Introduction
在充满异国情调，后果严重的病原体科学的兴趣，近年来一直稳步上升。特别感兴趣的是新出现的有潜在的生物武器视为病原体或重新出现的试剂。在研究的重点和风险方面，这些病原体是由疾病控制中心和预防中心（CDC）的生物恐怖主义范畴AC代理1分类。此外，后果严重的病原体关于进口，出口和准入制度列为选择代理[和毒素。在美国，生物安全规则和程序必须遵循与需要BSL-2，BSL-3或BSL-4遏制特殊病原体的工作， 微生物和生物医学实验室 （BMBL） 生物安全概述2。这被认为呈现最显著健康风险对人类和/或动物的病原体被认为是BSL-4的病原体。因此，BSL-4研究需要特别谨慎，highlŸ专门培训，以及一个强大的和冗余的设备基础设施3。为了改善与BSL-4研究相关的挑战一般的认识，理解为高安全壳厂房运营，系统管理的要求，以及工程控制的常规确认测试是必要的。我们的目标是通过视觉呈现的操作和生物安全标准的提高，而在BSL-4遏制动手研究结果增加了难度，以推动这一认识。
设施壳体BSL-4西装实验室必须满足严格的要求，包括但不限于：专用nonrecirculating通风系统，严格的废物处理系统和处理4,5，和楼宇自动化系统（BAS）-2,6,7-。实验室供给空气被过滤一次和排气是双过滤通过高效率的颗粒空气（HEPA）过滤器，其每年重新认证。此外，该BMBL征收固体废物以及收集和污水的所有材料的去污洗消严格的要求发布之前进入普通垃圾系统。多个冗余被内置于系统，以防止任何类型的BSL-4病原体的释放。该BAS监控设施运行远程和可查明问题区域。设施支持系统每天由专人负责优化运行和实时问题的通知检查。所有系统都经常性的基础上测试，符合CDC /对设施运行选择制剂和毒素的要求司。
除了这些标准的物理设备，实验室工作人员有选择制剂和毒素的工作必须服从安全风险评估（SRA）由司法部与或周围选择代理合作之前。此外，工作人员用1级选择药物（ 如埃博拉病毒， 炭疽杆菌 ）必须进行注册工作在人事可靠性计划（PRP），不断评估个别研究人员8的身心健康。在健康检查评估个人是否能够实际以安全的方式进行的BSL-4围堵工作。心理健康普查评估总体幸福感，心理福利和弹性，以及工作人员的安全意识。在NIAID，科学家选择代理工作进行额外的审查，其中每个单独完成一个访问国家局检查和咨询（ANACI）背景检查检查教育和职业资格证书，犯罪史，金融史，以及外国影响的风险。
相比于BSL-2实验室的条目，最大围堵进入需要的资源，时间和培训相当大的投资。 SRA审批和登记选择剂和毒素司后，工作人员必须经过严格的动手火车ING进入BSL-4实验室诉讼之前。实验室的工作人员在接收设施的操作培训，其中包括关键职能和入境/出境手续9日常检查。工作人员还培训了实验室生物安全和护理和使用正压西服。聚氯乙烯涂层制成的涤纶织物的白西装在德特里克处堡垒NIH / NIAID综合研究设施中使用。使用其他类型/商业品牌正压服的设施可能需要进入和退出BSL-4实验室比这里列出不同的运作程序。研究人员使用本文应占前培训这些差异设施。在德特里克在堡垒NIH / NIAID综合研究设施的西装培训包括穿上西装，确保诉讼是正常，维修和保养套装（内部和外部的实验室），并在实验室内移动的正确程序。上CE本次培训结束后，实验室的工作人员就可以开始BSL-4实验室的西装内工作。最初，另一个有经验的工作人员指导一对单在第一个五年走访BSL-4实验室套装的新培训的工作人员。若要在德特里克堡NIH / NIAID综合研究机构独立运作，新培训的工作人员完成至少40监督探访到BSL-4实验室的西装至少有100小时的实验室内的实际工作时间。
Protocol
1.日常外部清单
- 验证安全系统。检查呼吸空气系统，备份破空气系统，流出物净化系统（EDS）系统，化学淋浴系统，定向气流和高压釜的功能（ 图1）。
2.实验室入境手续
- 缓冲区走廊入口程序由实验室工作人员
- 下的人员进入/退出日志研究人员输入某人的姓名，入口，实验室的位置，和病原体的时间。表明在磁性板实验室位置。
- 为了确保BSL-4西装实验室“系统运行正常，验证外部系统已检查和对每日外部系统安全检查表项（ 图1）的实验室已被清除。
- 为了保证实验室房间的压力是维护道具负压设定点内呃定向空气流，检查建筑物自动化系统（BAS）监视外变化入室的外面。如果室内压力不在正常范围内，生物安全通知或设施的工作人员，并推迟进入实验室之前，这样的压力恢复到正常范围。
- 确保用于生物废物和/或洗衣以下实验工作灭菌的高压釜的可用性。
- 获得包含靠近的人员进入/退出日志设施的供应磨砂，袜子，从储藏室的毛巾。
- 外更衣室程序入口由实验室工作人员：
- 调节和文件访问生物控制实验室完成的安全要求。进入外更衣室。
- 删除所有街头服装，内衣，珠宝和手表，不要擦洗，然后继续诉讼的房间。
- 正压防护服检验所拉完整性测试boratory工作人员在诉讼室：
- 在获得适当大小的正压防护服，进行诉讼的目视检查寻找任何孔，泪水，穿刺点，抽丝，或薄弱点。彻底检查外服手套，因为手套是被损坏的最有可能的去处。
- 更换手套，至少每7天或如果对手套损伤识别。
- 要更换外服手套，从现有的套装手套取下胶带，O型圈滚到套，并删除旧西服手套。
- 把一个新的手套到衣服的袖口，并确保手套覆盖整个箍和拇指是在适当的位置。将O型环手套，O形圈进袖口上的凹槽座位，并用胶带固定外服手套。
- 折叠管道胶带和O形圈手套袖口，用胶带的一个最后一块封住手套，并重新检查新阿塔高等教育委员会手套。
- 一周申请拉链润滑剂拉链的薄层至少一次。
- 覆盖各排气阀的，位于盖罩后面西装内并与任一胶带或铝试压盖背面的左侧，和zip西服关闭。
- 连接快速断开/在每个呼吸线路上的西装软管接头的一端连接附件。充气西装，直到手臂和腿是坚定和诉讼置于直立位置。断开气源。
- 该诉讼不宜过度加压的压力过大可能会导致对诉讼造成严重损害。全面检查为约23分钟漏气的迹象西装目视检查通货紧缩的迹象诉讼。确保该诉讼未过压为过剩压力可造成衣服严重损坏。
- 如果西装失去坚定性，通过重新inflati检查泄漏套装纳克诉讼。听和感觉在西装泄漏。如果需要，喷防护服的所有表面用肥皂溶液。有泄漏的一些常见的地区是西装，拉链区，并与诉讼材料遮阳材料交界处的接缝。监测指示泄漏，要特别注意接缝和遮阳泡沫的形成。检查，以确保排气阀完全密封。
- 暂时修复小的泄漏面料用胶带。完成永久性修复使用的材料从西装修理包。如果衣服不容易修复，净化西装用酒精消毒，并从西装室取出。如果西装是无法修复的，因使用退休西装焚烧。
- 一旦完整性测试完成后，解压西装从排气门卸下外盖。如果未取下排气罩会阻塞过滤和严重损坏诉讼。进入测试，且在维修信息正压式西装完整性测试日志。
- 穿上正压西服在西服房间并进入BSL-4实验室套装：
- 磁带袜子磨砂的腿。唐内丁腈手套和管他们胶带将清理的袖口。唐第二对丁腈手套（不录音）在内部手套。如果有必要，清洁内部面罩用玻璃清洁剂增加知名度。
- 唐正压力服，确保西装压缩完全封闭，并西装连接到一个呼吸的空气线。当BAS监控器都是免费的报警进入BSL-4实验室的西装。
- 要在西装室内呼吸空气行进入BSL-4实验室的西装，断开并推动为化学淋浴室访问按钮的请求。
- 一旦空气压力抗性（APR）门被激活时，围绕在门的密封放气和门磁体脱离。化学淋浴RO中的APR门OM都环环相扣，含义一APR门必须关闭，当对方是开放在任何时候都保持遏制。通过化学淋浴房，关闭APR大门西装的房间，等待膀胱重新膨胀，完全密封门框，并激活第二APR门通往实验室。
- 在进入到BSL-4实验室的西装，西装连接到可用的呼吸空气线。
- 在进一步讨论之前，关闭门APR通往实验室和保证的化学喷淋自动激活消毒化学淋浴区和诉讼。一旦消毒，化学淋浴房的门APR可以再次从西装开了房间。如果一个周期不启动，请联系工厂管理人员。
- 如果衣服不具有完整的靴子，穿上一对分别位于靠近出口的门，化学淋浴门APR货架套鞋。为了避免额外的风险/危害，检查奥雅纳rshoes的形状配合和舒适。
3. BSL-4实验室套装内运动
- 断开并重新连接到整个实验室的空气线周围的实验室自由移动。留连接到空气线路试图弯腰或检索接近地面的项目时，以保持正压力。
注：这种运动，同时从空气线断开将从西装内排出呼吸空气并创建负压，可以让实验室空气在西服输入任何违反。 - 观察整个实验室各种警报和当前状态套件的显示器。
4. BSL-4实验室套装实验室出境手续
- 由水槽或室内走廊净化在塑料扣篮坦克的洗涤剂消毒清洁剂戴手套的手。如果没有扣篮坦克存在，喷戴手套的手用消毒剂彻底。</ LI>
- 检查套鞋或靴子看得见的物质的底部。如果套鞋干净，去除套鞋并将它们放在相邻的化学喷淋APR门口的货架上。关闭实验室，断开所有室内门从呼吸空气线，并进行化学淋浴。
- 如果套鞋脏了，在用洗涤剂消毒清洁水池彻底清洗。
5. BSL-4化学淋浴过程
- 按下访问按钮，打开门APR请求输入化学淋浴，关上门。重新西装淋浴内呼吸空气线。
- 一旦年利率门关闭，化学淋周期将自动激活，释放洗涤剂消毒清洁剂的充分混合妥善消毒衣服和化学淋浴区。如果循环没有自动启动，拉动手柄泛滥。擦洗西装大约1分钟，推洪水处理放回原位，防止引流充分的化学消毒剂坦克。手动淋周期不可用。
- 通过将戴手套的手和脚在含清洁剂消毒清洁液的塑料桶检查手套和脚不停地泄漏的化学淋浴内。寻找外手套下方液体或潮湿和检查眼泪，撕裂或在外手套薄弱的部分。如果在外部手套的一个发现泄漏，等到淋周期完成后，取出外服手套和最外侧内手套，并保留外手套的塑料桶。
- 擦洗西装，西装综合靴子长柄刷子刷洗或手的化学消毒剂分发到诉讼的所有表面。淋浴的水的循环过程中彻底冲洗洗涤剂消毒清洁剂的西装。
- 断开呼吸空气线，先前暴露于实验室空气，无论是化学和水循环至d中isinfect在西装的连接。冲洗任何洗涤剂消毒清洁剂的空气管路连接。如果没有断线，洗涤剂消毒清洁剂不能以其他方式净化空气线连接。
- 打开通往室内套装门，退出后关闭它。
- 在紧急情况下，如非寿险威胁切断或火灾，请按照5.2所述的相同的步骤。
6.西装室程序退出化工淋浴后
- 干西装的外部用大毛巾。解压正压西装，从外服手套取出一只手，并仔细检查外丁腈手套的外面的水分。
- 如果湿气已经通过外服手套泄露，去掉外服手套外丁腈手套和生物危险废物处置垃圾箱。除去另一方面，重复检查。
- 卸下西装，继续干西装外，防止干腐病ð豪悦国际。喷雾面罩的玻璃清洁剂内部并擦干。挂西装起来晾晒。从磨砂取下胶带和内丁腈手套和这些物品放入指定的生物危险废物的垃圾桶处置。
- 文档任何泄漏或修理的西装日志的西装，并报设施管理。
- 进到内更衣室，去除脏磨砂和袜子，并将它们放置在指定的洗衣桶。继续，进入个人用品。
7.个人淋浴间和外更衣室出境手续
- 激活淋浴和充分洗净的头发和身体最少3分钟，用肥皂和水。退出个人淋浴间，并继续外更衣室。
- 擦干身体和唐街头服装，退出外更衣室，将用过的毛巾在指定的洗衣桶，然后继续缓冲区走廊。
- 表明，在人员进入/退出日志退出的时间，并指示实验室前它的定位板。
Representative Results
工作人员已在这些技术经过仔细而彻底培训，确保BSL-4设备内的安全和一致的做法。通过检查设施是否正常运行，在日常检查表（ 图1）所示，我们能够确保所有必要的行政和工程控制的到位和运作，以维持安全和正常运作的环境。正压力服提供了工作人员额外的保护层。正确维护和使用这些西装是不可或缺的工作人员个人防护。通过严格遵守这些程序，没有实验室获得性感染已被记录在德特里克处堡垒NIH / NIAID综合研究设施。
图1： 每日直观的项目清单为在BSL-4的支持和备份系统。 请点击此处查看该图的放大版本。
Discussion
我们在概括在德特里克堡NIH / NIAID综合研究设施用于高危险（风险组4）病原体工作BSL-4的入口和出口手续。可视化BSL-4的入口和出口的程序的一个目的是要强调与这些病原体在工作期间的实验室工作人员的安全的重要性，避免实验室获得性感染。负压，BSL-4实验室保持向内的定向气流，以确保病原体将包含在实验室内。正压式西装搭配由空气传播的病原体的实验室工作人员减少接触的实验室工作人员佩戴专用的呼吸空气系统。后实验室工作人员离开BSL-4实验室，化学淋浴消毒的潜在污染衣服的表面，因此防止了建筑物的其他部分和改变出衣服的人的潜在污染。
作为POSITI的完整性VE-压力西装，以防止潜在的病原体接触的几个重要的一次障碍之一，需要工作人员检查高考前的西装泄漏和BSL-4实验室退出后。如果发生泄漏，人员识别泄漏和警报设施管理器的位置。这些做法保证任何暴露于严重后果的病原体迅速反应。虽然尽一切努力尽快排除危险实验室工作人员，可以通过使用玻璃器皿，锐器，动物侵略，或连续使用发生违反诉讼。
而这里提出的程序通常遵循通过CDC 2概述的BMBL规格，这些程序是特定到IRF-弗雷德里克。每个BSL-4设备有不同的建筑设计规范，影响实验室操作的具体方法。进入和退出BSL-4实验室的替代程序部分取决于这些laboratori的设计和操作上课。此外，在不同的国家的政府法规还可能对每个国家BSL-4实验室方法的效果。尽管如此，BSL-4的程序一个大致的了解和建筑监督支持的实验室工作人员的安全会帮助谁正在考虑类似的建筑物和参与高风险的病原体的研究合作者以外的设计卫生管理员制度。
随着越来越多的实验室工作人员在BSL-4实验室的入口和出口手续，并在BSL-4的条件下进行实验训练的生产力将会增加。然而，在设计与外部合作者的协议时，有足够的时间应分配来执行连基础实验室操作，以及用于传送的结果的时间框架中的期望必须通过接受在BSL-4实验室固有工作的困难来调节。广义的假设是，任何实验在BSL-2进行的（ 比如 ，2小时）将需要的时间量的两倍在BSL-4（ 例如 ，4小时）来执行。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro-Chem Plus | National Chemical Laboratories | 255 | |
| Windex | Grainger | 3U560 | |
| Sperian aluminum pressure test cap | Honeywell Sperian | CC0199649 | |
| Sperian suit repair kit | Honeywell Sperian | CC0199621 | |
| Sperian Protection Suit Integrity Test Log | NA | NA | Created by individual lab |
| Sperian positive pressure suit | Honeywell Safety Products | BSL 4-2 | |
| Soapy water | NA | NA | Created by individual lab |
| Outer suit gloves (canners) | Fisher | 19-019-601 | |
| Outer suit gloves (MAPA) | Fisher | 2MYU1 | |
| Inner nitrile suit gloves | Fisher | 19-050-592 | |
| Zip Lube | Amazon | B000GKBEJA | |
| Scrubs | Cintas | 60975/60976 | |
| Socks | Cintas | 944 | |
| Duct Tape | Pack-N-Tape | 51131069695 | |
| Towels | Cintas | 2720 | |
| O-rings | O-ring warehouse | AS568-343 | |
| Overshoes | Amazon | B0034KZE22 | |
| Plastic dunk tanks | Fisher | 14-831-113 | |
| Entry and exit logbook | NA | NA | Created by individual lab |
| Baby powder | Amazon | 44230 | |
| Ethanol | Fisher | BP2818500 |
References
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