Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

Ontwikkeling van een doi: 10.3791/52222 Published: November 1, 2014

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Allergie is gekend voor duizenden jaren. Een astma-behandeling werd beschreven in het Oude Egyptische medische tekst die bekend staat als de Ebers Papyrus (~ 1550 BCE) en besproken kruidenmiddelen om het 7 behandelen.

Vandaag allergie geclassificeerd als type I overgevoeligheidsreactie, waarbij de T-helpercel type 2 (Th2) arm van het immuunsysteem stuurt de productie van immunoglobuline E (IgE) antilichamen in respons op omgevingsveranderingen antigenen genoemd allergenen. Dit zijn verschillende stoffen die gewoonlijk interactie met cellen in het immuunsysteem en stimuleert de synthese en secretie van pro-inflammatoire cytokines, zoals interleukine-4 en interleukine-13 8, 9 als er deeltjes in sigarettenrook of dieseldeeltjes IgE synthese verbeteren 10.

De stijging van allergische manifestaties industrielanden de afgelopen 50 jaar is toegeschreven aan een combinatie van het effect vanmilieuverontreinigende stoffen en een trend naar een meer hygiënische omgeving, die samen de immuunrespons tegen een profiel overheerst TH 2 cytokines verschuiven, zoals de "Hygiene Hypothesis '11 voorgesteld.

Zoals hierboven vermeld, mensen niet de enige zoogdieren getroffen door allergie. Met name paarden en honden kunnen ook klassieke allergische reacties ontwikkelen en een studie met 12 blijkt dat, bij mensen, paarden allergie wordt toegeschreven aan genetische en omgevingsfactoren. Bijgevolg dienen deze dieren goed model voor het bestuderen van de interactie tussen genetische en oorzaken van allergie, de progressie van sensibilisatie voor ziekte, en mogelijke interventiestrategieën nadat klinische verschijnselen worden in

In 1887, Stömmer was de eerste persoon die de gelijkenis tussen mensen en paarden astma 13 beschrijven, het effect van histamine op de paarden cardiovasculaire systeem isvergelijkbaar met die van mensen 14. Paarden zijn ook de hoeksteen van de paardenrennen, dat is een waarde van US $ 72000000000 met een betting omzet van US $ 115.000.000.000 per jaar 15.

De meeste hedendaagse renpaarden zijn afstammelingen van het kleine aantal Arabische paarden gefokt door Lady Anne Blunt van 1878 en later. Moderne renpaarden worden vaak inteelt te selecteren voor de prestaties vaardigheden. Ze zijn gevoelig voor genetische aandoeningen, waarvan hun gevoeligheid voor allergische reacties monteren. Ze hebben ook 1000 maal hoger serum IgE-gehaltes dan zelfs de meest zwaar allergische mensen 16. Paard allergische reacties zijn meestal manifesteert als insectenbeet overgevoeligheid (IBH) 17, 18. IBH resultaten in dermatitis als gevolg van beten vormen insecten in het geslacht Culicoides. Een andere vorm van paardachtigen allergische ziekte terugkerende luchtweg obstructies (RAO) Dit manifesteert zich in de longen en luchtwegen. Het wordt gekenmerkt door een piepende ademhaling en labORed ademhaling. RAO zich vaker voordoet in reactie op sporen vormen en hoge allergeen-specifieke IgE niveaus zijn opgenomen in paarden met RAO in een studie 19 hoewel andere onderzoek niet heeft bevestigd 20.

