Summary
Avec cette étude, nous présentons un modèle de stress standardisé pour la rétine bovine superfusé isolée pour l'avenir essais thérapeutiques précliniques. L'effet de l'hypoxie soit (N 2 pur) ou le stress de glutamate (250 uM de glutamate) sur la fonction rétinienne représenté par a et b amplitudes d'onde a été évaluée.
Abstract
Neuroprotection a été un fort champ d'investigation dans la recherche ophtalmologique dans les dernières décennies et affecte maladies comme le glaucome, une occlusion vasculaire rétinienne, décollement de la rétine, et la rétinopathie diabétique. Ce était l'objet de cette étude d'introduire un modèle de stress normalisé pour les futurs essais thérapeutiques précliniques.
Rétines bovins ont été préparés et perfusés avec une solution standard d'oxygène saturé, et l'ERG a été enregistré. Après l'enregistrement B-ondes stables, l'hypoxie (N 2) pur ou un stress du glutamate (250 um de glutamate) a été exercée pendant 45 min. Pour étudier les effets sur la fonction des photorécepteurs seul, 1 mM aspartate a été ajouté pour obtenir un-ondes. ERG recouvrement a été suivie pendant 75 min.
Pour une hypoxie, une diminution de l'amplitude d'une onde de 87,0% a été notée (p <0,01) après un temps d'exposition de 45 min (diminution de 36,5% après la fin du lavage p = 0,03). En outre, un dim initialefacilité dans amplitudes b-ondes de 87,23% a été enregistrée, qui a atteint la signification statistique (p <0,01, baisse de 25,5% à la fin de l'affouillement, p = 0,03).
Pour 250 um glutamate, une première réduction de l'amplitude d'onde un (p> 0,05), suivie par une réduction de 1,9% (p> 0,05) de 7,8%. Une réduction de 83,7% des amplitudes d'onde (b p <0,01) a été notée; après un lavage de 75 min, la réduction a été de 2,3% (p = 0,62). Dans cette étude, un modèle de stress standardisé est présenté qui peut être utile pour identifier les effets neuroprotecteurs possibles à l'avenir.
Introduction
Neuroprotection a été un fort champ d'investigation dans la recherche ophtalmologique dans les dernières décennies. La rétine est un réseau neuronal très sensible qui dépend de manière significative sur l'oxygénation et est fortement influencé par le métabolisme de ses cellules environnantes. Pathologies oculaires majeurs liés aux dommages de cellules nerveuses rétiniennes sont occlusions vasculaires, le glaucome, et décollement de la rétine.
Occlusion de l'artère rétinienne, comme un exemple pour occlusion vasculaire rétinienne, conduit à une perte soudaine de la vision due à l'hypoxie de la rétine interne 1. Elle est souvent associée à des pathologies vasculaires générales 2 et conduit à une perte visuelle persistante 1, avec seulement 8% des patients qui se remettent de façon significative une acuité visuelle. Bien que la fibrinolyse artérielle a été suggéré comme une option de traitement, le bénéfice n'a pas pu être montré dans un essai clinique randomisé 3.
Le glaucome et décollement de la rétineont tous deux une augmentation de la concentration de glutamate 6.4. Glutamate dans des conditions physiologiques est rencontré comme un transmetteur excitateur dans tout le système nerveux central et le 7,8 rétine interne. Niveaux élevés de glutamate ont été trouvés non seulement dans le glaucome et décollement de la rétine 5,6 mais aussi dans la rétinopathie diabétique proliférante neuf. Une augmentation de glutamate conduit éventuellement à l'excitotoxicité et, par conséquent, des lésions des cellules nerveuses 10. Dans la plupart des cas de décollement de la rétine et dans certains cas de la chirurgie de la rétinopathie diabétique proliférante sur la rétine (vitrectomie pars plana) sont nécessaires. Pendant pars plana vitrectomie manipulation mécanique, la lumière vive de la fibre optique ou contrainte de cisaillement exercée par des débits élevés de solutions d'irrigation pendant de longues opérations exercent un stress supplémentaire sur la rétine 11,12.
