Abstract
红/近红外光疗法（R / NIR-LT），通过激光或发光二极管（LED）的递送，可能通过减少氧化应激改善功能和形态学效果的范围内的中枢神经系统损伤的体内 ，的。然而，在氧化应激的R / NIR-LT的作用已被证明取决于波长或辐射的强度而变化。在比较治疗参数的研究缺乏，由于缺乏能够提供多个波长或强度，适用于通过量高的体外优化研究商用设备。这个协议描述了用于递送光的技术在一定范围的波长和强度，以优化所需的一个给定的损伤模型治疗剂量。我们假设，提供光的方法，其中波长和强度参数可以很容易地被改变，可以促进确定的R / NIR-LT的最佳剂量的减少活性氧（ROS）的体外。
非相干氙光通过窄带干涉滤光片过滤，以提供不同的波长（440，550，670的中心波长和810纳米）和能量密度（8.5×10 -3至3.8×10 -1焦耳/ cm 2）的光的向培养的细胞中。从该装置的光输出被校准以发射治疗相关，等于量子剂量的光的每个波长。检测反应性物质在谷氨酸强调与光处理的细胞，用DCFH-DA和H 2 O 2的敏感的荧光染料。
我们成功地在一个范围内的生理学和治疗相关的波长和强度的光传递，以暴露于谷氨酸作为CNS损伤模型的培养细胞。而R / NIR-LT在当前研究中使用没有施加由培养的细胞产生的活性氧的效果的能量密度，轻的递送方法也适用于其他SYSTEMS包括分离线粒体或多种生理上相关的器官切片培养模型，并且可以用来评估的范围内的氧化代谢的结果的措施的效果。
Introduction
活性氧（ROS）的所需要的各种信号转导途径和细胞代谢的正常反应，包括那些神经保护1。然而，当内源性抗氧化机制无法控制ROS的产生，细胞可能会屈从于氧化应激2,3。损伤后的中枢神经系统，在ROS和氧化应激的存在相关联的增加被认为在损伤4,5的进展显着的作用。尽管用于衰减已评估氧 化应激策略的广泛的数目，目前有用于以下神经外伤6衰减ROS产生和相关的氧化应激在临床使用中没有完全有效，临床相关抗氧化剂的策略。因此氧化应激的衰减仍是治疗介入7的一个重要目标。
后续的改进荷兰国际集团的R / NIR-LT已经报道了在广泛的伤害和疾病，包括减少心肌梗死面积，糖尿病期间肾和肝的并发症，视网膜变性，中枢神经系统损伤和中风8，或许通过减少氧化应激。特别是关于CNS损伤，670nm处光的功效的临床前研究已经显示在视网膜变性9-11，脊髓损伤12，神经元死亡13的模型良好的效果。临床试验已经进行了干性年龄相关性黄斑变性和目前正在进行对于中风14，但是这些试验的结果不出现希望的，或许是由于未能采用有效的治疗参数15。因此，R / NIR-LT并没有被广泛采用作为在神经外伤正常临床实践的一部分，尽管是一种简单的施用，非侵入性的和相对便宜的治疗方法。障碍的临床翻译，包括缺乏CL的早知道行动规范有效的治疗方案16,17和缺乏机制。关于光疗法目前的文献揭示了过多的变化治疗参数相对于照射源（LED或激光），波长（ 例如 ，630，670，780，810，830，880，904nm），照射总剂量（焦耳/单位面积），持续时间（曝光时间），定时（前或后损伤），治疗的频率和传递模式（脉冲或连续）8。在研究之间的治疗参数的变化，使比较困难，已经向有关的功效持怀疑态度16贡献。
因此，R / NIR-LT的优化显然需要，与细胞培养系统能够提供必要的比较的多个变量的高通量筛选的机制。然而也有一些市售的照明系统，可以提供足够的灵活性和控制わvelength和强度进行这样的优化实验。市售的LED器件通常是不能够提供多个波长或强度，从而导致研究者使用来自不同制造商，其可以不仅在强度变化的多个LED器件，而且光发射的波长的光谱。我们已通过使用宽带氙光源透过窄带干涉滤光片过滤，从而产生范围内的波长和光的能量密度，从而允许R / NIR-LT的参数密切，精确控制解决了这一问题。
要注意的是治疗的治疗剂量由光子与photoacceptor（发色团），其中在R / NIR-LT的情况下被假定为细胞色素C氧化酶（COX）18相互作用的数目定义是很重要的。输送光子能量随波长;意相等剂量的能量以不同的波长将是玉米珍贵的不同数量的光子的。因此，从装置发射的光被校准以发射相等数目的光子的每个所选择的波长进行测试。我们已开发了可用于递送的R / NIR-LT在一定范围的波长和强度，以细胞在体外的系统和演示来测量递送的R /对ROS产生NIR-LT在细胞经受影响的能力谷氨酸压力。
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Protocol
1.光学校正：测量光输出
- 为了制备所述光递送装置，连接宽带光源（ 例如 ，氙或钨灯），以适当的电源。定位在光源的前面的准直透镜，以产生的光的准直光束。通过液体热过滤通过的光以从光束去除大部分的热量。根据不同的应用，聚焦准直光束上的入口孔的液体光导的，这提供了更灵活的递送的光的（ 例如 ，到一个培养箱）。
