Summary
A disfunção mitocondrial é uma característica da senescência celular. Este trabalho usa não-invasivo do infravermelho próximo (NIR) de tratamento para melhorar a função mitocondrial no rato epitélio sensorial vestibular de envelhecimento.
Abstract
Estratégias para atenuar o declínio na função equilíbrio com o aumento da idade são predominantemente focado em terapias físicas, incluindo tarefas de equilíbrio e exercícios. No entanto, estas abordagens não abordam as causas subjacentes do declínio do equilíbrio. Usando ratos, o impacto da luz de infravermelho próximo (NIR) sobre o metabolismo de células do epitélio sensitivo vestibular foi avaliada. Os dados coletados mostram que essa intervenção simples e segura pode proteger essas células vulneráveis dos efeitos deletérios do envelhecimento natural. ARNm foi extraído a partir do epitélio sensitivo vestibular periférico isolado (ampulares crista, e mácula utricular) e posteriormente transcrita para uma biblioteca de ADNc. Esta biblioteca foi então sondadas para a expressão de antioxidante ubíqua (SOD-1). A expressão do gene antioxidante foi então usado para quantificar o metabolismo celular. Usando entrega transcraniana de Nir em jovens (4 semanas) e mais velhos (8-9 meses), ratos, e um regime de tratamento breve (90 seg / dia para 5 days), este trabalho sugere NIR sozinho pode ser suficiente para melhorar a função mitocondrial no epitélio sensitivo vestibular. Uma vez que existem atualmente não há métodos disponíveis, acessíveis e não-invasivos de terapia para melhorar a função das células ciliadas vestibular, a aplicação de radiação NIR externa fornece uma estratégia potencial para neutralizar o impacto do envelhecimento sobre o metabolismo celular inthe epitélio sensorial vestibular.
Introduction
O declínio da performance de equilíbrio e quedas subsequentes são comuns, e, infelizmente, muitas vezes definem características de envelhecimento natural 1. O impacto desse declínio pode ser tanto física e social, e reduz significativamente a qualidade de vida das pessoas mais velhas. Em resposta, terapias físicas e reabilitação têm sido o foco da investigação sobre as quedas, mas não têm sido associadas com redução consistente na prevalência de quedas repetidas. Ao mesmo tempo, o trabalho investiga as mudanças no sistema vestibular periférico ou central (o sistema responsável por manter o equilíbrio) é escassa, e potenciais estratégias terapêuticas dirigidas a esses sistemas e as causas subjacentes de desequilíbrio limitado.
Trabalhos recentes sobre doenças neurodegenerativas associadas com a idade relacionada com a idade, incluindo degeneração macular 2-4, modelos da doença de Alzheimer, 5-8 e 9-12 doença de Parkinson têm mostrado efeitos neuroprotectores de simple aplicação não invasiva do infravermelho próximo (NIR) luz. Além disso, no sistema vestibular, NIR foi usada para aumentar a actividade dos neurónios aferentes primários vestibulares in vitro 13. Embora o mecanismo de NIR luz não é bem compreendido, a maioria dos estudos que usam NIR sugeriram que estimula NIR mitocôndrias complexo IV (citocromo c oxidase) 14-17 para facilitar o metabolismo celular. No epitélio sensorial vestibular da placa subcuticular do tipo células ciliadas I é denso em mitocôndrias 18 e, como tal, pode representar um local de ação para o tratamento terapêutico NIR.
Aqui, uma breve regime de tratamento, não-invasivo de transcraniana aplicado NIR que podem ser utilizadas para medir o metabolismo celular (e implicitamente, a função mitocondrial) no rato epitélio sensorial vestibular é descrito. Também é discutida a preparação de um epitélio sensorial vestibular e é mostrado que o NIR aumenta a expressão de um ubiquitonos anti-oxidante (superóxido dismutase 1) no epitélio sensorial - anteriormente mostrado ser importante para a sobrevivência de células do cabelo cóclea 19.
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Protocol
Declaração de Ética: Todos os procedimentos descritos a seguir foram aprovados pelo Comitê de Ética da Universidade de Sydney animal.
1. Animais
NOTA: 1 e 8-9 meses de idade camundongos (C57 / BL6) foram obtidos a partir do Centro de Recursos Animal (Perth, Austrália). Os ratinhos foram alojados no mecanismo Bosch Roedor na Universidade de Sydney.
- Casa ratos em gaiolas-padrão do mouse em um ciclo claro / escuro de 12/12 horas de luz com acesso a comida e água ad libitum.
- Camundongos Divida em cada faixa etária em infravermelho próximo (NIR), tratados, ou sham grupos tratados (controle) para comparação.
2. Infravermelho Próximo (NIR) Irradiação e Tratamento Sham
- Raspar a pele na região da cabeça e pescoço do mouse com um barbeador elétrico, tanto quanto possível para evitar a rebrota rápida de cabelo antes da realização do regime de tratamento. A fim de manter o status de livre de patógenos dos ratos, use 70% de etanolpara limpar instrumentos entre animais para maquiagem e desinfetante F10 veterinário entre animais de gaiolas separadas. Faça isto 2-3 dias antes do início do tratamento para que os animais não estão sobre-tratadas.
- Conter rato com a extremidade proximal da cauda e permitir que ele relaxe na palma de uma mão ou de bancada, de modo a minimizar o stress, que pode levar a resultados falsos.
- Segure o NIR (670 nm) LED (light emitting diode) dispositivo de 1-2 cm de distância da área exposta (raspada) e ligar o aparelho durante 90 segundos (Figura 1A).
NOTA: A mudança de temperatura como resultado de exposição de 90 segundos foi medida como <0,2 ° C em 100 ml de água. - Repita os passos de 2,2-2,3 para o grupo de tratamento simulado de animais, mas deixar o aparelho desligado (Figura 1B).
- Repita os passos de 2,2-2,3 para o grupo de tratamento Nir-bloqueado de animais, mas cubra o aparelho com papel alumínio.
- Repita os passos 2,2-2,5 diariamente às approximate 24 intervalos de RH durante 5 dias consecutivos.
- Extraia o epitélio vestibular sensorial (3 cristas e uma mácula utricular) de ambas as orelhas no quinto dia pós-tratamento (ver secção 3 abaixo).
3. Extracção de tecido 20
- Preparar 300 ml de um fluido cerebrospinal artificial (ACSF) à base de glicerol que consistem em (em mM): 26 de NaHCO3, 11 de glucose, 250 glicerol, 2,5 de KCl, 1,2 de NaH 2 PO 4, 1,2 de MgCl2, 2,5 e CaCl 2. Antes da adição de CaCl2, gás a solução com carbogénio (95% O 2 e 5% CO 2) para estabelecer um pH de 7,4 e evitar a precipitação do cálcio (turvação). Arrefeça a solução num congelador a -80 ° C durante 45 minutos de modo que uma pasta de gelo é formada.
- Prepare o tampão de lise isolamento do RNA em microtubos parafuso superior marcados (pára o popping de tampas quando as alterações de pressão tubo entre congelamento e descongelamento em nitrogênio líquido), de acordocom as instruções do fabricante ou práticas de laboratório habituais. Já nitrogênio líquido pronto em um frasco de Dewar de alumínio.
NOTA: Use roupas de proteção e eyeware ao manusear nitrogênio líquido. Certifique-se de que o nitrogênio líquido é usado em um quarto bem ventilado como o volume da sua forma de gás é aproximadamente 700 vezes maior do que a sua forma líquida e pode causar asfixia. - Profundamente anestesiar os ratos com cetamina (400 mg / kg) através de uma injecção intra-peritoneal. Permitir que o reflexo posterior de membros para desaparecer completamente como indicação de que os ratos são totalmente anestesiado.
- Decapitar ratos com tesoura de aço inoxidável afiadas e fazer uma incisão ao longo da pele sagital do crânio usando uma lâmina de barbear (arredondado # 22). Neste momento e em toda as etapas 3,5-3,9, manter a calota craniana, cérebro e aparelho vestibular subjacente o mais fresco possível pela aplicação regular de ACSF gelada sobre o tecido.
- Usando o braço pontas de tesouras padrão standard fazer uma small incisão no crânio no Lambda e cortar ao longo da sutura sagital.
- Deslize suavemente um braço de um fórceps rasas debaixo do osso parietal mantendo a lâmina tão próximo quanto possível da superfície inferior do osso sem arrastar o cérebro. Seguros e afastar o osso parietal lateral e posterior do osso occipital até que o cérebro está exposto.
- Use uma pequena espátula de aço inoxidável e levante o cérebro de distância do anterior e fossa craniana média para expor o nervo vestibular (CN VIII). Transecto o nervo para evitar tensão desnecessária sobre os axônios aferentes primários que inervam diretamente as células ciliadas vestibulares.
