जा सकती है।

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Representative Results

फैट ग्राफ्ट उत्तरोत्तर 8 सप्ताह स्कैन के पूरा होने में सप्ताह 8. (चित्रा -4 ए) से 62.2% औसत उत्तरजीविता 24 में जिसके परिणामस्वरूप, अध्ययन के पाठ्यक्रम से अधिक मात्रा में कमी आई है, प्रत्येक वसा भ्रष्टाचार एक टुकड़ा में निकाला गया था। एक Wilcoxan रैंक राशि परीक्षण या तो सूक्ष्म सीटी द्वारा प्राप्त या शारीरिक द्रव्यमान से गणना की चर्बी ग्राफ्ट की मात्रा माप के बीच अंतर की तुलना करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। कोई महत्वपूर्ण अंतर यह है कि इन दोनों तरीकों (दो तरफा पी -value = 0.9362) के बीच पाया गया था। (4B चित्रा)

स्कैन प्रति 5 centiGy और पांच स्कैन समय बिंदुओं के साथ, प्रत्येक माउस अध्ययन के पाठ्यक्रम पर 25 centiGy की कुल से अधिक नहीं प्राप्त किया। इस के साथ संगत, चूहों में से कोई भी त्वचीय विकिरण जलता है की किसी भी सकल सबूत का प्रदर्शन किया।

चित्रा 1
चित्रा 1. (ए) (बी) पूरा वसा ग्राफ्टिंग पर नंगा माउस, एक एकल नायलॉन सीवन के साथ घाव लाने के लिए इस्तेमाल किया किनारों साथ। जेब भरी लेकिन तनाव में नहीं किया गया है।

चित्रा 2
खंगाला छवियों शुरू में अक्षीय, राज्याभिषेक, और बाण के समान दृश्यों में प्रदर्शित चित्रा 2 (ए)। (बी) बाण के समान दृष्टिकोण पर भ्रष्टाचार के बाएँ सबसे पहलू पर नेविगेट करने के लिए एक गाइड के रूप में अक्षीय दृश्य का उपयोग। सभी voxels इस प्रकार, वसा ऊतकों का प्रतिनिधित्व वसा भ्रष्टाचार मात्रा के सीमांकन के लिए अनुमति देगा दहलीज सीमा के भीतर चयनित इतना है कि (सी)। पिक्सेल तीव्रता के लिए एक सीमा निर्धारित करना है रॉय भ्रष्टाचार की बाईं सबसे पहलू पर शुरू बाण के समान दृष्टिकोण पर परिभाषित किया है और जारी रखा कभीभ्रष्टाचार के दूसरे छोर से आगे बढ़ Y पांचवें टुकड़ा। (डी) 2 डी रॉय एक भी 3 डी आरओआई में interpolated से सभी चयनित voxels। (ई) एक तीन आयामी सतह कुल वसा भ्रष्टाचार संस्करणों कल्पना करने के लिए घन तख़्ता प्रक्षेप का उपयोग कर बनाया गया था ।

चित्रा 3
हटाया त्वचा के पृष्ठीय पैच के साथ explantation पहले चित्रा 3 (ए) फैट भ्रष्टाचार,। (बी) explantation के बाद फैट भ्रष्टाचार।

चित्रा 4
चित्रा 4 (ए) सूक्ष्म सीटी बड़ा विश्लेषण आठ सप्ताह से अधिक वसा भ्रष्टाचार मात्रा का क्रमिक नुकसान का प्रदर्शन किया। सूक्ष्म सीटी द्वारा मापा (बी) अंतिम वसा भ्रष्टाचार संस्करणों, explanted वसा भ्रष्टाचार की जनता से गणना संस्करणों को बारीकी से correspondedएस। मानव वसा (0.9 ग्राम / एमएल) का औसत घनत्व एक रूपांतरण दर के रूप में इस्तेमाल किया गया था।

तालिका 1
वास्तविक मापा फैट वॉल्यूम 24 बनाम तालिका 1. परिकलित सूक्ष्म सीटी वॉल्यूम

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Discussion

इस बिंदु तक, सबसे शोधकर्ताओं वसा ग्राफ्ट के लंबे समय तक जीवित रहने यों के लिए गैर-इमेजिंग तौर तरीकों पर भरोसा किया, लेकिन इन तरीकों के अध्ययन जानवर के बलिदान की आवश्यकता होती है और केवल एक ही माप उपज है। 3,10-12 हमारे अध्ययन का प्रतिनिधित्व करता है एक माउस मॉडल में वसा भ्रष्टाचार अस्तित्व का उद्देश्य वास्तविक समय मात्रा का ठहराव है कि परमिट एक बेहतर विश्लेषण विधि।

