Introduction
L'intérêt scientifique dans exotiques, les agents pathogènes à haut conséquence n'a cessé d'augmenter ces dernières années. D'un intérêt particulier sont des agents pathogènes considérés comme émergents ou des agents ré-émergentes qui sont bioweapons potentiels. En termes de priorité de recherche et de risque, ces agents pathogènes sont classés par les Centers for Disease Control and Prevention (CDC) comme le bioterrorisme Catégorie Agents AC 1. En outre, les agents pathogènes à haut conséquence sont classés comme agents Sélectionnez [et Toxines] en ce qui concerne les règlements d'importation, d'exportation et d'accès. Aux Etats - Unis, les règles et procédures de biosécurité qui doivent être suivies pour le travail avec des agents pathogènes spéciaux qui nécessitent BSL-2, BSL-3, ou BSL-4 de confinement sont décrites dans biosécurité en laboratoires microbiologiques et biomédicaux (BMBL) 2. Pathogens qui sont perçus pour présenter un risque de santé le plus important pour les humains et / ou les animaux sont considérés comme BSL-4 agents pathogènes. Par conséquent, la recherche de BSL-4 requiert une attention particulière, highlformation spécialisée y, et un centre robuste et redondant infrastructure 3. Pour améliorer la sensibilisation générale aux défis associés à BSL-4 recherche, la compréhension des exigences pour les opérations de construction haut niveau de confinement, la gestion des systèmes et des tests de validation de routine des contrôles techniques est nécessaire. Notre objectif est de faire avancer cette compréhension en présentant visuellement les normes accrues de fonctionnement et de la biosécurité, et la difficulté accrue résultant des mains sur la recherche dans le BSL-4 de confinement.
Installations logement laboratoires BSL-4 costume doivent répondre à des exigences strictes , y compris, mais sans s'y limiter, les systèmes de ventilation nonrecirculating dédiés, système de traitement des déchets rigoureux et traite 4,5, et les systèmes d'automatisation des bâtiments (BAS) 2,6,7. l'air d'alimentation de laboratoire est filtré une fois l'air d'échappement est double filtré à travers l'air (HEPA) filtres à particules à haute efficacité, qui sont Recertified annuellement. En outre, leBMBL impose des exigences strictes en matière de décontamination des déchets solides et la collecte et la décontamination de tous les effluents avant rejet dans le système général de déchets. licenciements multiples sont intégrés dans le système pour empêcher le rejet de tout type de BSL-4 pathogène. Les opérations de l'installation du moniteur de BAS à distance et peuvent localiser la zone à problème. systèmes d'aide à l'installation sont contrôlés quotidiennement par le personnel pour le fonctionnement et la notification des problèmes en temps réel optimal. Tous les systèmes sont testés sur une base récurrente pour se conformer à CDC / Division de Select agents et de toxines requises pour le fonctionnement de l'installation.
En plus de ces normes pour l'installation physique, le personnel de laboratoire travaillant avec Select Agents et Toxines doit se soumettre à une évaluation des risques de sécurité (SRA) par le ministère de la Justice avant de travailler avec ou autour de sélectionner des agents. En outre, le personnel travaillant avec Niveau 1 Sélectionnez Agents (par exemple, le virus Ebola, Bacillus anthracis) doit être inscritdans un programme de fiabilité du personnel (PRP) qui évalue en permanence l'état de santé physique et mentale des chercheurs individuels 8. Les examens de santé évaluent si les individus sont physiquement capables d'effectuer le travail dans BSL-4 de confinement d'une manière sûre. des examens de santé mentale évaluent le bien-être, le bien-être psychologique et la résilience, et la sensibilisation à la sécurité du personnel. Au NIAID, les scientifiques travaillent avec des agents sélectionnés sont soumis à un examen supplémentaire dans lequel chaque individu effectue une Agence nationale Contrôle d'accès et demandes de renseignements (ANACI) vérification des antécédents qui examine les diplômes et professionnels, les antécédents criminels, l'histoire financière, et le risque d'influence étrangère.
Par rapport à BSL-2 entrée de laboratoire, l'entrée de confinement maximal nécessite un beaucoup plus grand investissement de ressources, de temps, et la formation. Après approbation SRA et inscription auprès de la Division de sélectionner des agents et les toxines, le personnel doit subir les mains sur le train strictesment avant que l'accès aux BSL-4 laboratoires de costume. Le personnel de laboratoire reçoit une formation sur le fonctionnement de l'installation, y compris des vérifications quotidiennes des fonctions critiques et les procédures d' entrée / sortie 9. Le personnel est également formé sur la biosécurité en laboratoire et les soins et l'utilisation des combinaisons à pression positive. costumes blancs en tissu de polyester avec revêtement polyvinyle de chlorure sont utilisés à l'installation NIH / NIAID recherche intégrée à Fort Detrick. Les installations qui utilisent d'autres types / marques commerciales de combinaisons à pression positive peuvent nécessiter des procédures opérationnelles pour entrer et sortir du laboratoire BSL-4 que celles décrites ci. Les chercheurs dans les installations utilisant cet article devrait tenir compte de ces différences avant la formation. la formation de costume à l'installation NIH / NIAID de recherche intégrée à Fort Detrick comprend des procédures appropriées pour enfiler le costume, en veillant à la combinaison fonctionne correctement, la réparation et l'entretien des costumes (à l'intérieur et à l'extérieur du laboratoire), et le déplacement au sein du laboratoire. SurCE cette formation est terminée, le membre du personnel de laboratoire peut commencer à travailler dans les laboratoires BSL-4 de costume. Dans un premier temps, une autre expérience mentors membres du personnel d'un-à-un membre du personnel nouvellement formé au cours des cinq premières visites aux BSL-4 laboratoires de costume. Pour travailler de façon autonome à l'installation de NIH / NIAID recherche intégrée à Fort Detrick, le membre du personnel nouvellement formé d'un minimum de 40 visites supervisées dans BSL-4 laboratoires de costume avec au moins 100 heures de temps de travail pratique dans les laboratoires.
Protocol
1. Liste de vérification quotidienne externe
- Vérifier les systèmes de sécurité. Vérifiez la respiration des systèmes d'air, de sauvegarder les systèmes d'air rupture, système de décontamination des effluents (EDS) systèmes, système de douche chimique, débit d' air directionnel et fonctionnalité autoclave (figure 1).
2. Procédures de laboratoire d'entrée
- Buffer Corridor Procédures d'entrée par le personnel du laboratoire
- Entrez le nom de la personne du personnel, le temps de l'entrée, l'emplacement du laboratoire, et les agents pathogènes à l'étude dans le personnel d'entrée / sortie Logbook. Indiquez l'emplacement du laboratoire sur une carte magnétique.
- Afin d' assurer la BSL-4 complet des systèmes de laboratoires fonctionnent correctement, vérifier que les systèmes externes ont été vérifiés et les laboratoires ont été défrichées pour l' entrée sur les systèmes externes Daily Liste de contrôle de sécurité (Figure 1).
- Pour assurer que la pression ambiante du laboratoire est à l'intérieur négatif des points de consigne de pression qui maintient proper flux d'air directionnel, vérifier le système d'automatisation du bâtiment (BAS) de surveiller l'extérieur de l'entrée extérieure changer de chambre. Si la pression de la chambre est pas dans la plage normale, informer la biosécurité ou un personnel et de retarder l'entrée en laboratoire jusqu'à ce que ces déclarations de pression à la normale.
- Assurer la disponibilité d'un autoclave pour la stérilisation des déchets et / ou la lessive biologique suite à des travaux expérimentaux.
- Obtenir des gommages, des chaussettes et des serviettes de la salle de stockage contenant les fournitures de l'établissement situé à proximité du personnel d'entrée / sortie Logbook.
- Outer changer de chambre Procédures d'entrée par le personnel du laboratoire:
- exigences de sécurité complètes qui régulent et documenter l'accès au laboratoire de bioconfinement. Entrez dans la salle de changement externe.
- Retirer tous les vêtements de la rue, les sous-vêtements, bijoux et montres, don gommages, et passez à la salle de costume.
- Pression positive Inspection Combinaison de protection et de test d'intégrité par LaLe personnel boratoire dans le costume Chambre:
- Après avoir obtenu une combinaison de protection à pression positive d'une taille appropriée, effectuer une inspection visuelle de la combinaison à la recherche de tous les trous, les larmes, les points de ponction, déchirures couture, ou des points faibles. Inspecter les gants de costume extérieurs à fond, étant donné que les gants sont l'endroit le plus susceptible d'être endommagé.
- Changer de gants au moins tous les 7 jours civils ou en cas de dommages aux gants est identifié.
- Pour remplacer les gants de costume extérieur, retirez le ruban adhésif du gant de costume existant, rouler le joint torique sur le manchon, et enlever le vieux gant de costume.
- Mettez un nouveau gant sur la manchette de la combinaison et faire en sorte que le gant couvre l'ensemble du brassard et le pouce est dans la bonne position. Placez le joint torique sur le gant, siège le joint torique dans la rainure sur le brassard, et utiliser du ruban adhésif pour fixer gant de costume extérieur.
- Pliez le brassard de gant sur le ruban adhésif et le joint torique, sceller le gant avec un morceau final de ruban adhésif, et ré-inspecter le nouveau attaGant CHED.
- Appliquer une fine couche de fermeture à glissière lubrifiant sur la fermeture à glissière au moins une fois par semaine.
- Couvrir chacune des soupapes d'échappement, situé à l'intérieur du costume derrière le couvercle de la tête et sur le côté gauche de l'arrière soit avec du ruban adhésif ou un bouchon d'essai de pression d'aluminium, et zip le costume fermé.
- Branchez le débranchement rapide / connect pièce jointe à la fin de chaque ligne de respiration pour le raccordement du tuyau sur le costume. Gonfler le costume jusqu'à ce que les bras et les jambes sont fermes et placer le costume en position verticale. Débranchez l'alimentation en air.
- Le costume ne devrait pas être trop sous pression que la pression excessive peut causer des dommages graves à la combinaison. Inspectez soigneusement le costume pour toute indication d'une fuite d'air pendant environ 5 minutes et inspecter visuellement le costume pour des signes de déflation. Assurez-vous que le costume est pas trop sous pression que la pression en excès peut causer des dommages graves à la combinaison.
- Si la combinaison perd sa fermeté, de vérifier la combinaison des fuites par re-inflating le costume. Écoutez et sentir les fuites dans le costume. Si nécessaire, vaporiser toutes les surfaces de la combinaison de protection avec une solution de savon. Certaines zones communes pour les fuites sont les coutures de la combinaison, la zone de fermeture à glissière, et la jonction de la matière de la visière avec le matériau de la combinaison. Moniteur pour la formation de bulles qui indiquent une fuite, en accordant une attention particulière aux coutures et la visière. Assurez-vous que les soupapes d'échappement sont bien scellés.
- Réparer les petites fuites de tissu temporairement avec du ruban adhésif. réparations permanentes complètes en utilisant du matériel à partir d'un kit complet de réparation. Si la combinaison ne peut être réparé facilement, décontaminer le costume avec un désinfectant à base d'alcool et de retirer de la salle de costume. Si la combinaison est au-delà de la réparation, la retraite costume d'utilisation et incinérer.
- Une fois le test d'intégrité est terminée, décompressez le costume et retirer les couvercles des soupapes d'échappement. Ne pas retirer les couvercles d'échappement obstruera filtration et endommager gravement le costume. Entrez les tests et les réparations dans leSuit pression positive Integrity Log Test.
- Revêtir Suit pression positive dans la chambre et Suit Entrer dans BSL-4 laboratoires Suit:
- Ruban chaussettes aux pieds de gommages. Don gants et conduit en nitrile interne les enregistrer aux poignets des gommages. Don une deuxième paire de gants en nitrile (non enregistré) sur les gants intérieurs. Si nécessaire, nettoyer la visière intérieure avec un nettoyant pour vitres pour une visibilité accrue.
- Don le costume à pression positive, assurant que le costume est zippé complètement fermé, et connectez le costume à une ligne respiratoire à air. Entrez dans les BSL-4 laboratoires de costume lorsque les moniteurs BAS sont libres d'alarmes.
- Pour entrer dans la BSL-4 laboratoires de costume, se déconnecter de la ligne d'air à respirer dans la salle de costume et appuyez sur le bouton pour accéder à la demande de la salle de douche chimique.
- Une fois l'air résistant à la pression (APR) porte est activée, le joint d'étanchéité autour de la porte se dégonfle et l'aimant de porte débraye. Les portes de l'APR dans les ro de douche chimiqueom sont interverrouillage, ce qui signifie une porte avril doit être fermé lorsque l'autre est ouverte pour maintenir le confinement en tout temps. Pour passer à travers la salle de douche chimique, fermer la porte avril à la salle de costume, attendre la vessie pour regonfler et entièrement sceller le cadre de la porte, et activer le deuxième porte avril menant au laboratoire.
- Lors de l'entrée aux BSL-4 laboratoires de costume, le costume se connecter à une ligne disponible de l'air à respirer.
- Avant de poursuivre, fermez la porte avril menant au laboratoire et veiller à ce que la douche chimique est automatiquement activé pour désinfecter la zone de douche chimique et le costume. Une fois désinfectés, la porte avril dans la salle de douche chimique peut être ouvert à nouveau de la salle de costume. Si un cycle ne démarre pas, le personnel de gestion des installations de contact.
- Si la combinaison n'a pas de bottes intégrées, enfiler une paire de galoches qui se trouvent sur les étagères adjacentes pour sortir la porte, la douche chimique avril porte. Pour éviter des risques / dangers supplémentaires, vérifier que le overshoes sont sous forme de montage et serré.
3. Mouvement dans les BSL-4 laboratoires Suit
- Déplacer librement autour des laboratoires par déconnexion et reconnexion à des conduites d'air à travers les laboratoires. Restez connecté à une ligne d'air pour maintenir une pression positive lors d'une tentative de se pencher ou de récupérer des objets à proximité du sol.
NOTE: Ces mouvements tout en étant déconnecté de la ligne d'air épuiseront l'air respirable à l'intérieur du costume et créer une pression négative qui peut permettre à l'air de laboratoire pour entrer des brèches dans le costume. - Observez les moniteurs à travers les laboratoires pour différentes alarmes et l'état de l'ensemble actuel.
4. Procédures de laboratoire sortie de laboratoires BSL-4 Suit
- Décontaminer les mains gantées dans un détergent nettoyant désinfectant dans des cuves à immersion en plastique par l'évier ou dans les couloirs intérieurs. Si aucun réservoir de dunk est présent, vaporiser soigneusement les mains gantées avec un désinfectant. </ Li>
- Inspecter le fond de surchaussures ou des bottes pour le matériel visible. Si surchaussures sont propres, enlever surchaussures et placez-les sur les étagères adjacentes à la douche chimique avril porte. Fermez toutes les portes intérieures du laboratoire, débrancher la conduite d'air à respirer, et passer à la douche chimique.
- Si les surchaussures sont sales, lavez-les dans l'évier avec un détergent nettoyant désinfectant.
5.-4 BSL Procédures de douche chimiques
- Entrez la douche chimique en poussant la demande bouton pour ouvrir la porte pour accéder à avril, et fermer la porte. Rebranchez costume à une ligne d'air à respirer à l'intérieur de la douche.
- Une fois que la porte est fermée avril, le cycle de douche chimique active automatiquement pour libérer un mélange adéquat de détergent nettoyant désinfectant pour désinfecter correctement la combinaison et la zone de douche chimique. Si le cycle ne démarre pas automatiquement, tirer sur la poignée de déluge. Frotter le costume pendant environ 1 min, appuyez sur ladéluge gérer remettre en place pour éviter de vider les réservoirs de désinfectants chimiques pleinement. Un cycle manuel d'eau ne sont pas disponibles.
- Vérifiez gants et des pieds fuites en plaçant les mains et les pieds gantées dans la baignoire en plastique contenant une solution de nettoyage détergent désinfectant conservé à l'intérieur de la douche chimique. Recherchez liquide ou l'humidité sous le gant extérieur et vérifier les larmes, les déchirures ou les parties faibles sur le gant extérieur. Si une fuite se trouve dans l'un des gants extérieurs, attendre jusqu'à ce que le cycle de la douche est terminée, retirez gant de costume extérieur et le gant intérieur à l'extérieur, et laisser le gant extérieur dans la cuve en plastique.
- Frotter le costume et costume intégrée des bottes avec une brosse ou les mains gommage à long manche pour distribuer le désinfectant chimique pour toutes les surfaces de la combinaison. Rincer soigneusement costume de détergent nettoyant désinfectant pendant le cycle de l'eau de la douche.
- Débrancher la conduite d'air à respirer, préalablement exposé à l'air de laboratoire, à la fois au cours du cycle de l'eau à d chimique etisinfect la connexion sur le costume. Rincer la connexion de la ligne d'air d'un nettoyant détergent désinfectant. Sans déconnexion, le nettoyant détergent désinfectant ne peut pas autrement nettoyer la connexion de la ligne aérienne.
- Ouvrez la porte menant à la salle de costume et le fermer après avoir quitté.
- En cas d'urgence, comme une coupure nonvie en danger ou d'incendie, suivez la même procédure décrite au point 5.2.
6. Procédures Suit la chambre après avoir quitté la douche chimique
- Sécher l'extérieur de la combinaison avec une grande serviette. Décompressez le costume à pression positive, retirer une main du gant de costume extérieur, et d'examiner l'extérieur du gant de nitrile externe soigneusement l'humidité.
- Si l'humidité a fui à travers le gant de costume extérieur, retirer le gant de costume extérieur et gant de nitrile externe et éliminer les déchets de biohazard poubelle. Retirez l'autre main et répétez le contrôle.
- Retirer costume et continuer à sécher l'extérieur de costume pour éviter la pourriture sèche dAmage. Vaporiser l'intérieur du masque facial avec un nettoyant pour vitres et essuyez. Suspendez le costume pour sécher. Retirer le ruban adhésif et des gants en nitrile interne de gommages et de disposer de ces éléments dans biohazard désigné poubelle poubelle.
- Documenter les fuites ou les réparations à la combinaison dans le journal de costume et de les signaler à la gestion des installations.
- Passez à la salle de changement intérieur, enlever des gommages et des chaussettes sales, et les placer dans le bac de lavage désigné. Continuez et entrez dans la douche personnelle.
7. Douche personnelle et procédures de sortie Outer changer de chambre
- Activer douche et entièrement laver les cheveux et le corps pour un minimum de 3 min avec de l'eau et du savon. Sortez de la douche personnelle et passez à l'extérieur changer de chambre.
- Séchez et des vêtements de la rue Don, quitter le Outer changer de chambre, placez les serviettes utilisées dans le bac de lavage désigné, et procéder au Corridor Buffer.
- Indiquer moment de la sortie dans l'entrée du personnel / Sortie Logbook et indique laboratoire exsur la carte de localisation.
Representative Results
Le personnel a été soigneusement et minutieusement formés à ces techniques pour assurer des pratiques sûres et cohérentes à l'intérieur d'une installation BSL-4. En vérifiant que l'installation fonctionne correctement, comme indiqué sur la liste de vérification quotidienne (Figure 1), nous sommes en mesure de veiller à ce que tous les contrôles administratifs et techniques nécessaires sont en place et fonctionnent pour maintenir un environnement sûr et fonctionne correctement. La combinaison de pression positive fournit une couche de protection supplémentaire pour le membre du personnel. Un bon entretien et l'utilisation de ces costumes font partie intégrante de la protection individuelle pour le membre du personnel. Par le strict respect de ces procédures, aucune infection acquises au laboratoire ont été enregistrés à l'installation NIH / NIAID recherche intégrée à Fort Detrick.
Figure 1: liste de contrôle visuel quotidienpour le soutien et de sauvegarde des systèmes pour le BSL-4. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Discussion
Nous avons décrit les procédures BSL-4 entrée et de sortie utilisés à l'installation NIH / NIAID de recherche intégrée à Fort Detrick pour travailler avec très dangereux (Groupe de risque 4) des agents pathogènes. Un but de visualiser les procédures d'entrée et de sortie BSL-4 est de souligner l'importance de la sécurité du personnel de laboratoire pendant le travail avec de tels agents pathogènes pour éviter les infections acquises au laboratoire. Négatif pression, BSL-4 laboratoires maintenir un flux d'air directionnel vers l'intérieur afin d'assurer que les agents pathogènes seront contenus dans le laboratoire. costumes à pression positive avec les systèmes d'air de respiration dédié portés par le personnel de laboratoire contact à atténuer des agents pathogènes aéroportés avec le personnel de laboratoire. Après le personnel de laboratoire quittent le laboratoire BSL-4, une douche chimique désinfecte la surface de la combinaison potentiellement contaminée et empêche donc la contamination potentielle du reste du bâtiment et de la personne qui change de costume.
Que l'intégrité de la positicostume ve-pression est l'un de plusieurs barrières primaires importantes pour prévenir l'exposition des agents pathogènes potentiels, le personnel est nécessaire pour vérifier les fuites costume avant l'entrée et après la sortie de BSL-4 laboratoires. Si une fuite se produit, le personnel identifie l'emplacement de la gestion des installations et des alertes fuites. Ces pratiques assurent une réponse rapide à toute exposition à des agents pathogènes à haut risque. Bien que tous les efforts soient prises pour éliminer les risques pour le personnel de laboratoire, les violations de la combinaison peuvent se produire à travers l'utilisation de la verrerie, objets tranchants, l'agressivité des animaux, ou l'utilisation continue.
Alors que les procédures présentées ici suivent généralement les spécifications définies par BMBL CDC 2, ces procédures sont spécifiques à l'IRF-Frédéric. Chaque BSL-4 installation a différentes spécifications de conception de bâtiments qui ont une incidence les méthodes exactes de fonctionnement du laboratoire. D'autres procédures pour entrer et sortir des laboratoires BSL-4 dépendent en partie de la conception et le fonctionnement de ces laboratories. En outre, les réglementations gouvernementales dans différents pays peuvent aussi avoir un effet sur BSL-4 procédures de laboratoire dans chaque pays. Néanmoins, une compréhension générale de BSL-4 procédures et la construction des systèmes qui prennent en charge la sécurité du personnel de laboratoire aidera les administrateurs de la santé qui envisagent la conception des bâtiments similaires et des collaborateurs extérieurs impliqués dans les études d'agents pathogènes à risque élevé de surveillance.
La productivité augmentera à mesure que davantage de personnel de laboratoire est formé à BSL-4 entrée de laboratoire et des procédures de sortie et dans la réalisation d'expériences dans BSL-4 conditions. Cependant, lors de la conception des protocoles avec des collaborateurs extérieurs, un temps suffisant doit être alloué pour effectuer des opérations de laboratoire de base même, et les attentes des délais pour l'obtention de résultats doivent être ajustés en acceptant les difficultés inhérentes au travail dans BSL-4 laboratoires. Une hypothèse généralisée est que toute expérience réalisée à BSL-2 (par exemple, 2 heures)il faudra deux fois plus de temps pour effectuer en BSL-4 (par exemple 4 heures).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro-Chem Plus | National Chemical Laboratories | 255 | |
| Windex | Grainger | 3U560 | |
| Sperian aluminum pressure test cap | Honeywell Sperian | CC0199649 | |
| Sperian suit repair kit | Honeywell Sperian | CC0199621 | |
| Sperian Protection Suit Integrity Test Log | NA | NA | Created by individual lab |
| Sperian positive pressure suit | Honeywell Safety Products | BSL 4-2 | |
| Soapy water | NA | NA | Created by individual lab |
| Outer suit gloves (canners) | Fisher | 19-019-601 | |
| Outer suit gloves (MAPA) | Fisher | 2MYU1 | |
| Inner nitrile suit gloves | Fisher | 19-050-592 | |
| Zip Lube | Amazon | B000GKBEJA | |
| Scrubs | Cintas | 60975/60976 | |
| Socks | Cintas | 944 | |
| Duct Tape | Pack-N-Tape | 51131069695 | |
| Towels | Cintas | 2720 | |
| O-rings | O-ring warehouse | AS568-343 | |
| Overshoes | Amazon | B0034KZE22 | |
| Plastic dunk tanks | Fisher | 14-831-113 | |
| Entry and exit logbook | NA | NA | Created by individual lab |
| Baby powder | Amazon | 44230 | |
| Ethanol | Fisher | BP2818500 |
References
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