- Remover o cérebro in toto após transecção do CN VIII.
- Observe o labirinto ósseo contendo a cóclea e os órgãos vestibulares periféricas da fossa craniana média. Faça duas pequenas incisões ao lado de cada labirinto ósseo e extirpar toda a estrutura, mantendo o canal semicircular anterior e puxando mais tardealiado.
- Mergulhar imediatamente labirintos excisadas em um prato de dissecação contendo solução ACSF gelado (como descrito no passo 3.1), enquanto que irriga continuamente com carbogéneo.
- Sob um microscópio estereoscópico, mantenha pressionado o labirinto pela cóclea e fixá-lo ao fundo do prato com uma pinça.
- Use uma pinça reta fina para riscar uma pequena abertura no osso acima do canal semicircular (SSC) ampulla anterior.
- Gentilmente ampliar esta abertura, alcançando imediatamente abaixo do osso e sacudindo para fora ampulífuga. Tenha cuidado aqui para não empurrar pinça na abertura e danificar o labirinto membranoso frágil abaixo. Continuar dessa maneira até que o utrículo, anterior e ampolas laterais estão todos expostos. Se possível remover a ampola posterior também.
- Usando uma pinça fina, levantar delicadamente o utrículo e ampolas de distância do labirinto ósseo até que estejam completamente isolada. Sempre que possível, mantê-lospor seus canais semicirculares associados para evitar danos ao epitélio sensorial. Em alguns casos, a parte proximal da conduta membranoso semicircular pode ter de ser cortado com tesoura de íris para libertar as ampolas a partir do osso.
- Firmemente compreender os órgãos vestibulares entre a ponta de uma pinça e lugar para o tampão de lise preparado anteriormente na etapa 3.2. Agite suavemente a pinça em torno do tampão para garantir órgãos vestibulares têm destacado a pinça. Confira este for o caso, trazendo a pinça, ao microscópio estereoscópico.
- Parafuso na tampa de microtúbulos e congelar a amostra em nitrogênio líquido imediatamente.
4. Extracção de ARN e RT-PCR
- Siga métodos padrão de RNA mensageiro (mRNA) extracção de acordo com as instruções do fabricante ou protocolos de laboratório preferenciais.
NOTA: Um kit comercial que utilizou ARN de suporte para ajudar a isolar pequenos rendimentos de ARNm foi utilizada nesteprotocolo. Volumes de eluição inferiores podem ser utilizados para aumentar as concentrações finais de ARNm.
NOTA: Negativo controles "não enzima" (CNE) e controles "nenhum modelo de DNA" (NTC) também deve ser concluído para garantir a validade dos efeitos observados. - Aplicar os métodos padrão de transcrição reversa do ARNm de ADN complementar (ADNc) e amplificação de genes alvo 21-23.
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Representative Results
Para comparar o impacto do tratamento NIR em jovens (4 semanas) e mais velhos (8-9 meses), camundongos medimos a expressão de antioxidante superóxido dismutase 1 (SOD-1) em jovens (n = 16) e mais velhos (n = 20) os ratos que foram tratados Nir, tratamento simulado, ou NIR-bloqueados. A Figura 2 mostra um aumento significativo na normalizada SOD-1 expressão β-actina de mais de 2 vezes em jovens tratados com NIR animais jovens em comparação com os animais tratados de forma simulada (p <0,01) e animais jovens NIR-bloqueadas (p <0,01). Animais tratados com Nir Older também mostrou que mais de 2 vezes up-regulação da SOD-1 quando comparados com animais Nir-bloqueadas mais velhos (p <0,05).