- 在液体光导的另一端，定位一个第二准直透镜，然后对干扰和中性密度滤光片的支架。检查这种安排产生光所需要的波段和强度的均匀照明的地方。
注意：在光导和试样面的端部之间的距离可能需要根据改变必须被照亮，但面积记住作为从光导增大端部的距离，光的强度将减小。在本研究中，这个距离是14厘米并产生一个光束截面均匀地照射一个3x3阱区域上的96孔平板。 - 保证从灯和相关的光学组件，杂散光无法到达的试样。
- 放水冷却器用于液体热过滤，并确保存在通过过滤器夹套交换的水。开启灯电源并等待至少5分钟，对宽带光源来稳定。注意：使用水冷却器的需要，以防止过度加热的装置。
- 选择的窄带干扰滤波器（通常由它们的中心波长，峰值透射率和半峰全宽（FWHM）带宽描述），以产生照明的期望的波段。注意：在目前的研究中使用的窄带干扰滤波器分别为442纳米，550纳米，671纳米和810纳米。
- 测量由灯在平面，其中试样是在治疗过程中被定位产生的光。使用连接到一个合适的分光校准的辐射探测器（余弦集电极）测量光，根据制造商的说明使用正当性的软件。
- 使用中性密度滤光片，直到获得所需的输出来调节光的强度。注意：在本研究中，光通过每个干涉滤光器传递的强度被调整到相等的量子输出在各四个治疗波段的。要定期检查校准，因为灯的输出如有变更，这是非常重要的。
注：按照该装置的设置后，所述细胞是准备被照射图1是在目前的研究中使用的光传送装置的表示。
在光传输设备。画报图1.图像的光电源，氙灯住房，准直透镜，水过滤器，入口孔，液体光导，第二准直透镜，过滤器支架，处理框架和磨砂黑卡。需要注意的是窄带波长和强度的过滤器未示出。
2.细胞的制备
- 所描述的R / NIR-LT递送方法可以适用于任何类型的细胞或体外模型系统;细胞培养等下面的说明是一般情况下，使用成熟的技术，文化嗜铬细胞瘤（PC12），穆勒（RMC1）和原发性视网膜混合细胞。
- 此前细胞接种于光治疗和氧化应激试验，文化永生化细胞在其包含适当的补充（ 例如 ，FBS，抗生素）的T75 FLAS各自的生长介质KS，直到70-80％汇合。
- 分离永生化细胞从T75烧瓶，使用适合于细胞类型的方法进行测试如 。，胰蛋白酶。如果需要的话，前继续进行细胞的96孔测定板的播种，涂层测定板孔用为10μg/ ml的聚-L-赖氨酸1小时（ 例如 ，对于PC12细胞）或10微克/ ml的聚-L-赖氨酸为1H随后的O / N培养用为10μg/ ml的层粘连蛋白（ 例如 ，用于混合的视网膜细胞）。
- 离心细胞，收集适当（ 例如 ，3分钟，在405×g离心PC12细胞或在218×g离心RMC1细胞10分钟），除去上清，重悬在8ml适当的细胞培养介质。
- 如果混合视网膜细胞将被使用，从通过酶消化（木瓜蛋白酶）P0-5新生大鼠幼仔按既定的方法19制备
- 计数存活的细胞不包括0.4％（重量/体积）的台盼蓝染料的数量，使用血球。
- 调整细胞密度SUCh上的细胞将是约70-80％汇合在培养24或48小时后。 （对PC12细胞的接种密度为4.0×10 5个活细胞/ ml时，为RMC1细胞，它是2.5×10 5个活细胞/ ml和混合视网膜细胞为8×10 5个活细胞/ ml）中。加入细胞后，无论是透明的或黑色的96孔板（用于H 2 O 2或分别DCFH-DA分析），在100微升合适的生长培养基，使板坐在平坦表面上，在37℃，5 ％的CO 2（或其他条件都适合于特定的细胞类型）中至少24小时，以允许细胞附着。
- 培养的细胞在适当的96孔托盘中的生长培养基，直到他们70-80％汇合（24小时为PC12和RMC1细胞，48小时混合视网膜细胞）。
3.添加谷氨酸应激到细胞
- 准备L-谷氨酸单钠盐水合物应激0-10MM的浓度适当满成长个培养基。
- 从细胞中除去培养基，并用PBS轻轻（PC12）或HBSS（RMC1和混合视网膜细胞）洗涤细胞3次。后洗涤后，含谷氨酸介质添加到100微升的总体积/孔。
光处理的四首剂量
- 立即在加入谷氨酸或选择的压力源，通过将制备的光递送装置，根据细胞暴露于光处理在所期望的波长和强度。一定要改变光束的使用的依赖于波长的中性密度滤光片的既定的组合的量子输出被施用。
注意：在当前的实验中，细胞暴露于光处理3分钟，由搁在96孔板上37℃热垫保持体温。根据需要治疗的时间可以变化。- 放置了磨砂黑卡的细胞下方，以防止光反射到邻近井在96 WEL升盘指定的其他治疗参数。
- 如果治疗所需的时间较长的长度，添加的25mM Hepes缓冲液以维持PH值的细胞培养基或理想地，将装置和处理板的培养箱内用CO 2浓度调节到5％的CO 2，或条件是最优对于特定的细胞类型。
- 以下的光治疗结束后，将细胞在一个水平面上，并培育在37℃和5％的CO 2（或其他条件，最适合于细胞类型）24小时。
