Summary
Mitokondriell dysfunktion är ett kännetecken för cellulärt åldrande. Denna uppsats använder icke-invasiv nära infraröd (NIR) behandling för att förbättra mitokondriefunktion i den åldrande musen vestibulära sensoriska epitel.
Abstract
Strategier för att dämpa nedgången i balans funktion med stigande ålder är övervägande fokuserade på fysiska behandlingar inklusive balans uppgifter och motion. Men dessa metoder inte ta itu med de bakomliggande orsakerna till balans nedgång. Använda möss, var effekten av nära infrarött ljus (NIR) på metabolismen av celler i det vestibulära sensoriska epitelet bedömas. Data som samlats in visar att denna enkla och säkra ingripande kan skydda dessa utsatta celler från de skadliga effekterna av naturligt åldrande. mRNA extraherades från den isolerade perifera vestibulära sensoriska epitelet (Crista ampullaris och utrikulära makula) och därefter transkriberas till ett cDNA-bibliotek. Detta bibliotek sonderades sedan för uttryck av allestädes närvarande antioxidant (SOD-1). Antioxidant genexpression användes sedan för att kvantifiera cellulär metabolism. Använda transkraniell leverans av NIR i unga (4 veckor) och äldre (8-9 månader) möss, och en kort behandlingsregim (90 sek / dag för 5 days) tyder detta arbete Nir ensam kan vara tillräcklig för att förbättra mitokondriell funktion i det vestibulära sensoriska epitelet. Eftersom det för närvarande inga tillgängliga, prisvärda, icke-invasiva metoder för terapi för att förbättra vestibulära hår cellfunktion, ger tillämpningen av externa NIR-strålning en potentiell strategi för att motverka effekterna av åldrande på cellulär metabolism inthe vestibulära sensoriska epitel.
Introduction
Degressiv prestanda och efterföljande faller är vanliga, och tyvärr ofta definierar funktioner i naturliga åldrandet 1. Effekterna av denna nedgång kan vara både fysiskt och socialt, och minskar livskvaliteten för äldre människor. Som svar har fysiska behandlingar och rehabilitering varit i fokus för forskning om fallen men har inte förknippats med en jämn reduktion av förekomsten av upprepade fall. Samtidigt, arbete undersöker förändringar i perifera eller centrala vestibulära systemet (systemet som ansvarar för att upprätthålla balansen) är knapp, och potentiella terapeutiska strategier inriktade dessa system och de bakomliggande orsakerna till obalansen begränsad.
Senaste arbete på åldersassocierade neurodegenerativa sjukdomar inklusive åldersrelaterad makuladegeneration 2-4, Alzheimers sjukdom modellerna 5-8, och Parkinsons sjukdom 9-12 har visat nervskyddande effekter av simple icke-invasiv applikation av nära infraröd (NIR) ljus. Vidare, i vestibulära systemet, NIR har använts för att öka aktiviteten av vestibulära primära afferenta neuron in vitro 13. Medan mekanismen för NIR ljus inte väl förstådd, har de flesta studier med NIR föreslog att Nir stimulerar mitokondrier komplex IV (cytokrom c oxidas) 14-17 för att underlätta cellulär metabolism. I vestibulära sensoriska epitelet den subkutikulär tallrik typ I hårceller är tät i mitokondrierna 18 och som sådan kan representera ett verkningsställe för terapeutisk NIR behandling.
Här, en kort, icke-invasiv behandling regim transcranially tillämpas Nir som kan användas för att mäta cellulär metabolism (och underförstått, mitokondriefunktion) i musen vestibulära sensoriska epitel beskrivs. Också diskuteras är ett preparat i vestibulära sensoriska epitel och det visas att Nir ökar uttrycket av en ubiquitooss antioxidant (superoxiddismutas 1) i sensoriska epitel - tidigare visat sig vara viktiga för cochlea hår cellöverlevnad 19.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Etik Uttalande: Alla förfaranden som beskrivs nedan godkändes av University of Sydney Animal etikkommitté.
1. Djur
OBS: 1 och 8-9 månader gammal möss (C57 / BL6) erhölls från Animal Resources Centre (Perth, Australien). Möss inrymt i Bosch Gnagare Facility vid University of Sydney.
- Hus-möss i standard mus burar på en 12/12 timmar ljus / mörker-cykel med tillgång till föda och vatten ad libitum.
