Introduction
תפקידו העיקרי של הריאות הוא לספק לחמצן ופחמן דו-חמצני חילופי בין האורגניזם והאווירה. בבני אדם, שורה של תנאים מולדים ונרכשים להוביל לשטח ריאות מופחת וכתוצאה מכך תפקוד ריאות לקוי. למרות שורה של טיפולים כגון סטרואידים בשאיפה, מרחיבי סימפונות, חמצן, אוויר ואוורור מכאני כרוני משמשות כדי למתן את ההשלכות של תפקוד ריאות לקוי 1-3, הטיפול האידיאלי לתנאים אלה יקדם צמיחה מחודשת של רקמה תפקודית ריאות - כלומר, ריאות התחדשות.
התחדשות רקמות של יונקים תועדה היטב. קוצני העכבר האפריקאי יכול להתחדש שטחים גדולים של עור ללא היווצרות צלקת 4. גדוד דיסטלי בבני אדם יכול להתחדש בעקבות פציעה או קטיעה 5-7. הריאה הבאה (PNX), צמיחת ריאות מפצה מתרחשת בעכברים 8, 9 חולדות, לעשותGS 10, ובני האדם 11. על פי הגדרה, צמיחת ריאות פיצוי כרוכה הרחבה לא רק של airspaces הקיים, אך מחדש septation של airspaces המוגדל אלה עם הרחבת זרימת הדם קשור 12. ניתוח ביטוי גנים הוכיח כי מודל זה משחזר רב של אירועי האיתות של התפתחות ריאות 13. ארבעה שבועות לאחר העכבר PNX, שטח פן alveolar הוא שווה ערך לזה של בעלי חיים דמה מופעלים 14. בכתב היד הזה, אנו מתארים את PNX העכבר ונהלי PNX דמה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
הצהרת שימוש בבעלי חיים:: הערה כל הנהלים במחקר זה נערכו באישור וביצוע ההנחיות של בעלי החיים המוסדיים השימוש וטיפול הוועדה (IACUC) בבית החולים לילדים בסינסינטי. עכברי זכרים שמונה שבועות בן C57BL / 6J התקבלו מג'קסון מעבדות (Bar Harbor, ME) ואפשרו להסתגל לשבוע לפני שימוש אחד. עד ניתוח, בעלי חיים שוכנו במתקן מחסום הפתוגן ללא וסיפקו אוכל autoclaved וlibdium מודעת מים מסונן. כל כלוב עכבר סופק עם אוויר ומים ייעודיים, וחדרים נשמרו במחזור היום-לילה 12 שעות. בעקבות התאוששות מניתוח, עכברים נשמרו בכלובים עם צמרות מסוננות, ובלבד libidum מודעת אוכל autoclaved, ובלבד שמים מסוננים מבקבוק מים.
1. הכנה של מכשירים
- הפוך 6 מפשקי עור באמצעות אטבי נייר וסיכות. טוויסט יישר מהדקי נייר באנקס של סיכות נייר, leave תיל פלדה ישר 5 סנטימטר בקצה אחד ולעשות 0.5 סנטימטר בודד וו "U" בצורה בסוף החוט.
- הפוך וילונות כירורגי מרובעים כ -15 x 15 סנטימטר באמצעות ניילון נצמד. הכן רוטב אחד לכל עכבר. שים מגדל נייר בין כל לעטוף.
- לעקר את כל הכלים כירורגיים יחד עם ערימה של אריחי 12 x 12 אינץ 'פקק, גזה, וספוגיות כותנה שקצה.
2. עכבר הכנה
- לגרום להרדמה עם isoflurane 2%. לשקול בעלי חיים.
- באזור הכנה כירורגית ייעודי לגלח בית חזה שמאלי ואזור צוואר עם מכונת גילוח חשמלי.
- החל ירידה של המשחה הדמעה המלאכותית לעיניו של העכבר.
- לטהר צוואר ובית חזה שמאלי עם chlorhexidine ואלכוהול איזופרופיל. חזור פעמיים יותר.
אינטובציה 3. העכבר Oro-קנה הנשימה ואוורור מכאני
- יש מקום טכנאי כירורגית שאינו סטרילי פרקדן העכבר באזור הניתוח המחומם מראש.
- לאשר עומק ההרדמה על ידי תיעוד חוסר תגובה לקמצוץ כפה.
- לאחר שטיפת ידיים ועוטים לבוש כירורגית, מסיכה, וכובע, דון כפפות מנתחים סטרילית.
- לאחר כורך ובאמצעות טכניקה האספטי, לעשות חתך אנכי 1 סנטימטר מעל אמצע הצוואר-הקדמי כדי לחשוף את הגרון. קל לחזור שרירי הרצועה עם משוננים מלקחיים מעוקלים סנטימטר, 10 ולחשוף את הגרון וקנה נשימה על ידי הפצת שרירי הרצועה עם הקצה של מספריים ישר.
- דרך הפה להכניס angiocatheter בוטה, קצה 22 G לאמצע קנה הנשימה (איור 1 א) וחזותי לאשר מיקום (איור 1). לשמור על ההרדמה ולאוורר באמצעות isoflurane 1-3% באמצעות מכונת הנשמה מכרסם (225 μl לשבץ; 200 סטוקס לדקה). להעסיק מגבלת לחץ של 15 סנטימטרים H 2 O.
4. עכבר ריאה
- הנח את העכבר בעמדת פַּחֶסֶת רוחב תקין עם מול האחורי של העכברהמפעיל (בצד שמאל למעלה). השתמש בניילון נצמד איטום עצמי כוילון סטרילי. חיתוך דרך הווילון, להשתמש במספריים מעוגלים היטה בוטים לעשות מקביל ארוך קיצוץ של 2 סנטימטר לצלעות בחלל צלע 4 th וה -5. הכנס את המספריים קצה מעוקל בוטים ולנתח את העור מצלעות הבסיס ושרירים הבין-.
- לחזור בו העור עם ארבעה מפשקים לחשוף מרובע 1.5 x 1.5 סנטימטר חלון כירורגית (איור 2 א). אבטח את המפשקים ללוח השעם.
- לנתח את הצלעות באמצעות מלקחיים מעוקלים, ולהשתמש בקצה אחד של המלקחיים המעוקלים להיכנס לחלל בית החזה.
- שימוש במייקרו-המספריים קצה הקהה, השתמש בלהב התחתון להיכנס לחלל בית החזה. ביצוע חתך 0.5 סנטימטר בין הצלעות וחזור על הפעולה בכיוון ההפוך.
- באמצעות שני הכולים הכתיבה שנותרו, לפתוח את בית החזה בציר הקדמי-אחורית והמפשקים מאובטחים ללוח השעם (איור 2). <li> שימוש שבקצו מלקחיים בוטים מעוקלים ביד השמאל, לתפוס את הריאה השמאלית ולעקור את החלק העליון של הריאה השמאלית רוחבי וinferiorly באמצעות פתיחת בית החזה עד עורק הריאה השמאלי והסמפונות נחשפים (איור 3 א ', ב').
- מחזיק המוליך microclip כלי הדם טיטניום הטעון ביד ימין עם הגוף של המוליך בכף וקצה מעוגל פונה אל כף היד (איור 3 ג), חלק את קצה המוליך לבית החזה לאורך העקמומיות של חלק האחורי של השמאל ריאות וקליפ הסמפונות עזבה ועורק ריאה (איור 3D).
- הסר את המוליך אבל לשמור הריאה השמאלית חזר בו. אחוז במייקרו המספריים קצה הקהה עם יד ימין וחתכתי את הסמפונות ודיסטלי עורק הריאה לקליפ ולהסיר ריאה שמאלית (איור 3E).
- הסר את מפשקי צלעות.
- השתמש במלקחיים בוטים המעוקלים לצבוט את 1 סנטימטר של עור נחות incisiבאבל מעל לרמה של הסרעפת והכנס angiocatheter G 24 דרך העור ולתוך חלל בית החזה השמאלי (איור 4 א ', ב').
- השתמש 5-0 prolene תפר למקום שני תפרים שהופסקו סביב ה 4 ו -5 צלעות ה לסגור את חלל בית החזה.
- הסר את מפשקי העור. השתמש בשני סטים של מלקחיים כדי להתקרב לעור לאורך החתך ומדביק את העור סגור.