注意：根据需要，如上所述R / NIR-LT的附加剂量可以施用，。
光治疗ROS和检测5.最终用量
- 之前进行最后一轮的光处理，准备用于活性氧的检测试剂。制备的50mM柠檬酸缓冲液（pH6.0的），加入Triton X100和H 2 O 2的检测试剂的工作溶液（1：2：97的比例的10mM的H 2 O 2的检测试剂原液; 10 U / ml的辣根过氧化物酶; 50mM的柠檬酸钠（pH 6.0）中）。制备DCFH-DA在100μM的在适当培养基的最终浓度。
注意：DCFH-DA试剂PC12细胞在RPMI培养基，DCFH-DA试剂RMC1细胞是在DMEM介质。需要注意的是可商购的检测试剂具有差的敏感性，以特定的活性氧和试剂应仔细选择，以提供所需的单个应用程序中的信息。 - 辖光治疗的细胞中，如在步骤4.1-4.1.2说明。确保在细胞被治疗的光的期望的能量密度/波长。
- 紧接光处理，取出含有谷氨酸媒体和与适当的缓冲液洗两次（用于PC12细胞，PBS中被使用，对于RMC1细胞的HBSS时）。对细胞进行ROS测定如下：
- H 2 O 2 2的15分钟。加入50微升的H 2 O 2的检测工作溶液孵育30分钟，在室温。使用读板器以530nm的的激发波长和480纳米的发射波长测量荧光。
- DCF测定：添加100微升的100μM的溶液DCFH-DA到每个孔中，并孵育30分钟，在37℃和5％的CO 2。除去含有100μM的DCFH-DA中的媒体，并与适当的缓冲液洗涤（如上所述）的两倍。加入90微升缓冲溶液和10微升的Triton X100到每个孔中，并在37℃下轻轻摇动在轨道摇床上分钟温育30秒前15。使用读板器以480纳米的激发波长和发射沃维勒测量的DCF荧光衍生ength 530nm处的。
- 明示的ROS值相对于剩余孔中的细胞的蛋白质浓度，使用比色试剂盒根据制造商的说明书来定量蛋白浓度，参照标准曲线来计算mg蛋白质。
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Representative Results
使用中性密度滤光片，以照射细胞的范围内的能量密度包含先前证明是有益的体内 （0.3焦耳/厘米2）20 670nm处的光的剂量的光在670nm处的波长传送的输出进行校准。作为在光源增加前中性密度滤光片的数量，强度（W /米2）降低，从而允许更少的光传递到目标区域。表1给出了670nm处的光的从装有一个波长滤光器，光源产生的校正数据，并包括用于ND过滤器的数量和光的作为结果而产生的强度，在从光输出中所描述的距离。注量，或670nm处的光（焦耳/厘米2）的剂量，由下式计算：[剂量（焦耳/厘米2）=（光强度（W /米2）/ 10,000）×时间（s）]，其中治疗时间为180秒。
| 的ND滤镜数量 | 从光输出距离（cm） | 强度（W /平方公尺） | 剂量（J /平方公分） |
| 0 | 10.5 | 20.11 | 0.38 |
| 0 | 14 | 10.55 | 0.19 |
| 1 | 14 | 4.91 | 0.075 |
| 2 | 14 | 2.28 | 0.041 |
| 3 | 14 | 1.03 | 0.018 |
| 4 | 14 | 0.47 | 0.0085 |
| 五 | 14 | 0.21 | 0.0038 |
| 6 | 14 | 0.094 | 0.00169 |
| 7 | 14 | 0.045 | 0.00081 |
| 8 | 14 | 0.021 | 0.000378 |
| 9 | 14 | 0.013 | 0.000234 |
表1：装有670nm处波长滤光器的ND滤镜.Number 所述光递送装置的输出是指装配到光源输出的前中性密度过滤器的数量。强度（W / m 2的）指的是光的强度所报告的第Ë恰当的软件。注量，或剂量进行了计算等式[剂量（焦耳/厘米 2）=（光强度（W /米2）/ 10,000）×时间（s）]，其中暴露的时间为180秒，并从光输出距离10.5或14公分。
光的两个临床相关的量子能量密度被选为调查R / NIR-LT波长对ROS产生不同影响。可以达到以下通过使用LED器件上覆组织传输的CNS束的剂量（即，1.78瓦/米 2，在670nm处）20等同于0.03焦耳/ cm 2的一个3分钟处理，或4.9×10 14光子/厘米2 /秒。装备有过滤器的光源导致的442发射，550，670或830nm的随后校准用的中性密度滤光片的组合以发射等于量子输出（光子）每个波长，而不是能量输出（焦耳/厘米2），和剂量（J / cm 2）的与英特nsities以W / m 2的计算值（表2a）。一个附加的较高剂量是在推荐准则，以刺激细胞活性21也使用（1.29×10 15光子/厘米2 /秒），以及校准的每个波长进行（表2b）。