Studies over paarden allergie stond de poging tot controle en neutraliseren paarden IgE door de ontwikkeling van anti-paarden IgE monoklonale antilichamen (mAbs) 21 22. Verder is de studie van 23 beschrijft de productie van de extracellulaire domeinen van α paarden hoge affiniteit Fc receptor chain (FceRIa) receptor in een poging het detecteren en kwantificeren equine serum IgE. Een verwante studie van Ledin 24 bespreekt een nieuwe aanpak gericht op het neutraliseren van serum IgE door priming het immuunsysteem met behulp van een zelf / niet-zelf immunogeen. Al deze studies echter miste een effectieve test om de veiligheid en werkzaamheid van de testprotocollen. In dit artikel hebben we nu zo'n assay sys presenterenteem voor het bestuderen van diagnostische en therapeutische strategieën om de paarden systeem, waarbij β-hexosaminidase afgifte, als een indicator van cel mediator degranulatie werd beoordeeld op RBL-cellen die 2H3.1 paarden FceRIa relevant. Dit protocol is gebaseerd op eerdere publicaties 25, 4, 5, 2, 3 beschrijft de constructie van RBL-cellen getransfecteerd met het gen dat codeert voor het IgE bindende domein van de receptor met hoge affiniteit voor IgE van verschillende species. Het protocol wordt uitgelegd hoe een β-hexosaminidase afgifte assay uitgevoerd, waarvan de resultaten worden gepresenteerd als het gemiddelde ± standaardafwijking van drievoudige experimenten.

De release assay werd voor het eerst ontwikkeld door Siraganian en Haak 25 tot mens allergie te bestuderen. Het lab groep onder leiding van Dr. Reuben Siraganian ontwikkelde ook het RBL cellijn. Deze RBL cellen werden ontwikkeld om de menselijke FcsRIa uiten en het protocol dat werd gepubliceerd door 4. Het laatste stukjevan de test kwam met de ontwikkeling van het plasmide pSV in het artikel van Neuberger 26 die de productie van IgE-antilichamen beschreven door kloneren zijn zware keten gen stroomafwaarts van een muis gen voor een variabel gebied IgE dat het hapteen 4-hydroxy-3 richt nitro-phenacetyl (NP), het resulterende chimere antilichaam volledig functioneel. De mogelijkheid om een ​​IgE ontwikkelen zij hetzelfde hapteen, maar ook klonen zijn receptor op het oppervlak van RBL-cellen resulteerde in de standaardisatie van de test waardoor het een bruikbaar protocol voor de degranulatie van basofiele cellen te meten.

De test heeft wel voor- en nadelen. De voordelen van de test is de aanpasbaarheid te gebruiken in zoogdiercelsystemen, ons lab is dus gebruikt om te testen op de degranulatie van de mens, honden en paarden systemen, en dit kan worden bereikt door eenvoudig synthetiseren IgE het organisme en klonen zijn receptor op het oppervlak van de RBL-cellen.

Anderzijds,de nadelen van de test is dat de RBL-cellen zeer gevoelig zijn voor thermische, mechanische en PH veranderingen, waardoor ze een variatie van degranulatie niveaus in dezelfde test. Het wordt dus sterk aangeraden dat de assays altijd worden herhaald in drievoud en vervolgens een gemiddelde wordt genomen van hen. Bovendien is de RBL cellen neigen te verschuiven naar een niet lossend fenotype als ze nog in weefselkweek langere tijden (> 10 weken) 27, waardoor het onderhoud omslachtig. Zij zijn ook gevoelig voor infecties door mycoplasma bacteriën, die onzichtbaar zijn van een lichtmicroscoop en kan de morfologie van de cel niet gewijzigd, maar zouden hun degranulatie niveaus drastisch veranderen. Dus regelmatig mycoplasma tests nodig.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1) Voorbereiding van de Cell Line:

  1. Het ontwikkelen van de RBL-2H3.1 cellijn die paarden FceRI α:
    1. Met behulp van elementaire weefselkweek technieken voor monolaag cellijnen, transfecteren ouderlijke RBL-2H3.1 cellen met behulp van de pEE6 plasmide, het dragen van de paarden FcsRIa gen (GenBank: Y18204.1) 28. Voeg 2 ul -1 ug van het plasmide DNA 0,8 ml van cellen bij een dichtheid van 1,2 x 10 7 cellen ml-1. Electroporate de cellen bij 250 uF 960 V met een 0,4 cm electrocuvette onmiddellijk incubeer op ijs gedurende 10 min.
    2. Selecteer de getransformeerde cellen met medium dat 0,4 g geneticine G418 sulfaat, vervolgens sorteren de overblijvende levende cellen door FACS door taggen met een fluorescerende IgE antilichaam. Gebruik de resulterende RBL-2H3.1 uiten equine FcsRIa cellijn voor het onderzoek 2, 3.
  2. Pre-test antilichaam sensibilisatie:
      5 cellen ml-1.
    1. Voeg de IgE van belang de gesuspendeerde cellen tot een eindconcentratie van 1 ng ml -1, dan plaat 100 ul cellen op een 96 puts plaat bij kolommen 1-6 en incubeer bij 37 ° C + 5% CO2 + 90% relatieve vochtigheid gedurende 16 uur. Na de incubatietijd, en voor het uitvoeren van de release assay, controleer dan de putten onder een microscoop voor goed confluentie en cel therapietrouw.

2) afgifte test:

  1. Het wassen van de cellen:
    1. Warm afgifte buffer (25 mM PIPES, 120 mM natriumchloride, 5 mM kaliumchloride, 0,04 mM magnesiumchloride en 1 mM calciumchloride) bij 37 ° C om voor zacht wassen van de cellen.
    2. Was de cellen in door de plaat naar cel media verwijderen en toevoegen van 100 ul warm, 37 ° C, vrijlating buffer. Tweemaal herhalen.
  2. Antigen uitdaging:
    1. Bereid een seriële verdunning van het antigeen (NIP-HSA of DNP-HSA) van 0 ng ml -1, 0,1 ng ml -1, 1 ng ml -1, 10 ng ml-1, 100 ng ml -1, 1000 ng ml -1, 10.000 ng ml-1 in afgiftebuffer en verwarm bij 37 ° C.
    2. Na de tweede cel wassen, gooi de media en vervangen door 100 ul van het antigeen oplossingen. Controleer of putten in dezelfde rij (A1-6 bijvoorbeeld) dezelfde antigeenconcentratie toegevoegd.
    3. Het opzetten van een negatieve controle in rij A door het toevoegen van 0 ng ml-1-antigeen. Voeg toenemende antigeenconcentratie langs de rijen (BG) gevolgd door Triton x-buffer (5% Triton X-100) in rij H cellen lyseren van de cellen worden gebruikt als een positieve controle. Incubeer bij 37 ° C gedurende 20 minuten om de cellen zijn mediatoren vrij.
  3. Het opzetten van individuele welzijn controles:
    1. Na de incubatie, overdracht 50 pi celsupernatant aan de andere helft van de plaat (putjes A1-6 putjes A7-12, etc.). Gooi de resterende 50 pl supernatant en vervangen door 50 pi Triton-x buffer voor de meting van de hoeveelheid vrijgekomen mediatoren in elke well in kolom 7-12 laten als percentage van de totale mediatoren in de cellen in kolom 1-6 .
  4. Enzym substraat:
  5. Voeg 50 ul van β-hexosaminidase substraat (50 mM 4-nitrofenyl N-acetyl-β-D-glucosaminide bereid in DMSO verdund tot 2 mM toe te voegen aan citraatbuffer 0,2 M citroenzuur en 0,2 M natriumacetaat, pH 4,5) alle wells om de omzetting van het substraat 4-nitrofenol door β-hexosaminidase enzym vergemakkelijkt. Incubeer de platen bij 37 ° C gedurende 2 uur.