- חבר מזרק luer נעילת 3 מיליליטר לangiocatheter ולהסיר אוויר שייר על ידי יישום שאיבה עדינה ונסיגת angiocatheter.
- מדביק את החתך בצוואר נסגר באמצעות שני סטים של מלקחיים כמו קודם.
5. עכבר שאם ריאה
- לחשוף את הריאה השמאלית כפי שצוין בפרוטוקול "עכבר ריאה". הרם את כלוב צלעות עם מלקחיים בוטים מעוקלים כדי לאפשר לאוויר לתוך חלל החזה השמאלי (איור 5 א ', ב').
- הנח angiocatheter G 24 לאף השמאלחלל racic כאמור לעיל נזהר שלא לפגוע הריאה השמאלית.
- באמצעות 5-0 תפר prolene ונזהר שלא לנקב את הריאות (איור 5 ג), למקם את שני אורכים של חומר תפר לתוך 3 rd / 4 th וה -5 / 6 interspaces צלע ה (איור 5D). הנח את שני האורכים של חומר תפר לפני הקשירה כדי להפחית את הסיכונים של פריצת ריאה השמאלית. לקשור את חומר התפר לעשות שני תפרים שהופסקו (איור 5E).
- מדביק את העור על החתך בבית החזה, להסיר אוויר שייר עם angiocatheter, ולהדביק את החתך בצוואר כאמור לעיל.
6. החייאה, שיכוך כאבים, ושחזור
- כבה את isoflurane, ולנהל 0.1 מ"ג / קילוגרם של עצירות ו0.5 מיליליטר של תת-עורית מלח הרגילה.
- כאשר נשימה ספונטנית לחדש, להסיר את הטובוס.
- שים לב עכבר עד שהוא שוב אמבולטורי. הליכה בדרך כלל resumes כמה דקות לאחר הסרת הטובוס.
- מניחים את העכבר ב-27 מעלות צלזיוס חממה (חמצן humidified, 25%) כדי לשחזר O / N.
הערה: אנו שמים כמה כדורים של האוכל רטוב עם מים על רצפת הכלוב ל24 שעות הראשונות שלאחר ניתוח. - לנהל 0.1 מ"ג / קילוגרם של עצירות בזריקת intraperitoneal פעמיים ביום למשך שלושה ימים לאחר ניתוח. הקפד לא לפתוח את האתר כירורגית בעת טיפול בבעלי חיים.
7. ניטור עכבר
- לשקול עכברים בבית 1, 3, 5, ו -7 ימים לאחר ניתוח.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
. חלקה של PNX ומשקולות עכבר מזויף פעל מסופקת באיור 6 בידיים שלנו, הישרדות היא באופן עקבי 95-100% עבור שתי pneumonectomy PNX והעמדת פן. לתיאורים של איך הריאה הימנית מחדש גדל במודל זה וכמובן הזמן הצפוי, אנחנו מפנים את הקורא לכתבי יד של גיבן et al. 15 וet al וואנג. 14
יש להימנע מכמה ממכשולים נפוצים לבצע בהצלחה את נהלי pneumonectomy דמה PNX העכבר ועכבר.
Endotracheal אינטובציה: חוקרים רבים ללמוד את טכניקת PNX העכבר מתקשה באינטובציה endotracheal. כגרון העכבר הוא קדמי וקטטר endotracheal חייב להיות מועבר דרך מיתרי קול, קל לקטטר לעבור לוושט. כפי שהודגם באיור 1 א, קטטר הקהה שקצהו יש זווית כקדמית ככל האפשר הבא Curvaטבעה של הלשון לאורך קו האמצע ולאחר מכן עבר לקנה הנשימה עם עדינות לחץ. עמדת קטטר אמצע קנה הנשימה צריכה להיות מאושרת מבחינה ויזואלית (איור 1). מיקום endotracheal יכול להיות מאושר על ידי בעדינות להזיז את צד קטטר לצד וההתבוננות לתנועה של קנה הנשימה. מיקום נכון הוא אושר על ידי התבוננות עליית חזה דו-צדדית. טכניקה חלופית מתוארת להלן.
יצירת שדה כירורגי: מכשול נפוץ שני הוא כישלון ליצור חלון פתיחת בית החזה הולם. כפי שמודגם באיור 2 א ו -2, חלון פתיחת בית החזה חייב להיות מספיק גדול ואחורי כדי לאפשר להדמיה מספקת של עורק הריאה השמאלי והסמפונות גזע ראשיים עזבו. המפעיל חסר הניסיון יהיה נפוץ לעשות פתיחת בית החזה שלו קטן מדי, קדמית מדי, או נחותה מכדי לחזור בקלות הריאה השמאלית ולגשת hilum השמאל.
Applicati קליפ כלי דםב: אי להחיל את הקליפ של כלי דם בצורה נכונה יגרום exsanguination. זיהוי נכון של hilum הוא (איור 3 א) הקריטי. כפי שהודגם באיור 3 ו3C, כאשר הסרטון הוסר מהמחזיק על ידי המוליך קליפ, סוף הסרטון הוא מיושר עם קצה המוליך קליפ והגוף של הסרטון הוא בתוך הגוף של קצה המוליך המעוקל . סגירה עדינה של ידית המוליך תסגור את הסרטון. כל שינוי באוריינטצית קליפ עלול לגרום לסגירת קליפ לא ראויה; לכן, קליפ חדש צריך להיות טעון אם סרטון הופך חלץ מהמוליך. כמו כן, מתיחה על הריאה השמאלית צריכה להיות עדינה כדי לא לקרוע את הפרוקסימלי hilum לקליפ. הקצה המעוגל של המוליך צריך לעקוב העקומה של ההיבט מעולה של הריאה השמאלית ולקשור hilum השמאלי (איור 3D). טעות נפוצה היא מייתר של הוושט. כפי שהודגם באיור 3E
הימנעות שמאל ריאות פגיעה במהלך Sham PNX: כנראה המכשול הנפוץ ביותר של מפעילים מנוסים וחסרי ניסיון נשארה פציעת ריאות במהלך PNX דמה. כפי שהודגם באיור 5, המפעיל חייב להיות זהיר בעת סגר פתיחת בית החזה לא לנקב את הריאות עם מחט התפר או כדי לאפשר לכידה של ריאות פריצה. חשוב להרים את הצלעות בעת ביצוע מפשק, angiocatheter G 24 לפינוי אוויר, והתפר (איור 5 א-ד). במהלך סגירת פתיחת בית החזה, הצבת שני הגדילים של תפר לפני הקשירה ממזערת את הסיכון של הילכדות ריאות (איור 5E). המעבדה שלנו בדרך כלל לבצע ארבעה הליכי העמדת פנים ואחריו ארבעה PNX כדי שנוכל להמיר עכבר דמה לעכבר PNX אנחנו צריכים לפגוע הריאה השמאלית. יש לציין שלא כל הקבוצות לבצע פינוי האוויר בבית חזה השמאלי שייר. למיטב ידיעתנו, לא קיימים נתונים המשווים PNX עם ובלי פינוי אוויר שיורי.
עם תרגול וניסיון, צריכים להיות מושלם שני הליכי PNX והזיוף ב 10 דקות ומאפשרים לעד שני ניתוחים עשרות עכבר להתבצע בפגישה אחת.
איור 1. עכבר endotracheal אינטובציה. () הצנתר לקנה הנשימה דרך הפה-צריך להיות קו האמצע ומשמש לדכא את הלשון כפי שהוא מתקדם וזווית anteriorly כיוון הגרון. מיצוב נכון של הצנתר באמצע קנה הנשימה (B) צריך להיות מאושר מבחינה ויזואלית."Target =" _ blank "> לוחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 2. עכבר פתיחת בית החזה. (א) לאחר חתך ושחרורו של העור מכלוב בית החזה הבסיסי, חלון כירורגית 1.5 x 1.5 סנטימטר נוצר התמקד בחלל צלע 4 th וה -5. (ב) לאחר הקמתה של פתיחת בית החזה בה 4 ו -5 חלל צלע צלעות ה, מפשקים משמשים כדי להמחיש את הריאות. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 3. ריאה. L שמאלה () ung נתפס עם מלקחיים מעוקלים והרים באמצעות פתיחת בית החזה כדי לחשוף את hilum השמאל (חץ לבן). (ב) קליפ כלי הדם צריך לשבת מיושר עם הקצה של המוליך קליפ כלי דם ובתוך קצה המוליך המעוקל. (ג) המוליך יש לקיים עם אגודל ימין ו-4 אצבע עם הגוף של המוליך יושב לאורך כף יד ימין עם הקצה המעוגל בזווית אל הכף. (ד) בעקבות העיקול של האונה השמאלית העליונה, קליפ כלי הדם מוחל על hilum השמאל. (E) כפי שניתן לראות הבא PNX שמאל, הוושט (בין החצים הלבנים) ממוקם במרחק האחורי לhilum השמאל (קליפ כלי דם שתואר על ידי קופסא לבנה). אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של נתון זה.
es / ftp_upload / 52,294 / 52294fig4highres.jpg "/>
איור 4. מיקום של angiocatheter לפינוי אוויר. (א) קצה angiocatheter מפלח את העור. (B) angiocatheter מוכנסת מעל הסרעפת לתוך חלל בית החזה. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 5. ריאת העכבר שאם. (א) במהלך הליך העמדת פנים, הרמת קצה הצלע לפני מפשק מיקום ממזער את הסיכון של פציעת ריאות. (ב) יש להשאיר המפשקים במקום כפי שהם לPNX. (C) הקצה הנחות של כלוב הצלעות צריך להיות הרים עד בעת ביצוע angiocatheter G 24 משמש כדי לשאוב אוויר שיורי לאחר סגירה של בית החזה ומדיing עור. (ד) גם כלוב הצלעות צריך להיות הרים למיקום תפר. (E) על ידי הצבת שני גדילים של תפר על אתר פתיחת בית החזה לפני הקשירה, את הסיכון של הילכדות ריאות ממוזער. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של נתון זה.
איור 6. צפוי הרזיה. שימוש בחמישה עכברים לכל קבוצה, הראו כי 24 שעות לאחר הניתוח, עכברי PNX יאבדו ממוצעת של 1.5 (7.2%), ועכברים דמה יאבדו ממוצע של 1.1 g (5.2%). שני הקבוצות להחזיר את המשקל לפני הניתוח שלהם ביום שלאחר ניתוח 3.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
סיפקנו תיאור מפורט ביותר של נהלי PNX PNX העכבר ועכבר דמה שדווחו עד כה. אנחנו עשינו את הקורא מודע לכמה מהמכשולים הנפוצים שחוקרים לומדים ההליך נפוץ להיתקל, ויש לנו התווינו כמה טכניקות שפותחו על ידי המעבדה שלנו כדי להקטין נגד המלכודות הללו. מעבדות אחרות ניצול מודל זה עשויות פיתחו שינויים בטכניקה אחרים או משתמשות במכשירים שונים. בעת הערכת הבדלים בטכניקות, חוקרים פרטיים יצטרכו להחליט אם הבדלים אלה משפיעים באופן משמעותי את תוצאות ניסוי.
יש מודל PNX העכבר של צמיחת ריאות מפצה יתרונות רבים על פני מודלים של בעלי חיים אחרים של תיקון ריאות והתחדשות. המספר הגדול של מעקב שושלת להפוך לזמין עכברים הטרנסגניים, גן על ביטוי, וכללי של ניסויי מחיקת גן ממוקד השגה עבור רוב מעבדות 16. שנית, מורטכניקות phometric לquantitating צמיחה מחדש alveolar מתוארות היטב 17. שלישית, העלות של אימוץ מודל זה היא מתונה. הציוד מיוחד רק נהלים אלה דורשים הוא החלת קליפ כלי דם ומספריים אביב קצה הקהה Cohan-Vannas. כל הציוד האחר יינתן בדרך כלל בערכת עכבר כירורגית או זמינה דרך מתקן גרעין כירורגית עכבר. רביעית, עם ניסיון, PNX העכבר ונהלי PNX דמה הם יחסית מהירים המאפשרים לניתוחים רבים שיש לבצע באותו היום. לבסוף, גודלו הקטן של העכבר בהשוואה למודלים של בעלי חיים אחרים, דרישות דיור צנועות, ואת הקלות שבה הם יכולים להיות התרבו גם להקל על מודל העכבר כדי לשמור על יותר ממודלים של בעלי חיים אחרים.
יש גם כמה חסרונות למודל PNX העכבר בהשוואה לדגמים אחרים של התחדשות ריאות. בעוד צמיחת ריאות מפצות עכבר תלויה במידה רבה על מתיחת 18, ריאות מפצות לגדולה ביונקים גבוהים יותר תלויה בשני למתוח וזרימת דם ריאתי עלתה 19. מאז התחדשות ריאות אנושית היא סביר יותר דומה למנגנוני ההתחדשות של יונקים גבוהים אלה, החוקר צריך להיות זהיר אקסטרפולציה ממצאים בעכבר ישירות לאדם. מכניקת נשימה עכבר שונה ממכניקת נשימה אנושית. בבני אדם, נשיפת הסוף מלווה בהפסקה שבבו אין זרימת אוויר. בסופו של דבר בבני אדם הנשיפה, גיוס ריאות מתוחזק על ידי המתיחה הרדיאלי של כלוב בית חזה היענות נמוכה. מחזור הנשימה העכבר חסר הפסקת נשיפה זו וכתוצאה מכך כמות קטנה של לכידת אוויר עקב נשיפה שלמה. מאז יש לו את העכבר כלוב בית חזה עמידה הרבה יותר גבוה, זה לכידת אוויר זה ששומר על גיוס ריאה 20. החסרון השלישי של מודל העכבר הוא האנטומיה שלה. מאז יש לו את העכבר רק אונת ריאה השמאלית יחידה, PNX שמאל חלקי לא ניתן כפי שהוא באחרמינים.
יש להימנע מכמה ממכשולים נפוצים בכמה נקודות קריטיות לביצוע PNX העכבר ונהלי דמה בהצלחה. צומת קריטיים אלה אינטובציה endotracheal, יצירת את שדה הניתוח, יישום קליפ כלי דם, והימנעות מפגיעת ריאה השמאלית במהלך ניתוח דמה.
נתיחה לאחר המוות של כל עכברים שלא מצליחים לשרוד ניתוחים אלה הוא חיוני לשיפור טכניקות ניתוחיות בעתיד. בהמשך, אנו לפתור כמה קשיים משותפים ולספק טכניקות חלופיות שעשויות להניב מידה רבה יותר של הצלחה.
אי cannulate בהצלחה קנה נשימה: מעבדות אחרות לנצל השעיה ותאורת טרנס-קנה הנשימה לאינטובציה oro-קנה הנשימה אשר מייתרת את הצורך בהדמיה ישירה 21.
קושי לדמיין hilum: יצירת חלון גדול, ממוקם כראוי פתיחת בית החזה הוא i ההכרחיתכדי n כדי להמחיש את hilum השמאל. אם במהלך הליך ההדמיה אינה מספקת או שאין די מקום להכנסה של applicators קליפ כלי הדם, פתיחת בית החזה צריך להיות מוארכת ומפשקי מיקומו. לא צריך להיות שום ריכוז דם במהלך הליך זה. אם יש, החוקר צריך לקבוע אם הוא מציב יותר מדי מתח על הריאה השמאלית וקורע את עורק הריאה השמאלי.
דימום לאחר ההסרה של שמאל ריאות: לא צריך להיות דימום קטן במהלך הליך זה. קליפ כלי דם לא תקין טעון או שיושם הוא הסיבה השכיחה ביותר לדימום, ועכבר עם דימום מעורק הריאה השמאלי שלה צריך להיות מורדמים. אם זה סוג של דימום מתרחש, הטעינה תקינה של כלי הדם וקליפ היישום של חברה, אפילו הלחץ במהלך יישום צריכה להיות מאושר לפני שתנסה את ההליך שוב. כמו כן, מוות לאחר ניתוח עם הממצא של דם בחזה השמאלי הואכנראה עקב יישום קליפ כלי דם לא תקין. אלטרנטיבה לטכניקת קליפ כלי הדם שלנו היא מייתר עם תפר משי.
שמאל ריאות פגיעה במהלך ניתוח דמה: במובנים רבים, הליך העמדת פנים דורשת רמה גבוהה יותר של מיומנות כירורגית מהליך PNX. הריאה השמאלית ניתן נפצעה במהלך פתיחת בית החזה, במהלך ההחדרה של angiocatheter G 24 להלן האתר כירורגית, או בסגירה של פתיחת בית החזה. בהתאם לצורך הניסוי, ניתן להמיר עכברים שעברו ניתוח דמה לPNX. סיבה נוספת אפשרית של פגיעת ריאה השמאלית היא מאסר של פריצת ריאה שמאלית במהלך סגירת אתר פתיחת בית החזה. עכברים שאם עם פציעת ריאות שמאל צריכים גם להיות מורדמים או שיש לי ההליך כירורגי השתנה לPNX.
מצוקה נשימתית לאחר שחזור: מצוקה נשימתית לאחר התאוששות מן ההרדמה יכולה לבוא מנפיחות של מייתרי הקול עקב אינטובציה הטראומטית, שליטה בכאב בלתי מספק, או unrecoפציעת ריאות gnized. באופן כללי, אלא אם כן המצוקה משוחררת על ידי ממשל של תרופות לשיכוך כאבים נוספים, צריכים להיות מורדמים בעלי חיים ולגרום לנקבעו. ניסיונות אינטובציה מרובים עלולים לגרום לglottic או subglottic נפיחות עם קושי שנוצר בהשראה. בנתיחה לאחר מוות, חוסר פתיחת glottic פטנט יהיה ברור לאחר מייתרי הקול מופרדים מhypopharynx. גישות אלטרנטיביות לcannulation endotracheal מתוארות לעיל. שליטה בכאב בלתי מספק ניתן לטפל עם מנות נוספות של תרופה לשיכוך כאבים. כפי שצוין לעיל, פגיעת ריאה השמאלית לא מכוונת היא נפוצה כאשר לומדים את ההליך כירורגי המזויף, ואם לא מוכר, יכולה להוביל למצוקה ושינוי של תוצאות ניסויים בדרכי הנשימה.
אובדן מוגזם במשקל והתייבשות: עכברים שחווים ירידה במשקל מוגזמת או התייבשות לאחר הניתוח עשוי להיות וושט ligated, שליטה בכאב בלתי מספק, או חוסר יכולת להאכיל או לשתות. הוושט נמצא jאחורי ust לhilum השמאל, וקשירה של הוושט יש לחשוד בכל עכבר מיובש. שליטה בכאב לקוי יש לחשוד בעכברים עם piloerection, תוקפנות מוגברת, או ניידות מופחתת. פתיחת בית החזה יכול למנוע עכברים מלהגיע מזון ומים הושעה מגג הכלוב ביום שלאחר הניתוח הראשון. עכברים שלא לאכול ולשתות לאחר התאוששות מן ההרדמה רק להיות יותר חלשים ומיובשים. אנו ממליצים למקם מזון טבול על רצפת הכלוב למשך 24 שעות לאחר ניתוח.
לסיכום, מודל ריאת העכבר של צמיחת ריאות מפצה הוא מודל רב ערך להבהרת המנגנון הבסיסי של התחדשות ריאות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 6 inch Vascular clip applicator | Teleflex Medical (WECK) | 137062 | |
| Horizon small titanium red clip | Teleflex Medical (WECK) | 1201 | |
| Narrow pattern 12 cm curved forceps | Fine Science Tools | 11003-12 | |
| Curved serrated 10 cm Graefe forceps | Fine Science Tools | 11052-10 | |
| Castroviejo needle holder | Fine Science Tools | 12565-14 | |
| Straight 9 cm Strabismus scissors (blunt tip) | Fine Science Tools | 14075-09 | |
| Straight 8.5 cm hardened fine scissors | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Straight, blunt tip Cohan-Vannas spring scissors | Fine Science Tools | 15000-12 | |
| Skin glue | Gluture | 32046 | |
| 22 G Angiocatheter | |||
| 24 G Angiocatheter | |||
| 3 ml Luer lock syringe | |||
| 4 Short retractors | |||
| 2 Long retractors | |||
| 5-0 Prolene on curved cutting needle | Ethicon | 8698G | |
| 0.5 ml Syringe on 27 G needle | |||
| Normal saline | |||
| Buprenorphine | |||
| Press-n-Seal wrap | Glad Products Company | ||
| 12 x 12 inch Cork board stack | Office Depot | ||
| 70% Ethanol | |||
| Betadine | |||
| Mouse ventilator | Hugo Sachs Elektronnik | Minivent Type 845 | |
| Isoflurane vaporizer | OHMEDA | Excel 210 SE | |
| Artificial tear ointment | Puralube | NDC: 17033-211-38 |
References
- Strueby, L., Thebaud, B. Advances in bronchopulmonary dysplasia. Expert review of respiratory medicine. , (2014).
- Donn, S. M., Sinha, S. K. Recent advances in the understanding and management of bronchopulmonary dysplasia. Seminars in fetal & neonatal medicine. 14, 332 (2009).
- Molen, T., Miravitlles, M., Kocks, J. W. COPD management: role of symptom assessment in routine clinical practice. International journal of chronic obstructive pulmonary disease. 8, 461-471 (2013).
- Seifert, A. W., et al. Skin shedding and tissue regeneration in African spiny mice (Acomys). Nature. 489, 561-565 (2012).
- Vidal, P., Dickson, M. G. Regeneration of the distal phalanx. A case report. Journal of hand surgery. 18, 230-233 (1993).
- Potter, P. C., Levine, M. H. Bone Regeneration Following Chronic Suppurative Osteitis of the Distal Phalanx. Annals of surgery. 80, 728-729 (1924).
- McKim, L. H. Regeneration of the Distal Phalanx. Canadian Medical Association journal. 26, 549-550 (1932).
- Brown, L. M., Rannels, S. R., Rannels, D. E. Implications of post-pneumonectomy compensatory lung growth in pulmonary physiology and disease. Respir Res. 2, 340-347 (2001).
- Holder, N. Regeneration and compensatory growth. British medical bulletin. 37, 227-232 (1981).
- Hsia, C. C. Lessons from a canine model of compensatory lung growth. Curr Top Dev Biol. 64, 17-32 (2004).
- Butler, J. P., et al. Evidence for adult lung growth in humans. N Engl J Med. 367, 244-247 (2012).
- Konerding, M. A., et al. Spatial dependence of alveolar angiogenesis in post-pneumonectomy lung growth. Angiogenesis. 15, 23-32 (2012).
- Kho, A. T., Liu, K., Visner, G., Martin, T., Boudreault, F. Identification of dedifferentiation and redevelopment phases during postpneumonectomy lung growth. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305, 542-554 (2013).
- Wang, W., Nguyen, N. M., Guo, J., Longitudinal Woods, J. C. Noninvasive Monitoring of Compensatory Lung Growth in Mice after Pneumonectomy via (3)He and (1)H Magnetic Resonance Imaging. Am J Respir Cell Mol Biol. 49, 697-703 (2013).
- Gibney, B. C., et al. Detection of murine post-pneumonectomy lung regeneration by 18FDG PET imaging. EJNMMI research. 2, 48 (2012).
- Rawlins, E. L., Perl, A. K. The a'MAZE'ing world of lung-specific transgenic mice. Am J Respir Cell Mol Biol. 46, 269-282 (2012).
- Ochs, M., Muhlfeld, C. Quantitative microscopy of the lung: a problem-based approach. Part 1: basic principles of lung stereology. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305, L15-22 (2013).
- Ysasi, A. B., et al. Effect of unilateral diaphragmatic paralysis on postpneumonectomy lung growth. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305, L439-445 (2013).
- Dane, D. M., Yilmaz, C., Estrera, A. S., Hsia, C. C. Separating in vivo mechanical stimuli for postpneumonectomy compensation: physiological assessment. Journal of applied physiology. 114, 99-106 (2013).
- Mortola, J. P., Magnante, D., Saetta, M. Expiratory pattern of newborn mammals. Journal of applied physiology. 58, 528-533 (1985).
- MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. An improved simple method of mouse lung intubation. Journal of applied physiology. 106, 984-987 (2009).
