Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

Utveckling av ett doi: 10.3791/52222 Published: November 1, 2014

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Allergi har varit känt i årtusenden. En astmabehandling beskrevs i forntida egyptiska medicinska text kallas Ebers Papyrus (~ 1550 f.Kr.) och diskuterade naturläkemedel för att behandla det 7.

Idag allergi klassificeras som en typ I överkänslighetssvar, där T-hjälparcell typ 2 (TH 2) armen av immunsystemet styr produktion av immunoglobulin E (IgE) antikroppar som svar på miljömässiga antigener kallas allergener. Dessa är olika ämnen som vanligen interagerar med celler i immunsystemet och stimulerar syntes och utsöndring av proinflammatoriska cytokiner, inklusive interleukin-4 och interleukin-13 8, 9 som gör partiklarna i cigarettrök eller dieselpartiklar som ökar IgE-syntes 10.

Ökningen av allergiska manifestationer i industriländerna under de senaste 50 åren har tillskrivits en kombination av effekterna avmiljögifter och en trend mot en mer sanerad miljö, som kombinerar att skifta immunsvaret mot en profil dominerade med TH 2 cytokiner, som föreslås av "hygienhypotesen" 11.

Som nämnts ovan, människor är inte de enda däggdjur som drabbats av allergi. Särskilt hästar och hundar kan också utveckla klassiska allergiska reaktioner och en studie av 12 har visat att, som hos människa, är hästallergi skrivas genetiska och miljömässiga faktorer. Som en följd av dessa djur presenterar bra modeller för att studera samspelet mellan genetiska och miljömässiga orsaker till allergi, dess progression från sensibilisering till sjukdom, och möjliga interventionsstrategier gång kliniska manifestationer har ställt in

År 1887 Stömmer var den förste att beskriva likheten mellan människa och häst astma 13, är effekten av histamin på häst kardiovaskulära systemetmycket liknar den för människor 14. Hästar är också en hörnsten i hästsporten, som är värt US $ 72 miljarder euro med en vadslagning omsättning på US $ 115 miljarder dollar per år 15.

De flesta moderna tävlingshästar är ättlingar till det lilla antalet arabiska hästar uppfödda av Lady Anne Blunt från 1878 och framåt. Moderna tävlingshästar vanligen inavlad att välja för prestationsförmåga. De är benägna att genetiska störningar, av vilka en är deras känslighet för att montera allergiska svar. De har också 1000 gånger högre serum IgE-nivåer än även de svårast allergiska människor 16. Häst allergiska reaktioner är vanligtvis manifesteras som insektsbett överkänslighet (IBH) 17, 18. IBH ger eksem på grund av bites bildar insekter i släktet Culicoides. En annan form av häst allergisk sjukdom är återkommande luftvägshinder (RAO), detta visar sig i lungor och luftvägar. Det kännetecknas av väsande och labORed andning. RAO uppträder vanligen som svar på mögelsporer, och höga allergenspecifika IgE-nivåer har registrerats hos hästar som lider av RAO i en studie 19 även om en annan utredning inte har bekräftat detta 20.

Studier av hästallergi kretsade kring försök till övervakning och neutralisera häst IgE genom att utveckla anti-häst IgE monoklonala antikroppar (mAbs) 21, 22. Dessutom studien med 23 diskuterar produktionen av de extracellulära domäner av häst med hög affinitet Fc receptorns α kedja (FcsRIa) receptor i ett försök att detektera och kvantifiera häst serum-IgE. En besläktad studie av Ledin 24 diskuterar en ny strategi som syftar till att neutralisera serum-IgE genom att instruera immunsystemet med hjälp av en själv / icke själv immunogen. Alla dessa studier, men saknade en effektiv analys för att testa säkerheten och effektiviteten i sina protokoll. I den här artikeln presenterar vi nu en sådan analys system som tillämpas på studiet av diagnostiska och terapeutiska strategier som är relevanta för häst systemet, där β-hexosaminidas release, som en indikator på cell medlare degranulering, bedömdes på RBL-2H3.1 celler som uttrycker häst FcsRIa. Detta protokoll är baserat på tidigare publikationer 25, 4, 5, 2, 3 som beskriver konstruktion av RBL-celler transfekterade med den gen som kodar för den IgE-bindande domänen av receptor med hög affinitet för IgE från olika arter. Protokollet förklarar hur du utför en β-hexosaminidas frisättningsanalys, vars resultat presenteras som medelvärde ± standardavvikelse för trippelexperimenten.