Figuur 2.4.1

  1. Het beëindigen van de reactie:
    1. Stop de reactie door de toevoeging van 150 pl Tris-buffer (1 M Tris-HCl, pH 9) aan elk putje en de hoge pH van de buffer stopt de reactie en wordt de 4-nitrofenol een gele kleur.
  2. Het lezen en analyseren van de resultaten:
    1. Lees de plaat met een plaat spectrofotometer bij 405 nm om de absorptie van de gele kleur te meten. Berekend het percentage vrijgegeven β-hexosaminidase met behulp van de volgende formule:

Figuur 2.6.1

  1. Pas deze formule aan elk putje, waarna een gemiddelde wordt genomen voor elke rij. A1 en A7 geven de plaats van de putjes in de plaat met 96 putjes. Maak een grafiek van percentage van β-hexosaminidase afgifte (die overeenkomt met de totale mediatorafgifte) against antigeenconcentratie 2, 3.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

De ouderlijke RBL-2H3.1 cellen en die getransfecteerd met de paarden FcsRIa receptor gen werden voor het eerst gesensibiliseerd met muis IgE anti DNP-HSA en uitgedaagd met de DNP-HSA antigeen. Muis IgE bindt aan de endogene receptor in rat beide cellijnen en werkt dus als een controle om de levensvatbaarheid vrijlating van beide cellijnen te testen om mediators (Figuur 1 A) los. Dit is een belangrijke controle en dient regelmatig sinds na uitgebreid (> 10 weken) passage worden uitgevoerd in celculturen, RBL-2H3.1 cellen drijven richting de niet-afscheidende fenotype 27. De ouderlijke cellen ondersteund een piek mediatorafgifte van 51,54% ± 4,79%, terwijl de cellen die de receptor FceRIa paarden hadden een piek mediatorafgifte van 45,99% ± 5,76%. Deze zelfde cellijnen waar vervolgens gesensibiliseerd met paarden IgE anti NIP-HSA en uitgedaagd met de NIP-HSA antigeen (figuur 1 B). Ouderlijke cellen heeft mediatorafgifte ondergaan, omdat depaarden IgE bindt niet aan de endogene receptor rat. Anderzijds, zoals verwacht, RBL-cellen die 2H3.1 paarden FceRIa receptor onderging mediatorafgifte bij gesensibiliseerd met paarden IgE anti NIP-HSA en uitgedaagd met NIP-HSA antigeen, waardoor een piek afgifte van 36,68% ± 4,88% .

Deze resultaten bevestigen de efficiëntie van deze release assay protocol in het onderzoek van mediator vrijlating via equine IgE-receptor. Het laat zien dat deze cellijn is een nuttig diagnostisch hulpmiddel in de zoektocht naar ezels nieuwe therapeutische interventiestrategieën in equine allergie in vitro het verminderen van de behoefte aan dierproeven. Hetzelfde protocol geldt ook voor RBL-2H3.1 cellen getransfecteerd met de menselijke en honden FceRIa receptoren.

Dit protocol werd ook gebruikt om de veiligheid van een mogelijke immunisatie strategie die probeert honden serum IgE antilichamen 30 neutraliseren testen. Uit de resultatenin (figuur 2) kan worden vastgesteld dat de immunisatie strategie niet veilig. De anti-honden-IgE serum succes gebonden aan de hond IgE zoals oorspronkelijk bedoeld was om te neutraliseren serum IgE en voorkomt dat binding met de receptor. Maar deze aspecifieke binding was, en dus de anti-IgE serum verknoopte receptor op het oppervlak van de cellen, resulterend in mediatorafgifte, kunnen leiden tot een anafylactische shock indien immunisatie strategie werd gebruikt als anti-allergie vaccin.

RBL-2H3.1 Uiting Equine FceRIa - - Geproduceerd in het laboratorium
Equine IgE anti NIP-HSA - - Geproduceerd in het laboratorium
96 Well Plate Sigma CLS3595 -
Multi Channel Pipette Anachem - -
Broedmachine Galaxy R - -
4Hydroxy-5-jood-3-nitrofenylazijnzuur Cambridge Research Biochemicals N-1070-1 NIP-OH werd geconjugeerd met menselijk serumalbumine aan NIP-HSA te maken in het lab
Dinitrofenylester geconjugeerd aan humaan serumalbumine Sigma A6661 Verkorte DNP-HSA
Plaat spectrofotometer Anthos Labtec HT2 - -
Pijpen Sigma P1851 -
Natriumchloride Sigma S7653 -
Kalium Chloride Sigma P9333 -
Magnesium Chloride Sigma M2670 -
Calcium Chloride Sigma C1016 -
Triton X100 Sigma X100 -
4-nitrofenyl N-acetyl-β-D-glucosaminide Sigma N9376 De oplossing genaamd β-hexosaminidase substraat werd bereid in 50 mM DMSO
Dimethyl Sulfoxide Sigma D2650 -
Citric Acid Sigma 251275 -
Sodium Acetate Sigma S7670 -
Tris Sigma T5941 -

Tabel 1: Tabel van materiaal en apparatuur:

Figuur 1
Figuur 1: A toont de afgifte test uitgevoerd op RBL-2H3.1 cellen niet uiten van equine FcsRIa en het uiten van de receptor met behulp van muis IgE anti DNP-HSA. De muis IgE bindt aan de endogene receptor rat waardoor mediatorafgifte bij provocatie met DNP-HSA antigeen, hetgeen bevestigt dat beide cellijnen levensvatbaar en ondersteunen IgE-gemedieerde antigeen geïnduceerde mediatorafgifte 2, 3. Grafiek B toont de afgifte assay voorgevormde op RBL-2H3.1 ouderlijke cellen die niet uitdrukken equine FcsRIa en die uiten equine FcsRIa, met behulp van paarden IgE anti NIP-HSA voor mobiele sensibilisatie. Paarden IgE bindt aan paarden receptor, maar niet de endogene receptor rat, resulteert in mediatorafgifte, dit wordt bevestigd, omdat de ouderlijke cellen niet mediator mediatoren vrijkomen, terwijl de cellen die de receptor paarden support paarden IgE-gemedieerde antigen geïnduceerde , mediator Release 2, 3.

Figuur 2
Figuur 2: Immunisatie afgifte test resultaten: De grafiek toont de afgifte assay uitgevoerd op RBL-cellen die 2H3.1 canine FceRIa met hondencelkweken IgE anti NIP-HSA voor mobiele sensibilisering en geïmmuniseerde ratten anti-honden-IgE serum als het antigeen. De gebruikte controle werd vooraf geïmmuniseerd serum, en de positieve controle was NIP-HSA antigeen. De hond IgE bindt aan de receptor honden. Bovendien het anti-IgE serum bindt aan de receptor gebonden IgE honden en crosslinks, en de receptor op het oppervlak van de cellen resulteert in mediatorafgifte. Dit in feite blijkt dat dit immunisatie strategie kan een anafylactische shock reactie veroorzaken en wordt derhalve niet beschouwd als veilig 30.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Samengevat zijn de resultaten van dit onderzoek bleek dat wanneer RBL-2H3.1 cellen die paarden FcsRIa worden gesensibiliseerd met paarden IgE en uitgedaagd door een antigeen, ze geven een piek mediator release van 36,68% ± 4,88% van het totale bedrag van de mediator in de cellen, vergeleken met de RBL-2H3.1 oorspronkelijke cellen niet tot expressie paarden FcsRIa.

Dus deze test biedt een nuttig instrument voor het onderzoeken en bestuderen van equine allergische reacties in vitro. Het maakt de bepaling van de hoeveelheid mediator vrijgegeven door cellen van mastcellen / basofielen afstamming en daarom kan worden verwacht dat onderzoek paarden allergie bevorderen, of de beoordeling allergene middelen, of onderzoek IgE / receptor blokkerende middelen.

