Introduction
والوظيفة الرئيسية للرئة هو توفير للأوكسجين والكربون ثاني أكسيد الصرف بين كائن حي والغلاف الجوي. في البشر، مجموعة من الشروط الخلقية والمكتسبة تؤدي إلى انخفاض مساحة الرئة مما يؤدي إلى اختلال وظائف الرئة. على الرغم من أن مجموعة من العلاجات مثل الستيرويدات المستنشقة، موسعات القصبات، الأكسجين الإضافي، والتهوية الميكانيكية المزمنة وتستخدم للتخفيف من عواقب اختلال وظائف الرئة 1-3، فإن العلاج المثالي لهذه الشروط تشجيع إعادة نمو أنسجة الرئة وظيفية - أي والرئة التجدد.
وقد تم توثيق وترميم الأنسجة الثدييات أيضا. وشائك الفأر الأفريقي يمكن أن تتجدد مناطق واسعة من الجلد دون تشكيل ندبة 4. السلامية البعيدة في البشر يمكن تجديد التالية الإصابة أو بتر 5-7. بعد استئصال الرئة (PNX)، يحدث نمو الرئة التعويضي في الفئران 8، 9 الفئران، والقيامع 10، والبشر 11. بحكم التعريف، ونمو الرئة التعويضي ينطوي التوسع ليس فقط من الأجواء الحالية، ولكن إعادة تحوجز لهذه الأجواء الموسع مع التوسع في دوران الأوعية الدقيقة المرتبطة 12. وقد أثبت تحليل الجينات التعبير أن هذا النموذج يلخص العديد من الأحداث يشير التنمية الرئة 13. بعد أربعة أسابيع الماوس PNX، مساحة السنخية ما يعادل ذلك من الشام الحيوانات تعمل 14. في هذا المخطوط، وصفنا PNX الماوس والإجراءات PNX صورية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
بيان استخدام الحيوان: ملاحظة: أجريت جميع الإجراءات في هذه الدراسة مع موافقة واتباع المبادئ التوجيهية للاستخدام الحيوان المؤسسي ولجنة الرعاية (IACUC) في مستشفى سينسيناتي للأطفال. تم الحصول القديمة أسابيع ثمانية C57BL / 6J الفئران الذكور من جاكسون مختبرات (بار هاربور، ME) والسماح للتأقلم لمدة أسبوع واحد قبل استخدامها. حتى عملية جراحية، وتم إيواء الحيوانات في منشأة حاجز خالية من مسببات الأمراض، وقدمت طعام تعقيمها وتصفيتها libdium المياه الإعلانية. تم تزويد كل قفص الفأر مع الهواء مخصص والماء، وكان مسك غرف على دورة الليل والنهار 12 ساعة. وبعد الشفاء من الجراحة، واستمرت الفئران في أقفاص مع قمم تصفيتها، شريطة تعقيمها libidum الإعلان طعام، وقدمت تصفيتها الماء من زجاجة الماء.
1. إعداد الأدوات
- جعل 6 الكامشات الجلد باستخدام مشابك الورق والدبابيس. تطور تقويمها مشابك الورق على السيقان من الدبابيس الورقية، لإيف 5 سم أسلاك الفولاذ التوالي على نهاية واحدة وجعل واحدة 0.5 سم "U" على شكل الخطاف في نهاية السلك.
- جعل بعض 15 × 15 سم الستائر الجراحية مربع باستخدام غلاف بلاستيكي. إعداد خلع الملابس واحدة في الماوس. وضع برج رقة بين كل التفاف.
- تعقيم جميع الأدوات الجراحية جنبا إلى جنب مع كومة من البلاط 12 × 12 بوصة الفلين والشاش، ومسحات القطن ذات الرؤوس.
2. إعداد ماوس
- لحث التخدير مع 2٪ الأيزوفلورين. وزن الحيوان.
- في منطقة إعداد الجراحية مخصصة يحلق الصدر الأيسر ومنطقة الرقبة مع ماكينة حلاقة كهربائية.
- تطبيق قطرة من مرهم مصطنعة المسيل للدموع لعيون الفأر.
- تطهير الرقبة والصدر الأيسر مع الكلورهيكسيدين وايزوبروبيل. كرر مرتين أكثر من ذلك.
3. ماوس أورو-التنبيب الرغامي والتهوية الميكانيكية
- لديهم غير معقمة مكان فني الجراحية مستلق الماوس في منطقة الجراحية قبل تحسنت.
- تأكيد عمق التخدير عن طريق توثيق عدم وجود استجابة إلى مخلب قرصة.
- بعد غسل اليدين وارتداء الملابس الجراحية، وقناع، وقبعة، وارتداء القفازات الجراحية المعقمة.
- بعد اللف وباستخدام تقنية العقيم، وجعل شق عمودي 1 سم فوق الأمامية منتصف الرقبة لفضح الحنجرة. بخفة التراجع عضلات حزام مع منحنية، مسننة 10 سم ملقط وفضح الحنجرة والقصبة الهوائية عن طريق نشر عضلات حزام مع غيض من مقص على التوالي.
- إدراج شفويا 22 G صريحا طرف angiocatheter في منتصف القصبة الهوائية (الشكل 1A) وتأكيد بصريا التنسيب (الشكل 1B). الحفاظ على التخدير وتهوية باستخدام 1-3٪ الأيزوفلورين من خلال القوارض التنفس الصناعي (225 ميكرولتر في السكتة الدماغية، 200 ستوكس لكل دقيقة). توظيف حد ضغط 15 سم H 2 O.
4. ماوس استئصال الرئة
- وضع الماوس في موقف استلقاء الجانبي الأيمن مع الخلفية التي تواجه الماوس،المشغل (الجانب الأيسر لأعلى). استخدام الاغطية البلاستيك الختم الذاتي كما ثنى العقيمة. قطع طريق ثنى، استخدم حادة مقص منحني يميل إلى جعل 2 سم قطع طويلة بالتوازي مع الضلوع في 4 و 5 تشرين عشر الفضاء وربي. إدراج غيض منحني مقص حادة وتشريح الجلد بعيدا عن الضلوع الكامنة والعضلات الوربية.
- التراجع الجلد مع أربعة الكامشات لفضح مربع 1.5 × 1.5 سم نافذة الجراحية (الشكل 2A). تأمين الكامشات إلى لوحة الفلين.
- تشريح وصولا الى الأضلاع باستخدام ملقط المنحنية، واستخدام طرف واحد من ملقط المنحنية لدخول التجويف الصدري.
- باستخدام طرف حادة مقص الدقيقة، استخدام أقل شفرة لدخول التجويف الصدري. جعل 0.5 سم شق بين الأضلاع وتكرار في الاتجاه المعاكس.
- باستخدام اثنين من الكامشات المتبقية، فتح القفص الصدري في المحور الأمامي الخلفي وتأمين الكامشات إلى لوحة الفلين (الشكل 2B). <لى> استخدام الملقط ذات الرؤوس حادة مقوسة في اليد اليسرى، فهم الرئة اليسرى وتهجير الجزء العلوي من الرئة اليسرى أفقيا ودون المستوى خلال بضع الصدر حتى يتعرض الشريان الرئوي الأيسر والقصبات الهوائية (الشكل 3A، B).
- عقد تحميل التيتانيوم الأوعية الدموية microclip قضيب في يده اليمنى مع الجسم من قضيب في راحة وغيض المنحني مشيرا بعيدا عن النخيل (الشكل 3C)، حرك طرف قضيب في الصدر على طول انحناء الجانب الخلفي من اليسار الرئة والقصبات الهوائية مقطع اليسار والشريان الرئوي (الشكل 3D).
- إزالة قضيب ولكن الحفاظ على الرئة اليسرى تراجع. فهم حادة طرف المقص الصغير مع اليد اليمنى وقطع القصبات الهوائية والشريان الرئوي البعيدة إلى مقطع وإزالة الرئة اليسرى (الشكل 3E).
- إزالة الكامشات الصدري.
- استخدام ملقط حادة منحنية لقرصة حتى 1 سم من الجلد أقل شأنا من incisiولكن على أعلى مستوى الحجاب الحاجز وإدراج G angiocatheter 24 عن طريق الجلد وداخل تجويف الصدر الأيسر (الشكل 4A، B).
- استخدام 5-0 خياطة البرولين لوضع اثنين من الغرز انقطاع في جميع أنحاء ال 4 و 5 الأضلاع عشر لإغلاق التجويف الصدري.
- إزالة الكامشات الجلد. استخدام مجموعتين من ملقط لتقريب الجلد على طول شق والغراء إغلاق الجلد.
- توصيل 3 مل بالتركيبة قفل المحقنة إلى angiocatheter وإزالة الهواء المتبقي من خلال تطبيق الشفط لطيف وسحب angiocatheter.
- الغراء شق الرقبة مغلقة تستخدم مجموعتين من ملقط كما كان من قبل.
5. ماوس الشام استئصال الرئة
- فضح الرئة اليسرى كما ورد في بروتوكول "ماوس استئصال الرئة". رفع القفص الصدري مع ملقط حادة منحنية للسماح للهواء في تجويف الصدر الأيسر (الشكل 5A، B).
- وضع G angiocatheter 24 في ثو الأيسرراكيك تجويف على النحو الوارد أعلاه والحرص على عدم جرح الرئة اليسرى.
- باستخدام 5-0 خياطة البرولين والحرص على عدم ثقب في الرئة (الشكل 5C)، ومكان اثنين من أطوال من مواد خياطة الجروح في 3 الثالث / 4 و 5 تشرين عشر / 6 interspaces عشر ضلع (الشكل 5D). وضع كل من أطوال مواد خياطة الجروح قبل ربط للتقليل من مخاطر ترك فتق الرئة. ربط مواد خياطة الجروح لجعل اثنين من غرز انقطاع (الشكل 5E).
- الغراء الجلد فوق شق الصدر، وإزالة الهواء المتبقي مع angiocatheter، والغراء شق الرقبة على النحو الوارد أعلاه.
6. الإنعاش، تسكين، والإنعاش
- إيقاف الأيزوفلورين، وإدارة 0.1 ملغم / كغم من البوبرينورفين و 0.5 مل من الطبيعي تحت الجلد المالحة.
- عند استئناف التنفس العفوي، وإزالة الأنبوب الرغامي.
- مراقبة الماوس حتى يصبح مرة أخرى المتنقلة. المشي resum عادةوفاق عدة دقائق بعد إزالة الأنبوب الرغامي.
- ضع الماوس في 27 ° C حاضنة (مرطب، 25٪ أكسجين) لاسترداد O / N.
ملاحظة: ونحن نضع عدة الكريات من طعام المبللة بالماء على الأرض قفص للساعة 24 الأولى بعد الجراحة. - إدارة 0.1 ملغم / كغم من البوبرينورفين عن طريق الحقن داخل الصفاق مرتين يوميا لمدة ثلاثة أيام بعد الجراحة. والحرص على عدم فتح موقع الجراحي عند التعامل مع الحيوانات.
7. ماوس المراقبة
- وزن الفئران في 1 و 3 و 5 و 7 أيام بعد الجراحة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
. ويرد مؤامرة من PNX وصورية تعمل الأوزان الماوس في الشكل 6 في أيدينا، والبقاء على قيد الحياة على الدوام 95-100٪ لكلا PNX وصورية استئصال الرئة. للحصول على وصف لكيفية الرئة اليمنى إعادة ينمو في هذا النموذج وبالطبع الوقت المتوقع، نشير للقارئ أن المخطوطات من غيبني 15 آخرون وانغ وآخرون (14).
يجب تجنب العديد من المخاطر المشتركة لتنفيذ الإجراءات صورية استئصال الرئة PNX الفار الفار وبنجاح.
التنبيب الرغامي: كثير من المحققين تعلم تقنية الماوس PNX صعوبة مع التنبيب الرغامي. كما الحنجرة الماوس الأمامية ويجب أن يتم تمرير القسطرة القصبة الهوائية من خلال الحبال الصوتية، فمن السهل للقسطرة بالمرور إلى المريء. كما هو موضح في الشكل 1A، ينبغي الزاوية القسطرة ذات الرؤوس صريحا كما الأمامي ممكن بعد curvaالبنية اللسان على طول خط الوسط ومن ثم تمريرها إلى القصبة الهوائية مع الضغط بلطف. موقف القسطرة منتصف القصبة الهوائية وينبغي تأكيد بصريا (الشكل 1B). ويمكن التأكد من وضع القصبة الهوائية عن طريق تحريك بلطف الجانب القسطرة إلى جانب ومراقبة لحركة القصبة الهوائية. تأكيد تحديد المواقع المناسبة من خلال مراقبة ارتفاع الصدر الثنائي. يوصف تقنية بديلة أدناه.
الجراحية الأنشاء الميدانية: شرك المشترك الثاني هو الفشل في خلق نافذة بضع الصدر كاف. كما هو موضح في الشكل 2A و 2B، يجب أن تكون نافذة بضع الصدر كبير والخلفي بما فيه الكفاية للسماح التصور الكافي من الشريان الرئوي الأيسر وترك القصبات الهوائية الجذعية الرئيسية. سوف المشغل عديم الخبرة جعل عادة بضع الصدر له صغيرة جدا، الأمامي أيضا، أو أقل شأنا من أن يتراجع بسهولة الرئة اليسرى والوصول إلى نقير الأيسر.
الأوعية الدموية كليب تطبيق وعلى: فشل لتطبيق كليب الأوعية الدموية بشكل صحيح سيؤدي إلى استنزاف. التحديد السليم للنقير أمر بالغ الأهمية (الشكل 3A). كما هو موضح في الشكل 3B و3C، وعندما تتم إزالة مقطع من صاحب بواسطة قضيب مقطع، نهاية مقطع هو مطاردة مع غيض من قضيب كليب والجسد من مقطع هو داخل الجسم من طرف قضيب منحني . سوف إغلاق طيف من مقبض قضيب إغلاق كليب. أي تغيير في كليب التوجه قد يؤدي إلى عدم كفاية إغلاق كليب. وبالتالي، يجب أن يتم تحميل مقطع جديد إذا مقطع يصبح طردت من قضيب. وبالمثل، ينبغي أن يكون الجر على الرئة اليسرى لطيف حتى لا المسيل للدموع والداني نقير إلى مقطع. غيض المنحني من قضيب ينبغي أن يتبع منحنى الجانب متفوقة من الرئة اليسرى لligate نقير الأيسر (الشكل 3D). وهناك خطأ شائع هو رباط من المريء. كما هو موضح في الشكل 3E
تجنب اليسار إصابة الرئة أثناء الشام PNX: ربما الوقوع في شرك الأكثر شيوعا من العاملين ذوي الخبرة وعديمي الخبرة ويترك إصابة الرئة خلال زائفة PNX. كما هو موضح في الشكل (5)، ويجب أن يكون المشغل الدقيق أثناء إغلاق بضع الصدر على عدم ثقب في الرئة مع إبرة خياطة أو السماح انحباس الرئة الفقري. من المهم لرفع الأضلاع عند وضع ضام، وG angiocatheter 24 لإخلاء الهواء، وخياطة (الشكل 5A-D). خلال إغلاق بضع الصدر، ووضع حد سواء خيوط خياطة قبل ربط يقلل من خطر انحباس الرئة (الشكل 5E). لدينا مختبر وعادة أربعة إجراءات صورية تليها أربعة PNX حتى نتمكن من تحويل الماوس صورية في الماوس PNX علينا أن تجرح الرئة اليسرى. وتجدر الإشارة إلى أنه ليست كل المجموعات أداء إخلاء المتبقية الأيسر الهواء الصدري. إلى حد علمنا، لا يوجد بيانات مقارنة PNX مع وبدون اخلاء الهواء المتبقية.
مع الممارسة والخبرة، ينبغي أن يتحقق كلا الإجراءات PNX وصورية في 10 دقيقة السماح لمدة تصل إلى عمليتين جراحيتين عشرات الماوس التي يتعين القيام بها في جلسة واحدة.
الشكل 1. ماوس التنبيب الرغامي. (A) يجب أن تكون القسطرة عن طريق الفم، القصبة الهوائية خط الوسط وتستخدم لخفض اللسان كما هو المتقدمة والزاوية الأمامية نحو الحنجرة. (ب) تحديد المواقع المناسبة للقسطرة في منتصف القصبة الهوائية وينبغي تأكيد بصريا."الهدف =" _ فارغة "> الرجاء النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2. ماوس بضع الصدر. (A) بعد شق وإطلاق الجلد من القفص الصدري الأساسي، يتم إنشاء 1.5 × 1.5 سم نافذة الجراحية تركزت على ال 4 و 5 تشرين الفضاء وربي. (B) بعد إنشاء بضع الصدر في ال 4 و 5 عشر ضلع الفضاء وربي، وتستخدم الكامشات لتصور الرئة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3. استئصال الرئة. (A) ول ترك يتم اغتنامها اونج مع ملقط المنحنية ورفعت خلال بضع الصدر للكشف عن نقير الأيسر (السهم الأبيض). (ب) مقطع الأوعية الدموية يجب جلوس مطاردة مع غيض من مقطع قضيب الأوعية الدموية وضمن طرف قضيب المنحني. (C) وقضيب وينبغي أن تعقد مع ابهام اليد اليمنى و 4 تشرين الاصبع مع الجسم من قضيب يجلس على طول كف اليد اليمنى مع طرف المنحني الزاوية بعيدا عن النخيل. (D) وبعد منحنى من الفص العلوي الأيسر، مقطع الأوعية الدموية يتم تطبيقها على نقير الأيسر. (E) كما رأينا التالية الأيسر PNX، المريء (بين السهام البيضاء) ويقع الخلفي عادل للنقير الأيسر (كليب الأوعية الدموية التي حددها مربع أبيض). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
وفاق / ftp_upload / 52294 / 52294fig4highres.jpg "/>
الشكل 4. التنسيب من Angiocatheter لإخلاء الهواء. (A) غيض angiocatheter يخترق الجلد. (B) يتم إدراج angiocatheter فوق الحجاب الحاجز إلى تجويف الصدر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 5. ماوس الشام استئصال الرئة. (A) أثناء الإجراء خدعة، رفع حافة الضلع قبل ضام التنسيب يقلل خطر إصابة الرئة. (ب) ينبغي ترك الكامشات في المكان كما أنها لPNX. (C) على حافة أدنى من القفص الصدري يجب رفع عند وضع G angiocatheter 24 تستخدم لنضح الهواء المتبقي بعد إغلاق الصدر وبشكل مفرطوينبغي أيضا رفع القفص الصدري لوضع خياطة الجلد جي. (D). (E) عن طريق وضع اثنين من خيوط خياطة على الموقع بضع الصدر قبل ربط، والتقليل من خطر انحباس الرئة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 6. المتوقعة لتخفيف الوزن. عن طريق خمسة فئران لكل مجموعة، أثبتنا أن 24 ساعة بعد الجراحة، والفئران PNX سوف تفقد في المتوسط 1.5 غرام (7.2٪)، والفئران صورية سوف تفقد في المتوسط 1.1 غرام (5.2٪). كلا المجموعتين على استعادة وزنهم قبل الجراحة بعد يوم بعد العملية الجراحية 3.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
قدمنا وصفا أكثر تفصيلا للإجراءات PNX PNX الفار الفار وصورية الإبلاغ عنها حتى الآن. لقد حققنا القارئ على بينة من العديد من المخاطر الشائعة أن المحققين تعلم الإجراء تواجه عادة، ولقد أوجز العديد من التقنيات التي طورها المختبر لدينا لتخفيف ضد هذه المزالق. غيرها من المختبرات التي تستخدم هذا النموذج قد وضعت تعديلات تقنية أخرى أو استخدام أدوات مختلفة. عند تقييم الاختلافات في التقنيات، وسوف المحققين الفردية أن تقرر ما إذا كانت هذه الاختلافات تؤثر بشكل كبير على النتائج التجربة.
وPNX نموذج الفأر من نمو الرئة التعويضي لديه العديد من المزايا على نماذج حيوانية أخرى للإصلاح الرئة والتجدد. أعداد كبيرة من الفئران المعدلة وراثيا جعل متاح تتبع النسب، الجين الإفراط في التعبير، وعامة من الجينات المستهدفة التجارب حذف قابلة للتحقيق بالنسبة لمعظم مختبرات (16). الثاني، مورتقنيات phometric لquantitating السنخية إعادة النمو هي موصوفة وصفا جيدا 17. ثالثا، فإن تكلفة اعتماد هذا النموذج هو المعتدلة. المعدات المتخصصة الوحيدة تتطلب هذه الإجراءات هي أدوات تطبيقها كليب الأوعية الدموية وغيض حادة كوهان-Vannas مقص الربيع. وسيتم توفير جميع المعدات الأخرى عادة في مجموعة الجراحية الماوس أو المتاحة من خلال مرفق الأساسية الجراحية الماوس. رابعا، من ذوي الخبرة، وPNX الماوس والإجراءات PNX صورية وسريعة نسبيا تسمح للعديد من العمليات الجراحية التي يتعين القيام بها في نفس اليوم. وأخيرا، فإن صغر حجم الماوس بالمقارنة مع النماذج الحيوانية الأخرى، ومتطلبات السكن متواضعة، والسهولة التي يمكن أن تكون ولدت أيضا أن يجعل من نموذج الفأر أسهل للحفاظ على من النماذج الحيوانية الأخرى.
هناك أيضا العديد من عيوب الماوس PNX نموذج بالمقارنة مع نماذج أخرى من تجديد الرئة. في حين أن النمو الماوس الرئة تعويضية يعتمد إلى حد كبير على امتداد 18 عاما، الرئة التعويضية تنموعشر في الثدييات العليا يعتمد على كل من امتداد وزيادة تدفق الدم الرئوي 19. منذ تجديد الرئة البشري هو على الأرجح أكثر مماثلة لآليات التجدد من هذه الثدييات العليا، ينبغي أن يكون المحقق دقيق استقراء النتائج في الماوس مباشرة إلى الإنسان. الماوس ميكانيكا الجهاز التنفسي مختلفة من الميكانيكا الجهاز التنفسي الإنسان. في البشر، ويرافق نهاية الزفير التي كتبها وقفة في التي لا يوجد تدفق الهواء. في نهاية الزفير في البشر، ويحتفظ التوظيف الرئة عن طريق الجر شعاعي من الامتثال منخفضة القفص الصدري. دورة الماوس الجهاز التنفسي تفتقر هذه وقفة الزفير مما أدى إلى كمية صغيرة من محاصرة الهواء بسبب زفير غير مكتملة. منذ الفأر لديه أعلى بكثير الصدر الامتثال القفص، وهذا هو محاصرة الهواء الذي يحافظ التوظيف الرئة 20. العيب الثالث من نموذج الفأر هو تشريح لها. منذ الفأر لديه فقط واحد فص الرئة اليسرى، جزئي الأيسر PNX من غير الممكن كما هو الحال في غيرهاالأنواع.
ويجب تجنب العديد من المخاطر الشائعة في العديد من المراحل الحاسمة لأداء PNX الماوس وإجراءات صورية بنجاح. هذه المراحل الحاسمة هي التنبيب داخل الرغامى، وخلق مجال العمليات الجراحية، وتطبيق كليب الأوعية الدموية، وتجنب إصابة الرئة اليسرى أثناء الجراحة صورية.
التشريح في أي الفئران التي تفشل في البقاء على قيد الحياة هذه العمليات الجراحية ضروري لتحسين التقنيات الجراحية في المستقبل. أدناه، فإننا استكشاف عدة صعوبات المشتركة وتوفير التقنيات البديلة التي قد تسفر عن درجة أكبر من النجاح.
الفشل في يقني؛ يدخل القنية بنجاح القصبة الهوائية: مختبرات أخرى تستخدم التعليق والإضاءة عبر القصبة الهوائية لالتنبيب الرغامي أورو-الذي يغني عن الحاجة إلى رؤية مباشرة 21.
صعوبة تصور النقير: خلق كبير، نافذة بضع الصدر وضعها بشكل صحيح هو أنني ضروريالدرجة n لتصور نقير الأيسر. إذا خلال التصور الإجراء غير كاف أو أن هناك مساحة كافية لادراج تطبيقها كليب الأوعية الدموية، ويجب أن تطول لبضع الصدر والكامشات تعديل أوضاعها. يجب أن يكون هناك تجمع الدم أثناء هذا الإجراء. إذا كان هناك، ينبغي للمحقق تحديد ما اذا كان تم وضع الكثير من التوتر على الرئة اليسرى وتمزق الشريان الرئوي الأيسر.
النزيف بعد إزالة اليسار الرئة: يجب أن يكون هناك نزيف قليلا أثناء هذا الإجراء. مقطع الأوعية الدموية تحميلها أو تطبيقها بشكل غير صحيح هو السبب الأكثر شيوعا للنزف، ويجب أن يتم التخلص ماوس مع نزيف من الشريان الرئوي الأيسر لها. إذا كان هذا النوع من النزيف يحدث والتحميل الصحيح من مقطع الأوعية الدموية وتطبيق الشركة، ينبغي تأكيد حتى الضغط أثناء التطبيق قبل محاولة الإجراء مرة أخرى. وبالمثل، والموت بعد العملية الجراحية مع النتيجة من الدم في الصدر الأيسر هوالأرجح بسبب التطبيق غير السليم كليب الأوعية الدموية. بديلا لأسلوبنا كليب الأوعية الدموية هو رباط مع خياطة الحرير.
اليسار إصابة الرئة أثناء الجراحة الشام: في نواح كثيرة، وإجراء صورية يتطلب درجة عالية من المهارة الجراحية من الإجراء PNX. يمكن إصابة الرئة اليسرى خلال بضع الصدر، خلال ادراج G angiocatheter 24 أدناه موقع الجراحية، أو أثناء إغلاق بضع الصدر. اعتمادا على الحاجة التجريبية، يمكن تحويلها الفئران خضوعه لعملية جراحية صورية لPNX. سبب آخر محتمل للاصابة الرئة اليسرى هو حبس فتق الرئة اليسرى أثناء إغلاق الموقع بضع الصدر. ينبغي إما الموت الرحيم الفئران الشام مع إصابة الرئة اليسرى أو تغيرت الإجراء من جراحي لPNX.
ضيق في التنفس وبعد الاسترداد: الضائقة التنفسية بعد الشفاء من التخدير يمكن أن تأتي من تورم في المزمار بسبب التنبيب الصدمة، وعدم كفاية السيطرة على الألم، أو unrecoإصابة الرئة gnized. بشكل عام، ما لم الضائقة يعفى من إدارة الدواء الألم إضافي، يجب أن يتم التخلص من الحيوانات وتسبب تحديدها. محاولات التنبيب متعددة يمكن أن يؤدي إلى الحنجرة أو تحت المزمار تورم مع صعوبة الناتجة مع إلهام. على التشريح، وعدم وجود الحنجرة افتتاح براءة يكون واضحا بعد فصل المزمار من البلعوم السفلي. يتم وصف أساليب بديلة لالقصبة الهوائية القسطرة أعلاه. السيطرة على الألم غير كافية يمكن معالجتها بجرعات إضافية من المسكنات. كما ذكر أعلاه، غير مقصودة إصابة الرئة اليسرى هو شائع عندما تعلم الإجراء الجراحي زائفة، وإذا غير المعترف بها، يمكن أن يؤدي إلى ضيق في التنفس وتغيير النتائج التجريبية.
الإفراط في تخفيف الوزن والجفاف: الفئران التي تعاني من نقص في الوزن المفرطة أو الجفاف بعد الجراحة قد يكون له المريء و ligated، وعدم كفاية السيطرة على الألم، أو عدم القدرة على إطعام أو الشراب. المريء يكمن ييجب الاشتباه أوست الخلفي للنقير الأيسر، وربط المريء في أي الماوس المجففة. يجب يشتبه السيطرة على الألم غير كافية في الفئران مع انتصاب الشعر، وزيادة العدوانية، أو خفض التمشي. يمكن أن بضع الصدر منع الفئران من الوصول إلى الغذاء والماء تعليق من السقف القفص في أول يوم بعد العملية الجراحية. والفئران التي لا تأكل وتشرب بعد الشفاء من التخدير تصبح فقط أكثر ضعيفة والمجففة. ننصح بوضع الطعام مبلل على أرضية القفص لمدة 24 ساعة بعد الجراحة.
وفي الختام، فإن النموذج استئصال الرئة الماوس للنمو الرئة التعويضي هو نموذج قيما لتوضيح الآليات الكامنة وراء تجديد الرئة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 6 inch Vascular clip applicator | Teleflex Medical (WECK) | 137062 | |
| Horizon small titanium red clip | Teleflex Medical (WECK) | 1201 | |
| Narrow pattern 12 cm curved forceps | Fine Science Tools | 11003-12 | |
| Curved serrated 10 cm Graefe forceps | Fine Science Tools | 11052-10 | |
| Castroviejo needle holder | Fine Science Tools | 12565-14 | |
| Straight 9 cm Strabismus scissors (blunt tip) | Fine Science Tools | 14075-09 | |
| Straight 8.5 cm hardened fine scissors | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Straight, blunt tip Cohan-Vannas spring scissors | Fine Science Tools | 15000-12 | |
| Skin glue | Gluture | 32046 | |
| 22 G Angiocatheter | |||
| 24 G Angiocatheter | |||
| 3 ml Luer lock syringe | |||
| 4 Short retractors | |||
| 2 Long retractors | |||
| 5-0 Prolene on curved cutting needle | Ethicon | 8698G | |
| 0.5 ml Syringe on 27 G needle | |||
| Normal saline | |||
| Buprenorphine | |||
| Press-n-Seal wrap | Glad Products Company | ||
| 12 x 12 inch Cork board stack | Office Depot | ||
| 70% Ethanol | |||
| Betadine | |||
| Mouse ventilator | Hugo Sachs Elektronnik | Minivent Type 845 | |
| Isoflurane vaporizer | OHMEDA | Excel 210 SE | |
| Artificial tear ointment | Puralube | NDC: 17033-211-38 |
References
- Strueby, L., Thebaud, B. Advances in bronchopulmonary dysplasia. Expert review of respiratory medicine. , (2014).
- Donn, S. M., Sinha, S. K. Recent advances in the understanding and management of bronchopulmonary dysplasia. Seminars in fetal & neonatal medicine. 14, 332 (2009).
- Molen, T., Miravitlles, M., Kocks, J. W. COPD management: role of symptom assessment in routine clinical practice. International journal of chronic obstructive pulmonary disease. 8, 461-471 (2013).
- Seifert, A. W., et al. Skin shedding and tissue regeneration in African spiny mice (Acomys). Nature. 489, 561-565 (2012).
- Vidal, P., Dickson, M. G. Regeneration of the distal phalanx. A case report. Journal of hand surgery. 18, 230-233 (1993).
- Potter, P. C., Levine, M. H. Bone Regeneration Following Chronic Suppurative Osteitis of the Distal Phalanx. Annals of surgery. 80, 728-729 (1924).
- McKim, L. H. Regeneration of the Distal Phalanx. Canadian Medical Association journal. 26, 549-550 (1932).
- Brown, L. M., Rannels, S. R., Rannels, D. E. Implications of post-pneumonectomy compensatory lung growth in pulmonary physiology and disease. Respir Res. 2, 340-347 (2001).
- Holder, N. Regeneration and compensatory growth. British medical bulletin. 37, 227-232 (1981).
- Hsia, C. C. Lessons from a canine model of compensatory lung growth. Curr Top Dev Biol. 64, 17-32 (2004).
- Butler, J. P., et al. Evidence for adult lung growth in humans. N Engl J Med. 367, 244-247 (2012).
- Konerding, M. A., et al. Spatial dependence of alveolar angiogenesis in post-pneumonectomy lung growth. Angiogenesis. 15, 23-32 (2012).
- Kho, A. T., Liu, K., Visner, G., Martin, T., Boudreault, F. Identification of dedifferentiation and redevelopment phases during postpneumonectomy lung growth. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305, 542-554 (2013).
- Wang, W., Nguyen, N. M., Guo, J., Longitudinal Woods, J. C. Noninvasive Monitoring of Compensatory Lung Growth in Mice after Pneumonectomy via (3)He and (1)H Magnetic Resonance Imaging. Am J Respir Cell Mol Biol. 49, 697-703 (2013).
- Gibney, B. C., et al. Detection of murine post-pneumonectomy lung regeneration by 18FDG PET imaging. EJNMMI research. 2, 48 (2012).
- Rawlins, E. L., Perl, A. K. The a'MAZE'ing world of lung-specific transgenic mice. Am J Respir Cell Mol Biol. 46, 269-282 (2012).
- Ochs, M., Muhlfeld, C. Quantitative microscopy of the lung: a problem-based approach. Part 1: basic principles of lung stereology. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305, L15-22 (2013).
- Ysasi, A. B., et al. Effect of unilateral diaphragmatic paralysis on postpneumonectomy lung growth. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305, L439-445 (2013).
- Dane, D. M., Yilmaz, C., Estrera, A. S., Hsia, C. C. Separating in vivo mechanical stimuli for postpneumonectomy compensation: physiological assessment. Journal of applied physiology. 114, 99-106 (2013).
- Mortola, J. P., Magnante, D., Saetta, M. Expiratory pattern of newborn mammals. Journal of applied physiology. 58, 528-533 (1985).
- MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. An improved simple method of mouse lung intubation. Journal of applied physiology. 106, 984-987 (2009).