| 波长（λ） | 剂量（J /平方公分） | 强度（W /平方公尺） | 辐射（光子/平方公分/秒） |
| 442 | 0.057 | 3.21 | 4.8×10 ^ 14 |
| 550 | 0.051 | 2.87 | 5.0×10 ^ 14 |
| 670 | 0.032 | 1.78 | 4.9×10 ^ 14 |
| 830 | 0.018 | 1.01 | 4.9×10 ^ 14 |
表2：剂量由光的光子的相等数目在各种波长下传递的强度的校正强度（瓦/米2），剂量为3分钟处理（焦耳/厘米2）和发射（光子/厘米2 /秒）当氙发光442，550，670和830nm的的输出被校准以发射A）的4.9×10 14光子/厘米2 /秒或B）1.3×10 15光子/厘米2 /秒，在距离的距离为14cm光输出。
为了评估由所述装置递送的光是否对细胞有毒，在所使用的剂量，我们评估残留在PC12细胞培养孔以下的活性氧测定的蛋白质含量，用比色蛋白测定。有在任何的光（P> 0.05）的较高输出的剂量不显著损失的蛋白质，这表明光的递送的剂量是不引起细胞死亡（ 造型玩具e 2的），并适合于使用的氧化代谢的评估。
图2：不同剂量的光对总蛋白质浓度保持在培养孔中以下的R / NIR-LT和ROS测定的影响 。直方图条是平均值±SEM蛋白浓度在PC12细胞培养孔中，6个重复/浓度，实验重复3次。那里通过方差分析（ANOVA），P> 0.05确定为控制和任何治疗组之间没有统计上显著差异。
我们最初评估670nm处的光的影响，发表在能量密度范围从0.0085至0.38焦耳/厘米2，作为一个例子波长来评估光递送装置的适用性。没有显著EFF评估可以是H 2 O 2或DCF荧光的PC12，RMC1或混合视网膜细胞强调与谷氨酸（ 图3，P <0.05），当670nm处光的ECT观察到任何试验的能量密度的。同样，有评估H 2 O 2时，不同R / NIR-LT为4.9×10 14光子传送/ 平方厘米/秒或1.3×10 15光子/厘米ROS生产2 /秒，波长不显著效果或DCF荧光性（P> 0.05，数据未显示）。我们的检测中反应性物质的变化的能力是通过在13.44±0.67毫谷氨酸的增加DCFH-DA活性染料荧光22.10±2.10处的10mM谷氨酸证实。尽管我们的数据不泄露R / NIR-LT的正面影响交付使用我们的ROS生产光传输设备，在所选模型系统，无论在那里为细胞不受损害，在文化持续的蛋白质含量标明的负面影响井以下光疗法（ 图2）。因此，所描述的方法提供了一个协议，用于在一波长范围内的一种治疗细胞或线粒体具有限定的光子剂量，并且可以用来评估更高的剂量和替代结果的措施，这可能使的R / NIR-LT参数优化。
图3：H 2 O 2（AC）和DCF（DF）荧光PC12（A，D）量化，RMC1（B，E）或混合视网膜细胞（C，F）文化的10毫谷氨酸应激的存在，以下670nm处照射治疗，在能量密度剂量范围从0 - 0.38焦耳/厘米2。直方图条表示均值任意荧光单位/微克蛋白±SEM。没有统计学显著如通过ANOVA，P> 0.05，6确定每组复制控制和任何治疗组之间的差异，实验重复3次。
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Discussion
我们已经成功地适应了精确和校准的光传输系统，以提供一种机制，用于对R / NIR-LT 在体外优化的研究。的R波长和强度的参数/ NIR-LT能够被准确有效地操纵使用这个系统。我们建立了光治疗的细胞并没有导致细胞死亡，尽管ROS没有减少在输送的波长和剂量，在测试的细胞类型。当前系统在670nm处（20.11W /米2）实现的最大强度在过量照射的外显率的先前公布的措施到大鼠脑，其中1.17瓦/米2达到视神经和0.3W的腹面/ m 2的到达脑部的情况下的腹面。当递送30分钟后，通过体内视神经细胞接受的剂量，因此0.054 - 0.31焦耳/厘米2。在目前的研究中递送670nm处的光的剂量（达0.38J / cm 2）的，因此包括那些在我们以前的体内研究接收细胞。
最广泛接受的R / NIR-LT功效的理论是，一个photoacceptor基于系统18的，因此有必要确保具有不同波长的经处理的细胞接受光的相等量子能量密度（光子/厘米2 /秒）8。此外，用于传送光的特定注量的曝光时间必须保持治疗之间是一致的，与光变化来增加和减少总能量密度随时间的唯一的强度。以前的研究已经表明，改变曝光时间以提供相等能量密度导致在结局指标的差异，并且可以充当混杂因素，妨碍所需的特定损伤模型22,23的最优波长/能量密度参数的识别。因此，我们建议仔细校准用量在每个波长进行测试，以确保读/ NIR-LT的有用的优化。