Figura 1. Nir Tratamento. 2 cm acima da região raspou na cabeça do rato durante 90 segundos por dia durante 5 dias consecutivos em irradiação trea - (A) Nir dispositivo portátil 1 LEDcamundongos ted. (B) Nir realizada dispositivo acima camundongos tratados de forma simulada, da mesma forma, mas com o dispositivo desligado durante o período de 90 seg LED. Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2. Análise de SOD-1 a expressão do gene após 5 dias consecutivos de tratamento NIR (90 seg / dia). O epitélio sensitivo vestibular foi colhida no quinto dia e antioxidante gene específico sondaram por meio de RT-PCR. O gene de SOD-1 foram normalizados para β-actina de linha de base e densitometria realizada utilizando o ImageJ v1.48. Significativo aumento da regulação (p <0,01) da SOD-1 expressão foi observada em animais jovens tratados-NIR, quando comparado com os dois controles jovens Nir-bloqueadas (4 semanas) tratados sham e jovem. Aumento significativo (p &# 60; 0,05) na expressão de SOD-1 foi também observada em animais mais velhos tratados com NIR, quando comparado com animais mais velhos NIR-bloqueados (8-9 meses). Todos os gráficos mostram a mudança de dobragem de SOD-1 em comparação com a expressão do gene do jovem de controlo tratados por simulação. Os dados representam a média ± SD. Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância e significância estatística determinada utilizando comparações múltiplas de Tukey teste post-hoc. Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
Os resultados representativos descritos aqui mostram que a entrega breve transcraniana de luz NIR (90 seg / dia durante 5 dias) é suficiente para elevar os níveis de expressão de antioxidantes em ratos mais velhos quando comparados com os ratos tratados por simulação. Enquanto calor emitido poderia representar uma fonte de mitocondrial e / ou ativação neuronal, como relatado para vestibular rato aferentes 24 - nossa medição do calor emitido pelo NIR LED dispositivo foi <0,2 ° C durante 90 segundos, e, como tal, não é provável que o alterações descrito aqui. Além disso, ao contrário do relatório destacado acima, o tratamento Nir usada aqui não foi aplicada diretamente para o epitélio sensorial ou neurônios aferentes vestibulares, e como tal, é também pouco provável a impactar no termo canais sensíveis (eg, TRPV4). Finalmente, o trabalho anterior utilizando o mesmo dispositivo de NIR em outras regiões do cérebro sugeriram que o calor não foi a fonte das diferenças observadas 7,9.
Enquanto estes results mostram uma sobre-regulação da resposta celular ao stress oxidativo associada à idade no nível genético, não é claro se estas alterações são adicionalmente expressa ao nível da proteína, ou importante, se eles são reflectidos no desempenho global equilíbrio de ratinhos. Além disso, a sobre-regulação é mostrada para um único anti-oxidante ubíqua. É provável que vários marcadores do metabolismo celular são afectados por este regime de tratamento. Além disso, uma vez que o ARNm foi extraído a partir do aparelho vestibular in toto (isto é, células ciliadas, células de suporte, aferentes vestibulares e epitélio todos presentes), não é possível relacionar as alterações observadas no metabolismo celular em resposta ao tratamento com luz NIR para um cabelo vestibular específico tipo de célula ou aferentes primários. Importante, porém, utilizando o ARNm suficiente de preparação descrito pode ser extraído a partir de um único rato para permitir futuras estudos de correlação entre o metabolismo celular e análise comportamental de equilíbrio performance.
A intensidade LED dispositivo de alta usada aqui emite cerca de 5 J / cm 2 por 90 seg tratamento- totalizando 25 J de energia ao longo de 5 dias. Embora a vantagem da utilização de luz de comprimento de onda longo (incluindo NIR) é a penetrância, não pode ser assumido que o total de 25 J NIR de luz é entregue ao epitélio sensitivo vestibular. No rato, a luz deve penetrar pelo menos 1 mm por meio de camadas de tecidos moles e osso que protegem o aparelho vestibular periférico e no cérebro. Nos humanos este se estende para centímetros. Assim, a penetração de luz representa uma limitação da técnica descrita em relação à tradução de NIR estratégias de tratamento de luz para o ambiente clínico. Trabalhos recentes, entretanto, tem empregado fibras ópticas para entregar Nir luz para estruturas cerebrais profundas, incluindo os gânglios da base 25, e os órgãos sensoriais, incluindo a cóclea 26. Com base nesta e a localização do aparelho vestibular periférica adjacente àcóclea (e clínica acesso a ele através do processo mastóides), é viável a sugerir que, no ser humano, a estimulação directa do epitélio sensitivo vestibular pode ser alcançada através de uma pequena fibra óptica desencadeada por um dispositivo externo - semelhante a um implante coclear 27 .
Várias condições podem ser modificados no protocolo descrito acima, para se adaptar ao interesse do investigador. Em primeiro lugar, o comprimento de onda usado aqui (670 nm) pode ser estendido para incluir os comprimentos de onda mais longos na faixa do infravermelho tal como anteriormente reportado em outros sistemas sensoriais e modelos animais. Em segundo lugar, os regimes de tratamento também pode ser variada, dependendo se a curto prazo ou resposta a longo prazo é em questão. Aqui um breve regime de tratamento foi utilizado, mas isso poderia ser estendido para períodos mais longos, ou durações mais curtos para medir a dinâmica das mudanças induzidas NIR.