Analys frisättningen utvecklades först av Siraganian och Hook 25 för att studera människans allergi. Labbet Gruppen leds av Dr Reuben Siraganian utvecklades också RBL cellinje. Dessa RBL-celler har utvecklats för att uttrycka det mänskliga FcsRIa och protokollet publicerades av 4. Den sista pusselbitenav analysen kom med utvecklingen av pSV-plasmiden i papperet genom Neuberger 26 vilken beskrivs framställning av en IgE-antikroppar genom att klona dess tunga kedja-gen nedströms om en gen mus för en IgE-variabel region som riktar haptenen 4-hydroxi-3 -nitro-fenacetyl (NP), var den resulterande chimära antikroppen fullt funktionell. Förmågan att utveckla någon IgE inriktning samma hapten, samtidigt klona dess receptor på ytan av RBL-celler resulterade i att standardisera analysen gör det till ett användbart protokoll för att mäta degranulering av basofila celler.

Analysen har för- och nackdelar. Proffsen av analysen är dess anpassningsförmåga som ska användas i alla däggdjurssystem, vårt labb har således använt den för att testa för degranulering i mänskliga, hund och häst-system, och det är möjligt att helt enkelt genom att syntetisera organismens IgE och kloning sin receptor på ytan av RBL-celler.

Å andra sidan,nackdelarna av analysen är att RBL cellerna är mycket känsliga för värme, mekaniska och pH-förändringar, vilket gör dem ger en variation av degranulering nivåer inom samma analys. Det är därför starkt rekommenderat att analyserna alltid upprepas i tre exemplar och sedan ett genomsnitt tas ifrån dem. Vidare RBL cellerna tenderar att skifta mot en icke-releasing fenotyp om de lämnas i vävnadskultur under en längre tid (> 10 veckor) 27, vilket gör deras underhåll besvärlig. De är också benägna att infektioner av mykoplasmabakterier, som inte syns från ett ljusmikroskop och inte ändrar cellens morfologi, men drastiskt skulle förändra deras degranulering nivåer. Således behövs regelbundna mykoplasmatest.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1) Framställning av cellinje:

  1. Utveckling av RBL-2H3.1 cellinje som uttrycker hästdjur FcsRI α:
    1. Använda grundläggande vävnadsodlingstekniker för monoskikt cellinjer, transfektera föräldra RBL-2H3.1 celler med pEE6 plasmiden, som bär häst FcsRIa genen (GenBank: Y18204.1) 28. Lägg 2 ug il -1 av plasmid-DNA till 0,8 ml av celler vid en densitet av 1,2 x 10 7 celler ml -1. Electroporate cellerna vid 250 V 960 ^ F med användning av en 0,4 cm electrocuvette sedan omedelbart inkubera på is under 10 min.
    2. Markera de transformerade cellerna med hjälp av media innehållande 0,4 g geneticin G418 sulfat, sedan sortera de kvarvarande levande celler genom FACS genom att märka dem med en fluorescerande IgE-antikropp. Använd den resulte RBL-2H3.1 uttryck häst FcsRIa cellinje för utredningen 2, 3.
  2. Pre-antikroppsanalys sensibilisering:
      5 celler ml -1.
    1. Lägg IgE av intresse för de suspenderade cellerna till en slutlig koncentration av 1 ng ml -1, då plattan 100 | il av celler på en 96 brunnars platta vid kolumnerna 1-6 och inkubera vid 37 ° C + 5% CO2 + 90% relativ fuktighet under 16 h. Efter inkubationstiden och innan utförande av frisättningsanalys, ta brunnarna under ett mikroskop för väl sammanflytning och cellvidhäftning.