所描述的技术允许输送的光的一定范围的体外模型系统，包括器官切片培养物，这可能会导致更多的有意义的结果，由于蜂窝结构和复杂的细胞间相互作用的保存。对损伤模型的变化，可能需要在R / NIR-LT的治疗参数的差异。这种技术是由最大输出功率可实现所描述的仪器的限制。可能需要一些在体外和大多数体内应用更高功率输出。如果光的高输出的要求，该装置可以被改变以增加光到达样品的强度。缩短光终止和靶细胞之间的距离将增加光到达板的强度。可替代地，光可以反射离开反射镜并到达细胞作为辰sed将通过液体光导被过滤，但是替代波长和中性密度滤光片将需要实现这一目标。此外，还需要使用更强大的光源更高的输出，如果该方法被以适于递送的R / NIR-LT在体内模型CNS损伤的，由于需要确保照射8,20的有效渗透率的增加的剂量。
总之，目前的研究描述了一种新的光传送，可提供有效地改变在R / NIR-LT研究光的强度和波长的参数的装置的方法。这种方法将在R / NIR-LT优化采用了一系列成果的措施和体外损伤模型是有用的。
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| OxiSelect Intracellular ROS Assay Kit (Green Fluorescence) | Cell Biolabs | STA-342 | |
| Amplex UltraRed Reagent | Molecular Probes | A36006 | |
| 300 Watt Xenon Arc Lamp | Newport Corporation | 6258 | Very intense light source, do not look directly into the lamp. Ensure there is sufficient cooling to the lamp whilst it is switched on |
| USB4000-FL Fluorescence Spectrometer | Ocean Optics | ||
| CC-3-UV Cosine Corrector for Emission Collection | Ocean Optics | ||
| 200μm diameter quartz fibre optic | Ocean Optics | ||
| SpectraSuite Spectroscopy Platform | Ocean Optics | ||
| 2300 EnSpire Multimode Plate Reader | Perkin Elmer | ||
| Pierce BCA Protein Assay Kit | Thermo Scientific | 23225 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | 9002-93-1 | Acute toxicity, wear gloves when handling. |
| L-Glutamic acid monosodium salt hydrate | Sigma-Aldrich | 142-47-2 (anhydrous) | |
| Pheochromocytoma rat adrenal medulla (PC12) cells | American Type Culture Collection | CRL-2522 | |
| Roswell Park Memorial Institute (RPMI1640) Media | Gibco | 11875-119 | |
| Fetal Bovine Serum, certified, heat inactivated, US origin | Gibco | 10082-147 | Warm to 37 °C in water bath before use |
| Horse Serum, New Zealand origin | Gibco | 16050-122 | Warm to 37 °C in water bath before use |
| GlutaMAX Supplement | Gibco | 35050-061 | Warm to 37 °C in water bath before use |
| 100 mM Sodium Pyruvate | Gibco | 11360-070 | Warm to 37 °C in water bath before use |
| Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL) | Gibco | 15140-122 | Warm to 37 °C in water bath before use |