इस प्रक्रिया में गंभीर इस बरकरार प्रतिरक्षा प्रणाली के साथ चूहों का इस्तेमाल कर रहे हैं तो घटित होता है कि भ्रष्टाचार अस्वीकृति रोकता के रूप में पर्याप्त प्रतिरक्षा में अक्षम चूहे, अध्ययन के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं कि यह सुनिश्चित किया जाता है। वसा अखंडता बनाए रखने ग्राफ्टिंग की फसल, प्रसंस्करण, और प्लेसमेंट चरणों के दौरान महत्वपूर्ण है। परंपरागत रूप से स्वीकार किए जाते हैं मानकों के अनुसार, ग्राफ्टिंग के लिए वसा चूषण liposuction सहायता (साल) के द्वारा प्राप्त किया जाना चाहिए। प्लेसमेंट के दौरान, वसा कोई तेजी से 0.5 मिलीग्राम / सेकंड की तुलना में एक सतत प्रवाह दर पर इंजेक्ट किया जाना चाहिए। एक 14 गेज प्रवेशनी मैं कलम बांधने का काम के लिए पसंद किया जाता हैना माउस, लेकिन बड़े व्यास cannulas वसा के लिए किसी भी चोट के बिना इस्तेमाल किया जा सकता है। वे कारण बढ़ कतरनी तनाव को भंग करने के लिए वसा का कारण बन सकता है के रूप में छोटे cannulas और सुई-विशेष रूप से उन संकरा से अधिक 16 गेज-कर रहे हैं प्लेसमेंट के दौरान हतोत्साहित किया। हम ऊपर अवसादन, centrifugation के, और / या निस्पंदन के किसी भी संयोजन के प्रसंस्करण के लिए हमारे पसंदीदा तकनीक का वर्णन हालांकि लंबे समय के रूप में तेल और रक्त परतों को पर्याप्त रूप से पूर्व कलम बांधने का काम करने के लिए वसा से बाहर अलग कर रहे हैं के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।

फैट ग्राफ्ट की वजह से वसा ग्राफ्टिंग की असंगत प्रकृति के परिणामों में विचरण कम करने के लिए आकार में कम से कम 200 μl होना चाहिए। आकार में 400 μl अप करने के लिए बड़ा ग्राफ्ट इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन इस मात्रा से ऊपर, बिगड़ा संवहनी आपूर्ति और अत्यधिक त्वचा तनाव वसा और त्वचा गल जाना हो सकता है। अंत में, अधिक से अधिक वसा भ्रष्टाचार आकार सतह क्षेत्र और जेब की मात्रा से निर्धारित किया जाएगा। पुलिस को सुरक्षित रूप से दिया जा सकता है कि एक भ्रष्टाचार की मात्रा बढ़ाने के लिएcket अधिक व्यापक विच्छेदन द्वारा विस्तारित किया जा सकता है। हालांकि, इस भ्रष्टाचार और कम स्पष्ट आसपास के ऊतकों के बीच इसके विपरीत जो कर देगा खोपड़ी के शीर्ष की सीमाओं से परे वसा जगह हो सकती है। इसलिए, बाद में voxel के चयन और अधिक कठिन हो जाएगा।

प्रारंभिक त्वचा चीरा काफी छोटा है, तो एक सिवनी वसा निहित रहता है और जेब से बाहर लीक नहीं देखा है के रूप में लंबे समय के रूप में की जरूरत नहीं किया जा सकता है। एक सिवनी रखा जाता है, तो देखभाल अन्यथा त्वचा टूटने हो सकता है, भी कसकर पहली गाँठ बाँध नहीं लिया जाना चाहिए। यह भड़काऊ प्रतिक्रिया सीमा और संक्रमण बंदरगाह की संभावना कम होती है जैसे नायलॉन के रूप में एक गैर absorbable monofilament सीवन, पसंद किया जाता है। चीरा के पुन: epithelialization 24 घंटा 48 के बाद operatively के भीतर हो जाएगा, और सिवनी इस समय हटाया जा सकता है। Absorbable और लट टांके नहीं किया जाना चाहिए। त्वचा हमेशा आवश्यक कम से कम बल के साथ संभाला जाना चाहिए, और सर्जन त्वचा को कुचलने के लिए नहीं ख्याल रखना चाहिएघाव किनारों को दबाए हुए।

जांचकर्ताओं 'इमेजिंग विश्लेषण सॉफ्टवेयर पर निर्भर करता है, पिक्सेल तीव्रता और ऊतक के घनत्व के बीच सटीक संबंध भिन्न हो सकते हैं। जांचकर्ता सबसे सही आसपास के ऊतकों से वसा भ्रष्टाचार अलग है कि एक अधिकतम और न्यूनतम सीमा प्राप्त करने के लिए पिक्सेल तीव्रता थ्रेसहोल्ड का चयन करना चाहिए। सभी मात्रा स्थिरता बनाए रखने के लिए विश्लेषण करती दौरान एक ही अधिकतम और न्यूनतम सीमा मूल्यों इस्तेमाल किया जाना चाहिए।

पिक्सेल तीव्रता दहलीज मूल्यों को निर्धारित किया गया है एक बार भ्रष्टाचार की मात्रा का चयन करने के लिए कई तरीके हैं। हम हमारे हाथ में सबसे अच्छा बाण के समान ध्यान में रखते हुए एक ब्रश उपकरण के साथ पेंटिंग को खोजने हालांकि, अन्य voxel के चयन के तरीकों एक रॉय अक्षीय दृश्य में तख़्ता उपकरण या चित्र के साथ बैठक के रूप में इस तरह इस्तेमाल किया जा सकता बनाने के लिए। एक ही व्यक्ति के सभी मात्रा माप त्रुटि को कम करने के क्रम में के रूप में लगातार संभव के रूप में विश्लेषण करती प्रदर्शन करती है तो यह बेहतर है।

नइस विधि और भ्रष्टाचार विकास के वास्तविक समय दृश्य के आक्रामक स्वभाव परंपरागत तकनीकों से अधिक महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करते हैं। हालांकि, इस तकनीक के बचे हुए ग्राफ्ट की व्यवहार्यता और स्वास्थ्य की पहचान करने की क्षमता में सीमित है। इसके अलावा, यह ग्राफ्ट के रिश्तेदार revascularization का प्रदर्शन नहीं कर सकते। उपस्थिति और भ्रष्टाचार के घनत्व में परिवर्तन वसा गल जाना, संक्रमण, पुटी गठन, या द्रवीकरण पर संकेत हो सकता है, यह अकेला सूक्ष्म सीटी से सटीक निष्कर्ष आकर्षित करने के लिए मुश्किल है।

हम इस तकनीक को भविष्य के अध्ययनों से बेहतर वसा भ्रष्टाचार अस्तित्व और नुकसान में प्रेरणा का कारकों को समझने के लिए आयोजित किया जा सकता है जिस पर एक आधार के रूप में काम करेगा उम्मीद है। इस विषय पर बदलाव की कोशिकाओं, वृद्धि कारकों, साइटोकिन्स, जीन है कि स्टेम भूमिका को स्पष्ट कर सकते हैं और कोशिका की सतह मार्करों वसा भ्रष्टाचार मात्रा का परम संरक्षण में खेलते हैं। परिकल्पना विषम परीक्षण करने के लिए यह बेहतर उपकरण के साथ, हम Transfo कि वसा हस्तांतरण का एक बेहतर समझ के लिए तत्पर हैंएक और अधिक उम्मीद के मुताबिक एक में नरम ऊतक घाटे के इलाज के लिए एक सनकी तकनीक आरएमएस।

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Acknowledgments

इस अध्ययन एसीएस फ्रेंकलिन एच मार्टिन संकाय रिसर्च फैलोशिप, Hagey द्वारा समर्थित किया गया ओक फाउंडेशन, बाल चिकित्सा पुनर्योजी चिकित्सा के लिए Hagey प्रयोगशाला, और MTLDCW के लिए राष्ट्रीय स्वास्थ्य, अनुदान NIHR21DE019274, NIHR01DE019434, NIHR01DE021683 संस्थान, और NIHU01HL099776 द्वारा समर्थित किया गया बाल चिकित्सा पुनर्योजी चिकित्सा, और स्टैनफोर्ड विश्वविद्यालय बाल स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान संकाय विद्वान पुरस्कार के लिए प्रयोगशाला। सूक्ष्म सीटी vivo इमेजिंग में नवाचार के लिए स्टैनफोर्ड सेंटर में आयोजित किया गया।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
SAL lipoaspirate
Centrifuge Beckman Coulter, Inc., Pasadena, CA
50 ml conical tubes BD Biosciences, San Jose, CA
CD-1 nude mice (Crl:CD1-Foxn1nu) Charles River Laboratories, Inc., Wilmington, MA
Isoflurane Henry Schein, Dublin, OH
2.5% Betadine Purdue Pharma, L.P., Stamford, CT
70% Ethanol solution  Gold Shield, Hayward, CA
1cc luer-lock syringe BD Biosciences, San Jose, CA
14 gauge cannula Shippert Medical, Centennial, CO
Forceps Fine Science Tools, Heidelberg, Germany
Tenotomy scissors Fine Science Tools, Heidelberg, Germany
6-0 nylon suture Ethicon, Blue Ash, OH
Phosphate buffered saline Gibco, Carlsbad, CA
micro-CT scanner  Siemens Healthcare, Pleasanton, CA
Phantom  TriFoil Imaging, Northridge, CA
Imaging analysis software IRW, Siemens Healthcare, Pleasanton, CA
Scale  Mettler-Toledo International, Inc., Columbus, OH

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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चिकित्सा अंक 95 ऑटोलॉगस वसा भ्रष्टाचार वसा इंजेक्शन lipofilling lipotransfer मात्रा प्रतिधारण सूक्ष्म गणना टोमोग्राफी भ्रष्टाचार व्यवहार्यता भ्रष्टाचार अस्तित्व भ्रष्टाचार निगरानी
माइक्रो-गणना टोमोग्राफी के साथ नग्न चूहों में मानव फैट इंजेक्शन की व्यवहार्यता का आकलन
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Atashroo, D. A., Paik, K. J., Chung, M. T., McArdle, A., Senarath-Yapa, K., Zielins, E. R., Tevlin, R., Duldulao, C. R., Walmsley, G. G., Wearda, T., Marecic, O., Longaker, M. T., Wan, D. C. Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography. J. Vis. Exp. (95), e52217, doi:10.3791/52217 (2015).

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