Deze test werd gewijzigd om paarden allergie eerdere publicaties die vroeger menselijke en honden allergieën 4529 voor dezelfde doeleinden bestuderen bestuderen. De gemanipuleerde cellijns die humaan en honden FceRIa werden gebruikt om de werkzaamheid en veiligheid van allergie blokkeringsmiddelen bestuderen zoals vaccins gericht op de remming van IgE / receptor interactie 30. Het onderzoek toonde een anaphylactogenic neveneffect van immunogenen omvattende de gehele Cε3 domein, die ook door anderen werd voorgesteld als een vaccin voor het verzwakken van IgE-gemedieerde allergische reacties in 24 honden. Uit ons onderzoek kan de moleculaire basis voor deze potentieel serieuze complicatie worden gerationaliseerd op basis van herkenning van epitopen in het IgE-antilichaam van het anti-IgE immuun serum met anti-IgE-antilichamen die epitopen in Cε3 gericht op en niet verborgen wanneer IgE gecomplexeerd aan zijn receptor. Deze observatie kan niet zijn gemaakt in de afwezigheid van deze test-systeem en is in opvallend contrast met het onderzoek van 24, die ook onderzoek gedaan naar de anti-allergie interventiestrategie op basis van in vivo immuniteitensatie met Cε3 domeinen, maar nog niet gesproken over de veiligheid van de strategie door de afwezigheid van een dergelijke test.

De kritische stappen van dit protocol is dat de meerderheid van de RBL-2H3.1 cellen van de secreterende fenotype; dat de cellen in kweek meer dan 10 weken zorgt dat ze beginnen te drijven naar de niet-afscheidende fenotype 27 ongeacht of ze sprak de gekloneerde FceRIa van belang of niet. Het is daarom essentieel om muis IgE positieve controles omzomen het experiment (figuur 1), en een grote bevroren voorraad uitscheidende cellen behouden.

Bovendien moet de pH van alle buffers nauwkeurig of zij risico geven vals negatief resultaat; verlenging van de houdbaarheid van buffers verandert de pH en derhalve alle buffer ouder dan 2 maanden te worden weggegooid.

De techniek toont de interactie van een chemisch met de RBL-2H3.1 ceLLS, en hoe het bevordert, of onderdrukt, hun mediator release in vitro. Dit is een goede indicatie van wat er kan gebeuren in vivo, waardoor dit protocol is een essentiële stap bij het ​​onderzoek naar potentiële anti-allergie therapeutische strategieën. De techniek echter niet aangeven welk deel van de antilichaam / receptorcomplex het molecuul van belang interactie met.

Ander onderzoek, zoals de 20 hebben aangegeven dat equine RAO niet gerelateerd is aan IgE mediation, dat is waarom sommige discrepantie kan worden gezien met andere uitgevers zoals Moran et al. 31 bij het ​​gebruik van de totale equine serum te testen om Ca 2+ influx van RAO lijden paarden met onspecifieke reaginische antilichamen die verschillende antilichamen zouden verantwoordelijk voor de cellulaire Ca2 + influx is.

Deze test is specifiek voor IgE gemedieerde overgevoeligheid, die ook kan worden toegepast op andere organismen, zoals mensen en29 honden, en specifiek worden gebruikt om de veiligheid van anti-allergie interventiestrategieën, zoals synthetische / chimeer anti-allergie antilichamen 30 getest.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
RBL-2H3.1 Expressing Equine FcεRIα - - Produced in the lab
Equine IgE anti NIP-HSA - - Produced in the lab
96 Well Plate Sigma CLS3595 -
Multi Channel Pipette Anachem - -
Incubator Galaxy R - -
4Hydroxy-5-iodo-3-nitrophenylacetic acid Cambridge Research Biochemicals N-1070-1 NIP-OH was conjugated with Human Serum Albumin to make NIP-HSA in the lab
Dinitrophenyl Conjugated to Human Serum Albumin Sigma A6661 Abbreviated DNP-HSA
Plate Spectrophotometer Anthos Labtec HT2 - -
Pipes Sigma P1851 -
Sodium Chloride Sigma S7653 -
Potassium Chloride Sigma P9333 -
Magnesium Chloride Sigma M2670 -
Calcium Chloride Sigma C1016 -
Triton x100 Sigma X100 -
4-nitrophenyl N-acetyl-β-D-glucosaminide Sigma N9376 Stock solution called β-hexosaminidase substrate was 50mM prepared in DMSO
Dimethyl Sulfoxide Sigma D2650 -
Citric Acid Sigma 251275 -
Sodium Acetate Sigma S7670 -
Tris Sigma T5941 -