2) frisättningsanalys:

  1. Tvättning av cellerna:
    1. Varm frisättningsbuffert (25 mM PIPES, 120 mM natriumklorid, 5 mM kaliumklorid, 0,04 mM magnesiumklorid och 1 mM kalciumklorid) vid 37 ° C för att medge för skonsam cell tvättning.
    2. Tvätta cellerna genom att slå plattan för att avlägsna cellmedier och tillsats av 100 | il varm, 37 ° C, frigör buffert. Upprepa två gånger.
  2. Antigen utmaning:
    1. Bered en seriespädning av antigenet (NIP-HSA eller DNP-HSA) av 0 ng ml -1, 0,1 ng ml -1, 1 ng ml -1, 10 ng ml -1, 100 ng ml -1, 1000 ng ml -1, 10000 ng ml -1 i frigör buffert och varm vid 37 ° C.
    2. Efter den andra celltvätt, kassera mediet och ersattes med 100 | il av de antigenlösningar. Säkerställ att brunnarna i samma rad (A1-6 till exempel) har samma antigenkoncentration sattes till dem.
    3. Inrätta en negativ kontroll i rad A genom att lägga till 0 ng ml -1 antigen. Lägg ökande antigenkoncentration ned raderna (BG) följt av Triton-X-buffert (5% Triton X-100) i raden H-celler för att lysera cellerna för att användas som en positiv kontroll. Inkubera vid 37 ° C under 20 min för att tillåta cellerna att frigöra dess mediatorer.
  3. Ställa in individuella och kontroller:
    1. Efter inkubationen överföra 50 | il av cell supernatanten till den andra hälften av plattan (brunnar A1-6 till brunnar A7-12, etc). Kasta de återstående 50 fil supernatant och ersätt med 50 pl Triton-X-buffert för att möjliggöra mätning av mängden frigjorda medlare i varje brunn i kolumnerna 7-12 i procent av de totala medlarna inuti cellerna i kolumn 1-6 .
  4. Enzymsubstrat:
  5. Addera 50 pl av β-hexosaminidas substrat (50 mM 4-nitrofenyl-N-acetyl-β-D-glukosaminid ställdes i DMSO späddes ned till 2 mM genom att tillsätta den till citratbuffert 0,2 M citronsyra och 0,2 M natriumacetat, pH 4,5) till alla brunnar för att underlättas omvandlingen av substratet till 4-nitrofenol av β-hexosaminidas enzym. Inkubera plattorna vid 37 ° C under 2 h.

Fig 2.4.1

  1. Avslutande av reaktionen:
    1. Stoppa reaktionen genom att tillsätta 150 | il Tris-buffert (1 M Tris-HCl, pH 9) till varje brunn såsom det höga pH av bufferten stoppar reaktionen och vänder den 4-nitrofenol i en gul färg.
  2. Läsa och analysera resultaten:
    1. Läs plattan med användning av en platta spektrofotometer vid 405 nm för att mäta absorbansen av den gula färgen. Beräknat procentsatsen frisatt β-hexosaminidas under användning av följande formel:

Fig 2.6.1

  1. Applicera denna formel till varje brunn, varefter ett genomsnitt tas för varje rad. A1 och A7 representerar placeringen av brunnar i 96-brunnsplatta. Plotta en graf av procentuell andel av β-hexosaminidas frisättning (som motsvarar totalt mediatorfrisättning) agaiNST antigenkoncentration 2, 3.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Föräldra RBL-2H3.1 celler och de som har transfererats med häst FcsRIa receptorgenen först sensibiliserade med mus IgE anti DNP-HSA och utmanas med DNP-HSA-antigen. Mus IgE binder till den endogena råttreceptor i båda cellinjerna och således fungerar som en kontroll för att testa frisättningen livskraft båda cellinjerna att frisätta mediatorer (Figur 1 A). Detta är en viktig kontroll och bör utföras rutinmässigt sedan på förlängt (> 10 veckor) passage i cellkultur, RBL-2H3.1 celler driver mot den icke-utsöndrande fenotyp 27. Modercellerna stödde en topp mediatorfrisättning på 51,54% ± 4,79%, medan celler som uttrycker häst FcsRIa receptorn hade en topp mediatorfrisättning på 45,99% ± 5,76%. Samma cellinjer där sensibiliserade sedan med häst IgE anti NIP-HSA och utmanade med NIP-HSA-antigen (Figur 1 B). Föräldra celler genomgick inte mediatorfrisättning, eftersomhäst IgE binder inte till den endogena råttreceptorn. Å andra sidan var, som väntat, RBL-2H3.1 celler som uttrycker den equine FcsRIa-receptorn gick mediatorfrisättning när sensibiliserade med equine IgE anti NIP-HSA och utmanades med NIP-HSA-antigenet, vilket ger en topp frisättning av 36,68% ± 4,88% .