- Divide möss i varje åldersgrupp i nära infraröd (NIR) behandlad, eller skenbehandlade (kontroll) grupper för jämförelse.
2. Near Infrared (NIR) Bestrålning och Sham Behandling
- Raka pälsen på huvudet och halsregionen av musen med en elektrisk rakapparat så nära som möjligt för att förhindra snabb återväxt av hår innan avslutad behandling regimen. För att upprätthålla patogenen fria status mössen, använd 70% etanolatt rengöra instrumenten mellan rakning djur och F10 veterinär desinfektionsmedel mellan djur från olika burar. Gör detta 2-3 dagar före början av behandlingen, så djuren inte över hanteras.
- Hindra musen genom att hålla den proximala änden av svansen och låt det koppla i handflatan med en hand eller bänk för att minimera stressen som kan leda till felaktiga resultat.
- Håll NIR (670 nm) LED (lysdiod) enhet 1 - 2 cm från den exponerade (Rakad) området och slår på enheten för 90 sek (Figur 1A).
OBS: temperaturändringen som en följd av 90 sek exponering mättes såsom <0,2 ° C i 100 ml vatten. - Upprepa steg 2,2-2,3 för simulerad behandling grupp av djur men lämna apparaten avstängd (Figur 1B).
- Upprepa steg 2,2-2,3 för NIR-blockerad behandlingsgrupp av djur men täcker anordningen med aluminiumfolie.
- Upprepa steg 2,2-2,5 dagligen vid approximate 24 h intervall för 5 på varandra följande dagar.
- Utdrag vestibulära sensoriska epitelet (3 crista och 1 utrikulära makula) från båda öronen på den femte dagen efter behandling (se avsnitt 3 nedan).
3. Vävnads Extraktion 20
- Bered 300 ml av en glycerolbaserad artificiell cerebrospinalvätska (ACSF) som består av (i mM): 26 NaHCO 3, 11 glukos, 250 glycerol, 2,5 KCl, 1,2 NaH 2 PO 4, 1,2 MgCl2 och 2,5 CaCl2. Före tillsättning av CaCl2, gas lösningen med karbogen (95% O2 och 5% CO2) för att upprätta ett pH på 7,4 och undvika kalcium nederbörd (grumlighet). Kyl lösningen i ett -80 ° C frys under 45 minuter så att en is uppslamning bildas.
- Förbered RNA isolering lyseringsbuffert i märkta skruvtopp mikrorör (stoppar popping av lock när röret tryckändringar mellan frysning och upptining i flytande kväve) enligtanvisningar tillverkaren eller vanliga lab praxis. Ha flytande kväve klar på en aluminium Dewar kolv.
OBS: Använd skyddskläder och eyeware vid hantering av flytande kväve. Se till att flytande kväve används i ett väl ventilerat rum som volymen av dess gasform är ungefär 700 gånger högre än för sin flytande form och kan orsaka kvävning. - Djupt söva möss med ketamin (400 mg / kg) via en intra-peritoneal injektion. Låt hind-lem reflex att helt avta som indikation på att möss är helt bedövad.
- Halshugga möss med vass sax av rostfritt stål och gör ett snitt längs den sagittala hud av skallen med ett rakblad (avrundat # 22). Vid denna punkt, och i hela steg 3,5-3,9, hålla skalle, hjärna, och underliggande vestibulära apparaten så cool som möjligt genom regelbunden applicering av iskall ACSF över vävnaden.
- Använda den spetsiga arm standardmönster sax göra en small snitt i skallen på Lambda och skär längs sagittal sutur.
- Skjut försiktigt en arm av ett grunt rongeurs nedanför den parietala benet hålla bladet så nära som möjligt till den undre ytan på benet utan att dra hjärnan. Säkert och dra bort de parietala benet i sidled och pannben posteriort tills hjärnan utsätts för.
- Använd en liten spatel rostfri och lyft hjärnan ifrån den främre och mellersta skall fossa att exponera vestibulocochlear nerven (CN VIII). Transekt nerven för att förhindra onödig spänning på de primära afferenta axoner som direkt innerverar vestibulära hårcellerna.
- Ta bort hjärnan i sin helhet efter tran av CN VIII.
- Observera Benlabyrinten innehåller snäckan och de perifera vestibulära organ i mitten skallgropen. Gör två små snitt bredvid varje Benlabyrinten och skära hela strukturen genom att hålla den främre halvcirkelformade kanalen och drar senarebundsförvant.
- Omedelbart fördjupa utskurna labyrinter i en dissekera skål innehållande iskall ACSF lösning (som beskrivs i steg 3.1) under ständig perfusion med karbogen.
- Enligt ett stereomikroskop, håll ner labyrint av snäckan och fäst den till botten av skålen med pincett.
- Använd raka fin pincett för att skrapa en liten öppning i benet ovanför den främre halvcirkelformade kanalen (SSC) ampulla.
- Försiktigt förstora denna öppning genom att nå omedelbart under benet och snärta utåt bort från ampulla. Var försiktig här för att inte pressa pincett i öppningen och skada den ömtåliga membranös labyrint nedan. Fortsätt på detta sätt tills utriculus, främre och sido ampuller är alla utsatta. Om möjligt ta bort den bakre ampulla också.
- Med fin pincett, försiktigt lyfta utriculus och ampuller ifrån Benlabyrinten tills de är helt fristående. Om möjligt, hålla demsamman med deras båggångarna att undvika skador på sensoriska epitel. I vissa fall kan den proximala delen av den halvcirkulära membranös kanalen måste skäras med iris sax för att frigöra ampuller från benet.
- Säkert förstå de vestibulära organ mellan spetsen av pincett och plats i lyseringsbuffert beredd tidigare i steg 3.2. Snurra försiktigt tången runt i bufferten för att säkerställa vestibulära organ har lossnat från tången. Kontrollera detta är fallet genom att pincetten under stereomikroskop.
- Skruva på mikrotubuli locket och frysa provet i flytande kväve omedelbart.
4. RNA-extraktion och RT-PCR
- Följ standardmetoder för budbärar-RNA (mRNA) extraktion i enlighet med tillverkarens instruktioner eller föredragna lab protokoll.
OBS: En kommersiellt kit som utnyttjade carrier RNA för att isolera små utbyten av mRNA användes i dennaprotokoll. Lägre elueringsvolymer kan användas för att öka slutkoncentrationer av mRNA.
OBS: Negativ "ingen enzym" kontroller (NEC) och "inget DNA mall" kontroller (NTCs) måste också kompletteras för att säkerställa giltigheten av observerade effekter. - Tillämpa standardmetoder för omvänd transkription av mRNA till komplementärt DNA (cDNA) och amplifiering av målgener 21-23.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
För att jämföra effekten av att NIR behandling hos unga (4 veckor) och äldre (8-9 månader) möss vi mätte uttrycket av antioxidant superoxiddismutas 1 (SOD-1) hos unga (n = 16) och äldre (n = 20) möss som var NIR-behandlade, skenbehandlade eller NIR-blockerad. Figur 2 visar en signifikant ökning i β-aktin normaliserad SOD-1 expression av mer än 2-faldigt i unga NIR-behandlade djur jämfört med unga skenbehandlade djur (p <0,01) och unga NIR-blockerade djur (p <0,01). Äldre NIR-behandlade djur uppvisade också mer än en 2-faldigt uppreglering av SOD-1 i jämförelse med äldre NIR-blockerade djur (p <0,05).
Figur 1. Nir Treatment. (A) Nir LED enhet hålls 1-2 cm ovanför rakade området på huvudet av musen för 90 sek per dag under 5 dagar i följd i bestrålning treated möss. (B) Nir LED enhet hålls ovanför skenbehandlade möss på samma sätt men med enheten avstängd under hela 90 sekunder. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. Analys av SOD-1 genuttryck efter 5 dagar i följd av Nir behandling (90 sek / dag). Det vestibulära sensoriska epitel skördades på den femte dagen och specifik antioxidant gen sonde för att använda RT-PCR. SOD-1-genen normaliserades till β-aktin baslinjen och densitometri fördes med ImageJ v1.48. Betydande uppreglering (p <0,01) av SOD-1 expression observerades i unga NIR-behandlade djur i jämförelse med både unga sham-behandlade och unga NIR-blockerade kontroller (fyra veckor). Betydande ökning (p &# 60; 0,05) i SOD-1 uttryck observerades också i äldre NIR-behandlade djur jämfört med äldre NIR-blockerade djur (8-9 månader). Samtliga grafer visar faldig förändring av SOD-1 genuttryck jämfört med unga bluff behandlade kontrollen. Data representerar medelvärde ± SD. Alla data analyserades med hjälp av envägs ANOVA och statistisk signifikans bestäms med hjälp Tukeys multipeljämförelse post-hoc test. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De representativa resultat som beskrivs här visar att korta transkraniell leverans av NIR ljus (90 sek / dag i 5 dagar) är tillräcklig för att höja nivåerna av antioxidant uttryck i äldre möss jämfört med skenbehandlade möss. Medan avges värmen kan utgöra en källa till mitokondrie och / eller neuronal aktivering, som rapporterats för råtta vestibulära afferenter 24 - vår mätning av värme som avges av NIR LED-enheten var <0,2 ° C under 90 sekunder, och som sådan är osannolikt att orsaka förändringar som beskrivs här. Vidare, till skillnad från rapporten beton ovan NIR behandling som används här var inte appliceras direkt på sensoriska epitel eller vestibulära afferenta neuroner, och som sådan är också osannolikt att påverka termo känsliga kanaler (t.ex. TRPV4). Slutligen har tidigare arbete med hjälp av samma NIR enheten i andra områden i hjärnan föreslog att värmen inte var källan till observerade skillnader 7,9.
Medan dessa Results visar en uppreglering av cellulära svar till åldersassocierade oxidativ stress på genetisk nivå, är det inte klart om dessa förändringar ytterligare uttrycks på proteinnivå, eller viktigare, oavsett om de avspeglas i den övergripande balansen prestanda möss. Dessutom är den uppreglering visas för en enskild ubiquitous antioxidant. Det är troligt att multipla markörer av cellulär metabolism påverkas av denna behandling regim. Vidare, eftersom mRNA extraherades från vestibulära apparaten i sin helhet (dvs. hårceller, stödjande celler, vestibulära afferenter och epitel alla närvarande) är det inte möjligt att relatera observerade förändringar i cellulär metabolism som svar på NIR ljusbehandling till en specifik vestibulära hår cell eller primära afferenta typ. Viktigt dock att använda den beskrivna beredningen tillräckligt mRNA kan utvinnas ur en enda mus för att möjliggöra framtida korrelat studier mellan cellulär metabolism och beteendeanalys av balans performance.
Den högintensiva LED enhet som används här avger ungefär 5 J / cm2 per 90 sek behandling- totalt 25 J energi under 5 dagar. Medan fördelen med att använda långa våglängd ljus (inklusive NIR) är penetrans, kan man inte utgå från att hela 25 J NIR ljus levereras till vestibulära sensoriska epitelet. I mus, måste ljus tränga in minst en mm genom lager av mjukvävnad och ben som skyddar den perifera vestibulära apparaten och hjärnan. Hos människor detta sträcker sig till centimeter. Således penetrans av ljus representerar en begränsning av den beskrivna tekniken i fråga om att översättningen av Nir ljus behandlingsstrategier i klinisk miljö. Senaste arbete men har anställt optiska fibrer för att leverera NIR ljus till djupa hjärnstrukturer inklusive de basala ganglierna 25, och sinnesorgan inklusive cochlea 26. Baserat på detta och placeringen av den perifera vestibulära apparaten intill dencochlea (och klinisk tillgång till den via mastoidutskottet), är det möjligt att påstå att i det mänskliga, direkt stimulering av vestibulära sensoriska epitelet kan uppnås genom en liten optisk fiber utlöses av en extern enhet - besläktad med en cochleaimplantat 27 .
Flera villkor kan ändras i det protokoll som beskrivs ovan för att anpassa sig till det intresse för utredaren. Först, den våglängd som används här (670 nm), kan utvidgas till att omfatta längre våglängder i det infraröda området som tidigare rapporterats i andra sensoriska system och djurmodeller. För det andra, kan behandlingsregimer också varieras beroende på om kortsiktiga eller långsiktiga svaret är i fråga. Här en mycket kort behandlingsregim utnyttjades, men detta skulle kunna utsträckas till längre löptider, eller ännu kortare varaktighet för att mäta dynamiken i Nir inducerade förändringar.
Den största utmaningen med detta protokoll är att upprätthålla lönsamheten i vävnadenunder vävnads extraktion. Med tanke på den tid som krävs för att ta bort den beniga labyrinten och skära ut membranös labyrinten från den, är det viktigt att minska metabolisk nedbrytning. Detta uppnås genom att bada vävnaden i iskallt ACSF under hela förfarandet och perfusion denna lösning kontinuerligt med karbogen. Dessutom, vid slutet av dissektion förfarandet, ytterligare vävnadsnedbrytning kan stoppas med hjälp av flytande kväve till flash frysa den extraherade vävnaden. När det är lämpligt, kan den frysta vävnaden tinas och mRNA extraherade för vidare genanalys.
Även de metoder som beskrivs här inte beskriva den fullständiga effekten av Nir ljusbehandling på cellulär metabolism i vestibulära sensoriska epitel, kan ytterligare tillämpning av denna strategi ändras så att även andra åldersassocierade markörer för mitokondriell funktion 28,29 och / eller cellulär metabolisk förolämpningar såsom hypoxi 30. Ytterst, förmågan att beskriva vestibular cellulära metaboliska profilen hos en enskild mus kommer att tillåta undersökning av sambanden mellan balans prestanda och subcellulära processer under åldrandet, och effekterna av läkemedel inklusive NIR behandling.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar att de inte har några konkurrerande ekonomiska intressen.
Acknowledgments
Författarna vill erkänna Dr Paul Witting och Ms Genevieve Fong för deras hjälp med mRNA extraktion och PCR, och Garnett Passe och Rodney Williams Minnesfond för support.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Quantum WARP 10 | Quantum Devices | 2070N030-A | |
| Screw top microtubules | Quality Scientific Plastics | 520-GRD-Q | |
| Ketamine | Parnell, Alexandria Australia | ||
| Standard pattern scissors | FST | 14001-12 | |
| Carbon steel surgical blades #22 | Livingstone | SBLDCL 22 | |
| Friedman-Pearson rongeurs | FST | 16221-14 | |
| Stereo microscope | Leica Microsystems | A60S | |
| Dumont #5 SF forceps | FST | 11252-00 | |
| Isolate II RNA Micro Kit | Bioline | BIO-52075 |
References
- Agrawal, Y., Carey, J. P., Della Santina,, C, C., Schubert, M. C., Minor, L. B. Disorders of balance and vestibular function in US adults: data from the National Health and Nutrition Examination Survey, 2001-2004. Archives of internal medicine. 169, 938-944 (2009).
- Bessho, K., et al. Effect of subthreshold infrared laser treatment for drusen regression on macular autofluorescence in patients with age-related macular degeneration. Retina. 25, 981-988 (2005).
- Olk, R. J., et al. Therapeutic benefits of infrared (810-nm) diode laser macular grid photocoagulation in prophylactic treatment of nonexudative age-related macular degeneration: two-year results of a randomized pilot study. Ophthalmology. 106, 2082-2090 (1999).
- Rodanant, N., et al. Predictors of drusen reduction after subthreshold infrared (810 nm) diode laser macular grid photocoagulation for nonexudative age-related macular degeneration. American journal of ophthalmology. 134, 577-585 (2002).
- De Taboada, L., et al. Transcranial laser therapy attenuates amyloid-beta peptide neuropathology in amyloid-beta protein precursor transgenic mice. Journal of Alzheimer's disease : JAD. 23, 521-535 (2011).
- Grillo, S. L., Duggett, N. A., Ennaceur, A., Chazot, P. L. Non-invasive infra-red therapy (1072 nm) reduces beta-amyloid protein levels in the brain of an Alzheimer's disease mouse model. TASTPM. Journal of photochemistry and photobiology. B, Biology. 123, 13-22 (2013).
- Purushothuman, S., Johnstone, D. M., Nandasena, C., Mitrofanis, J., Stone, J. Photobiomodulation with near infrared light mitigates Alzheimer's disease-related pathology in cerebral cortex - evidence from two transgenic mouse models. Alzheimer's researc., & therapy. 6, 2 (2014).
- Sommer, A. P., et al. 670 nm laser light and EGCG complementarily reduce amyloid-beta aggregates in human neuroblastoma cells: basis for treatment of Alzheimer's disease. Photomedicine and laser surgery. 30, 54-60 (2012).
- Moro, C., et al. Photobiomodulation preserves behaviour and midbrain dopaminergic cells from MPTP toxicity: evidence from two mouse strains. BMC neuroscience. 14, 40 (2013).