O principal desafio deste protocolo é para manter a viabilidade do tecidodurante a extracção do tecido. Dado o tempo necessário para remover o labirinto ósseo e excisar o labirinto membranoso a partir dele, é essencial para reduzir a degradação metabólica. Isto é conseguido por banhar o tecido em ACSF gelado durante todo o procedimento de perfusão e esta solução continuamente com carbogéneo. Além disso, no final do procedimento de dissecção, uma maior degradação do tecido pode ser interrompido com o uso de azoto líquido para congelar o tecido piscar extraída. Quando necessário, o tecido congelado pode ser descongelado e mRNA extraído para posterior análise genética.
Embora os métodos descritos aqui não descrevem o impacto total do tratamento de luz NIR no metabolismo celular no epitélio sensitivo vestibular, nova aplicação desta estratégia pode ser modificada para incluir outros marcadores associadas com a idade de função mitocondrial 28,29 e / ou metabólica celular insultos, como hipóxia 30. Em última análise, a capacidade de descrever o vperfil metabólico celular estibular de um rato indivíduo permitirá que a investigação das correlações entre o desempenho equilíbrio e processos subcelulares durante o envelhecimento, bem como o impacto da terapêutica incluindo tratamento NIR.
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Disclosures
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Acknowledgments
Os autores gostariam de agradecer Dr. Paul Witting e Ms. Genevieve Fong por sua assistência com extração de mRNA e PCR, eo Garnett Passe e Rodney Williams Memorial Foundation para o apoio.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Quantum WARP 10 | Quantum Devices | 2070N030-A | |
| Screw top microtubules | Quality Scientific Plastics | 520-GRD-Q | |
| Ketamine | Parnell, Alexandria Australia | ||
| Standard pattern scissors | FST | 14001-12 | |
| Carbon steel surgical blades #22 | Livingstone | SBLDCL 22 | |
| Friedman-Pearson rongeurs | FST | 16221-14 | |
| Stereo microscope | Leica Microsystems | A60S | |
| Dumont #5 SF forceps | FST | 11252-00 | |
| Isolate II RNA Micro Kit | Bioline | BIO-52075 |
References
- Agrawal, Y., Carey, J. P., Della Santina,, C, C., Schubert, M. C., Minor, L. B. Disorders of balance and vestibular function in US adults: data from the National Health and Nutrition Examination Survey, 2001-2004. Archives of internal medicine. 169, 938-944 (2009).
- Bessho, K., et al. Effect of subthreshold infrared laser treatment for drusen regression on macular autofluorescence in patients with age-related macular degeneration. Retina. 25, 981-988 (2005).
- Olk, R. J., et al. Therapeutic benefits of infrared (810-nm) diode laser macular grid photocoagulation in prophylactic treatment of nonexudative age-related macular degeneration: two-year results of a randomized pilot study. Ophthalmology. 106, 2082-2090 (1999).
- Rodanant, N., et al. Predictors of drusen reduction after subthreshold infrared (810 nm) diode laser macular grid photocoagulation for nonexudative age-related macular degeneration. American journal of ophthalmology. 134, 577-585 (2002).
- De Taboada, L., et al. Transcranial laser therapy attenuates amyloid-beta peptide neuropathology in amyloid-beta protein precursor transgenic mice. Journal of Alzheimer's disease : JAD. 23, 521-535 (2011).
- Grillo, S. L., Duggett, N. A., Ennaceur, A., Chazot, P. L. Non-invasive infra-red therapy (1072 nm) reduces beta-amyloid protein levels in the brain of an Alzheimer's disease mouse model. TASTPM. Journal of photochemistry and photobiology. B, Biology. 123, 13-22 (2013).
- Purushothuman, S., Johnstone, D. M., Nandasena, C., Mitrofanis, J., Stone, J. Photobiomodulation with near infrared light mitigates Alzheimer's disease-related pathology in cerebral cortex - evidence from two transgenic mouse models. Alzheimer's researc., & therapy. 6, 2 (2014).
- Sommer, A. P., et al. 670 nm laser light and EGCG complementarily reduce amyloid-beta aggregates in human neuroblastoma cells: basis for treatment of Alzheimer's disease. Photomedicine and laser surgery. 30, 54-60 (2012).
- Moro, C., et al. Photobiomodulation preserves behaviour and midbrain dopaminergic cells from MPTP toxicity: evidence from two mouse strains. BMC neuroscience. 14, 40 (2013).