Toutes les maladies mentionnées ont en commun que la pathologie est localisée à la rétineun seul et pose la communauté ophtalmologique au défi de trouver des moyens pour protéger la rétine comme un système neurosensoriel.
L'électrorétinogramme (ERG) est la méthode standard pour l'évaluation in vivo la fonction des photorécepteurs (a-ondes) et la fonction de la rétine interne (b-ondes). L'ERG est mesurée par Silver-électrodes introduites dans la cornée et les yeux sont stimulées par une augmentation du niveau de la lumière pour détecter des défauts dans des tiges ou des cônes ou dans la rétine interne. Différents défauts de la rétine peuvent être détectées par des changements dans l'amplitude (la force de la réponse) ou la latence (la réponse-à-intervalle de temps-) de l'ERG. Protocole et méthodes de mesure différentes ERG (pattern-ERG, multifocale-ERG ou champ clair ERG) permettent une différenciation plus poussée des défauts. La technique de la rétine isolée a été introduit récemment, ce qui permet d'évaluer les effets sur la rétine sans interférences d'un animal, par exemple de l'étude de13,14 réactions générales.
Ce était le but de cette étude pour évaluer et mettre en place un modèle de stress défini et normalisé pour l'hypoxie et le stress de glutamate sur la rétine isolée superfusées. Ainsi, nous espérons jeter les bases pour de futures études sur les effets neuroprotecteurs de certains agents ou des solutions d'irrigation intraoculaires.
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Protocol
1. Préparation des yeux de bovins
- Obtenir yeux bovins directement après que l'animal est abattu.
- Transporter les yeux protégées "Sickel-solution" un milieu spécial contenant 120 mM de NaCl, 2 mM de KCl, 0,1 mM de MgCl2, 0,15 mM de CaCl2, 1,5 mM de NaH 2 PO 4, 13,5 mM de Na 2 HPO 4 et 5 mM de glucose à RT.
- Effectuer la préparation de la rétine dans des conditions adaptées sombres avec une lumière rouge sombre.
- Retirer la partie antérieure de l'œil. Effectuer une incision ca. équatoriale 4 mm en arrière du limbe. Par la suite retirer cornée, l'iris, le corps ciliaire et la lentille en un seul morceau. Gardez les rétines dans Sickel-solution.
- Desserrer mécaniquement les pièces jointes vitreux à la surface de la rétine et du vitré retirer de la coupe de l'oeil ouvert.
- Ensuite diviser l'œil en quatre quadrants et punch out ronde domaines de ca. 7 mm de diamètre en utilisant un trépan.
- Séparez délicatement la rétineà partir de l'épithélium pigmentaire et la placer sur un dispositif d'enregistrement à l'intérieur d'une boîte à l'abri de la lumière. Le dispositif d'enregistrement est constitué d'un mainteneur plastique à ouverture de maille dans le milieu; placer la rétine sur le maillage, puis fixer avec un anneau en plastique directement sur les électrodes.
NOTE: Le mainteneur plastique a deux canaux pour permettre un flux constant du milieu.
2. Enregistrement du Électrorétinogramme (ERG)
- Afin d'enregistrer l'électrorétinogramme, utiliser deux électrodes argent / chlorure d'argent de chaque côté de la rétine et perfuser la rétine à une vitesse de perfusion constante de ca. 1 ml / min et la température constante de 37 ° C. Utilisez le "Sickel-solution" saturée en oxygène.
- Avant de commencer la mesure, adapter sombre la rétine (la protéger de la lumière pendant toutes les mesures) et utiliser des intervalles de relance de cinq minutes. Utilisez un 1 Hz seul flash au xénon blanc pour la stimulation avec une intensité réglée sur 6,3 mlx à la surface de la rétine. Utilisez calibré filtres de densité neutre et un stimulus lumineux de 10 microsecondes contrôlée par une minuterie afin d'avoir des réponses optimales.
