Abstract
यहाँ हम व्यावसायिक रूप से सुलभ और सस्ती भागों का उपयोग कर एक एकल उपयोग "injectrode" के निर्माण के लिए एक विधि का वर्णन। एक जांच कर प्रणाली प्रभावित न्यूरोनल जनसंख्या से electrophysiological संकेतों जबकि रिकॉर्डिंग एक दवा के इंजेक्शन के लिए अनुमति देता है कि विकसित किया गया था। इस विधि वाणिज्यिक समाधान करने के लिए एक सरल और किफायती विकल्प प्रदान करता है। एक गिलास पिपेट एक चमड़े के नीचे सुई और एक रजत रेशा साथ संयोजन के द्वारा संशोधित किया गया था। injectrode दवा वितरण के लिए वाणिज्यिक microsyringe पंप से जुड़ा हुआ है। इस दवा वितरण की साइट से होने वाले बहु-इकाई कोशिकी संकेतों के माध्यम से वास्तविक समय pharmacodynamics प्रतिक्रिया देता है कि एक तकनीक में यह परिणाम है। अवधारणा के एक सबूत के रूप में, हम समन्वित रूप injectrode के माध्यम से दवाओं के वितरण के साथ, चूहों में प्रकाश की चमक द्वारा हासिल बेहतर colliculus से neuronal गतिविधि दर्ज की गई। injectrode रिकॉर्डिंग क्षमता inj के कार्यात्मक लक्षण वर्णन परमिटदवा वितरण के स्थानीयकरण पर सटीक नियंत्रण के पक्ष में ection साइट। Injectrode में लोड रासायनिक पदार्थ के चुनाव को शारीरिक प्रयोगों के लिए मार्कर अनुरेखण सहित विशाल है, के रूप में इस विधि का आवेदन भी अब तक यहां प्रदर्शन किया है क्या परे फैली हुई है।
Introduction
cortical क्षेत्रों और उप कॉर्टिकल नाभिक की निष्क्रियता विभिन्न मस्तिष्क संरचना 2-4 के बीच कार्यात्मक संबंधों के अध्ययन में महत्वपूर्ण है। हाल ही में साहित्य मस्तिष्क संरचना 2,5 की भूमिका का अध्ययन करने के नुकसान के समारोह रासायनिक या क्रायोजेनिक तकनीक कार्यरत है। आसपास के ऊतकों 6,7 करने के लिए जमानत के नुकसान को कम करते हुए औषधीय microinjections के संबंध में, दवाओं की छोटी मात्रा एक नियंत्रित दर पर एक मस्तिष्क क्षेत्र में प्रशासित किया जा सकता है। इस तकनीक neuronal गतिविधि पर विभिन्न औषधीय लक्ष्य के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए विशिष्ट एगोनिस्ट, उलटा एगोनिस्ट या विरोधी देने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। इस तरह के प्रभावों को भी शोधकर्ताओं ने अलग cortical और subcortical संरचनाओं के बीच संबंधों का अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है, दूर के स्थानों से neuronal प्रतिक्रियाओं में परिवर्तन को मापने के द्वारा अध्ययन किया जा सकता है।
यहाँ, हम बो में सक्षम डिवाइस के विधानसभा, injectrode का प्रदर्शनelectrophysiological संकेतों की रिकॉर्डिंग और लक्ष्य स्थान पर दवाओं की छोटी मात्रा में पहुंचाने वें। हम चूहे बेहतर colliculus में, गाबा, neuronal गतिविधि का एक आम अवरोध करनेवाला इंजेक्शन लगाने के द्वारा इस प्रणाली की क्षमताओं को प्रदर्शित करता है। इस क्षेत्र में हमें injectrode स्थानीयकरण पुष्टि करने के लिए नेत्रहीन पैदा multiunit गतिविधि का उपयोग करने की अनुमति दी है, जो दृश्य उत्तेजना, के प्रति संवेदनशील है। निष्क्रियता के उलटने गाबा इंजेक्शन के अंत के बाद सामान्य neuronal गतिविधि की वसूली के द्वारा मूल्यांकन किया गया था।