| 100X MEM Non-Essential Amino Acids Solution | Gibco | 11140-050 | Warm to 37 °C in water bath before use |
| Retinal Muller (rMC1) cells | University of California, San Diego | ||
| Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Gibco | 11965-118 | Warm to 37 °C in water bath before use |
| 75 cm2 Flasks | BD Biosciences | B4-BE-353136 | |
| Poly-L-lysine hydrobromide | Sigma-Aldrich | 25988-63-0 | Aliquot and store at -20 °C |
| Hank's Balanced Salt Solution (HBSS) | Gibco | 14025-134 | Warm to 37 °C in water bath before use |
| Phosphate-Buffered Saline (PBS) | Gibco | 10010-049 | Warm to 37 °C in water bath before use |
| Laminin Mouse Protein, Natural | Gibco | 23017-015 | Aliquot and store at -20 °C |
| 1X Neurobasal Medium | Gibco | 21103-049 | Warm to 37 °C in water bath before use |
| Trypan Blue Solution, 0.4% | Gibco | 15250-061 | |
| 165U Papain | Worthington | ||
| L-Cysteine | Sigma-Aldrich | W326305 | |
| Corning 96 well plates, clear bottom, black | Corning | CLS3603-48EA | |
| Costar Clear Polystyrene 96-Well Plates Untreated; Well shape: Round; Sterile. | Costar | 07-200-103 | |
| Seesaw Rocker | Standard lab epuipment | ||
| Centrifuge | Standard lab epuipment | ||
| Neutral Density Filter Paper (0.3) | THORLABS | ||
| 442 nm Bandpass Filter | THORLABS | FL441.6-10 | |
| 550 nm Bandpass Filter | THORLABS | FB550-10 | |
| 670 nm Bandpass Filter | THORLABS | FB670-10 | |
| 810 nm Bandpass Filter | THORLABS | FB810-10e | |
| Unmounted Ø25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.1) | THORLABS | NE01B | |
| Unmounted Ø25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.2) | THORLABS | NE02B | |
| Unmounted Ø25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.3) | THORLABS | NE03B | |
| Unmounted Ø25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.5) | THORLABS | NE05B | |
| Unmounted Ø25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.6) | THORLABS | NE06B | |
| Unmounted Ø25 mm Absorptive Neutral Density Filters (1.0) | THORLABS | NE10B |
References
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