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Taudou, G., et al. Expression of the Alpha Chain of Human FcεRI in Transfected Rat Basophilic Leukemia Cells: Functional Activation after Sensitization with Human Mite-Specific IgE. Int Arch Allergy Immunol. 100, (4), 344-350 (1993).
  2. Sabban, S. Development of an in Vitro Model System for Studying the Interaction of EquuscaballusIgE with Its High-Affinity FcεRI Receptor. The University of Sheffield. Sheffield. (2011).
  3. Sabban, S., Ye, H., Helm, B. A. Development of an in Vitro Model System for Studying the Interaction of EquuscaballusIgE with Its High-Affinity Receptor FcεRI. Vet ImmunolImmunopathol. 153, (1-2), 6-10 (2013).
  4. Wilson, A. P. M., Pullar, C. E., Camp, A. M., Helm, B. A. Human IgE mediates stimulus secretion coupling in rat basophilic leukemia cells transfected with the a chain of the human high-affinity receptor. Eur J Immunol. 23, 240-244 (1993).
  5. Hunter, M. J., Vratimos, A. P., Housden, J. E. M., Helm, B. A. Generation of canine-human Fc IgE chimeric antibodies for the determination of the canine IgE domain of interaction with FcεRIα. MolImmunol. 45, (8), 2262-2268 (2008).
  6. Rashid, A., et al. Review: Diagnostic and therapeutic applications of rat basophilic leukemia cells. MolImmunol. 52, (3-4), 224-228 (2012).
  7. Cohen, S. G. Asthma in antiquity: the Ebers Papyrus. Allergy Proc. 13, (3), 147-154 (1992).
  8. Dudler, T., et al. A link between catalytic activity, IgE-independent mast cell activation, and allergenicity of bee venom phospholipase A2. J. Immunol. 155, 2605-2613 (1995).
  9. Machado, D. C., Horton, D., Harrop, R., Peachell, P. T., Helm, B. A. Potential allergens stimulate the release of mediators of the allergic response from cells of mast cell lineage in the absence of sensitization with antigen-specific IgE. Eur J Immunol. 26, (12), 2972-2980 (1996).
  10. Smyth, L. J., et al. Assessment of the molecular basis of pro-allergenic effects of cigarette smoke. Environ Sci Technol. 34, (7), 1370-1374 (2000).
  11. Okada, H., Kuhn, C., Feillet, H., Bach, J. F. The 'hygiene hypothesis' for autoimmune and allergic diseases: an update. ClinExpImmunol. 160, (1), 1-9 (2010).
  12. Eder, C., et al. Influence of environmental and genetic factors on allergen-specific immunoglobulin-E levels in sera from Lipizzan horses. Equine Vet J. 33, (7), 714-720 (2001).
  13. Cook, W. R., Rossdale, P. D. The syndrome of 'Broken Wind' in the horse. Proceedings of the Royal Society of Medicine. 56, 972-977 (1963).
  14. Eyre, P., Lewis, A. J. Acute systemic anaphylaxis in the horse. Br. J. Pharmacol. 48, (3), 426-437 (1973).
  15. Bruggink, M. Global betting stable, but some countries suffer recession. International Federation of Horseracing Authorities. Available from: http://www.horseracingintfed.com/Default.asp?section=Resources&area=0&story=664 (2009).
  16. Wagner, B. IgE in horses: occurrence in health and disease. Vet ImmunolImmunopathol. 132, (1), 21-23 (2009).
  17. Hellberg, W., et al. Equine insect bite hypersensitivity: immunoblot analysis of IgE and IgG subclass responses to Culicoidesnubeculosus salivary gland extract. Vet. Immunol. Immunopathol. 113, (1-2), 99-112 (2006).
  18. Schaffartzik, A., et al. Equine insect bite hypersensitivity: what do we know. Vet ImmunolImmunopathol. 147, (3-4), 113-126 (2012).