- Peoples, C., et al. Photobiomodulation enhances nigral dopaminergic cell survival in a chronic MPTP mouse model of Parkinson's disease. Parkinsonis., & related. 18, 469-476 (2012).
- Shaw, V. E., et al. Neuroprotection of midbrain dopaminergic cells in MPTP-treated mice after near-infrared light treatment. The Journal of comparative neurology. 518, 25-40 (2010).
- Ying, R., Liang, H. L., Whelan, H. T., Eells, J. T., Wong-Riley, M. T. Pretreatment with near-infrared light via light-emitting diode provides added benefit against rotenone- and MPP+-induced neurotoxicity. Brain research. 1243, 167-173 (2008).
- Rajguru, S. M., et al. Infrared photostimulation of the crista ampullaris. The Journal of physiology. 589, 1283-1294 (2011).
- Chung, H., et al. The nuts and bolts of low-level laser (light) therapy. Annals of biomedical engineering. 40, 516-533 (2012).
- Desmet, K. D., et al. Clinical and experimental applications of NIR-LED photobiomodulation. Photomedicine and laser surgery. 24, 121-128 (2006).
- Huang, Y. Y., Chen, A. C., Carroll, J. D., Hamblin, M. R. Biphasic dose response in low level light therapy. Dose-response : a publication of International Hormesis Society. 7, 358-383 (2009).
- Rojas, J. C., Gonzalez-Lima, F. Low-level light therapy of the eye and brain. Eye and brain. 3, 49-67 (2011).
- Vranceanu, F., et al. Striated organelle, a cytoskeletal structure positioned to modulate hair-cell transduction. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 4473-4478 (2012).
- Johnson, K. R., et al. Separate and combined effects of Sod1 and Cdh23 mutations on age-related hearing loss and cochlear pathology in C57BL/6J mice. Hearing research. 268, 85-92 (2010).
- Tung, V. W., Di Marco, S., Lim, R., Brichta, A. M., Camp, A. J. An isolated semi-intact preparation of the mouse vestibular sensory epithelium for electrophysiology and high-resolution two-photon microscopy. Journal of visualized experiments : JoVE. , e50471 (2013).
- Kirby, J., Menzies, F. M., Cookson, M. R., Bushby, K., Shaw, P. J. Differential gene expression in a cell culture model of SOD1-related familial motor neurone disease. Human molecular genetics. 11, 2061-2075 (2002).
- Parry, S. N., Ellis, N., Li, Z., Maitz, P., Witting, P. K. Myoglobin induces oxidative stress and decreases endocytosis and monolayer permissiveness in cultured kidney epithelial cells without affecting viability. Kidney and Blood Pressure Research. 31, 16-28 (2008).
- Saee-Rad, S., et al. Analysis of superoxide dismutase 1, dual-specificity phosphatase 1, and transforming growth factor, beta 1 genes expression in keratoconic and non-keratoconic corneas. Molecular vision. 19, 2501-2507 (2013).
- Albert, E. S., et al. TRPV4 channels mediate the infrared laser-evoked response in sensory neurons. Journal of neurophysiology. 107, 3227-3234 (2012).
- Moro, C., et al. Photobiomodulation inside the brain: a novel method of applying near-infrared light intracranially and its impact on dopaminergic cell survival in MPTP-treated mice. Journal of neuroscience. 120, 670-683 (2014).
- Moreno, L. E., et al. Infrared neural stimulation: beam path in the guinea pig cochlea. Hearing research. 282, 289-302 (2011).
- Curthoys, I. S. A red thread as a guide in the vestibular labyrinth. The Journal of physiology. 589, 1241-1241 (2011).
- Chakrabarti, S., et al. Mitochondrial Dysfunction during Brain Aging: Role of Oxidative Stress and Modulation by Antioxidant Supplementation. Aging and disease. 2, 242-256 (2011).
- Petrosillo, G., De Benedictis, V., Ruggiero, F. M., Paradies, G. Decline in cytochrome c oxidase activity in rat-brain mitochondria with aging. Role of peroxidized cardiolipin and beneficial effect of melatonin. Journal of bioenergetics and biomembranes. 45, 431-440 (2013).
- Zhu, H., Sun, A., Zou, Y., Ge, J. Inducible metabolic adaptation promotes mesenchymal stem cell therapy for ischemia: a hypoxia-induced and glycogen-based energy prestorage strategy. Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. 34, 870-876 (2014).
