Introduction
O interesse científico em exóticos, patógenos de alta-consequência tem aumentado constantemente nos últimos anos. De particular interesse são patógenos considerados emergentes ou agentes de re-emergentes que são potenciais armas biológicas. Em termos de prioridade de investigação e risco, estes patógenos são classificadas pelos Centers for Disease Control and Prevention (CDC) como Bioterrorism Categoria AC agentes 1. Além disso, patógenos de alta-consequência são classificados como agentes selecionados [e] Toxinas no que diz respeito aos regulamentos de importação, de exportação e de acesso. Em os EUA, as regras e procedimentos de biossegurança que devem ser seguidas para o trabalho com patógenos especiais que exigem BSL-2, BSL-3, ou BSL-4 contenção estão descritos no Biossegurança na microbiológica e Biomedical Laboratories (BMBL) 2. Patógenos que são percebidos para apresentar o risco de saúde mais significativo para os seres humanos e / ou animais são considerados BSL-4 patógenos. Consequentemente, a pesquisa BSL-4 requer um cuidado especial, highlformação especializada y, e uma infra-estrutura de 3 instalação robusta e redundante. Para melhorar a consciência geral dos desafios associados com BSL-4 a pesquisa, a compreensão dos requisitos para as operações de construção de alta contenção, gerenciamento de sistemas e testes de validação de rotina de controles de engenharia é necessário. Temos como objectivo fazer avançar esse entendimento, apresentando visualmente o aumento dos padrões de operação e biossegurança, eo resultante aumento da dificuldade de hands-on pesquisa em BSL-4 contenção.
Instalações de alojamento laboratórios BSL-4 terno deve atender a requisitos rigorosos, incluindo, mas não limitados a, sistemas de ventilação nonrecirculating dedicado, rigoroso sistema de tratamento de resíduos e processa 4,5, e sistemas de automação predial (BAS) 2,6,7. ar de alimentação de laboratório é filtrada uma vez e ar de exaustão é double-filtrada através de filtros de ar (HEPA) de partículas de alta eficiência, que são recertificadas anualmente. Além disso, oBMBL impõe requisitos rigorosos para a descontaminação de resíduos sólidos e coleta e descontaminação de todos os materiais de efluentes antes do lançamento no sistema de resíduos em geral. Redundâncias múltiplas são incorporadas ao sistema para impedir a libertação de qualquer tipo de BSL-4 patógeno. As operações de instalação do monitor BAS remotamente e pode identificar a área do problema. sistemas de apoio à instalação são verificados diariamente pelo pessoal para o funcionamento ideal e notificação de problemas em tempo real. Todos os sistemas são testados em uma base recorrente para cumprir com CDC / Divisão de selecionar agentes e toxinas requisitos para a operação de instalação.
Além desses padrões para a instalação física, o pessoal do laboratório que trabalha com agentes selecionados e toxinas deve submeter-se a uma Avaliação de Risco de Segurança (SRA) pelo Departamento de Justiça antes de trabalhar com ou em torno selecionar agentes. Além disso, o pessoal que trabalha com o Tier 1 selecionar agentes (por exemplo, o vírus Ebola, Bacillus anthracis) deve ser inscritoem um Programa de Confiabilidade de pessoal (PRP), que avalia continuamente a saúde física e mental dos pesquisadores individuais 8. Os exames de saúde avaliar se os indivíduos são fisicamente capaz de realizar o trabalho em BSL-4 contenção de uma maneira segura. rastreios de saúde mental avaliar bem-estar geral, bem-estar psicológico e resiliência e sensibilização para a segurança do pessoal. No NIAID, os cientistas que trabalham com agentes selecionados passam por exame complementar em que cada indivíduo completa uma verificação e Consultas (ANACI) verificação de antecedentes Agência Nacional de Acesso, que examina as credenciais educacionais e profissionais, história criminal, história financeira e risco de influência estrangeira.
Comparado a entrada laboratório BSL-2, a entrada máxima contenção exige uma consideravelmente maior investimento de recursos, tempo e treinamento. Após a aprovação SRA e registro junto à Divisão de selecionar agentes e toxinas, o pessoal deve ser submetido a hands-on rigorosas treming antes que o acesso aos laboratórios BSL-4 terno. Pessoal de laboratório recebe treinamento sobre o funcionamento da instalação, incluindo verificações diárias de funções críticas e procedimentos de entrada / saída 9. A equipe também é treinado em bio-segurança laboratorial e cuidado e uso de ternos de pressão positiva. ternos brancos feitos de tecido de poliéster com revestimento de cloreto de polivinilo são usados na instalação NIH / NIAID Integrated Research em Fort Detrick. Instalações que usam outros tipos / marcas comerciais de ternos de pressão positiva pode requerer procedimentos operacionais diferentes para entrar e sair do laboratório BSL-4 do que as descritas aqui. Pesquisadores em instalações que utilizam este artigo deve levar em conta essas diferenças antes do treino. terno treinamento no Centro de NIH / NIAID Integrated Research em Fort Detrick inclui procedimentos adequados para vestir o terno, garantindo o processo está funcionando corretamente, reparação e manutenção de ternos (dentro e fora do laboratório), e movendo-se dentro do laboratório. Emce esta formação é completa, o membro do pessoal de laboratório pode começar a trabalhar dentro dos laboratórios BSL-4 terno. Inicialmente, mais experientes mentores membro da equipe one-on-one o membro do pessoal recém-formados durante os primeiros cinco visitas aos laboratórios BSL-4 terno. Para trabalhar de forma independente no Centro de NIH / NIAID Integrated Research em Fort Detrick, o membro do pessoal recém-formados completa um mínimo de 40 visitas supervisionadas em BSL-4 laboratórios terno com pelo menos 100 horas de tempo de trabalho prático dentro dos laboratórios.
Protocol
1. Diário Checklist externo
- Verifique sistemas de segurança. Verifique respirando sistemas de ar, faça backup dos sistemas de ar quebrando, sistemas de sistema de descontaminação de efluentes (EDS), sistema de chuveiro química, fluxo de ar direcional e funcionalidade autoclave (Figura 1).
2. Procedimentos de Laboratório de entrada
- Tampão corredor de entrada Procedimentos por pessoal de laboratório
- Inserir o nome do pessoal da pessoa, o tempo de entrada, localização laboratório e patógenos em estudo no pessoal Entrada / Saída diário de bordo. Indicar a localização do laboratório em uma placa magnética.
- Para garantir o naipe BSL-4 sistemas dos laboratórios estão funcionando corretamente, verificar se os sistemas externos foram verificados e os laboratórios foram apuradas para a entrada no Diário sistemas externos Checklist de Segurança (Figura 1).
- Para garantir que a pressão sala de laboratório está dentro de pontos de ajuste da pressão negativa que mantém proper fluxo de ar direcional, verifique o sistema de automação predial (BAS) monitor fora da entrada da sala de mudança exterior. Se a pressão do quarto não está na faixa normal, notificar biossegurança ou instalações de pessoal e atrasar a entrada laboratório até essa pressão retorna ao normal.
- Assegurar a disponibilidade de uma autoclave para esterilização de resíduos e / ou lavandaria biológica seguinte trabalho experimental.
- Obter esfrega, meias e toalhas de quarto de armazenamento contendo suprimentos da instalação localizada perto do pessoal Entrada / Saída diário de bordo.
- Outer Mudança sala de entrada Procedimentos por pessoal de laboratório:
- requisitos de segurança completas que regulam e acesso de documentos para o laboratório de isolamento biológico. Entre na sala mudança exterior.
- Tirar toda a roupa rua, roupas, jóias e relógios, don scrubs, e prossiga para a sala de terno.
- Inspeção Roupa Protectora de pressão positiva e Teste de integridade por LaStaff labora- no quarto Suit:
- Após a obtenção de um fato de protecção de pressão positiva de um tamanho adequado, realizar uma inspeção visual do terno que olha para todos os furos, rasgos, pontos de punção, rasgos de costura, ou pontos fracos. Inspecione as luvas terno exterior completamente, uma vez que as luvas são o lugar mais provável de ser danificado.
- Mudar de luvas, pelo menos, a cada 7 dias ou se danos nas luvas é identificado.
- Para substituir as luvas terno exteriores, retire a fita adesiva da luva terno existente, role o O-ring na manga, e remover a luva terno velho.
- Colocar uma nova luva sobre o punho do terno e garantir que a luva cobre todo o balonete e o polegar se encontra na posição correcta. Coloque o anel de vedação sobre a luva, assentar o O-ring na ranhura no punho, e usar uma fita adesiva para prender a luva terno exterior.
- Dobre o punho luva sobre a fita adesiva e O-ring, selar a luva com uma peça final de fita adesiva, e re-inspecionar o recém-attaluva Ched.
- Aplicar uma camada fina de zíper lubrificante ao fecho de correr, pelo menos, uma vez por semana.
- Cubra cada uma das válvulas de escape, localizado dentro do terno atrás da tampa da cabeça e no lado esquerdo das costas ou com fita adesiva ou uma tampa de teste de pressão de alumínio, e zip o naipe fechado.
- Ligue a desconexão rápida / conectar anexo no final de cada linha de respiração para a conexão da mangueira no terno. Inflar o terno até que os braços e as pernas são firmes e colocar o terno para uma posição vertical. Desligue o suprimento de ar.
- O processo não deve ser sobre-pressurizado a pressão excessiva pode causar sérios danos ao terno. inspeccionar minuciosamente o terno para qualquer indicação de um vazamento de ar por aproximadamente 5 minutos e inspecione visualmente o terno para sinais de deflação. Certifique-se de que o processo não é sobre-pressurizado como excesso de pressão pode causar sérios danos ao terno.
- Se o terno perde a firmeza, verifique o terno para vazamentos por re-inflating a ação. Ouvir e sentir se há vazamentos no terno. Se necessário, pulverizar todas as superfícies da roupa de proteção com uma solução de sabão. Algumas áreas comuns de vazamentos são as costuras do terno, a área de zíper, e a junção do material viseira com o material da roupa. Monitor para a formação de bolhas que indicam um vazamento, com especial atenção para as costuras e viseira. Verificar para assegurar que as válvulas de escape estão totalmente selada.
- Reparar pequenas fugas de tecido temporariamente com fita adesiva. reparos permanentes completos utilizando material a partir de um kit de reparação de terno. Se o processo não pode ser reparado facilmente, descontaminar o terno com um desinfetante à base de álcool e retire do quarto suit-o. Se o terno é além do reparo, se aposentar terno do uso e incinerar.
- Uma vez que o teste de integridade for concluída, descompacte o terno e remover as tampas das válvulas de escape. Se não remover as tampas de escape vai entupir filtração e danificar gravemente o processo. Digite testes e reparos naTerno de pressão positiva Integrity Test Log.
- Vestindo terno com pressão positiva no quarto terno e Entrando em BSL-4 Laboratories Fato:
- Fita meias para os pés de scrubs. Don luvas de borracha nitrílica interna e fita adesiva-los para as algemas dos scrubs. D. um segundo par de luvas de borracha nitrílica (não gravado) sobre as luvas internas. Se necessário, limpe o escudo face interna com limpador de vidro para uma maior visibilidade.
- Don o traje de pressão positiva, certificando-se o processo é fechado completamente fechada, e ligar o terno a uma linha de respirar ar. Entrar nos laboratórios BSL-4 terno quando os monitores BAS são livres de alarmes.
- Para inserir os laboratórios BSL-4 terno, se desconectar da linha de ar para respirar na sala de terno e empurrar a solicitação para acessar o botão para o quarto de banho químico.
- Uma vez que a resistente à pressão de ar (APR) porta é ativado, o selo em torno da porta esvazia eo ímã porta desengata. As portas APR dentro do chuveiro químico roOM são interligadas, o que significa uma porta de abril deve ser fechada quando a outra é aberta para manter a contenção em todos os momentos. Para passar por casa de banho química, feche a porta abril para a sala de terno, aguarde a bexiga para re-inflacionar e totalmente selar a moldura da porta, e ativar a segunda porta abril levando para o laboratório.
- Após a entrada aos laboratórios BSL-4 terno, conecte o terno a uma linha de ar respirável disponível.
- Antes de prosseguir, feche a porta abril levando para o laboratório e garantir que chuveiro químico é activado automaticamente para desinfectar a área do chuveiro química e terno. Uma vez desinfectados, a porta abril na casa de banho química pode ser aberto novamente a partir da sala de terno. Se um ciclo de não começar, pessoal de gestão de instalações de contacto.
- Se a ação não tem botas integrais, vestir um par de galochas que estão localizados nas prateleiras adjacentes para sair da porta, o chuveiro químico porta abril Para evitar risco / perigos adicionais, verifique se o overshoes são a forma adequada e confortável.
3. A circulação dentro dos BSL-4 Laboratories Suit
- Mover-se livremente ao redor dos laboratórios desconectando e reconectando a linhas de ar em toda a laboratórios. Mantenha-se ligado a uma linha de ar para manter a pressão positiva ao tentar curvar-se ou recuperar itens próximo do chão.
NOTA: Esses movimentos enquanto estiver desconectado da linha de ar vai esgotar o ar respirável dentro do terno e criar uma pressão negativa que pode permitir que o ar do laboratório de introduzir quaisquer violações no processo. - Observe os monitores ao longo dos laboratórios para vários alarmes e status conjunto atual.
4. Procedimentos de Laboratório saída da Laboratories BSL-4 Suit
- Descontaminar as mãos enluvadas em detergente desinfetante em dunk tanques de plástico ao lado da pia ou em corredores interiores. Se nenhum tanque d'água está presente, spray mãos enluvadas cuidadosamente com desinfectante. </ Li>
- Inspecionar o fundo de galochas ou botas para o material visível. Se galochas são limpos, remova galochas e colocá-los nas prateleiras ao lado do chuveiro químico porta abril Feche todas as portas interiores do laboratório, se desconectar da linha de ar para respirar, e prossiga para o chuveiro químico.
- Se as galochas estão sujos, lave-as na pia com limpador detergente desinfetante.
5. BSL-4 Procedimentos Duche químicos
- Digite o chuveiro químico empurrando a solicitação para acessar o botão para abrir a porta APR, e feche a porta. Reconectar terno a uma linha de ar respirável dentro do chuveiro.
- Assim que a porta está fechada abril, o ciclo de banho químico vai ativar automaticamente para liberar uma mistura adequada de produto de limpeza detergente desinfetante para desinfetar adequadamente o terno e o chuveiro área química. Se o ciclo não começar automaticamente, puxe a alça dilúvio. Esfregue o terno para cerca de 1 min, empurre odilúvio lidar com volta no lugar para evitar a drenagem dos tanques de desinfetantes químicos totalmente. Um ciclo de chuveiro manual não está disponível.
- Verificar a existência de luvas e pé vazamentos, colocando as mãos e os pés com luvas na banheira de plástico contendo solução de limpeza detergente desinfetante mantido dentro do chuveiro químico. Procure líquido ou umidade embaixo da luva externa e verificar se há lágrimas, rasgos ou partes fracas na luva externa. Se for constatado um vazamento em uma das luvas exteriores, espere até que o ciclo de chuveiro é concluída, remova a luva terno exterior e a luva interna mais externa, e deixar a luva externa na banheira de plástico.
- Esfregue as botas terno e terno integrada com uma escova de cabo longo ou mãos para distribuir o desinfetante químico para todas as superfícies do terno. Enxaguar terno de produto de limpeza detergente desinfectante durante o ciclo da água do chuveiro.
- Desconecte a linha de ar para respirar, previamente expostas ao ar do laboratório, tanto durante o ciclo da água a d química eisinfect a conexão no terno. Lavar a conexão da linha de ar de qualquer produto de limpeza detergente desinfetante. Sem desconexão, o aspirador de detergente desinfetante não possa limpar a conexão da linha de ar.
- Abra a porta que dava para a sala de terno e fechá-lo depois de sair.
- Em caso de emergência, tal como um corte não-vida-ameaçadora ou incêndio, siga o mesmo procedimento descrito no ponto 5.2.
6. Procedimentos Suit quarto depois de sair do chuveiro Chemical
- Secar o exterior do terno com uma grande toalha. Descompacte o terno de pressão positiva, remova um lado da luva de terno exterior, e examinar o exterior da luva de borracha nitrílica exterior cuidadosamente para a umidade.
- Se a umidade vazou através da luva de terno exterior, remova a luva terno exterior e luva de borracha nitrílica exterior e descarte em lixo resíduos de risco biológico. Remover o outro lado e repetir o teste.
- Remover terno e continuar a secar exterior do terno para impedir seco rot dAmage. Pulverizar o interior do escudo rosto com limpador de vidro e seque. Pendurar a roupa para secar. Retire a fita adesiva e luvas de borracha nitrílica internas de esfrega e descartar esses itens em risco biológico designado lata de lixo de resíduos.
- Documentar quaisquer vazamentos ou reparos no terno no registo de terno e comunicá-las à gestão de instalações.
- Avance para o vestiário interno, remova esfrega sujos e meias, e colocá-los no cesto de roupa designado. Prossiga e entrar no chuveiro pessoal.
7. Duche Pessoal e Outer mudança de quarto saída Procedimentos
- Activa chuveiro e totalmente lavar o cabelo e do corpo durante um mínimo de 3 min, com sabão e água. Saia do chuveiro pessoal e proceder à mudança de quarto exterior.
- Secar e roupas don rua, sair do quarto alteração Outer, coloque toalhas usadas no cesto de roupa designado, e siga para o Corredor de buffer.
- Indique momento da saída do pessoal Entrada / Saída diário de bordo e indicar laboratório ex-lo na placa de localizador.
Representative Results
Equipe foi cuidadosamente e cuidadosamente treinados nessas técnicas para garantir práticas seguras e consistentes dentro de uma instalação BSL-4. Ao verificar se a unidade está a funcionar correctamente, como indicado na lista de verificação diária (Figura 1), somos capazes de garantir que todos os controlos administrativos e de engenharia necessários estão no lugar e funcionando para manter um ambiente seguro e em bom funcionamento. O processo de pressão positiva fornece uma camada adicional de proteção para o membro do pessoal. manutenção e uso adequado desses processos é essencial para a proteção pessoal para o membro do pessoal. Através da adesão estrita a esses procedimentos, não há infecções adquiridas em laboratório foram registrados no Centro de NIH / NIAID Integrated Research em Fort Detrick.
Figura 1: Lista de verificação visual diáriopara os sistemas de apoio e de backup para o BSL-4. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Discussion
Nós delineado a entrada e saída procedimentos BSL-4 usado na unidade de NIH / NIAID Integrated Research em Fort Detrick para trabalhar com altamente perigosos (Grupo de Risco 4) patógenos. Uma finalidade de visualizar os procedimentos de entrada e saída BSL-4 é enfatizar a importância da segurança do pessoal de laboratório durante o trabalho com esses agentes patogénicos para evitar infecções adquiridas em laboratório. Por pressão negativa, BSL-4 laboratórios manter um fluxo de ar para dentro direccional para assegurar que os agentes patogênicos irá ser contido dentro do laboratório. ternos de pressão positiva com sistemas de ar de respiração dedicado usados por pessoal de laboratório contato mitigar de organismos patogênicos com o pessoal de laboratório. Após o pessoal de laboratório sair do laboratório BSL-4, um chuveiro químico desinfecta a superfície do terno potencialmente contaminados e, portanto, impede a contaminação potencial do resto do edifício e da pessoa que muda fora do terno.
À medida que a integridade da posititerno pressão ve é uma das várias barreiras primárias importantes para evitar a exposição potencial patógeno, a equipe é necessário para verificar se há vazamentos terno antes de entrada e depois de sair da BSL-4 laboratórios. Se ocorrer um vazamento, a equipe identifica a localização do vazamento e alertas de gestão de instalações. Estas práticas asseguram uma resposta rápida a qualquer exposição a patógenos de alta importância. Embora todo esforço é levado para eliminar o risco para o pessoal do laboratório, violações do terno pode ocorrer através da utilização de objectos de vidro, farelos, agressão animal, ou uso contínuo.
Embora os procedimentos aqui apresentados geralmente seguem as especificações descritas BMBL pelo CDC 2, estes procedimentos são específicos para o IRF-Frederick. Cada instalação BSL-4 tem diferentes especificações de projeto de construção que impactam os métodos exatos de operação de laboratório. procedimentos alternativos para entrar e sair laboratórios BSL-4 dependerá em parte da sua concepção e funcionamento destes Laboratories. Além disso, os regulamentos governamentais em diferentes países também podem ter um efeito sobre BSL-4 procedimentos laboratoriais em cada país. No entanto, uma compreensão geral de BSL-4 procedimentos e a construção de sistemas que suportam a segurança do pessoal de laboratório ajudará os administradores de saúde que estão contemplando a concepção de edifícios semelhantes e colaboradores externos envolvidos nos estudos de patógenos de alto risco de monitoramento.
Produtividade vai aumentar à medida que mais pessoal de laboratório é treinado em BSL-4 entrada de laboratório e procedimentos de saída e na condução de experimentos sob BSL-4 condições. No entanto, ao projetar protocolos com colaboradores externos, tempo suficiente deve ser alocado para executar até mesmo as operações básicas de laboratório, e as expectativas de prazos para a entrega de resultados tem que ser ajustado ao aceitar as dificuldades inerentes ao trabalho em BSL-4 laboratórios. Uma suposição generalizada é que qualquer experimento realizado em um NB-2 (por exemplo, 2 horas)exigirá duas vezes a quantidade de tempo para executar em BSL-4 (por exemplo, 4 horas).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro-Chem Plus | National Chemical Laboratories | 255 | |
| Windex | Grainger | 3U560 | |
| Sperian aluminum pressure test cap | Honeywell Sperian | CC0199649 | |
| Sperian suit repair kit | Honeywell Sperian | CC0199621 | |
| Sperian Protection Suit Integrity Test Log | NA | NA | Created by individual lab |
| Sperian positive pressure suit | Honeywell Safety Products | BSL 4-2 | |
| Soapy water | NA | NA | Created by individual lab |
| Outer suit gloves (canners) | Fisher | 19-019-601 | |
| Outer suit gloves (MAPA) | Fisher | 2MYU1 | |
| Inner nitrile suit gloves | Fisher | 19-050-592 | |
| Zip Lube | Amazon | B000GKBEJA | |
| Scrubs | Cintas | 60975/60976 | |
| Socks | Cintas | 944 | |
| Duct Tape | Pack-N-Tape | 51131069695 | |
| Towels | Cintas | 2720 | |
| O-rings | O-ring warehouse | AS568-343 | |
| Overshoes | Amazon | B0034KZE22 | |
| Plastic dunk tanks | Fisher | 14-831-113 | |
| Entry and exit logbook | NA | NA | Created by individual lab |
| Baby powder | Amazon | 44230 | |
| Ethanol | Fisher | BP2818500 |
References
- of Allergy and Infectious Diseases. NIAID Category A, B, and C Priority Pathogens. National Institute of Allergy and Infectious Diseases. , National Institute. Bethesda, MD, . http://www.niaid.nih.gov/topics/biodefenserelated/biodefense/pages/cata.aspx (2013).
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- Shurtleff, A. C., et al. The impact of regulations, safety considerations and physical limitations on research progress at maximum biocontainment. Viruses. 4, 3932-3951 (2012).
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