- Pour mesurer et traiter les données, filtrer l'ERG et l'amplifier (100 Hz filtre passe-haut, 50 Hz filtre notch, 100 000 x amplification) en utilisant un amplificateur RPS312RM Herbe. Essayez de filtrer les fréquences perturbatrices possibles qui peuvent perturber le signal. Afin de traiter les données, utiliser une carte d'acquisition analogique-numérique des données sur un ordinateur de bureau (PC compatible).
- Après la période d'adaptation à l'obscurité sous perfusion constante, mesurer les amplitudes du signal électrique jusqu'à ce amplitudes b-ondes stables sont enregistrées.
NOTE: Les amplitudes sont considérés comme stable si cinq mesures simples atteignent une valeur moyenne et écartent moins de 10%. Un bon exemple de mesures individuelles est donnée à la figure 1. - Pour commencer le test, remplacer l'oxygène pur soit par de l'azote pur (nombre d'expériences simples, n = 5) pour tester l'hypoxieou glutamate 250 um (n = 5).
- Notez les réponses électriques toutes les 5 min pendant 45 min.
- Après la période d'essai, perfuser les rétines avec un milieu standard saturé avec l'oxygène pendant 75 minutes et regarder les changements de l'amplitude de l'onde b. Ce est la phase lavage. Mesurer l'amplitude de l'onde b de l'auge de l'un vague à l'apogée de la b-ondes.
- Pour étudier l'effet de l'hypoxie ou glutamate sur le potentiel de photorécepteur dans des conditions scotopiques, supprimer l'onde b en ajoutant 1 mM à la solution nutritive.
- Après l'enregistrement d'un potentiel de photorécepteur stable pendant 30 min, effectuer la procédure comme avant, exposant les rétines 45 min aux différentes solutions d'irrigation avec 1 mM aspartate. Utilisez la même période de lavage (étape 2.8) tel que mentionné précédemment.
3. Analyse des données
- Afin d'évaluer statistiquement les données, assurer une distribution normale pour toutes les données, par exemple en utilisant le Kolmogorov-Smirnovessai de 15.
- Calculer la réduction des a- et B-ondes amplitudes en pourcentages après la phase d'exposition par rapport à la dernière mesure avant l'exposition. Comparer la réduction de l'Erg-amplitudes après 45 min - à la fin de la période d'exposition - à ERG mesurée avant l'application.
- Comparer l'onde a- et b- à la fin de la phase de lavage à l'amplitude correspondante avant exposition à examiner une récupération possible.
- Pour l'analyse statistique, utilisez le logiciel JMP logiciel statistique ou le logiciel SPSS. Calculer des données dans l'ensemble en tant que moyenne ± écart-type. Estimer la signification par le test statistique approprié.
NOTE: Ces tests peuvent être différents en fonction de la portée expérimentale. Dans ce cadre, utilisez t-test apparié de Student.
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Representative Results
Après 1 heure de la perfusion de la préparation de la rétine avec la solution étalon saturée en oxygène (figure 1A et B) ERG-amplitudes ont montré stabilisation et moins de variations d'amplitudes entre les mesures simples. le pH, la pression osmotique, la température et la pO 2 (sauf pour l'essai de l'hypoxie) ont été maintenues constantes pour tous les tests.
Pour isoler le signal de photorécepteur à partir du signal de la rétine interne, 1 mM d'aspartate a été ajouté à la solution étalon de supprimer l'onde b (figure 1A). Au cours des essais de l'effet d'une hypoxie, une diminution de l'amplitude d'une onde de 87,0% a été notée (p <0,01) après un temps d'exposition de 45 minutes. A la fin du lavage, une diminution de 36,5% a été constaté que ce était statistiquement significative (p = 0,03, figure 2A). En outre, une diminution initiale b des amplitudes d'onde de 87,23% a été enregistrée, qui atteint également une signification statistique (p <0,01). Dans ce cadre une réduction de 25,5%a été noté, que ce était statistiquement significative (p = 0,03, figure 2B).
Après exposition avec 250 um glutamate, une réduction non significative d'une onde amplitudes a été détectée après (p> 0,05) l'intervalle de temps défini 7,8%. Ceci a été suivi par une réduction non significative de 1,9% (p> 0,05, figure 3A). Des mesures uniques sont présentés dans le tableau 1 et 2.
Concernant la b-ondes, baisse de l'amplitude de l'ERG par 83,7% ont été enregistrés qui sont statistiquement significatives (p <0,01, figure 3B). A la fin du lavage, un recouvrement b-onde a été constaté entraînant une réduction non significative de 2,3% après 75 minutes de perfusion avec une solution standard (p = 0,62).
Figure 1: Exemple d'une mesure de l'ERG perfusé isolé rétine bovine (A) L'un d'onde est montré dans.l'ERG de la rétine perfusé isolé bovine. Le b-ondes est supprimée en ajoutant 1 mM aspartate à la solution nutritive. (B) Le b-onde est dominante dans des conditions de lumière scotopiques. Un stimulus 10 ms lumière à une intensité lumineuse de 6,3 mlx est utilisé.
Figure 2: Effets de l'hypoxie après un temps d'exposition de 45 min sur le (A) d'une onde et l'amplitude (B) b-vague de l'ERG. Moyen de série représentatif de drogues (n = 5). La barre horizontale au-dessus de la courbe marque le temps de l'hypoxie. La ligne en pointillé (A) marque l'application de l'aspartate 1 mM de démasquer potentiel de photorécepteur. Les écarts-types pour chaque série d'expériences sont donnés directement avant et après l'application, ainsi que à la fin de l'essai. L'analyse statistique a été effectuée à des points de temps en utilisant la déviation standard (directement avant et après Applications ainsi que à la fin de l'essai): (A) Une diminution dans une onde amplitude de 87,0% a été notée après un temps d'exposition de 45 minutes par rapport au début du procès. À la fin du procès, une diminution significative de 36,5% a été notée. (B) Une diminution significative des amplitudes b-ondes de 87,23% a été enregistrée à la fin de la durée d'exposition. A la fin de l'essai, une réduction significative de 25,5% a été notée.
Figure 3:. Effets de 250 uM glutamate appliqué pendant 45 minutes sur le (A) amplitude a d'onde et de la (B) amplitude b-de vague de l'ERG de la perfusé bovine rétine moyenne isolé de la série représentatif de drogues (n = 5) . La barre horizontale au-dessus de la courbe marque l'application de glutamate. La ligne en pointillé (A) marque l'application de l'aspartate 1 mM de démasquer potentiel de photorécepteur. Standard écarts pour chaque série d'expériences sont donnés directement avant et après l'application ainsi qu'à la fin du procès. L'analyse statistique a été effectuée à des points de temps avec la déviation standard (directement avant et après l'application ainsi que à la fin de l'essai): (A) Après le temps d'exposition de 250 um glutamate une réduction non significative d'une onde amplitudes (7,8%) a été détecté. À la fin du procès, une réduction non significative de 1,9% a été constatée. (B) Concernant la b-ondes, diminué de manière significative amplitudes de l'ERG par 83,7% ont été enregistrées. A la fin de l'essai, une réduction non significative de 2,3% a été notée.
| Temps [min] | l'amplitude de l'onde b [mV] | Dakota du Sud | une onde d'amplitude [mV] | Dakota du Sud |
| 0 | 9.2 | <td align = "right"> 0,836660027-10,4 | 1,140175425 | |
| 5 | 9.2 | 1,095445115 | -10 | 1 |
| 10 | 10 | 0 | -10,6 | 0,547722558 |
| 15 | 9.4 | 1,140175425 | -9,6 | 0,547722558 |
| 20 | 9.4 | 0,547722558 | -10 | 1 |
| 25 | 9.4 | 0,894427191 | -10,8 | 0,447213595 |
| 4.2 | 2,774887385 | -6,6 | 2.50998008 | |
| 35 | 4 | 2,449489743 | -5 | 2,236067977 |
| 40 | 3,8 | 1,788854382 | -5 | 1 |
| 45 | 3.6 | 1,341640786 | -5 | 2,121320344 |
| 50 | 2.4 | 1,140175425 | -4 | 1,870828693 |
| 55 | 2.2 | 0,836660027 | -3,4 1,140175425 | |
| 60 | 2.6 | 0,547722558 | -3,4 | 1,816590212 |
| 65 | 1,8 | 0,836660027 | -2,8 | 1,303840481 |
| 70 | 1.2 | 0,447213595 | -1,4 | 0,894427191 |
| 75 | 4.2 | 0,836660027 | -5,2 | 2,683281573 |
| 80 | 5,8 | 1,303840481 | -6 | 2,828427125 |
| 85 | 1,095445115 | -4,8 | 0,836660027 | |
| 90 | 6,8 | 1,095445115 | -6,2 | 2,387467277 |
| 95 | 7.4 | 1,816590212 | -5,6 | 2,302172887 |
| 100 | 6.4 | 0,547722558 | -6,2 | 2,863564213 |
| 105 | 6.6 | 0,894427191 | -7,2 | 2,049390153 |
| 110 | 6.2 | 1,643167673 | -6,4 | <td align = "right"> 2,966479395|
| 115 | 8,8 | 3,898717738 | -6 | 3.16227766 |
| 120 | 7.4 | 1,516575089 | -6 | 2.34520788 |
| 125 | 6,8 | 1,095445115 | -6 | 2,645751311 |
| 130 | 7 | 1 | -6,6 | 1,816590212 |
Tableau 1: Résultats de Kolmogorov-Smirnov.
| Temps [min] | l'amplitude de l'onde b [mV] | Dakota du Sud | une onde d'amplitude [mV] Dakota du Sud | |
| 0 | 9,25 | 0,5 | -10 | 1 |
| 5 | 10,5 | 0,577350269 | -10 | 1 |
| 10 | 10,25 | 0,5 | -10,4 | 0,894427191 |
| 15 | 10,5 | 0,577350269 | -9,6 | 0,894427191 |
| 20 | 10 | 0,816496581 | -9,6 | 0,547722558 |
| 25 | 10,75 | 0,5 | 0,836660027 | |
| 30 | 3 | 1,825741858 | -8,4 | 2,701851217 |
| 35 | 6 | 3,559026084 | -9 | 1 |
| 40 | 5,25 | 2.62995564 | -8,4 | 2,966479395 |
| 45 | 2,75 | 2,061552813 | -9 | 1,414213562 |
| 50 | 2,75 | 0,957427108 | -8 | 0,707106781 |
| 55 | 1 | -10,2 | 1,095445115 | |
| 60 | 2,25 | 0,957427108 | -8,4 | 1,816590212 |
| 65 | 2 | 1,414213562 | -8,6 | 1,140175425 |
| 70 | 1,75 | 0,5 | -9,4 | 2,701851217 |
| 75 | 8 | 3,464101615 | -9,2 | 2.28035085 |
| 80 | 9,5 | 3,696845502 | -9 | 1 |
| 85 | 8 | 2,160246899 | -10,8 | 2.48997992 |
| 90 | 8,25 | 0,957427108 | -9,2 | 2,167948339 |
| 95 | 9,25 | 2,872281323 | -10 | 1,870828693 |
| 100 | 9,75 | 0,957427108 | -9,6 | 1,140175425 |
| 105 | 13,5 | 3,872983346 | -9,2 | 1,643167673 |
| 110 | 11,75 | -9,6 | 1,140175425 | |
| 115 | 9 | 1,825741858 | -10 | 1,870828693 |
| 120 | 11 | 3,366501646 | -9,8 | 1,303840481 |
| 125 | 11 | 2,708012802 | -10,8 | 0,447213595 |
| 130 | 10,5 | 0,577350269 | -10 | 1 |
Tableau 2: mesures représentatives de l'hypoxie pour des amplitudes b-ondes et un amplitudes d'onde.
| Glutamate une vague de données | Données onde b glutamate | Les données d'une onde hypoxie | Données onde b hypoxie | |
| Ré | 0,103827009 | 0.17415038 | 0,195 | 0,125 |
| p-valeur | 0,928603977 | 0,375501627 | 0,250 | 0,781 |
| alpha | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 |
Tableau 3: mesures représentatives pour 250 uM glutamate pour des amplitudes b-ondes et un-ondes amplitudes.
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Discussion
Dans cette étude, un impact significatif sur l'amplitude de l'onde b après 45 min de l'hypoxie a été trouvé. Cette réduction était encore significative après la phase de lavage. Un effet similaire sur le potentiel de photorécepteur a pu être observée.
Les résultats sont corroborés par d'autres données publiées et de 16 nous donner la possibilité d'étudier des effets neuroprotecteurs possibles après l'hypoxie.
Après 45 min d'exposition 250 uM de glutamate, nous avons trouvé un effet statistiquement significatif seulement sur l'amplitude de l'onde b qui était totalement réversible à la fin de la période de lavage. Le potentiel de photorécepteur ne est pas influencée par 250 uM de glutamate. Le fait que seule la rétine interne a été affectée par l'hypoxie indique que les changements sont très subtils et que nous avons, par conséquent, avoir un indicateur très sensible et normalisée pour la neuroprotection possible. Aspartate inhibe spécifiquement la transmission du photorécepteur à la horizontal ou des cellules bipolaires et donc supprime les b-ondes.
Ce résultat est contraire aux conclusions de la DG vert et Kapousta NV-Bruneau, qui a constaté que les concentrations de 250 et 500 mM glutamate leur enregistrement B-ondes étaient plus stables dans le temps par rapport à seulement 17 médias. Pour expliquer cette contradiction plusieurs différences dans les réglages doivent être prises en considération: Sickel-solution a été utilisée dans ce modèle l'autre publication utilisé Ringer-solution.
Les mesures ont été effectuées avec un tableau de l'autre publication avec une seule électrode. Yeux bovins en provenance de l'abattoir ont été utilisés alors que l'autre publication décrit yeux de rat frais. L'effet était réversible avec une inhibition temporel à des concentrations élevées de glutamate. Il est communément connu qu'une certaine quantité très faible de glutamate est nécessaire pour le bon entretien de l'œil et que des montants plus élevés sont toxiques. Nous pourrions supposer que dans les yeux de bovins de la slaughterhouse plus glutamate est libéré par rapport aux yeux fraîchement préparés résultant en des niveaux de glutamate étant différent de celui attendu à partir du glutamate expérimentalement ajoutée.
Mesure de la réponse en utilisant un réseau sur toute la rétine plutôt que d'une électrode, qui est principalement influencée par les cellules les plus proches, peut également conduire à une durée de survie plus longue en raison de dommages mécaniques inférieur. Enfin, la composition du milieu est essentielle. Dans les années 1960, le professeur Sickel fortement investi dans le développement de ce média spécialisé pour ces mesures et il a été en mesure de trouver un média optimisé sans avoir besoin de glutamate pour une réponse rétinienne stable 13,14.
Le modèle décrit se appuie sur une rétine isolée plutôt que d'un animal entier. Dans un système in vivo, l'oeil est isolé par la barrière sang-rétine barrière par les autres organes de l'animal. L'avantage de ce modèle est que interférer paramètres chez les animaux de l'étude, tels que l'anesthésieou la position des électrodes ne se produit pas, ce qui permet une plus grande standardisation. La normalisation est un point critique dans les expérimentations animales, en particulier concernant l'œil 18.
Les limitations de ce procédé sont la période de test et court du fait qu'il ne est pas un modèle animal. Nous savons par expérience que les amplitudes ERG restent stables pendant environ 8 heures, donc la période d'essai mentionné dans l'introduction peut être étendue à une exposition plus longue et la période de suivi, mais il faut toujours considérer que le plus une seule expérience est prolongée, le plus susceptibles écarts types plus élevés se produisent.
Un inconvénient de ce modèle est, par conséquent, aucune étude à long terme et peuvent être effectuées seulement un nombre limité de manipulations de la rétine sont possibles. Par exemple expérimentation in vivo Pour la manipulation et l'étendue spéciaux comme ERG ERG multifocale guidé par SLO comme décrit dans Dutescu et al.s sont nécessaires 19.
Ce modèle peut facilement être utilisé pour rétines humaines explantée par exemple des yeux énucléés. Comme ce matériau sensible est compliqué à obtenir, des expériences sur des rétines bovins sont plus faisable, mais doivent être interprétés en gardant cela à l'esprit.
Les étapes critiques dans le protocole sont le transport et la préparation de la rétine dans des conditions adaptées sombres. Ceci est important pour obtenir les réponses maximales possibles. Il peut parfois prendre quelques minutes pour séparer délicatement la rétine de l'épithélium pigmentaire sous-jacent. Agitation douce de la rétine poinçonnée facilite parfois ce processus. En plaçant la rétine sur le réseau, il est important de placer la rétine avec la rétine externe sur le poteau. Après trephanization, les bords de la rétine se courber légèrement vers le haut indiquant la position de la couche rétinienne interne.
La rétine bovine est plus semblable à la rétine humaine comparerd à la rétine de l'oeil contre les rongeurs en raison d'un rapport vitreux-cristallin similaire et une structure vasculaire qui ressemble à l'une de 20 l'oeil humain; Ainsi, bien que de petits animaux de laboratoire tels que les rats et les souris sont largement utilisés pour tester la biocompatibilité de la rétine, des études de toxicité réalisés sur ces animaux sont souvent moins 20 applicables à l'homme. L'analyse phylogénétique du gène myociline - un gène qui, dans sa forme mutée provoque autosomique dominant juvénile glaucome à angle ouvert - montre que le gène bovin est plus étroitement lié au gène humain que celle du rat ou de la souris 21. Myociline peut être trouvé dans les cellules de réseau trabéculaire, ainsi que dans la rétine. Enfin, nous avons montré une bonne corrélation entre bovine et ERG humain isolé et les effets ERG 12.
Dans notre modèle aspartate a été utilisé pour démasquer le photorécepteur de potentiel P III en abolissant la b-ondes. Cela donne à l'enquêteur la possibilité de faire la différenceentre les effets sur le réseau interne de la rétine et la fonction photoréceptrice 22. Bien que l'onde b est un paramètre bien plus sensible en ce qui concerne la fonction intégrée, l'amplitude d'une onde est plus stable et plus résistant aux contraintes, en raison du fait que l'un d'onde ne reflète que la réaction des photorécepteurs de lumière il. En revanche, la b-ondes dépend de l'interaction de cellule à cellule des différentes cellules de la rétine et l'activité des photorécepteurs. En utilisant l'aspartate d'isoler l'onde A, il est possible d'examiner l'effet des manipulations sur les seuls 23 photorécepteurs.
Dans cette étude, un modèle de toxicité neuronale normalisée qui peut être utilisé pour tester des agents neuroprotecteurs a été évaluée. En guise de perspectives, il sera intéressant de corréler fonction électrophysiologique avec l'analyse des protéines-biochimique ou de corréler fonction avec le métabolisme cellulaire ou même expression de l'ARNm.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 120 mM NaCl | Merck Pharma, Germany | 1,064,041,000 | |
| 2 mM KCl, | Merck Pharma, Germany | 1,050,010,250 | |
| 0.1 mM MgCl2, | Merck Pharma, Germany | 58,330,250 | |
| 0.15 mM CaCl2 | Merck Pharma, Germany | 111 TA106282 | |
| 1.5 mM NaH2PO4/13.5 mM Na2HPO4 | Merck Pharma, Germany | 1,065,860,500 | |
| 5 mM glucose | Merck Pharma, Germany | 40,741,000 |
References
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