- Peoples, C., et al. Photobiomodulation enhances nigral dopaminergic cell survival in a chronic MPTP mouse model of Parkinson's disease. Parkinsonis., & related. 18, 469-476 (2012).
- Shaw, V. E., et al. Neuroprotection of midbrain dopaminergic cells in MPTP-treated mice after near-infrared light treatment. The Journal of comparative neurology. 518, 25-40 (2010).
- Ying, R., Liang, H. L., Whelan, H. T., Eells, J. T., Wong-Riley, M. T. Pretreatment with near-infrared light via light-emitting diode provides added benefit against rotenone- and MPP+-induced neurotoxicity. Brain research. 1243, 167-173 (2008).
- Rajguru, S. M., et al. Infrared photostimulation of the crista ampullaris. The Journal of physiology. 589, 1283-1294 (2011).
- Chung, H., et al. The nuts and bolts of low-level laser (light) therapy. Annals of biomedical engineering. 40, 516-533 (2012).
- Desmet, K. D., et al. Clinical and experimental applications of NIR-LED photobiomodulation. Photomedicine and laser surgery. 24, 121-128 (2006).
- Huang, Y. Y., Chen, A. C., Carroll, J. D., Hamblin, M. R. Biphasic dose response in low level light therapy. Dose-response : a publication of International Hormesis Society. 7, 358-383 (2009).
- Rojas, J. C., Gonzalez-Lima, F. Low-level light therapy of the eye and brain. Eye and brain. 3, 49-67 (2011).
- Vranceanu, F., et al. Striated organelle, a cytoskeletal structure positioned to modulate hair-cell transduction. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 4473-4478 (2012).
- Johnson, K. R., et al. Separate and combined effects of Sod1 and Cdh23 mutations on age-related hearing loss and cochlear pathology in C57BL/6J mice. Hearing research. 268, 85-92 (2010).
- Tung, V. W., Di Marco, S., Lim, R., Brichta, A. M., Camp, A. J. An isolated semi-intact preparation of the mouse vestibular sensory epithelium for electrophysiology and high-resolution two-photon microscopy. Journal of visualized experiments : JoVE. , e50471 (2013).
- Kirby, J., Menzies, F. M., Cookson, M. R., Bushby, K., Shaw, P. J. Differential gene expression in a cell culture model of SOD1-related familial motor neurone disease. Human molecular genetics. 11, 2061-2075 (2002).
- Parry, S. N., Ellis, N., Li, Z., Maitz, P., Witting, P. K. Myoglobin induces oxidative stress and decreases endocytosis and monolayer permissiveness in cultured kidney epithelial cells without affecting viability. Kidney and Blood Pressure Research. 31, 16-28 (2008).
- Saee-Rad, S., et al. Analysis of superoxide dismutase 1, dual-specificity phosphatase 1, and transforming growth factor, beta 1 genes expression in keratoconic and non-keratoconic corneas. Molecular vision. 19, 2501-2507 (2013).
- Albert, E. S., et al. TRPV4 channels mediate the infrared laser-evoked response in sensory neurons. Journal of neurophysiology. 107, 3227-3234 (2012).
- Moro, C., et al. Photobiomodulation inside the brain: a novel method of applying near-infrared light intracranially and its impact on dopaminergic cell survival in MPTP-treated mice. Journal of neuroscience. 120, 670-683 (2014).
- Moreno, L. E., et al. Infrared neural stimulation: beam path in the guinea pig cochlea. Hearing research. 282, 289-302 (2011).
- Curthoys, I. S. A red thread as a guide in the vestibular labyrinth. The Journal of physiology. 589, 1241-1241 (2011).
- Chakrabarti, S., et al. Mitochondrial Dysfunction during Brain Aging: Role of Oxidative Stress and Modulation by Antioxidant Supplementation. Aging and disease. 2, 242-256 (2011).
- Petrosillo, G., De Benedictis, V., Ruggiero, F. M., Paradies, G. Decline in cytochrome c oxidase activity in rat-brain mitochondria with aging. Role of peroxidized cardiolipin and beneficial effect of melatonin. Journal of bioenergetics and biomembranes. 45, 431-440 (2013).
- Zhu, H., Sun, A., Zou, Y., Ge, J. Inducible metabolic adaptation promotes mesenchymal stem cell therapy for ischemia: a hypoxia-induced and glycogen-based energy prestorage strategy. Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. 34, 870-876 (2014).