इंजेक्शन साइट से बहु इकाई गतिविधि पर नजर रखने की क्षमता वांछित pharmacodynamic प्रतिक्रिया प्राप्त करने की आवश्यकता इंजेक्शन दरों और मात्रा के ठीक ट्यूनिंग के लिए अनुमति देता है। छोटी से छोटी प्रभावी संस्करणों इंजेक्ट कर रहे हैं के बाद से इसलिए, इस तकनीक का एक फायदा, microperfusion की वजह से ऊतकों को नुकसान की सीमित क्षमता है। प्रस्तावित प्रोटोकॉल डिस्पोजेबल हार्डवेयर necessar पैदा करने के लिए एक लागत प्रभावी तरीका प्रदान करता हैदवा वितरण और स्थानीय neuronal गतिविधि रिकॉर्डिंग वांछित है जहां का आयोजन प्रयोगों के लिए वाई।
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Protocol
नोट: सभी प्रक्रियाओं पशु के संरक्षण और Université de मॉन्ट्रियल के आचार समीक्षा बोर्ड के लिए कनाडा परिषद के निर्देशों के अनुसार में प्रदर्शन किया गया।
रिकॉर्डिंग इंजेक्शन पिपेट 1. विधानसभा
- एक विंदुक खींचने का उपयोग एक लगभग 7 सेमी लंबे गिलास केशिका (1 मिमी बाहरी व्यास) खींचो।
- केशिका की नोक तोड़ और एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत एपर्चर की जाँच करें। भीतरी व्यास से 40 माइक्रोन के बीच 30 माइक्रोन है कि पुष्टि करें।
- कांच पिपेट की गैर-पतला अंत से फैलने वाला लगभग 1 सेमी के साथ कांच केशिका में एक 7 सेमी लंबी चांदी के तार डालें।
- कांच केशिका को orthogonally अतिरिक्त रेशा झुको।
- एक 30 ग्राम चमड़े के नीचे सुई की शाफ्ट पर लचीले प्लास्टिक चिपकने वाला की एक छोटी बूंद लागू करें।
- चित्रा 1 में प्रस्तुत schematics के अनुसार कांच पिपेट में एक 30 ग्राम चमड़े के नीचे सुई डालें
- कांच पिपेट और चमड़े के नीचे सुई के बीच जंक्शन से एक उचित सील सुनिश्चित करने के लिए गोंद का एक दूसरा कोटिंग जोड़ें।
- टिप गोंद का उचित इलाज सुनिश्चित करने के बारे में 12 घंटे के लिए ऊपर की ओर का सामना करना पड़ के साथ सूखे के लिए पिपेट छोड़ दें। समाप्त परिणाम चित्रा 2 में दिखाया गया है।
नोट: इस प्रक्रिया को तीव्र प्रयोगों और विंदुक टिप की नसबंदी पर किया जाता है की आवश्यकता नहीं है।
2. पशु तैयारी
- एक संज्ञाहरण बॉक्स में चूहे रखें।
- 5 से 10 मिनट के लिए 4 isoflurane% का उपयोग कर संज्ञाहरण प्रेरित।
- 37 डिग्री सेल्सियस के शरीर का तापमान बनाए रखने के लिए हीटिंग पैड और गुदा जांच के साथ एक stereotaxic मेज पर पशु रखें। 2% isoflurane के साथ संज्ञाहरण बनाए रखने के लिए एक नाक शंकु का उपयोग करें। कान सलाखों और दांत धारक का उपयोग कर चूहे का सिर सुरक्षित।
- Atropine शिष्य फैलाव में सहायता करने के लिए चला जाता है 1% शामिल हैं जो नेत्र मरहम या आई ड्रॉप, लागू करें। सूखापन को रोकने के लिए, ड्रॉप चिकनाई लागू होते हैंलगभग हर 30 मिनट है।
- सिर दाढ़ी और 10% povidone आयोडीन के साथ साफ।
- स्थानीय संज्ञाहरण के लिए, त्वचा ऊपर उठाने और सुई की नोक डालने से 2-3 स्थानों में खोपड़ी के तहत 2% lidocaine के 0.5 मिलीलीटर इंजेक्षन।
- एक पैर के अंगूठे चुटकी प्रदर्शन और आंदोलन की कमी को देख कर संज्ञाहरण के पर्याप्त स्तर की पुष्टि करें। इसके अलावा, यह सामान्य मूल्यों (300 से 400 धड़कता / मिनट) के भीतर है कि यह सुनिश्चित करने के लिए दिल की दर पर नजर रखने के।
- राज्याभिषेक और बाण के समान टांके दोनों को बेनकाब करने के लिए एक # 10 स्केलपेल ब्लेड के साथ मंझला साथ एक सीधी रेखा में खोपड़ी काटकर अलग कर देना।
- एक शल्य चिकित्सा रंग के साथ कपाल कवर है कि ऊतक एक तरफ धकेलने के द्वारा लैम्ब्डा और शीर्षस्थान अंक पता चलता है।
- शीर्षस्थान और लैम्ब्डा पदों पर एक ही विमान पर कर रहे हैं इतना है कि कपाल स्तर।
- संदर्भ बिंदु निर्धारित करने के लिए, सही शीर्षस्थान के ऊपर यह निर्धारित करने के लिए एक मुहिम शुरू की ग्लास ट्यूब के साथ एक stereotaxic डिवाइस का उपयोग करें। यह "शून्य" के लिए Antero-पीछे और मेड हो जाएगाial पार्श्व माप निर्देशांक।
- , Stereotaxic आवश्यक निर्देशांक करने के लिए माउंट ले जाकर हित के बिंदु निर्धारित stereotaxic निर्देशांक ध्यान दें और craniotomy प्रदर्शन किया जाएगा, जहां के निशान है कि लक्षित क्षेत्र के चारों ओर एक वर्ग आकर्षित।
- धीरे-धीरे हड्डी सामग्री को हटाने के लिए दबाव के बिना धीरे धीरे चिह्नित वर्ग के साथ एक निष्फल ड्रिल के साथ एक शल्य चिकित्सा ड्रिल का प्रयोग करें। यह कॉर्टेक्स पर घावों गर्मी का उत्पादन और कारण होगा, के रूप में एक ही क्षेत्र में भी लंबे समय से ड्रिल करने के लिए नहीं सावधान रहना होगा।
- Craniotomy परिसीमन हड्डी पर्याप्त पतली हो गया है, ध्यान से कॉर्टेक्स को बेनकाब करने के लिए चिमटी के साथ कपाल खंड को हटा दें।
- अक्सर पूछे जाने वाले ऊतक सुखाना को रोकने के लिए कृत्रिम मस्तिष्क रीढ़ की हड्डी में तरल पदार्थ के साथ उजागर कॉर्टेक्स की सिंचाई।
नोट: injectrode की नोक घुसना करने के लिए पर्याप्त मजबूत है के रूप में ड्यूरा मेटर हटाने चूहे पर अनावश्यक है।
3. भरने और इंजेक्शन प्रणाली के बढ़ते
- भरनाखनिज तेल के साथ आकांक्षा से 5-10 μl microsyringe।
- 0.5% शिकागो स्काई ब्लू (CSB) और 300 माइक्रोन γ aminobutyric एसिड (गाबा) या 0.5% CSB 9 के साथ 2% lidocaine के एक समाधान की एक समाधान के साथ तय गिलास विंदुक के साथ चमड़े के नीचे सुई भरें। नमक के साथ सभी समाधान पतला।
- एक प्रचुर मात्रा में पदार्थ के मामले में, एक नियमित रूप से सिरिंज का उपयोग कर भरने के लिए और हवा के बुलबुले के गठन से बचने के लिए हमेशा एहतियाती तकनीक का उपयोग करें।
- अधिक महंगी पदार्थों के मामले में, injectrode भरने के लिए खनिज तेल का उपयोग करें और रासायनिक एजेंट तो आकांक्षा द्वारा शुरू की जा सकती है। खनिज तेल और पानी के घनत्व में अंतर अपेक्षाकृत अधिक है के रूप में, इस पदार्थ जलीय समाधान के इंजेक्शन के लिए एक अच्छे उम्मीदवार हैं।
ध्यान दें: एक डाई दोनों तरल पदार्थ के बीच अलगाव की पुष्टि करने के लिए जोड़ा जा सकता है।
- इंजेक्शन पिपेट भरने के लिए, आकांक्षा से समाधान के साथ एक 1 मिलीलीटर सिरिंज भरने और फिर धीरे-धीरे समाधान इंजेक्षनइंजेक्शन पिपेट में।
- साफ है कि इन क्षेत्रों swabbing और आगे सिरिंज के साथ धीरे-धीरे समाधान इंजेक्शन द्वारा लीकेज को देख कर चित्रा 1 में संकेत क्षेत्रों में लीक के लिए सावधान ध्यान दे।
- 1 मिलीलीटर सिरिंज निकालें। जब ऐसा करने से, वैक्यूम इंजेक्शन पिपेट से समाधान को दूर नहीं करता है, ताकि सवार पर प्रकाश दबाव रखना सुनिश्चित करें।
- आकांक्षा से खनिज तेल के साथ microsyringe भरें और भरा इंजेक्शन पिपेट को मजबूती देते हैं, तो ध्यान से धुंध के साथ इकट्ठे injectrode से किसी भी अतिरिक्त समाधान दूर पोंछ।
- टिप गिलास पिपेट की नोक पर बनाने की एक छोटी सी बूंद देखने के लिए पर्याप्त एक बहुत छोटी मात्रा में इंजेक्शन द्वारा अवरुद्ध नहीं है कि जाँच करें।
- Micropump सिस्टम पर injectrode माउंट और यह अच्छी तरह से तय हो गई है कि सुनिश्चित करते हैं।
- ध्यान से लक्ष्य निर्देशांक पर injectrode टिप स्थिति और कॉर्टेक्स की सतह के लिए टिप कम है।
- धीरे धीरे injectr कमउपयुक्त संरचनात्मक निर्देशांक का उपयोग कर लक्ष्य संरचना करने के लिए stereotaxic तंत्र (इस मामले में बेहतर colliculus) का उपयोग स्तोत्र।
- ऊतक सुखाना को रोकने के लिए गर्म अगर साथ उजागर कॉर्टेक्स कवर।
4. इंजेक्शन और प्रतिवर्ती निष्क्रियता
- इंजेक्शन शुरू करने के लिए 40 NL / मिनट और प्रेस भागो में 400 nl 800 इंजेक्षन करने के लिए microinjection के पंप सेट करें। उस कील दर इंजेक्शन के दौरान कमी दिखाई देगा ध्यान दें।
नोट: प्रयोगात्मक सेटअप में, तंत्रिका गतिविधि गाबा प्रसव के अंत के बाद एक घंटे के भीतर बरामद किए। किसी भी calibrated यांत्रिक उपकरण इंजेक्शन का संचालन करने के क्रम में microinjection सिरिंज पर दबाव लागू करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। - Electrophysiological डेटा के अधिग्रहण के बाद स्थानीय पशु आचार समुदाय द्वारा अनुमोदित एक विधि का उपयोग euthanize।
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Representative Results
injectrode के निर्माण के तार तुला के एक हिस्से के साथ एक गिलास पिपेट (डी) में खिलाया और खोलने से बाहर फैला हुआ है चित्रा 1. एक चांदी के तार (सी) में सचित्र है। एक 30 जी सुई (बी) जुड़ी है और गोंद के साथ कांच पिपेट का उद्घाटन करने के लिए बंद है। पिपेट इंजेक्शन पदार्थ के साथ भर दिया गया है, के बाद एक गिलास सूक्ष्म सिरिंज (ए) सुई से जुड़ा हुआ है। यह सूक्ष्म सिरिंज सुई (ई) और जहां चांदी के तार गिलास पिपेट (एफ) से protrudes के साथ जोड़ता है, जहां एक अच्छा मुहर है कि वहाँ महत्वपूर्ण है। 2 injectrode विधानसभा पूरा करने के बाद ऐसा लगता है की एक तस्वीर से पता चलता है।
दिखने में पैदा multiunit गतिविधि 3 चित्र में सचित्र के रूप में प्रतिपक्षी आंख के लिए एक 300 मिसे फ़्लैश निम्नलिखित बेहतर colliculus में प्राप्त किया गया। गाबा के इंजेक्शन पर, दबा दिया गया था एक फ्लैश उत्तेजना के जवाब में गतिविधि spiking। नेत्रहीनइंजेक्शन नहीं रह गया है के बाद पैदा multiunit गतिविधि आमतौर पर 60 मिनट के लिए 45 के बीच लौट आए।
चित्रा 4 microinjection प्रणाली की स्थापना को दिखाता है। इंजेक्शन पंप नियंत्रक इंजेक्शन के लिए सेटिंग्स निर्दिष्ट करने के लिए उपयोगकर्ता की अनुमति देता है। एक स्प्रिंग विद्युत कनेक्टर गिलास पिपेट से protrudes कि चांदी के तार जोड़ता है। कनेक्टर जमीन और संदर्भ इलेक्ट्रोड के साथ एक सिर मंच की ओर जाता है और फिर एक एम्पलीफायर में खामियों को दूर किया। एक एनालॉग / डिजिटल (ए / डी) इंटरफेस electrophysiological डेटा प्राप्त करने के लिए प्रयोग किया जाता है, और एक वक्ता neuronal गतिविधि के पूरक ऑडियो निगरानी के लिए प्रयोग किया जाता है।
चित्रा 1:। Injectrode विधानसभा की योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व एक सूक्ष्म सिरिंज (ए) एक 30 जी एच से मिलकर बनता है जो रिकॉर्डिंग इंजेक्शन पिपेट से जुड़ा हुआ हैएक गिलास पिपेट (डी) के अंदर एक चांदी के तार (सी) का पालन किया ypodermic सुई (बी)। लीक करने के लिए अतिसंवेदनशील हो सकता है कि प्रकाश डाला क्षेत्रों - क्षेत्र (एफ ई) की परिक्रमा की।
चित्रा 2: एक 30 जी सुई (बी), निविड़ अंधकार चिपकने वाला गोंद (एफ), एक चांदी का तार (सी) और एक गिलास पिपेट (डी) प्रयोग का निर्माण पिपेट की एक तस्वीर।
चित्रा 3: बेहतर colliculus में नेत्रहीन पैदा की बहु इकाई गतिविधि पर गाबा (300 माइक्रोन) के इंजेक्शन की निरोधात्मक प्रभाव का एक उदाहरण, तीर फ़्लैश शुरुआत का संकेत मिलता है। बिजलीअल संकेतों 30 और 3000 हर्ट्ज के बीच स्थापित एक बैंड पास फिल्टर का उपयोग कर फ़िल्टर किया गया।
चित्रा 4: पूर्ण सूक्ष्म इंजेक्शन प्रणाली के योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व।
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Discussion
प्रस्तावित प्रोटोकॉल वर्तमान प्रतिवर्ती निष्क्रियता के तरीकों से उत्पन्न होने वाली चुनौतियों का समाधान करने के लिए डिजाइन किया गया था। विशेष रूप से, इस परियोजना विशेष रूप से गहरी मस्तिष्क संरचना में, तंत्रिका गतिविधि modulating पदार्थों की रासायनिक microinjections के लिए इस्तेमाल किया तरीकों को परिष्कृत करने के उद्देश्य से। स्थापना के इस प्रकार से उभरती एक तकनीकी चुनौती दोनों जांच इंजेक्शन स्थल पर सटीक रिकॉर्डिंग प्राप्त करने के क्रम में vivo में एक ही प्रतिबंधित अंतरिक्ष में colocalized जा करने के लिए की जरूरत है। यह समस्या एक ही स्थल पर दोनों इंजेक्शन और रिकॉर्डिंग में सक्षम हैं जो इस तरह के यहाँ प्रस्तुत एक के रूप में उपकरणों, का उपयोग करके दूर किया जा सकता है। वैकल्पिक तरीकों गैस के दबाव दालों पर आधारित उपकरणों का उपयोग शामिल है। इस तरह के उपकरणों के कई वर्षों के लिए उपलब्ध किया गया है, लेकिन एक दबाने के मध्यवर्ती के उपयोग के इंजेक्शन दर और मात्रा, उलटने बीमा करने के लिए नियंत्रित करने के लिए महत्वपूर्ण हैं कि दो मापदंडों पर नियंत्रण कम कर देता है। ऐसे iontophoretic इंजेक्शन के रूप में अन्य विधियोंystems भी उपलब्ध हैं, लेकिन तरल के प्रसार गतिशीलता निष्क्रियता के संभावित रेंज को कम करने, सांस में इंजेक्शन बनाम अलग हैं। इन विधियों सूक्ष्म इंजेक्शन 7 के लिए मनाया अण्डाकार पैटर्न के लिए विरोध के रूप में एक गोलाकार प्रसार पैटर्न होने का फायदा है। इसलिए, निष्क्रियता विधि के चुनाव को लक्ष्य क्षेत्र और प्रयोगात्मक डिजाइन के अनुसार योजना बनाई जानी चाहिए। वाणिज्यिक विकल्प मौजूद हालांकि, प्रस्तावित प्रोटोकॉल दवा पदार्थ वितरण की निगरानी के रूप में अच्छी तरह से अनुकूलन के एक उच्च डिग्री के लिए अनुमति देने का एक लागत प्रभावी ढंग से प्रदान करता है। इंजेक्शन डिवाइस के क्राफ्टिंग में इस तरह की स्वतंत्रता विशिष्ट अनुप्रयोग के संदर्भों के लिए प्रयोगात्मक लचीलापन और ट्यूनिंग की एक बड़ी रेंज के पक्ष में है।
प्रस्तावित प्रोटोकॉल के साथ संबंध है, महत्वपूर्ण कदम गिलास पिपेट भरने की प्रक्रिया है। हवा संपीड़न इंजेक्ट की निगरानी प्रस्तुत करना होगा के रूप में हवाई बुलबुले, बचा जाना चाहिएअसभ्य संस्करणों। मैन्युअल रूप से प्रणाली में मुक्त प्रवाह की पुष्टि, पिपेट के माध्यम से तरल धकेलने जब एक बहुत कम प्रतिरोध भी महसूस किया जाना चाहिए। पुस्तिका इंजेक्शन के साथ तरल का अभाव प्रणाली या एक बाधित टिप में जिसके परिणामस्वरूप गलत पिपेट तैयार करने में एक दरार का संकेत हो सकता। पिपेट की प्रतिबाधा भी इच्छित प्रकार electrophysiological रिकॉर्डिंग प्राप्त करने के क्रम में मापा जाना चाहिए कम impedances में परिणाम होगा बड़ा सुझावों आकार के रूप में, (LFP, क्षमता, बहु इकाई गतिविधि, आदि पैदा)।
इंजेक्शन सफल होता है, 400 से 800 300 माइक्रोन गाबा समाधान की nl या 2% lidocaine के समाधान का एक मात्रा गतिविधि spiking को खत्म करने के लिए पर्याप्त है। स्थान और समय में फैल इंजेक्शन की एक विचार है, अगर तंत्रिका ऊतक अनुकरण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। इंजेक्शन के प्रसार को तो आसानी से एक CSB समाधान के साथ मनाया जा सकता है। सिमुलेशन के बाद, यह ओ उपयोग के माध्यम से histologically फैल इंजेक्शन चिह्नित करने के लिए आवश्यक हैradiolabeled दवाओं का उपयोग autoradiography द्वारा या तंत्रिका गतिविधि 1 की सक्रियता या निष्क्रियता को मापने के लिए इस तरह के ग्लूकोज autoradiography के रूप में अप्रत्यक्ष रूप से परदे के पीछे के रूप में चयापचय दृष्टिकोण का उपयोग करके ऐसे CSB के रूप में एफ रंजक,।
यह संभावना पूरी उलटने अप्राप्य बनाने के घावों में परिणाम होगा कि तेजी से इंजेक्शन (≥100 NL / मिनट) नोट करने के लिए भी महत्वपूर्ण है। प्रस्तावित प्रोटोकॉल का एक प्रमुख लाभ एक सेट neuronal गतिविधि के स्तर के लिए इंजेक्शन दर प्रतिक्रिया को नियंत्रित होता है कि सॉफ्टवेयर के साथ इंजेक्शन प्रणाली को एकीकृत करने की क्षमता है। इस तरह के एक कार्यान्वयन शोधकर्ताओं मापदंडों निष्क्रियता (या सक्रियण) के बजाय माना आवेदन के लिए दवा का ही अधिकार की राशि वितरित करते हुए इस तरह के इंजेक्शन दरों या संस्करणों के रूप में तकनीकी मानकों पर ध्यान केंद्रित करने की अनुमति होगी। यह, दवा वितरण के लिए और अधिक समय के प्रति संवेदनशील नियंत्रण के लिए अनुमति देने के लिए आवश्यक दवा की मात्रा के अनुकूलन के द्वारा जांच के विस्थापन को कम से कम reproducibility और सभी एहसान होगाडेटा की ओउ प्रत्यक्ष बनती तुलना।
इस तकनीक electrophysiological संकेतों के पदार्थ वितरण और रिकॉर्डिंग के लिए एक प्रणाली को जोड़ती है। हम 11 उत्तेजनाओं कार्यात्मक फ़्लैश का उपयोग कर बहु-इकाई गतिविधि की गाड़ियों उत्प्रेरण द्वारा बेहतर colliculus पता लगाने के लिए हमारे पिपेट की रिकॉर्डिंग क्षमता का उपयोग करके इसकी क्षमता का प्रदर्शन किया। निष्क्रियता के दौरान, बहु इकाई गतिविधि कम हो गई और धीरे-धीरे इंजेक्शन ऑफसेट के बाद बरामद किया। इस तरह यहाँ प्रस्तुत एक के रूप में प्रतिवर्ती निष्क्रियता तकनीक, अनुपस्थित या गरीब वसूली 3 कि उपलब्ध कराने के यांत्रिक या रासायनिक घावों तकनीक पर काफी फायदे प्रदान करते हैं। बनती तुलना 3 संभव हो रहे हैं के बाद से प्रतिवर्ती निष्क्रियता तकनीक है, जिससे विशेष स्वभाव मतभेदों को दूर करने, प्रयोगों के सांख्यिकीय महत्व को सुदृढ़। हम पदार्थ वितरण और मजबूत की अवधि से अधिक सटीक नियंत्रण की अनुमति देता है कि एक कुशल लागत और अनुकूलन तकनीक विकसित की हैएक लक्ष्य मस्तिष्क क्षेत्र की जांच कर रही।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Injection pump (UltraMicroPump III) | WPI | #UMP3 | |
| Injection console (Micro4 Controller) | WPI | #SYS-MICRO4 | |
| Hamilton syringe | Hamliton | (80301) 701LT 10 µL SYR | Syringes between 5 and 10 μl used |
| Flexible plastic adhesive | Lepage | 393915 | The gel form is easier to apply to the shaft of the 30 G hypodermic needle forming a waterproof seal when dry. |
| Glass pipettes | WPI | #TW100F-4 | Thin wall, 1 mm OD, 0.75 mm ID with filament pipettes used |
| 720 Needle Pipette Puller | Kopf | 720 | |
| Silver wire | A-M Systems, Inc. | 782500 | Bare 0.010” |
References
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