  19. Künzle, F., et al. IgE-bearing cells in bronchoalveolar lavage fluid and allergen-specific IgE levels in sera from RAO-affected horses. J Vet Med A PhysiolPatholClin Med. 54, (1), 40-47 (2007).
  20. Tahon, L., et al. In vitro allergy tests compared to intradermal testing in horses with recurrent airway obstruction. Vet ImmunolImmunopathol. (1-2), 85-93 (2009).
  21. Wagner, B., Radbruch, A., Rohwer, J., Leibold, W. Monoclonal anti-equine IgE antibodies with specificity for different epitopes on the immunoglobulin heavy chain of native IgE. Vet ImmunolImmunopathol. 92, (1-2), 45-60 (2003).
  22. Wilson, A. D., Harwood, L., Torsteinsdottir, S., Marti, E. Production of monoclonal antibodies specific for native equine IgE and their application to monitor total serum IgE responses in Icelandic and non-Icelandic horses with insect bite dermal hypersensitivity. Vet ImmunolImmunopathol. 112, (3-4), 156-170 (2006).
  23. McAleese, S. M., et al. Cloning and expression of the extra-cellular part of the alpha chain of the equine high-affinity IgE receptor and its use in the detection of IgE. Vet ImmunolImmunopathol. 110, (1-2), 187-191 (2006).
  24. Ledin, A., et al. Generation of therapeutic antibody responses against IgE in dogs, an animal species with exceptionally high plasma IgE levels. Vaccine. 24, (1), 66-74 (2006).
  25. Siraganian, R. P., Hook, W. A. Histamine release and assay methods for the study of human allergy. Manual of Clinical Immunology. American Society for Microbiology. Washington, D. C. (1980).
  26. Neuberger, M. S., et al. A hapten-specific chimaericIgE antibody with human physiological effector function. Nature. 314, (6008), 268-270 (1985).
  27. Bingham, B. R., Monk, P. N., Helm, B. A. Defective Protein Phosphorylation and Ca2+ Mobilization in a low secreting variant of the rat basophilic leukemia cell line. The Journal of Biological Chemistry. 269, (30), 19300-19306 (1994).
  28. McAleese, S. M., Halliwell, R. E., Miller, H. R. Cloning and sequencing of the horse and sheep high-affinity IgE receptor alpha chain cDNA. Immunogenetics. 1, (51), 878-881 (2000).
  29. Hongtu, Y. Study of the structure/function relationship in canine and human IgE as the basis for the development of rational therapeutic intervention strategies in allergic disease. The University of Sheffield. (2010).
  30. Sabban, S., et al. Towards a pan-anti-allergy vaccine. JIBTVA. 2, (2), 15-27 (2013).
  31. Moran, G., Burgos, R., Araya, O., Folch, H. In vitro bioassay to detect reaginic antibodies from the serum of horses affected with recurrent airway obstruction. Vet Res Commun. 34, 91-99 (2010).
Ontwikkeling van een<em&gt; In vitro</em&gt; Modelsysteem voor het bestuderen van de interactie van<em&gt; Equus</em&gt;<em&gt; Caballus</em&gt; IgE met zijn receptor met hoge affiniteit FceRI
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Sabban, S., Ye, H., Helm, B. Development of an in vitro model system for studying the interaction of Equus caballus IgE with its high-affinity receptor FcεRI. J. Vis. Exp. (93), e52222, doi:10.3791/52222 (2014).More

Sabban, S., Ye, H., Helm, B. Development of an in vitro model system for studying the interaction of Equus caballus IgE with its high-affinity receptor FcεRI. J. Vis. Exp. (93), e52222, doi:10.3791/52222 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter