Introduction
L'interesse scientifico in esotici, gli agenti patogeni ad alto conseguenza è costantemente aumentato negli ultimi anni. Di particolare interesse sono gli agenti patogeni considerati emergenti o riemergenti agenti che sono potenziali armi biologiche. In termini di priorità della ricerca e del rischio, questi agenti patogeni sono classificati per i Centers for Disease Control and Prevention (CDC) come Bioterrorism Categoria Agenti di AC 1. Inoltre, gli agenti patogeni ad alto conseguenza sono classificati come selezionare gli agenti [e] tossine in materia di norme di importazione, di esportazione e di accesso. Negli Stati Uniti, le regole e le procedure di biosicurezza che devono essere seguite per il lavoro con gli agenti patogeni speciali che richiedono BSL-2, BSL-3, o BSL-4 di contenimento sono descritte in biosicurezza in microbiologiche e laboratori biomedici (BMBL) 2. Gli agenti patogeni che sono percepiti per presentare il più significativo rischio per la salute per gli esseri umani e / o animali sono considerati BSL-4 agenti patogeni. Di conseguenza, la ricerca BSL-4 richiede particolare cautela, highlformazione specializzata y, e una infrastruttura 3 struttura robusta e ridondante. Per migliorare la consapevolezza generale delle sfide connesse con BSL-4 ricerca, la comprensione dei requisiti per le operazioni di costruzione ad alto contenimento, la gestione dei sistemi, e di routine test di validazione dei controlli tecnici è necessario. Il nostro obiettivo è far avanzare questa comprensione presentando visivamente le maggiori standard di funzionamento e di biosicurezza, e la conseguente maggiore difficoltà di hands-on di ricerca in BSL-4 di contenimento.
Laboratori BSL-4 tuta strutture abitative devono soddisfare severi requisiti tra cui, ma non limitatamente a, i sistemi di ventilazione nonrecirculating dedicati, rigoroso sistema di gestione dei rifiuti e processi 4,5, e sistemi di building automation (BAS) 2,6,7. aria di alimentazione da laboratorio è filtrata una volta e l'aria di scarico è doppio filtrata attraverso filtri ad alta efficienza di particelle d'aria (HEPA), che sono recertified ogni anno. Inoltre, laBMBL impone requisiti rigorosi per la decontaminazione dei rifiuti solidi e la raccolta e la decontaminazione di tutti i materiali effluenti prima del rilascio nel sistema rifiuti. ridondanze multiple sono integrati nel sistema per impedire il rilascio di qualsiasi tipo di BSL-4 patogeno. Le operazioni di impianto del monitor BAS remoto e possono individuare l'area del problema. sistemi di supporto impianto vengono controllati quotidianamente dal personale per il funzionamento ottimale e la notifica dei problemi in tempo reale. Tutti i sistemi sono stati testati su base ricorrente per rispettare CDC / divisione dei requisiti selezionare gli agenti e tossine per il funzionamento impianto.
In aggiunta a questi standard per l'impianto fisico, personale di laboratorio che lavora con selezionare gli agenti e tossine deve presentare una valutazione del rischio di sicurezza (SRA) dal Dipartimento di Giustizia prima di lavorare con o intorno selezionare gli agenti. Inoltre, il personale che lavora con Livello 1 selezionare gli agenti (ad esempio, il virus Ebola, Bacillus anthracis) devono essere iscrittiin un Programma di Affidabilità del personale (PRP), che valuta continuamente la salute fisica e mentale dei singoli ricercatori 8. Le selezioni di salute di valutare se gli individui sono fisicamente in grado di svolgere il lavoro in BSL-4 di contenimento in modo sicuro. selezioni di salute mentale valutare il benessere generale, il benessere psicologico e la resilienza, e la consapevolezza della sicurezza del personale. Al NIAID, scienziati che lavorano con selezionare gli agenti sottoposti a ulteriore controllo in cui ogni individuo compie un check e richieste controllo dei precedenti Agenzia nazionale Access (ANACI), che esamina le credenziali di studio e professionali, storia criminale, storia finanziaria, e il rischio di influenza straniera.
Rispetto alla BSL-2 entry di laboratorio, l'ingresso massimo contenimento richiede un considerevolmente maggiore investimento di risorse, tempo, e la formazione. Dopo l'approvazione SRA e la registrazione con la Divisione di selezionare gli agenti e tossine, il personale deve essere sottoposto a hands-on stringenti trenoing prima di accedere ai laboratori BSL-4 tuta. Personale di laboratorio riceve una formazione sul funzionamento della struttura, compresi i controlli quotidiani di funzioni critiche e le procedure di entrata / uscita 9. Il personale è anche addestrato su di laboratorio di biosicurezza e la cura e l'uso di tute positivo pressione. tute bianche in tessuto poliestere con rivestimento di cloruro di polivinile sono utilizzati presso l'impianto di NIH / NIAID Ricerca Integrata a Fort Detrick. Strutture che utilizzano altri tipi / marche commerciali di tute positiva pressione possono richiedere diverse procedure operative per entrare e uscire il laboratorio BSL-4 rispetto a quelli qui delineato. I ricercatori in impianti che utilizzano questo articolo dovrebbe tenere conto di queste differenze prima dell'allenamento. Tuta da allenamento presso l'impianto di NIH / NIAID di ricerca integrato a Fort Detrick include procedure corrette per indossare la tuta, garantendo la tuta funziona correttamente, riparazione e manutenzione abiti (all'interno e all'esterno del laboratorio), e lo spostamento all'interno del laboratorio. Soprace questa formazione è completa, il membro del personale di laboratorio in grado di iniziare a lavorare all'interno dei laboratori BSL-4 tuta. Inizialmente, un altro esperto mentori membro del personale one-to-one al membro del personale di nuova formazione durante i primi cinque visite ai laboratori BSL-4 tuta. Per lavorare in modo indipendente presso l'impianto di NIH / NIAID di ricerca integrato a Fort Detrick, il membro del personale di nuova formazione completa un minimo di 40 visite sorvegliate in BSL-4 laboratori tuta con almeno 100 ore di tempo di lavoro pratico all'interno dei laboratori.
Protocol
1. Lista di controllo esterno giornaliera
- Verificare sistemi di sicurezza. Controllare la respirazione sistemi ad aria, eseguire il backup di sistemi ad aria di rottura, i sistemi di sistema di decontaminazione degli effluenti (EDS), sistema doccia chimica, flusso d'aria direzionale e funzionalità in autoclave (Figura 1).
2. Le procedure di laboratorio di ingresso
- Buffer Corridoio procedure di ingresso per il personale di laboratorio
- Inserire il nome del personale della persona, il tempo di ingresso, la posizione di laboratorio, e gli agenti patogeni in fase di studio nel personale di entrata / uscita Logbook. Indicare la posizione di laboratorio su una scheda magnetica.
- Per garantire la tuta BSL-4 sistemi laboratori 'funzionino correttamente, verificare che i sistemi esterni sono stati controllati ed i laboratori sono stati eliminati per l'entrata in sistemi esterni Lista di controllo per la sicurezza quotidiana (Figura 1).
- Per assicurare che la pressione stanza del laboratorio è a set point pressione negativa che mantiene proper il flusso d'aria direzionale, controllare il sistema di building automation (BAS) monitor all'esterno dell'ingresso stanza cambiamento esteriore. Se la pressione stanza non è nel range di normalità, avvisare la biosicurezza o strutture del personale e ritardare l'ingresso di laboratorio fino a quando tali ritorni di pressione a valori normali.
- Garantire la disponibilità di una autoclave per la sterilizzazione di rifiuti biologici e / o lavanderia a seguito lavoro sperimentale.
- Ottenere scrub, calzini e asciugamani dalla camera di stoccaggio contenenti materiali di consumo della struttura situata nelle vicinanze del Personale di entrata / uscita Logbook.
- Outer cambio di camera d'ingresso Procedure per il personale di laboratorio:
- requisiti di sicurezza completa che regolano e accesso documento al laboratorio biocontenimento. Entrate nella stanza cambiamento esteriore.
- Togliere tutti gli indumenti di strada, indumenti intimi, gioielli e orologi, don scrub, e procedere alla stanza tuta.
- A pressione positiva ispezione tuta protettiva e Verifica integrità da LaIl personale labora- del vestito camera:
- Su ottenendo una tuta protettiva a pressione positiva di importo adeguato, eseguire un controllo visivo della tuta alla ricerca di eventuali buchi, strappi, punti di puntura, strappi cucitura o punti deboli. Verificare che i guanti tuta esterni a fondo, dal momento che i guanti sono il luogo più probabilità di essere danneggiati.
- Cambiare i guanti almeno ogni 7 giorni di calendario o se il danno ai guanti è identificato.
- Per sostituire i guanti tuta esterni, rimuovere il nastro adesivo dal guanto tuta esistente, rotolare l'O-ring sul manicotto, e rimuovere il vecchio guanto tuta.
- Mettere un nuovo guanto sul polsino della tuta e assicurarsi che il guanto copre l'intero bracciale e il pollice è nella posizione corretta. Posizionare l'O-ring sopra il guanto, la sede l'O-ring nella scanalatura sul bracciale, e usare nastro adesivo per fissare guanto abito esteriore.
- Piegare il bracciale guanto sopra il nastro adesivo e O-ring, sigillare il guanto con un ultimo pezzo di nastro adesivo, e ri-controllare il neo Attaguanto Ched.
- Applicare un sottile strato di cerniera lubrificante alla cerniera almeno una volta alla settimana.
- Coprire ciascuna delle valvole di scarico, che si trova all'interno della tuta dietro il coperchio della testa e sul lato sinistro della schiena sia con nastro adesivo o un tappo di prova di pressione di alluminio, e zip la tuta chiuso.
- Collegare la disconnessione rapida / connect attaccamento alla fine di ogni riga di respirazione per il raccordo del tubo sulla tuta. Gonfiare la tuta fino a quando le braccia e le gambe sono ferme e mettere il vestito in posizione verticale. Staccare l'alimentazione dell'aria.
- L'abito non deve essere troppo sotto pressione come una pressione eccessiva può causare gravi danni al completo. Accuratamente ispezionare il vestito per qualsiasi indicazione di una perdita d'aria per circa 5 minuti e controllare visivamente la tuta per i segni di deflazione. Assicurarsi che il vestito non è finita-pressurizzato come eccesso di pressione può causare gravi danni al completo.
- Se l'abito perde compattezza, controlla il vestito per le perdite da ri-inflating la tuta. Ascoltare e sentire la presenza di perdite nel vestito. Se necessario, spruzzare tutte le superfici della tuta di protezione con una soluzione di sapone. Alcune aree comuni per le perdite sono le cuciture della tuta, la zona cerniera, e la giunzione del materiale della visiera con il materiale della tuta. Monitor per la formazione di bolle che indicano una perdita, con particolare attenzione alle cuciture e visiera. Verificare che le valvole di scarico sono completamente sigillati.
- Riparare piccole perdite di tessuto temporaneamente con del nastro adesivo. riparazioni permanenti complete utilizzando materiale proveniente da un kit di riparazione seme. Se il seme non può essere riparato facilmente, decontaminare l'abito con un disinfettante a base di alcool e rimuovere dalla tuta-room. Se l'abito è al di là di riparazione, in pensione vestito dall'uso e incenerire.
- Una volta che il test di integrità è completato, decomprimere il vestito e rimuovere i coperchi delle valvole di scarico. La mancata rimozione dei coperchi di scarico intasare filtrazione e danneggiare gravemente la tuta. Inserisci test e sulle riparazioni inA pressione positiva Suit integrità log di test.
- Indossando a pressione positiva vestito in tuta camera e di entrare in BSL-4 laboratori Suit:
- calzini nastro per gambe di scrub. Don nitrile interno guanti e condotto li nastro alle polsini della macchia. Don un secondo paio di guanti nitrile (non registrata) sui guanti interne. Se necessario, pulire la visiera interna con detergente per vetri per una maggiore visibilità.
- Don la tuta a pressione positiva, assicurandosi che la tuta è compresso completamente chiuso, e collegare il seme di una linea di respirare aria. Entrare nei laboratori BSL-4 tuta quando i monitor BAS sono privi di allarmi.
- Per inserire i laboratori BSL-4 tuta, scollegare dalla linea di aria respirabile nella stanza tuta e spingere la richiesta pulsante per accedere per la doccia chimica.
- Una volta che la pressione resistente (APR) porta viene attivata, la guarnizione attorno alla porta sgonfia e il magnete porta disimpegna. Le porte APR sotto la doccia chimica room sono ad incastro, cioè una porta APR deve essere chiusa quando l'altro è aperto per mantenere contenimento in ogni momento. Per passare attraverso la doccia chimica, chiudere la porta APR stanza vestito, attendere che la vescica di ri-gonfiare e completamente sigillare il telaio della porta, e attivare la seconda porta che conduce aprile al laboratorio.
- All'entrata ai laboratori BSL-4 tuta, collegare il vestito di una linea di aria respirabile a disposizione.
- Prima di procedere oltre, chiudere la porta Aprile che conduce al laboratorio e garantire che doccia chimica si attiva automaticamente per disinfettare la zona doccia chimica e la tuta. Una volta disinfettate, la porta APR doccia chimica può essere aperto di nuovo dalla stanza tuta. Se un ciclo non si avvia, facility contatto gestione del personale.
- Se il seme non ha stivali integrali, indossare un paio di soprascarpe che si trovano sugli scaffali adiacenti per uscire porta, la doccia chimica aprile porta. Per evitare ulteriori rischi / pericoli, verificare che il overshoes sono forma di montaggio e avvolgente.
3. movimento all'interno della BSL-4 laboratori Suit
- Muoversi liberamente dei laboratori scollegando e ricollegando alle linee aeree in tutto i laboratori. Rimani connesso ad una linea d'aria per mantenere la pressione positiva quando si tenta di piegarsi o recuperare gli elementi in prossimità del suolo.
NOTA: Tali movimenti mentre si è disconnessi dalla linea d'aria, si esaurirà la respirazione dell'aria dall'interno della tuta e creare una pressione negativa che può permettere all'aria di entrare laboratorio eventuali violazioni nel vestito. - Osservare i monitor durante i laboratori per i vari allarmi e lo stato interno corrente.
4. Le procedure di laboratorio uscita dai laboratori BSL-4 Suit
- Decontaminare le mani guantate di detergente detergente disinfettante in serbatoi di plastica Dunk dal lavandino o in corridoi interni. Se non dunk serbatoio è presente, spruzzare mani guantate accuratamente con disinfettante. </ Li>
- Ispezionare il fondo dei soprascarpe o stivali per il materiale visibile. Se soprascarpe sono puliti, rimuovere soprascarpe e metterli sugli scaffali adiacenti alla doccia chimica aprile porta. Chiudere tutte le porte interne del laboratorio, scollegare dalla linea di aria respirabile, e procedere alla doccia chimica.
- Se le soprascarpe sono sporchi, lavarli accuratamente nel lavandino con un detergente detergente disinfettante.
5. BSL-4 Procedure doccia chimici
- Inserire la doccia chimica spingendo la richiesta pulsante per aprire la porta APR accedere, e chiudere la porta. Ricollegare vestito ad una linea di aria respirabile all'interno della doccia.
- Quando la porta APR chiusa, il ciclo doccia chimica attiva automaticamente per rilasciare un'adeguata miscela di liquido detergente disinfettante per disinfettare correttamente la tuta e la zona doccia chimica. Se il ciclo non si avvia automaticamente, tirare la maniglia diluvio. Scrub il vestito per circa 1 minuto, spingere ladiluvio di gestire al suo posto per evitare completamente lo scarico delle vasche disinfettanti chimici. Un ciclo doccia manuale non è disponibile.
- Verificare la presenza di guanto e piede perdite mettendo le mani ei piedi guantate nella vasca di plastica contenente la soluzione detergente detergente disinfettante mantenuto all'interno della doccia chimica. Cercare liquido o umidità sotto il guanto esterno e verificare la presenza di rotture, strappi o porzioni deboli sul guanto esterno. Se una perdita si trova in uno dei guanti esterni, attendere che il ciclo di doccia, rimuovere guanto abito esterno e il più esterno guanto interno, e lasciare il guanto esterno nella vasca di plastica.
- Scrub gli stivali tuta e tuta integrato con un pennello o con le mani macchia manico lungo per distribuire il disinfettante chimico di tutte le superfici della tuta. Sciacquare vestito di detergente detergente disinfettante durante il ciclo dell'acqua della doccia.
- Scollegare la linea aria respirabile, precedentemente esposta all'aria di laboratorio, sia durante la chimica e il ciclo dell'acqua disinfect il collegamento sulla tuta. Risciacquare il collegamento della linea aerea di qualsiasi detergente detergente disinfettante. Senza disconnessione, il pulitore di detergente disinfettante non può altrimenti pulire il collegamento della linea d'aria.
- Aprire la porta che conduce alla sala tuta e chiuderlo dopo l'uscita.
- In caso di emergenza, come ad esempio un taglio non-vita-minaccioso o incendi, seguire la stessa procedura descritta al punto 5.2.
6. Procedure Suit Camera dopo l'uscita dalla doccia Chemical
- Essiccare l'esterno della tuta con un grande asciugamano. Decomprimere la tuta pressione positiva, rimuovere una mano dal guanto tuta esterno, ed esaminare l'esterno del guanto nitrile esterno attentamente umidità.
- Se l'umidità è trapelata attraverso il guanto abito esterno, togliere il guanto abito esterno e guanto di nitrile esterno e smaltire nel cestino dei rifiuti a rischio biologico. Rimuovere l'altra mano e ripetere il controllo.
- Rimuovere tuta e continuare ad asciugare esterno della tuta per prevenire secca marcire dAmage. Spruzzare l'interno della visiera con detergente per vetri e asciugare. Appendere l'abito ad asciugare. Rimuovere il nastro adesivo e guanti di nitrile interni da scrub e smaltire questi elementi in rischio biologico designato spreco bin.
- Documentare eventuali perdite o riparazioni al completo nel registro tuta e segnalarli al facility management.
- Procedere alla stanza cambiamento interiore, rimuovere scrub e calzini sporchi, e metterli nel cestino di lavanderia designato. Procedere e entrare nella doccia personali.
7. doccia personale e Outer cambiare stanza procedure di uscita
- Attiva doccia e completamente lavare i capelli e il corpo per almeno 3 minuti con acqua e sapone. Uscire dalla doccia personale e procedere al cambio di camera esterno.
- Asciugare e abbigliamento via don, uscire dal cambio di camera esterno, inserire asciugamani usati nel cestino di lavanderia designato, e procedere al Corridoio Buffer.
- Indicare il tempo di uscita in Personale di ingresso / uscita Diario di bordo ed indicare laboratorio exsul bordo localizzatore.
Representative Results
Il personale è stato attentamente e accuratamente addestrato in queste tecniche per garantire pratiche sicure e coerenti all'interno di una struttura BSL-4. Controllando che l'impianto funziona correttamente, come indicato sulla lista di controllo giornaliera (figura 1), siamo in grado di garantire che tutti i necessari controlli amministrativi e tecnici sono a posto e funzionante per mantenere un ambiente sicuro e corretto funzionamento. La tuta a pressione positiva fornisce un ulteriore livello di protezione per il membro del personale. Una corretta manutenzione e l'uso di questi abiti è parte integrante di protezione personale per il membro del personale. Attraverso il rispetto rigoroso di queste procedure, non infezioni acquisite in laboratorio sono stati registrati presso l'impianto di NIH / NIAID Ricerca Integrata a Fort Detrick.
Figura 1: Giornaliero lista di controllo visivoper i sistemi di supporto e di backup per il BSL-4. Fai clic qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Discussion
Abbiamo delineato le procedure di ingresso e di uscita BSL-4 utilizzati presso l'impianto di NIH / NIAID di ricerca integrato a Fort Detrick per lavorare con gli agenti patogeni altamente pericolosi (4 Group Risk). Uno scopo di visualizzare le procedure di ingresso e di uscita BSL-4 è quello di sottolineare l'importanza della sicurezza del personale di laboratorio durante il lavoro con tali agenti patogeni per evitare infezioni acquisite in laboratorio. Pressione negativa, BSL-4 laboratori mantenere un flusso d'aria verso l'interno direzionale per garantire che i patogeni saranno contenuti all'interno del laboratorio. tute Positivo-pressione con sistemi di aria di respirazione dedicato indossati da personale di laboratorio contatto mitigare di agenti patogeni presenti nell'aria con il personale di laboratorio. Dopo personale di laboratorio lasciano laboratorio BSL-4, una doccia chimica disinfetta la superficie della muta potenzialmente contaminati e quindi impedisce la contaminazione potenziale del resto dell'edificio e la persona cambiando fuori della muta.
Come l'integrità del positituta ve-pressione è una delle numerose importanti barriere principali per prevenire la potenziale esposizione dei patogeni, il personale è tenuto a verificare la presenza di eventuali perdite tuta prima di entrare e dopo l'uscita dalla BSL-4 laboratori. Se si verifica una perdita, il personale identifica la posizione delle fughe di notizie e avvisi facility management. Queste pratiche garantiscono una risposta rapida a qualsiasi esposizione ad agenti patogeni ad alto conseguenza. Anche se ogni sforzo è presa per eliminare il rischio per il personale di laboratorio, violazioni della tuta si possono verificare attraverso l'uso di oggetti di vetro, taglienti, aggressione animale, o di uso continuo.
Mentre le procedure qui presentate generalmente seguono le specifiche BMBL delineate da CDC 2, queste procedure sono specifiche per l'IRF-Federico. Ogni struttura BSL-4 ha diverse specifiche di progetto di costruzione che hanno un impatto le modalità precise di funzionamento laboratorio. Procedure alternative per entrare e uscire laboratori BSL-4 dipendono in parte dalla progettazione e il funzionamento di questi Laboratories. Inoltre, i regolamenti governativi in diversi paesi possono anche avere un effetto sulla BSL-4 procedure di laboratorio in ogni paese. Tuttavia, una comprensione generale del BSL-4 procedure e la costruzione di sistemi che supportano la sicurezza del personale di laboratorio aiuterà gli amministratori sanitari che stanno contemplando la progettazione di edifici simili e collaboratori esterni coinvolti negli studi di agenti patogeni ad alto rischio di monitoraggio.
La produttività aumenterà come più personale di laboratorio è addestrato in BSL-4 ingresso di laboratorio e procedure di uscita e nella conduzione di esperimenti sotto BSL-4 condizioni. Tuttavia, quando si progetta protocolli con collaboratori esterni, il tempo sufficiente dovrebbe essere assegnato a eseguire anche operazioni di laboratorio di base, e le aspettative di tempi per il conseguimento di risultati devono essere adattati accettando le difficoltà inerenti con il lavoro in BSL-4 laboratori. Un presupposto generalizzato è che ogni esperimento eseguito a BSL-2 (ad esempio, 2 ore)richiederà il doppio della quantità di tempo per eseguire in BSL-4 (ad esempio, 4 ore).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro-Chem Plus | National Chemical Laboratories | 255 | |
| Windex | Grainger | 3U560 | |
| Sperian aluminum pressure test cap | Honeywell Sperian | CC0199649 | |
| Sperian suit repair kit | Honeywell Sperian | CC0199621 | |
| Sperian Protection Suit Integrity Test Log | NA | NA | Created by individual lab |
| Sperian positive pressure suit | Honeywell Safety Products | BSL 4-2 | |
| Soapy water | NA | NA | Created by individual lab |
| Outer suit gloves (canners) | Fisher | 19-019-601 | |
| Outer suit gloves (MAPA) | Fisher | 2MYU1 | |
| Inner nitrile suit gloves | Fisher | 19-050-592 | |
| Zip Lube | Amazon | B000GKBEJA | |
| Scrubs | Cintas | 60975/60976 | |
| Socks | Cintas | 944 | |
| Duct Tape | Pack-N-Tape | 51131069695 | |
| Towels | Cintas | 2720 | |
| O-rings | O-ring warehouse | AS568-343 | |
| Overshoes | Amazon | B0034KZE22 | |
| Plastic dunk tanks | Fisher | 14-831-113 | |
| Entry and exit logbook | NA | NA | Created by individual lab |
| Baby powder | Amazon | 44230 | |
| Ethanol | Fisher | BP2818500 |
References
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