Dessa resultat bekräftar effektiviteten i denna release analysprotokoll i utredningen av mediatorfrigöring via häst IgE-receptorn. Det visar att denna cellinje är ett användbart diagnostiskt verktyg i strävan att bedöma nya terapeutiska åtgärdsstrategier på hästallergi in vitro minskar behovet av djurförsök. Samma protokoll kan också tillämpas på RBL-2H3.1 celler transfekterade med de humana och hund- FcsRIa receptorer.

Detta protokoll användes också för att testa säkerheten av en potentiell immuniseringsstrategi som försöker neutralisera hund serum-IgE-antikroppar 30. Från resultateni (Figur 2) kan det fastställas att immunisering strategi är inte säker. Den anti-hund-IgE-serum framgångsrikt bunden till hund IgE som var tänkt för att neutralisera serum-IgE och hindra den från att binda till sin receptor. Men denna bindning var ospecifika, och därmed anti-IgE-serum tvärbunden receptor på cellens yta, vilket resulterar i mediatorfrigöring, vilket kan resultera i en anafylaktisk chock om detta immuniseringsstrategi användes som ett antiallergivaccin.

RBL-2H3.1 uttrycka Equine FcsRIa - - Producerad i labbet
Equine IgE anti NIP-HSA - - Producerad i labbet
96 Well Plate Sigma CLS3595 -
Multi Channel Pipette Anachem - -
Inkubator Galaxy R - -
4Hydroxy-5-jod-3-nitrofenylättiksyra Cambridge Research Biochemicals N-1070-1 NIP-OH konjugerades med humant serumalbumin för att göra NIP-HSA i labbet
Dinitrofenyl- konjugerad till humant serumalbumin Sigma A6661 Förkortad DNP-HSA
Plansch Spektrofotometer Anthos Labtec HT2 - -
Rör Sigma P1851 -
NATRIUMKLORID Sigma S7653 -
Kaliumklorid Sigma P9333 -
Magnesiumklorid Sigma M2670 -
Kalciumklorid Sigma C1016 -
Triton x100 Sigma X100 -
4-nitrofenyl-N-acetyl-β-D-glukosaminid Sigma N9376 Stamlösning kallas β-hexosaminidas substrat 50 mM beredd i DMSO
Dimetylsulfoxid Sigma D2650 -
CITRONSYRA Sigma 251.275 -
Natriumacetat Sigma S7670 -
Tris Sigma T5941 -

Tabell 1: Tabell över Material och utrustning:

Figur 1
Figur 1: A visar frisättningsanalysen förformade på RBL-2H3.1 cellerna inte uttrycker häst FcsRIa och uttrycker receptorn med hjälp av mus-IgE anti DNP-HSA. Musen IgE binder till den endogena rått receptorn resulterar i mediatorfrigöring när de utsattes för DNP-HSA-antigen, vilket bekräftar att båda cellinjer är livskraftig och stödja IgE-medierad antigeninducerad mediatorfrisättning 2, 3. Diagram B visar frisättningsanalysen förformade på RBL-2H3.1 moderceller som inte uttrycker häst FcsRIa och dem som uttrycker häst FcsRIa, använder häst IgE anti NIP-HSA för cell sensibilisering. Häst IgE binder till häst receptorn, men inte den endogena rått-receptorn, för att resultera i mediatorfrisättning, vilket bekräftas eftersom de parentala celler frigjorde inte förmedlar mediatorer, medan celler som uttrycker den equine receptor stöd equine IgE-medierad, antigeninducerad , medlare släpper 2, 3.

Figur 2
Figur 2: Immunisering frisättning analysresultat: Diagrammet visar frisättningsanalys förformade på RBL-2H3.1 celler som uttrycker hund- FcsRIa, med användning av hund-IgE-anti NIP-HSA för cellsensibilisering, och immuniserades rått-anti-hund-IgE-serum som antigen. Styr användes var pre-immuniserat serum, och den positiva kontrollen var NIP-HSA-antigenet. Den canine IgE binder till den canine receptorn. Dessutom är kommissionens anti-IgE-serum till receptorn bunden hund IgE och tvärlänkar det, och receptorn, på cellernas yta vilket resulterar i mediatorfrisättning. Detta, i själva verket, visar att denna immunisering strategi har potential att orsaka en anafylaktisk chock reaktion, och anses därför inte säkert 30.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Sammanfattningsvis resultaten från denna undersökning visade att när RBL-2H3.1 celler som uttrycker häst FcsRIa är sensibiliserade med häst IgE och utmanas av ett antigen, de ger en topp mediatorfrisättning på 36,68% ± 4,88% av den totala mängden medlare inuti celler, jämfört med RBL-2H3.1 moderceller som inte uttrycker häst FcsRIa.

Alltså denna analys ger ett användbart verktyg för att undersöka och studera hästdjur allergiska reaktioner in vitro. Dess medger bestämning av den mängd mediator frisätts av celler av mastcell / basofil härstamning och således kan förväntas att avancera forskning inom häst allergi, oavsett om de bedöms allergiframkallande ämnen, eller forska IgE / receptorblockerande medel.

Denna analys modifierades för att studera hästallergi från tidigare publikationer som använde den för att studera mänskliga och hund allergier 4529 för samma ändamål. Den manipulerade cellinjens uttryck människa och hund FcsRIa användes för att undersöka effekt och säkerhet av allergiblockerare såsom vacciner riktade mot hämning av IgE / receptorinteraktion 30. Undersökningen visade en anafylaktogen bieffekt av immunogener innefattar hela Cs3 domänen, vilket också föreslogs av andra som ett vaccin för dämpning IgE-medierade allergiska reaktioner hos hundar 24. Utifrån vår undersökning kan den molekylära grunden för denna potentiellt allvarlig komplikation rationaliseras på grundval av erkännandet av epitoper i IgE-antikroppen av anti-IgE immunserum som innehåller anti-IgE-antikroppar som riktar epitoper i Cs3 och är inte skyms när IgE är komplexbunden till dess receptor. Denna observation kunde inte ha gjorts i avsaknad av detta analyssystem och är i slående kontrast till utredningen med 24, som också undersökt den antiallergiinterventionsstrategi baserad på in vivo immunisering med Cs3 domäner, men har inte diskuterat säkerheten av strategin på grund av avsaknaden av en sådan analys.

De kritiska stegen i detta protokoll är att se till att majoriteten av RBL-2H3.1 celler är av utsöndrar fenotyp; som har de celler i odling som är större än 10 veckor får dem att börja att driva mot den icke-utsöndrande fenotyp 27 oberoende av om de uttryckte den klonade FcsRIa av intresse eller inte. Därför är det alltid viktigt att köra mus IgE positiva kontroller vid sidan av experimentet (Figur 1), och för att bibehålla en stor frusen lager av celler som utsöndrar.

Dessutom måste pH i alla buffertar vara korrekta eller att de riskerar att ge falskt negativa resultat; förlängning av hållbarhetstiden för buffertar förändrar deras pH-värde, och sålunda någon buffert är äldre än två månader måste kasseras.

Tekniken visar interaktionen av en kemikalie med RBL-2H3.1 ceLLS, och hur det främjar eller undertrycker, deras mediatorfrisättning in vitro. Detta är en bra indikation på vad som kan hända in vivo, vilket detta protokoll är ett viktigt steg när forska potentiella anti-allergi terapeutiska strategier. Tekniken innebär dock inte ange vilken del av antikroppen / receptorkomplexet molekylen av intresse interagerar med.

Annan forskning, till exempel 20 har visat att häst RAO inte är relaterad till IgE medling, vilket är varför vissa avvikelser kan ses med andra förlag som Moran et al. 31 vid användning av total hästserum för att testa till Ca2 + inflöde från RAO lidande hästar med hjälp av ospecifika reagina antikroppar, för vilka olika antikroppar skulle vara ansvarig för den cellulära Ca2 + inflöde.

Denna analys är specifik för IgE-medierade överkänslighet, som även kan tillämpas på andra organismer, såsom människor ochhundar 29 och specifikt används för att testa säkerheten av allergiåtgärdsstrategier, såsom syntetiska / chimera antiallergiantikroppar 30.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
RBL-2H3.1 Expressing Equine FcεRIα - - Produced in the lab
Equine IgE anti NIP-HSA - - Produced in the lab
96 Well Plate Sigma CLS3595 -
Multi Channel Pipette Anachem - -
Incubator Galaxy R - -
4Hydroxy-5-iodo-3-nitrophenylacetic acid Cambridge Research Biochemicals N-1070-1 NIP-OH was conjugated with Human Serum Albumin to make NIP-HSA in the lab
Dinitrophenyl Conjugated to Human Serum Albumin Sigma A6661 Abbreviated DNP-HSA
Plate Spectrophotometer Anthos Labtec HT2 - -
Pipes Sigma P1851 -
Sodium Chloride Sigma S7653 -
Potassium Chloride Sigma P9333 -
Magnesium Chloride Sigma M2670 -
Calcium Chloride Sigma C1016 -
Triton x100 Sigma X100 -
4-nitrophenyl N-acetyl-β-D-glucosaminide Sigma N9376 Stock solution called β-hexosaminidase substrate was 50mM prepared in DMSO
Dimethyl Sulfoxide Sigma D2650 -
Citric Acid Sigma 251275 -
Sodium Acetate Sigma S7670 -
Tris Sigma T5941 -

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Taudou, G., et al. Expression of the Alpha Chain of Human FcεRI in Transfected Rat Basophilic Leukemia Cells: Functional Activation after Sensitization with Human Mite-Specific IgE. Int Arch Allergy Immunol. 100, (4), 344-350 (1993).
  2. Sabban, S. Development of an in Vitro Model System for Studying the Interaction of EquuscaballusIgE with Its High-Affinity FcεRI Receptor. The University of Sheffield. Sheffield. (2011).
  3. Sabban, S., Ye, H., Helm, B. A. Development of an in Vitro Model System for Studying the Interaction of EquuscaballusIgE with Its High-Affinity Receptor FcεRI. Vet ImmunolImmunopathol. 153, (1-2), 6-10 (2013).
  4. Wilson, A. P. M., Pullar, C. E., Camp, A. M., Helm, B. A. Human IgE mediates stimulus secretion coupling in rat basophilic leukemia cells transfected with the a chain of the human high-affinity receptor. Eur J Immunol. 23, 240-244 (1993).
  5. Hunter, M. J., Vratimos, A. P., Housden, J. E. M., Helm, B. A. Generation of canine-human Fc IgE chimeric antibodies for the determination of the canine IgE domain of interaction with FcεRIα. MolImmunol. 45, (8), 2262-2268 (2008).
  6. Rashid, A., et al. Review: Diagnostic and therapeutic applications of rat basophilic leukemia cells. MolImmunol. 52, (3-4), 224-228 (2012).
  7. Cohen, S. G. Asthma in antiquity: the Ebers Papyrus. Allergy Proc. 13, (3), 147-154 (1992).
  8. Dudler, T., et al. A link between catalytic activity, IgE-independent mast cell activation, and allergenicity of bee venom phospholipase A2. J. Immunol. 155, 2605-2613 (1995).
  9. Machado, D. C., Horton, D., Harrop, R., Peachell, P. T., Helm, B. A. Potential allergens stimulate the release of mediators of the allergic response from cells of mast cell lineage in the absence of sensitization with antigen-specific IgE. Eur J Immunol. 26, (12), 2972-2980 (1996).
  10. Smyth, L. J., et al. Assessment of the molecular basis of pro-allergenic effects of cigarette smoke. Environ Sci Technol. 34, (7), 1370-1374 (2000).
  11. Okada, H., Kuhn, C., Feillet, H., Bach, J. F. The 'hygiene hypothesis' for autoimmune and allergic diseases: an update. ClinExpImmunol. 160, (1), 1-9 (2010).
  12. Eder, C., et al. Influence of environmental and genetic factors on allergen-specific immunoglobulin-E levels in sera from Lipizzan horses. Equine Vet J. 33, (7), 714-720 (2001).
  13. Cook, W. R., Rossdale, P. D. The syndrome of 'Broken Wind' in the horse. Proceedings of the Royal Society of Medicine. 56, 972-977 (1963).
  14. Eyre, P., Lewis, A. J. Acute systemic anaphylaxis in the horse. Br. J. Pharmacol. 48, (3), 426-437 (1973).
  15. Bruggink, M. Global betting stable, but some countries suffer recession. International Federation of Horseracing Authorities. Available from: http://www.horseracingintfed.com/Default.asp?section=Resources&area=0&story=664 (2009).
  16. Wagner, B. IgE in horses: occurrence in health and disease. Vet ImmunolImmunopathol. 132, (1), 21-23 (2009).
  17. Hellberg, W., et al. Equine insect bite hypersensitivity: immunoblot analysis of IgE and IgG subclass responses to Culicoidesnubeculosus salivary gland extract. Vet. Immunol. Immunopathol. 113, (1-2), 99-112 (2006).
  18. Schaffartzik, A., et al. Equine insect bite hypersensitivity: what do we know. Vet ImmunolImmunopathol. 147, (3-4), 113-126 (2012).
  19. Künzle, F., et al. IgE-bearing cells in bronchoalveolar lavage fluid and allergen-specific IgE levels in sera from RAO-affected horses. J Vet Med A PhysiolPatholClin Med. 54, (1), 40-47 (2007).
  20. Tahon, L., et al. In vitro allergy tests compared to intradermal testing in horses with recurrent airway obstruction. Vet ImmunolImmunopathol. (1-2), 85-93 (2009).
  21. Wagner, B., Radbruch, A., Rohwer, J., Leibold, W. Monoclonal anti-equine IgE antibodies with specificity for different epitopes on the immunoglobulin heavy chain of native IgE. Vet ImmunolImmunopathol. 92, (1-2), 45-60 (2003).
  22. Wilson, A. D., Harwood, L., Torsteinsdottir, S., Marti, E. Production of monoclonal antibodies specific for native equine IgE and their application to monitor total serum IgE responses in Icelandic and non-Icelandic horses with insect bite dermal hypersensitivity. Vet ImmunolImmunopathol. 112, (3-4), 156-170 (2006).
  23. McAleese, S. M., et al. Cloning and expression of the extra-cellular part of the alpha chain of the equine high-affinity IgE receptor and its use in the detection of IgE. Vet ImmunolImmunopathol. 110, (1-2), 187-191 (2006).
  24. Ledin, A., et al. Generation of therapeutic antibody responses against IgE in dogs, an animal species with exceptionally high plasma IgE levels. Vaccine. 24, (1), 66-74 (2006).
  25. Siraganian, R. P., Hook, W. A. Histamine release and assay methods for the study of human allergy. Manual of Clinical Immunology. American Society for Microbiology. Washington, D. C. (1980).
  26. Neuberger, M. S., et al. A hapten-specific chimaericIgE antibody with human physiological effector function. Nature. 314, (6008), 268-270 (1985).
  27. Bingham, B. R., Monk, P. N., Helm, B. A. Defective Protein Phosphorylation and Ca2+ Mobilization in a low secreting variant of the rat basophilic leukemia cell line. The Journal of Biological Chemistry. 269, (30), 19300-19306 (1994).
  28. McAleese, S. M., Halliwell, R. E., Miller, H. R. Cloning and sequencing of the horse and sheep high-affinity IgE receptor alpha chain cDNA. Immunogenetics. 1, (51), 878-881 (2000).
  29. Hongtu, Y. Study of the structure/function relationship in canine and human IgE as the basis for the development of rational therapeutic intervention strategies in allergic disease. The University of Sheffield. (2010).
  30. Sabban, S., et al. Towards a pan-anti-allergy vaccine. JIBTVA. 2, (2), 15-27 (2013).
  31. Moran, G., Burgos, R., Araya, O., Folch, H. In vitro bioassay to detect reaginic antibodies from the serum of horses affected with recurrent airway obstruction. Vet Res Commun. 34, 91-99 (2010).
Utveckling av ett<em&gt; In vitro</em&gt; Modellsystem för att studera interaktionen mellan<em&gt; Equus</em&gt;<em&gt; Caballus</em&gt; IgE med sin högaffinitetsreceptor FcsRI
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Sabban, S., Ye, H., Helm, B. Development of an in vitro model system for studying the interaction of Equus caballus IgE with its high-affinity receptor FcεRI. J. Vis. Exp. (93), e52222, doi:10.3791/52222 (2014).More

Sabban, S., Ye, H., Helm, B. Development of an in vitro model system for studying the interaction of Equus caballus IgE with its high-affinity receptor FcεRI. J. Vis. Exp. (93), e52222, doi:10.3791/52222 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter