Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Muis Pneumonectomie Model van Compenserende Lung Groei

Published: December 17, 2014 doi: 10.3791/52294

Introduction

De hoofdfunctie van de long te voorzien van zuurstof en kooldioxide uitwisseling tussen een organisme en de atmosfeer. Bij de mens, een gastheer van aangeboren en verworven voorwaarden leiden tot een verminderde oppervlakte long gebied, wat resulteert in verminderde longfunctie. Dwz long - hoewel een groot aantal therapieën zoals inhalatiecorticosteroïden, bronchodilatoren, extra zuurstof en chronische mechanische ventilatie wordt gebruikt om de gevolgen van verminderde longfunctie 1-3 beperken, zou de ideale therapie voor deze aandoeningen hergroei van functionele longweefsel bevorderen regeneratie.

Zoogdieren weefselregeneratie is goed gedocumenteerd. De Afrikaanse Stekelmuizen kunnen grote delen van de huid te regenereren zonder littekenvorming 4. De distale falanx in de mens kan regenereren na letsel of amputatie 5-7. Na pneumonectomie (PNX), compenserende long groei optreedt bij muizen 8, ratten 9, doengs 10 en 11 mens. Per definitie, compenserende long groei gaat het niet alleen uitbreiding van bestaande luchtruim, maar opnieuw septatie van deze vergroot luchtruim met de uitbreiding van de bijbehorende microcirculatie 12. Genexpressie analyse heeft aangetoond dat dit model recapituleert veel van de signalering evenementen van longontwikkeling 13. Vier weken na muis PNX, alveolaire oppervlakte gelijk is aan die van schijn geopereerde dieren 14. In dit manuscript, beschrijven we de muis PNX en sham PNX procedures.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

OPMERKING: Animal gebruik statement: Alle procedures in deze studie werden uitgevoerd met toestemming en volgens de richtlijnen van de Institutional Animal Gebruik en onderhoud Comité (IACUC) in Cincinnati Children's Hospital. Acht weken oude C57BL / 6J mannelijke muizen werden verkregen van Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME) en men acclimatiseren gedurende één week vóór gebruik. Tot de operatie werden de dieren gehuisvest in een pathogeenvrije barrière-faciliteit en voorzien geautoclaveerd chow en gefilterd water ad libdium. Elke muis kooi werd geleverd met een toegewijde lucht en water, en de kamers werden op een 12 uur per dag-nacht cyclus gehandhaafd. Na herstel van een operatie, werden muizen gehouden in kooien met gefilterd tops, mits geautoclaveerd chow advertentie libidum, en gefilterd water uit een fles water.

1. Voorbereiding van de instrumenten

  1. Maak 6 huid retractors behulp van paperclips en pennen. Twist rechtgetrokken paperclips op de schachten van papier pennen, leave een 5 cm rechte staaldraad aan één uiteinde en een eenmalige 0,5 cm "U" vormige haak aan het einde van de draad.
  2. Maak ongeveer 15 x 15 cm in het vierkant operatielakens gebruik van plastic wrap. Bereid een dressing per muis. Plaats een papieren toren in tussen elke wrap.
  3. Steriliseer alle chirurgische instrumenten met een stapel van 12 x 12 inch kurk tegels, gaas en wattenstaafje swabs.

2. Muis Voorbereiding

  1. Induceren anesthesie met 2% isofluraan. Wegen dier.
  2. In een speciale chirurgische preparaat scheren linker thorax-halsgebied met elektrische scheerapparaat.
  3. Breng een druppel van de kunstmatige traan zalf ogen van de muis.
  4. Ontsmet nek en linker thorax met chloorhexidine en isopropylalcohol. Herhaal tweemaal.

3. Mouse Oro-tracheale intubatie en mechanische ventilatie

  1. Hebben een niet-steriele chirurgische technicus plaats de muis rugligging in de voorverwarmde chirurgisch gebied.
  2. Bevestigen diepte van de anesthesie door het documenteren van het ontbreken van een antwoord op de poot knijpen.
  3. Na het wassen van de handen en het aantrekken van chirurgische kleding, masker en hoed, don steriele chirurgische handschoenen.
  4. Na draperen en met behulp van aseptische techniek, maak een 1 cm verticale incisie over het voorafgaande midden-hals aan het strottenhoofd bloot. Licht inschuiven band spieren gebogen gekartelde 10 cm pincet en het strottenhoofd en luchtpijp bloot door het verspreiden van de band spieren met de punt van een rechte schaar.
  5. Mondeling plaats een 22 G met stompe tip angiocatheter in het midden van de luchtpijp (Figuur 1A) en visueel te bevestigen plaatsing (Figuur 1B). Onderhouden anesthesie en ventileren met behulp van 1-3% isofluraan door knaagdieren ventilator (225 ul per slag; 200 stookt per min). Gebruik een druk limiet van 15 cm H 2 O.

4. Muis Pneumonectomie

  1. Leg de muis in de rechter laterale decubitus positie rug van de muis gerichtde operator (links boven). Gebruik een zelfdichtende plastic folie als een steriel laken. Snijden door het laken, gebruiken stompe getipt gebogen schaar om een 2 cm lange snede evenwijdig met de ribben bij het ​​4 e en 5 e intercostale ruimte. Steek de stompe punt gebogen schaar en ontleden de huid weg van de onderliggende ribben en intercostale spieren.
  2. Trek de huid met vier retractors om een vierkant bloot 1,5 x 1,5 cm chirurgische venster (Figuur 2A). Bevestig de oprolmechanismen aan de kurk boord.
  3. Ontleden tot op ribben met behulp van gebogen pincet, en gebruik een tip van de gebogen tang om de borstholte te voeren.
  4. Met behulp van de stompe punt van micro-schaar, gebruikt u de onderste mes om de borstholte te voeren. Maak een 0,5 cm incisie tussen de ribben en herhaal in tegengestelde richting.
  5. Met behulp van de twee resterende retractors, open de thorax in de anterior-posterior-as en de veilige de oprolmechanismen aan de kurk boord (Figuur 2B).
  6. <li> Het gebruik van gebogen stompe getipt tang in de linker hand de linker long en verdringen het bovenste gedeelte van de linker long lateraal en inferiorly door de thoracotomie totdat de linker longslagader en bronchus worden blootgesteld (figuur 3A, B).
  7. Houdt de belaste titanium vasculaire microclip applicator in de rechterhand met het lichaam van de applicator in de palm en gebogen tip weg richt vanuit de palm (Figuur 3C), schuif de applicator tip in de thorax langs de kromming van het achterste deel van de linker long en clip de linker bronchus en de longslagader (Figuur 3D).
  8. Verwijder de applicator maar houd de linker long ingetrokken. Pak de stompe punt van micro-schaar met de rechterhand en snijd de bronchus en longslagader distaal van de clip en verwijder de linker long (figuur 3E).
  9. Verwijder de rib retractors.
  10. Gebruik de gebogen stompe pincet te knijpen tot 1 cm van de huid inferieur aan de incisiop maar boven het niveau van het membraan en plaats een 24 G angiocatheter door de huid en in de linker borstholte (Figuur 4A, B).
  11. Gebruik 5-0 Prolene hechtdraad twee onderbroken hechtingen rond de 4de en 5de ribben plaatsen naar de borstholte gesloten.
  12. Verwijder de huid retractors. Gebruik twee sets pincetten om de huid langs de lengte van de incisie benaderen en lijm de huid gesloten.
  13. Sluit een 3 ml luerlockspuit de angiocatheter en verwijder resterende lucht door het toepassen van zachte zuigkracht en het intrekken van de angiocatheter.
  14. Lijm de nek incisie gesloten met twee pincetten als voorheen.

5. Mouse Sham Pneumonectomie

  1. Expose de linker long zoals vermeld in "Muis Pneumonectomie" protocol. Til de ribbenkast met gebogen stompe tang om lucht in de linker borstholte (figuur 5A, B).
  2. Plaats een 24 G angiocatheter in de linker thoRacic holte zoals hierboven zorg dat u de linker long niet te verwonden.
  3. Met behulp van een 5-0 prolene hechtdraad en zorg dat u de long (figuur 5C) niet te doorboren, plaatst u twee lengtes van hechtmateriaal in de 3 e / 4 e en 5 e / 6 e rib tussenruimtes (Figuur 5D). Plaats beide lengten hechtmateriaal alvorens binden aan het risico van linker long hernia verminderen. Bind het hechtmateriaal tot twee onderbroken steken (figuur 5E) te maken.
  4. Lijm de huid over de thoracale incisie, verwijder resterende lucht met de angiocatheter, en lijm de nek incisie als hierboven.

6. Reanimatie, analgesie, en Recovery

  1. Schakel de isofluraan en toedienen van 0,1 mg / kg buprenorfine en 0,5 ml normale zoutoplossing subcutaan.
  2. Wanneer spontane ademhaling hervat, verwijder de endotracheale tube.
  3. Observeren muis totdat het weer ambulant. Wandelen meestal Resumes enkele minuten nadat de endotracheale tube.
  4. Plaats de muis in een 27 ° C incubator (bevochtigde, 25% zuurstof) om O herstellen / N.
    LET OP: Wij plaatsen verschillende pellets van chow bevochtigd met water op de vloer van de kooi voor de eerste 24 uur na de operatie.
  5. Dien 0.1 mg / kg buprenorfine door intraperitoneale injectie tweemaal daags gedurende drie dagen na de operatie. Zorg ervoor dat u de operatiewond te openen bij de omgang met dieren.

7. Mouse Monitoring

  1. Weeg muizen 1, 3, 5 en 7 dagen na de operatie.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

. Een perceel van PNX en schijngeopereerde muis gewichten wordt gegeven in Figuur 6 In onze handen, overleving is consequent 95-100% voor zowel PNX en sham pneumonectomie. Voor een beschrijving van de wijze waarop de rechter long opnieuw groeit in dit model en het verwachte tijdsverloop, verwijzen we de lezer naar manuscripten van Gibney et al. 15 en Wang et al. 14

Een aantal gemeenschappelijke valkuilen moet vermeden worden om de muis PNX en muis schijnvertoning pneumonectomie procedures met succes uit te voeren.

Luchtpijpintubatie: Veel onderzoekers leren van de muis PNX techniek hebben moeite met endotracheale intubatie. Als de muis larynx is anterior en de endotracheale katheter wordt afgelegd door de stembanden, is het gemakkelijk voor de katheter te gaan in de slokdarm. Zoals getoond in figuur 1A, moet de stompe katheter wens gebogen voorste mogelijk na de Curvatuur van de tong over de middellijn en vervolgens in de trachea met zacht druk. Mid-tracheale katheter positie moeten visueel worden bevestigd (Figuur 1B). Endotracheale plaatsing kan worden bevestigd door zachtjes bewegen van de katheter zijdelings en observeren voor beweging van de luchtpijp. De juiste plaatsing wordt bevestigd door het observeren van bilaterale borst opkomst. Een andere techniek wordt hieronder beschreven.

Chirurgische veld Creation: Een tweede voorkomende valkuil is het niet om een adequate thoracotomie venster te maken. Zoals geïllustreerd in figuur 2A en 2B, moet de thoracotomie venster voldoende groot en posterior zijn om een adequate weergave van de linker longslagader en linker hoofdstam bronchus mogelijk. De onervaren operator zal vaak zijn thoracotomie te klein, te anterior, of te minderwaardig om gemakkelijk terug te trekken van de linker long en toegang tot de linker hilus maken.

Vasculaire Clip Applicatiop: Als u de vasculaire clip correct toe te passen zal resulteren in verbloeding. Correcte identificatie van de hilus kritisch (figuur 3A). Zoals aangetoond in figuur 3B en 3C, wanneer de klem wordt verwijderd uit de houder door de clip applicator, het einde van de clip is gelijk met het uiteinde van de clip applicator en het lichaam van de klem binnen het lichaam van de gekromde aanbrengpunt . Zachte sluiting van de applicator handvat zal de clip te sluiten. Elke wijziging in de clip oriëntatie kan resulteren in onvoldoende sluiting clip; Daarom moet er een nieuwe clip worden geladen als een clip los van de houder van de applicator. Evenzo moet tractie op de linker long zacht om niet de hilus proximaal van de clip scheuren. Het gebogen uiteinde van de applicator moet de kromme van de superieure aspect van de linker long volgen naar links hilus (Figuur 3D) ligeren. Een veel voorkomende fout is ligatuur van de slokdarm. Zoals aangetoond in figuur 3E

Het vermijden van Left longbeschadiging Tijdens Sham PNX: Waarschijnlijk de meest voorkomende valkuil van ervaren en onervaren bestuurders wordt overgelaten longbeschadiging tijdens schijnvertoning PNX. Zoals aangetoond in figuur 5, moet de exploitant voorzichtig bij thoracotomie sluiting zijn de longen niet te doorboren met de hechtdraad naald of beknelling van hernia long mogelijk te maken. Het is belangrijk om de ribben te tillen bij het ​​plaatsen van het oprolmechanisme, de 24 G angiocatheter voor luchtafvoer, en de hechtdraad (figuur 5A-D). Tijdens thoracotomie sluiting, het plaatsen van beide strengen van hechtdraad voordat koppelverkoop minimaliseert het risico op long- beknelling (Figuur 5E). Ons laboratorium zal vier schijnvertoning procedures vaak te voeren gevolgd door vier PNX zodat we kunnen een schijnvertoning muis om te zetten in een PNX muis moeten we verwonden de linker long. Opgemerkt zij dat niet alle groepen uitvoeren evacuatie resterende linker thoracale lucht. Om het beste van onze kennis, geen gegevens bestaan ​​vergelijken PNX met en zonder resterende lucht evacuatie.

Met oefening en ervaring moeten zowel PNX en sham procedures worden bereikt in 10 minuten waardoor maximaal twee dozijn muis operaties in één sessie worden uitgevoerd.

Figuur 1
Figuur 1. Mouse Luchtpijpintubatie. (A) De mondelinge-tracheale katheter middellijn en gebruikt om de tong te drukken als het geavanceerde en schuin naar voren naar de larynx (B) De juiste plaatsing van de katheter in het midden luchtpijp zijn. Moet visueel worden bevestigd."Target =" _ blank "> Klik hier om een ​​grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

Figuur 2
Figuur 2. Mouse thoracotomie. (A) Na incisie en het vrijkomen van de huid van de onderliggende borstkas, een 1,5 x 1,5 cm chirurgische venster wordt gecreëerd gericht op de 4 e en 5 e intercostale ruimte. (B) Na het ontstaan ​​van de thoracotomie in de 4 e en 5 ste rib intercostaalruimte, worden retractors gebruikt om de longen te visualiseren. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

Figuur 3

Figuur 3. Pneumonectomie. (A) De linker ung wordt vastgepakt met gebogen pincet en opgeheven door de thoracotomie links hilum (witte pijl) onthullen. (B) De vasculaire clip moet gelijk zijn met de tip van de vasculaire clip applicator en binnen de gebogen applicator tip zitten. (C) De applicator moet worden gehouden met de rechterduim en 4de vinger met het lichaam van de applicator zitten langs de palm van de rechterhand met de gebogen tip schuin weg van de palm. (D) Naar aanleiding van de curve van de linker kwab, het vasculaire clip wordt toegepast op de linker hilus. (E) Zoals te zien volgende links PNX, wordt de slokdarm (tussen de witte pijlen) gelegen juist achter de linker hilus (vasculaire clip geschetst door witte doos). Klik hier om een grotere versie van te bekijken dit cijfer.

es / ftp_upload / 52.294 / 52294fig4highres.jpg "/>
Figuur 4. Plaatsing van angiocatheter Om de lucht. (A) De angiocatheter tip doorboort de huid. (B) De angiocatheter wordt boven het middenrif in de borstholte ingebracht. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

Figuur 5
Figuur 5. Mouse Sham pneumonectomie. (A) Tijdens de sham procedure, het opheffen van de rib rand voorafgaand aan plaatsing oprolmechanisme minimaliseert risico op longbeschadiging. (B) De retractors moet op zijn plaats blijven als ze zijn voor de PNX. (C) De inferieure rand van de ribbenkast moet worden opgeheven bij het plaatsen van de 24 G angiocatheter gebruikt om de resterende lucht na de sluiting van de thorax en al te zuigening huid. (D) De ribbenkast moet ook worden opgeheven voor hechtdraad plaatsing. (E) Door het plaatsen van twee strengen van hechtdraad over de thoracotomie site voordat koppelverkoop, het risico op long- beknelling wordt geminimaliseerd. Klik hier om een grotere versie van te bekijken dit cijfer.

Figuur 6
Figuur 6. Verwachte Weight Loss. Met behulp van de vijf muizen per groep, hebben we aangetoond dat 24 uur na de operatie, zal PNX muizen een gemiddelde van 1,5 g (7,2%) te verliezen, en sham muizen zullen een gemiddelde van 1,1 g (5,2%) te verliezen. Beide groepen weer hun preoperatieve gewicht door postoperatieve dag 3.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

We hebben de meest gedetailleerde beschrijving van de muis PNX en muis schijnvertoning PNX procedures gemeld to-date. We hebben de lezer op de hoogte van een aantal van de gemeenschappelijke valkuilen die de onderzoekers leren van de procedure doorgaans tegenkomen gemaakt, en we hebben een aantal technieken ontwikkeld door ons laboratorium te verzachten tegen deze valkuilen geschetst. Andere laboratoria met behulp van dit model kunnen andere techniek aanpassingen hebben ontwikkeld of maken gebruik van verschillende instrumenten. Bij het beoordelen van verschillen in technieken, zullen individuele onderzoekers moeten beslissen of deze verschillen experiment resultaten van grote invloed zijn.

De muis PNX model compenserende longgroei heeft vele voordelen boven andere diermodellen long herstel en regeneratie. De grote aantallen transgene muizen beschikbaar make lineage tracing, gen over-expressie, en algemeen van gerichte gendeletie experimenten haalbaar voor de meeste laboratoria 16. Ten tweede, morphometric technieken voor het kwantificeren van alveolaire hergroei zijn goed beschreven 17. Ten derde, de kosten van goedkeuring dit model is gematigd. De enige gespecialiseerde apparatuur deze procedures nodig is vasculaire clip applicators en stompe punt Cohan-Vannas voorjaar schaar. Alle andere apparatuur wordt er doorgaans voorzien in een muis chirurgische kit of beschikbaar via een muis chirurgische kern faciliteit. Ten vierde, met ervaring, de muis PNX en sham PNX procedures worden relatief snel waardoor voor vele operaties uit te voeren op dezelfde dag. Tenslotte, de kleine afmeting van de muis vergeleken met andere diermodellen bescheiden woonwensen en het gemak waarmee ze kunnen ook worden gekweekt maken het muismodel gemakkelijker te onderhouden dan andere dierlijke modellen.

Er zijn ook verschillende nadelen aan de muis PNX-model in vergelijking met andere modellen van long regeneratie. Terwijl muis compenserende long groei is grotendeels afhankelijk van stretch 18, compenserende long groeiene in hogere zoogdieren is afhankelijk van zowel de stretch en een verhoogde pulmonale bloedstroom 19. Aangezien menselijke long regeneratie waarschijnlijk vergelijkbaar met de regeneratieve mechanismen van deze hogere zoogdieren, dient de onderzoeker voorzichtig extrapoleren van de resultaten in de muis rechtstreeks op de mens. Muis ademhalingsmechanica zijn anders dan de menselijke luchtwegen mechanica. Bij mensen wordt end uitademing gepaard met een pauze waarin er geen luchtstroom. Eind uitademing bij mensen, wordt longfunctie onderhouden door de radiale geleiding van een compliance borstkas. De muis ademhalingscyclus ontbreekt deze expiratoire pauze resulteert in een kleine hoeveelheid lucht trapping door onvolledige uitademing. Aangezien de muis een veel hogere naleving borstkas is deze lucht trapping die longfunctie 20 handhaaft. Het derde nadeel van het muismodel is de anatomie. Aangezien de muis slechts één linker long kwab, gedeeltelijke links PNX niet mogelijk als in anderespecies.

Een aantal gemeenschappelijke valkuilen moet worden vermeden bij verschillende kritieke momenten om de muis PNX en sham procedures met succes uit te voeren. Deze kritieke momenten zijn endotracheale intubatie, creatie van het chirurgische veld, vasculaire clip applicatie, en het vermijden van de linker long letsel tijdens schijnvertoning chirurgie.

Autopsie van muizen die niet aan deze chirurgische procedures overleven cruciaal belang om chirurgische technieken in de toekomst. Hieronder oplossen we een aantal gemeenschappelijke problemen en zorgen voor alternatieve technieken die een grotere mate van succes kan opleveren.

Het niet succesvol Canule de luchtpijp: Andere laboratoria maken gebruik van schorsing en trans-tracheale verlichting voor oro-tracheale intubatie die de noodzaak voor directe visualisatie 21 ondervangt.

Moeilijkheidsgraad Visualiseren hilum: Het creëren van een groot, juist geplaatste thoracotomie venster is nodig in Om de linker hilus visualiseren. Indien tijdens de procedure visualisatie onvoldoende of er onvoldoende ruimte voor het inbrengen van de vasculaire klem applicators, dient de thoracotomie worden verlengd en oprolmechanismen verplaatst. Er mag geen pooling van bloed tijdens deze procedure zijn. Als er moet de onderzoeker bepalen of hij plaatst teveel spanning op de linker long en scheuren de linker longslagader.

Bloeden na het verwijderen van de linker long: Er moet weinig bloeden tijdens deze procedure. Een verkeerd geladen of toegepast vasculaire clip is de meest voorkomende oorzaak van bloeden, en een muis met bloeden uit haar linker longslagader moet worden geëuthanaseerd. Als dit soort bloeden optreedt, een goede plaatsing van de vasculaire clip en de toepassing van stevige, gelijkmatige druk tijdens de applicatie moet worden bevestigd voordat u opnieuw probeert de procedure. Evenzo postoperatieve dood met de bevinding van bloed in de linker borstwaarschijnlijk als gevolg van onjuiste vasculaire clip toepassing. Een alternatief voor onze vasculaire clip techniek is ligatuur met zijden hechtdraad.

Links Lung Injury Tijdens Sham Chirurgie: In veel opzichten is de schijnvertoning procedure vereist een hogere mate van chirurgische vaardigheden dan de PNX procedure. De linker long kan worden verwond tijdens thoracotomie, tijdens het inbrengen van de 24 G angiocatheter onder de operatieplaats of bij het sluiten van de thoracotomie. Afhankelijk van de experimentele behoefte, kunnen muizen die een schijnvertoning chirurgie worden omgezet naar PNX. Een andere mogelijke oorzaak van de linker long letsel is opsluiting van hernia linker long tijdens thoracotomie website sluiting. Sham muizen met links longbeschadiging moet ofwel worden gedood of hebben hun chirurgische ingreep veranderd in PNX.

Respiratory Distress Na Recovery: distress na herstel van de anesthesie van de ademhalingswegen kan afkomstig zijn van zwelling van de glottis gevolg van traumatische intubatie, onvoldoende pijnbestrijding, of unrecognized longbeschadiging. In het algemeen, tenzij de nood verlicht door toediening van extra pijnmedicatie, dieren moeten worden gedood en de oorzaak bepaald. Meerdere intubatie pogingen zou kunnen resulteren in glottisch of subglottische zwelling met daaruit voortvloeiende problemen met inspiratie. Bij necropsie zal ontbreken van een octrooi glottisopening duidelijk nadat de glottis wordt gescheiden van de hypofarynx. Alternatieve benaderingen endotracheale canule zijn hierboven beschreven. Onvoldoende pijnbestrijding kan worden aangepakt met extra doses pijnstillers. Zoals hierboven opgemerkt, onbedoelde links longbeschadiging is gebruikelijk bij het leren van de sham chirurgische procedure is en herkend, kan leiden tot ademnood en veranderen van experimentele resultaten.

Overmatig gewichtsverlies en uitdroging: Muizen die overmatig gewichtsverlies of uitdroging ervaren na de operatie kan een afgebonden slokdarm, onvoldoende pijnbestrijding, of een onvermogen om zich te voeden of te drinken hebben. De slokdarm ligt just posterior naar links hilum, en ligatie van de slokdarm moet worden vermoed bij gedehydrateerde muis. Inadequate pijnbestrijding moet worden vermoed bij muizen met piloerectie, verhoogde agressiviteit, of verminderd ambulantie. De thoracotomie kan voorkomen dat muizen van het bereiken van voedsel en water opgehangen aan de kooi dak op de eerste dag na de operatie. Muizen die niet eten en drinken na het herstel van de anesthesie zal alleen maar meer zwak en uitgedroogd. We raden u bevochtigd voer over de vloer van de kooi 24 uur na de operatie.

Kortom, de muis pneumonectomie model van compenserende long groei is een waardevol model voor het ophelderen van de onderliggende mechanismen van de longen regeneratie.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
6 inch Vascular clip applicator Teleflex Medical (WECK) 137062
Horizon small titanium red clip Teleflex Medical (WECK) 1201
Narrow pattern 12 cm curved forceps Fine Science Tools 11003-12
Curved serrated 10 cm Graefe forceps Fine Science Tools 11052-10
Castroviejo needle holder Fine Science Tools 12565-14
Straight 9 cm Strabismus scissors (blunt tip) Fine Science Tools 14075-09
Straight 8.5 cm hardened fine scissors Fine Science Tools 14090-09
Straight, blunt tip Cohan-Vannas spring scissors Fine Science Tools 15000-12
Skin glue Gluture 32046
22 G Angiocatheter
24 G Angiocatheter
3 ml Luer lock syringe
4 Short retractors
2 Long retractors
5-0 Prolene on curved cutting needle Ethicon 8698G
0.5 ml Syringe on 27 G needle
Normal saline
Buprenorphine
Press-n-Seal wrap Glad Products Company
12 x 12 inch Cork board stack Office Depot
70% Ethanol
Betadine
Mouse ventilator Hugo Sachs Elektronnik Minivent Type 845
Isoflurane vaporizer OHMEDA Excel 210 SE
Artificial tear ointment Puralube NDC: 17033-211-38

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Strueby, L., Thebaud, B. Advances in bronchopulmonary dysplasia. Expert review of respiratory medicine. , (2014).
  2. Donn, S. M., Sinha, S. K. Recent advances in the understanding and management of bronchopulmonary dysplasia. Seminars in fetal & neonatal medicine. 14, 332 (2009).
  3. Molen, T., Miravitlles, M., Kocks, J. W. COPD management: role of symptom assessment in routine clinical practice. International journal of chronic obstructive pulmonary disease. 8, 461-471 (2013).
  4. Seifert, A. W., et al. Skin shedding and tissue regeneration in African spiny mice (Acomys). Nature. 489, 561-565 (2012).
  5. Vidal, P., Dickson, M. G. Regeneration of the distal phalanx. A case report. Journal of hand surgery. 18, 230-233 (1993).
  6. Potter, P. C., Levine, M. H. Bone Regeneration Following Chronic Suppurative Osteitis of the Distal Phalanx. Annals of surgery. 80, 728-729 (1924).
  7. McKim, L. H. Regeneration of the Distal Phalanx. Canadian Medical Association journal. 26, 549-550 (1932).
  8. Brown, L. M., Rannels, S. R., Rannels, D. E. Implications of post-pneumonectomy compensatory lung growth in pulmonary physiology and disease. Respir Res. 2, 340-347 (2001).
  9. Holder, N. Regeneration and compensatory growth. British medical bulletin. 37, 227-232 (1981).
  10. Hsia, C. C. Lessons from a canine model of compensatory lung growth. Curr Top Dev Biol. 64, 17-32 (2004).
  11. Butler, J. P., et al. Evidence for adult lung growth in humans. N Engl J Med. 367, 244-247 (2012).
  12. Konerding, M. A., et al. Spatial dependence of alveolar angiogenesis in post-pneumonectomy lung growth. Angiogenesis. 15, 23-32 (2012).
  13. Kho, A. T., Liu, K., Visner, G., Martin, T., Boudreault, F. Identification of dedifferentiation and redevelopment phases during postpneumonectomy lung growth. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305, 542-554 (2013).
  14. Wang, W., Nguyen, N. M., Guo, J., Longitudinal Woods, J. C. Noninvasive Monitoring of Compensatory Lung Growth in Mice after Pneumonectomy via (3)He and (1)H Magnetic Resonance Imaging. Am J Respir Cell Mol Biol. 49, 697-703 (2013).
  15. Gibney, B. C., et al. Detection of murine post-pneumonectomy lung regeneration by 18FDG PET imaging. EJNMMI research. 2, 48 (2012).
  16. Rawlins, E. L., Perl, A. K. The a'MAZE'ing world of lung-specific transgenic mice. Am J Respir Cell Mol Biol. 46, 269-282 (2012).
  17. Ochs, M., Muhlfeld, C. Quantitative microscopy of the lung: a problem-based approach. Part 1: basic principles of lung stereology. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305, L15-22 (2013).
  18. Ysasi, A. B., et al. Effect of unilateral diaphragmatic paralysis on postpneumonectomy lung growth. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305, L439-445 (2013).
  19. Dane, D. M., Yilmaz, C., Estrera, A. S., Hsia, C. C. Separating in vivo mechanical stimuli for postpneumonectomy compensation: physiological assessment. Journal of applied physiology. 114, 99-106 (2013).
  20. Mortola, J. P., Magnante, D., Saetta, M. Expiratory pattern of newborn mammals. Journal of applied physiology. 58, 528-533 (1985).
  21. MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. An improved simple method of mouse lung intubation. Journal of applied physiology. 106, 984-987 (2009).

Tags

Geneeskunde Pneumonectomie compenserende Lung Groei Lung Injury Lung Reparatie Muis Chirurgie Alveolarization
Muis Pneumonectomie Model van Compenserende Lung Groei
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Liu, S., Cimprich, J., Varisco, B.More

Liu, S., Cimprich, J., Varisco, B. M. Mouse Pneumonectomy Model of Compensatory Lung Growth. J. Vis. Exp. (94), e52294, doi:10.3791/52294 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter