Summary
본 연구는 성공적 병진 연하 연구를 촉진 할 목적으로 뮤린 질병 모델에 사용하기위한 연구 인간 videofluoroscopic 연하 (VFSS) 방법을 채택.
Abstract
이 연구는 번역 연하의 연구를 촉진하기위한 목적으로 쥐 질병 모델에 사용 연구 (VFSS) 방법을 삼키는 인간 videofluoroscopic 적응. 성공적인 결과는 세 가지 중요한 구성 요소에 따라 달라집니다 : 밀폐 된 공간에서 무제한 서있는 동안 자기 먹이를 허용 시험 챔버, 시판되는 경구 조영제의 혐오 맛 / 냄새 마스크 조리법 및 단계별 시험 프로토콜이 제비 생리학의 정량화를 허용합니다. 이들 성분 중 하나 이상의 제거는 연구 결과에 불리한 영향을 미칠 것이다. 또한, 투시 시스템의 에너지 레벨 능력 조사 될 수있는 삼 파라미터 결정한다. 대부분의 연구 센터는 마우스 및 기타 소형 설치류를 테스트 할 때 매우 열악한 화질을 사람과 더 큰 동물에 사용하기 위해 설계 높은 에너지 fluoroscopes 있습니다. 이러한 한계에도 불구하고, 우리는 일곱 VFS를 확인했다뮤린 VFSS 새로운 프로토콜과 결합하여 높은 에너지 투시기를 사용하는 경우 마우스에서 일관 계량화 S 파라미터. 우리는 최근 마우스 및 기타 작은 설치류와 함께 사용하도록 설계된 매우 높은 해상도와 결상 배율 기능 저에너지 투시 시스템을 획득. 새로운 뮤린 VFSS 프로토콜과 함께이 새로운 시스템을 사용하여 예비 작업은, 종래의 (즉, 높은 에너지)를 사용하여 얻어진 두 배에 가까운 수인, 마우스에서 일관 계량화 13 삼키기 매개 변수를 확인 하였다 fluoroscopes. 우리는이 새로운 시스템의 성능을 최적화하는 등의 추가 스왈 파라미터 식별 예상된다. 결과는 지금까지 검출하고 뮤린 질병 모델을 조사하는 고 에너지 fluoroscopes 사용시 간과 될 수 스왈 생리학의 미묘한 변화를 정량화하는 저에너지 투시 시스템을 사용의 유용성을 입증한다.
Introduction
연하 곤란은 (손상을 삼키는) 모든 연령대의 사람들에 영향을 미치는 수많은 건강 상태의 일반적인 증상이다. 예로는 뇌졸중, 파킨슨 병, 알츠하이머 병, 뇌성 마비, 근 이영양증, 근 위축성 측삭 경화증 (ALS), 배튼 병, 두 경부암, 조산 및 고급 노화를 포함한다. 연하 곤란은 매우 일반적으로 세균을 함유 한 식품 / 액체 / 침이 폐에 1-4로 흡입 될 때 개발 심한 영양 실조 나 폐렴의 결과로, 사망률과 상관 관계가있다. 이 쇠약과 생명을 위협하는 건강 상태는 미국에서 1500 만 명 이상이 매년 혼자 3에 영향을 미칩니다. 높은 유병률과 관련된 부정적인 결과에도 불구하고, 연하 장애에 대한 현재의 치료 방법은 자세의 변화 (예를 들어, tucki, (오히려 치료보다) (특정 음식 / 액체 일관성을 피하고, 예를 들면) 다이어트 수정과 같은 접근 완화로 제한됩니다삼키는 턱), 모터 접근법 (예를 들어, 구강, 인두의 근육을 대상으로 연습, 후두), 감각 접근법 (예를 들어, 구현 향기, 온도 및 / 또는 기계적 자극) 및 튜브 먹이 겨 (예, 영양 수화는 비위 (NG) 튜브 또는 경피적 내시경 위루 (PEG) 튜브)를 통해 관리. 이러한 치료는 단순히 오히려 문제의 근본 원인을 대상으로보다 같은 증상 치료를 제공합니다. 사실, 연하 장애에 대한 소설, 효과적인 치료법의 발견에 큰 장벽은 각 질환에 대한 가능성이 다른 책임 병리 메커니즘의 제한된 과학적 지식이다.
연하 장애의 진단은 주로 또한 수정 된 바륨 제비 연구로 알려진 videofluoroscopic 삼키는 연구 (VFSS)라는 방사선 절차를 사용하여 이루어진다. 지난 30 플러스 년 동안,이 진단 테스트는 EV의 황금 표준을 고려하고있다제비 기능 5-7 aluating. 이 검사는 일반적으로 황산 바륨이나 8,9 iohexol 10, 환자가 앉아 있거나 자발적 식품 및 경구 조영제와 혼합 액체 일관성을 섭취하는 동안 형광 투시 장치의 X 선 빔의 경로 내에 서 갖는 수반한다. 환자가 삼킨 것처럼 위장 입에서 여행하는 동안, 음식 및 조영제를 함유 액은 컴퓨터 모니터를 통해 실시간으로 알 수있다. 연부 조직 구조도 볼 수 있으며 구조화하는 상대와 기능을 평가 될 수있다. 환자는 연하 장애의 존재와 정도를 정량화 후속보기 및 프레임 별 분석을 위해 녹화 된 영상입니다, 모두 각각의 음식과 액체 일관성 여러 제비를 수행하라는 메시지가 표시됩니다. 연하의 다양한 생리 학적 구성 요소는 일반적으로 laryn의 인두 및 식도, 범위와 기간을 통해 해부학 인두 제비의 트리거 포인트, 일시 통과 시간으로, 분석geal 고도, 위치 및 사후 제비 잔류의 양, 그리고 발생 및 포부 7,11에 대한 생리 학적 이유.
인간의 VFSS 프로토콜의 양상은 최근에 자유롭게 행동 쥐를 공부하도록 하였다 쥐 12을 테스트하는 동안 뷰의 videofluoroscopic 필드에 남아 있지 않았기 때문에 그러나, 결과는 제한되었다. VFSS 이전에 마우스를 시도되지 않았습니다. 마우스 및 래트와 함께 사용하기위한 휴먼 VFSS 프로토콜의 성공적인 적응은 현존하는 뮤린 (마우스 및 래트) 인간 연하 장애를 일으키는 것으로 공지 된 질환의 모델 수백 조사 연구 신규 한 방법을 제공하는 것이다. 이 새로운 방법 (이제부터는 쥐 VFSS로 함) 따라서 병적이다 근육, 신경 및 뇌 조직 내에서 기본이되는 신경 생리 학적 메커니즘을 조사하고 연하 곤란에 기여 적합 연하 곤란의 쥐 모델의 식별 및 검증을 촉진 i입니다n 개의 인간. 또한, 쥐 VFSS는 제비 기능 / 직접 인간과 비교 될 수있는 장애의 객관적인 측정 (바이오 마커)의 식별을 허용합니다. 이러한 크로스 종 videofluoroscopic 바이오 마커는 더 나은 사람들과 임상 시험에 번역 것 마우스 및 쥐와 임상 시험에서 치료 효과를 정량화하는 등 새로운 결과 측정 서비스를 제공 할 수있다.
이를 위해, 쥐의 VFSS 프로토콜은 ~ 성별에 100 마우스를 사용하여 설립되었다. 모든 마우스는 C57 또는 하이브리드 C57 / SJL 균주를했다. C57 / SJL 트랜스 제닉 SOD1-G93A (또는 SOD1) 마우스, ALS 중 가장 널리 사용되는 동물 모델의 콜로니에 대한 배경 균주이었던 반면 C57 마우스를 유 전적으로 변경되지 않았다. SOD1 식민지 형질 전환 (즉, ALS-영향) 마우스와 비 형질 (즉, 영향을받지) 한배 새끼의 대략 50 대 50으로 혼합했다.
쥐 VFSS 프로토콜은 다음과 같은 세 가지 요소로 구성
- 경구 조영제의 혐오 맛 / 냄새 마스크 연하의 적절한 시각화를 허용하기에 충분한 radiodensity을 생산 조리법,
- 동물의 준수를 극대화 단계별 시험 프로토콜은 전체 테스트 시간과 방사선 노출을 최소화하고 (즉, 구강, 인두, 식도)을 삼키는의 각 단계에 대한 몇 가지 제비 매개 변수의 정량화를 허용합니다.
결합 효과는 전형적인 먹이와 마우스의 삼키는 행동의 평가를 허용하는 편안하고, 낮은 스트레스, 자기 먹이 시험 환경을 생성합니다.
Protocol
쥐 VFSS 프로토콜은 승인 된 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC) 프로토콜과 NIH 가이드 라인을 따른다.
폴리 카보네이트 튜브와 시트를 깔기 1. 작도 관측 챔버 (그림 1)
- 수동 밀링 기계를 사용하여 16cm의 길이로 폭 5cm, 정사각형 카보네이트 튜빙 (~ 2mm 벽 두께)를 잘라. 대부분의 마우스는 적절하게 걷고 원하는대로 턴어라운드를 허용하는 좁은 시험 챔버 결과 이러한 치수에 맞. ~ 2mm의 두께가 현저하게 X 선 빔을 감쇠없이 충분한 강성을 제공한다.
- 챔버의 두 가지 유형이 프로토콜에 필수적인 : 페그 그릇을 통해 액체를 전달하기 위해 설계 배출구를 통해 액체를 전달하기위한 설계 "주둥이 관", 및 "환기 튜브".
- "주둥이 관"의 경우, 수동 밀링 마하를 사용하여 한 끝 부분에 각 튜브의 상단에있는 작은 직사각형 구멍 (12 × 8 mm)를 만들오프라인. 이 구멍은 행동 조절 및 VFSS 테스트 중에 sipper 튜브 배출구를 통해 음주 솔루션을 제공하는 데 사용됩니다.
- "환기 튜브"드릴 하나의 끝 부분에 각 튜브의 상단에 9 작은 환기 구멍하십시오. 이 튜브는 대신 sipper 튜브의 말뚝 - 그릇에 VFSS 테스트 중에 사용됩니다.
- 이는 PEG-그릇 통해 액체를 전달할 때 주둥이 튜브를 사용하는 것이 가능하다; 그러나, 챔버 천장 개구 쥐 (단계 6.2.2 참조)에 의해 산만 탐색 동작을 방지하기 위해 차단되어야한다.
- 챔버의 두 가지 유형이 프로토콜에 필수적인 : 페그 그릇을 통해 액체를 전달하기 위해 설계 배출구를 통해 액체를 전달하기위한 설계 "주둥이 관", 및 "환기 튜브".
- 컴퓨터 밀링 머신을 사용하여 엔드 캡에 컷 폴리 카보네이트 시트 (3/4 "두께) (튜브 당 50 X 50mm, 2), 또한 컴퓨터 수치 제어 (CNC) 기계를했다.
- 밀 하나의 직사각형 홈 각각의 엔드 캡의 내부면의 한 가장자리 근처 (19 × 6 mm)이다. 마우스 VFSS 테스트 동안 마시는하는 PEG-그릇을 확보하기 위해이 홈을 사용합니다.
- 밀 5 라운드 통기 구멍 (직경 6mm) 각 엔드 캡을 통해.
- 직접 직사각형 홈 상기 엔드 캡을 통해 밀링 한 작은 원형 구멍 (직경 5mm). VFSS 테스트 중에 페그 그릇에 액체를 제공하기 위해이 구멍을 사용합니다.
- 엔드 캡의 외부면에서 밀 9/16 깊은이 작은 구멍 주위에 "그 카운터 직경은 1/4".
- 밀 멀리 7mm의 깊이 엔드 캡의 내부면의 경계부 2mm 용이 튜브의 단부로 삽입하는 단계를 더하게한다.
- 밀 엔드 캡의 단계에 1mm의 홈은 관의 단부에서 떨어지는 엔드 캡을 방지 할 필요가 O 링을 수용한다.
- 노출 모서리를 둥글게하고 마우스로 씹는 방지하기 위해 엔드 캡의 모든 모서리를 베벨.
- CNC 기계를 사용하여 폴리 카보네이트 시트에서 페그 그릇을 확인합니다. 전체 크기는 일단 10 × 3mm 2 그릇 모양의 우울증 24 X 19 X 6mm 3,해야한다. 한 페그 그릇 neede입니다각각의 튜브에 대한 D. 페그 - 그릇 최종 캡의 직사각형 홈 (그림 2)에 꼭 삽입해야합니다.
그림 1 :. 관측 챔버 관측 챔버는 뷰의 투시 필드에서 자유롭게 행동하는 동물을 유지하도록 설계되었다. 이 사진은 VFSS을 수행하기위한 필수 챔버 구성 요소를 보여줍니다. 탑 : 주둥이를 통해 액체를 전달하기위한 설계 "주둥이 관". 아래 : "환기 튜브", PEG-그릇을 통해 액체를 전달하기 위해 설계. 두 개의 엔드 캡은 주둥이 및 환기 튜브 사이의 상호 교환이 가능합니다.
그림 2 :. 나무못 그릇 각 페그 그릇은 각각의 엔드 캡의 내부면에있는 홈에 고정. 왼쪽 :조립되지 않은 부품. 중동 : 조립 부품. 오른쪽 :. 엔드 캡의 외부면 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
원심 분리기 튜브, 실리콘 마개 및 금속 스파우트 2. 작도 Sipper 튜브 병 (그림 3)
- 각각의 실리콘 마개 중심 구멍을 만들기 위해 스토퍼 구멍 뚫는을 (5/16 ")를 사용합니다.
- 보어 홀에 미네랄 오일 몇 방울을 적용하고 수동 스토퍼의 넓은 쪽 끝 금속 주둥이를 삽입합니다. 직선 선단 개방 스파우트 과도한 누설 테스트시 가시화를 방해 할 수있는 관찰 챔버 내의 조영제의 스플래터 초래할 때문에 스트레이트 공 소수점 스파우트가 바람직하다.
- 이 실리콘 스토퍼의 전체 길이에 걸쳐 스토퍼의 광각 단 이후 약 3cm를 연장하도록 주둥이 길이를 조정한다.
- 30 ML의 원심 분리기 튜브에 (sipper 튜브를 포함) 각 스토퍼의 좁은 끝을 삽입합니다.
- 스파우트 길이가 관찰 챔버의 상단에 직사각형 구멍을 통해 삽입하여 적절한 지 확인한다. 주둥이 끝은 건강한 성인 마우스에 도달하기에 충분히 긴 챔버 천장에서 약 1cm 휴식을해야합니다.
참고 : 긴 길이는 / 회전 VFSS 동안 연하의 시각화를 모호하게 머리를 기울 동안 마시는 쥐 결과. - 인한 사지 운동 장애로 스파우트에 도달 할 수없는 어린 마우스, 작은 크기의 마우스 균주 및 마우스 질병 모델을 수용하기 위해 주둥이 길이를 연장.
- 취급시 미네랄 오일, 실리콘 이물질 및 기타 오염 물질을 제거 할 수있는 사용하기 전에 새로 만든 스파우트을 씻으십시오.
그림 3 : Sipper. 관 병 왼쪽 : 조립되지 않은 구성 요소. 중동 : 조립 부품. 오른쪽 :. 관찰 실에서 sipper 튜브에서 마우스 마시는 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
3. 페그 - 그릇으로 사용하기 위해 주사기 전달 시스템을 구축합니다 (그림 4)
- 다음과 같이 관찰 챔버 엔드 캡에 폴리에틸렌 (PE) 관을 연결하기위한 어댑터를 만들기 위해 선반을 사용하여 설명.
- 여기에 튜브 어댑터 (또는 어댑터)라고 길이 섹션, "1 1/4 직경 아세탈 수지 봉재"1/2을 잘라.
- 각 어댑터의 일단에, 직경 "3/16로 선단 길이 부"1/2을 줄일 좁은 단부로 지칭.
- "(직경 끝 나머지 3/4 각 어댑터 즉, 1/2)의 길이 섹션"를, 수동 그립을위한 기계 홈 우리시전자. 이 섹션은 본 명세서에서 넓은 단부로 지칭된다.
- 각 어댑터의 넓은 결국, 깊은 0.098 "직경 1"중앙 구멍을 드릴.
- 드릴 PE 배관에 맞으면 제공 "0.096 각 어댑터 중심 구멍의 나머지 부분과 리밍.
- 가위를 이용하여 원하는 길이 (PE (240), 내부 직경 1.67 mm)를 PE 배관을 잘라. 3-4 다리 길이를 충분히 방사선 안전을 향상시키기 위해 VFSS 테스트 중에 형광 투시경과 조사원 사이의 거리를 증가시킨다.
주 : 긴 길이는 표준 30 ㎖ 레시피보다 아마도 더 VFSS 테스팅 동안 조영제 용액의 큰 체적을 활용한다. - 완전히 PE 튜브의 한쪽 끝으로 무딘 팁 15 G 바늘을 삽입합니다. 피팅은 가지런해야한다.
- t에서 시작, 어댑터 튜브의 중심 구멍을 통해 PE 튜브의 다른 쪽 (무료) 끝을 삽입그는 넓은 끝.
- 이 ~ 2mm를 확장하도록 어댑터의 좁은 끝에서 PE 튜브를 빼냅니다.
- 어댑터의 좁은 끝을 삽입 관측 관의 엔드 캡에 (~ 2mm의 PE 튜브 그것에서 연장 포함); 직접 못 그릇 위에있는 카운터 보어 구멍에 꼭 맞게 조정해야합니다.
- 그것은 거의 못 그릇의 그릇 우울증 위에 나오도록 어댑터의 좁은 끝에서 PE 배관 길이를 조정합니다.
- 비이커에서 물 (부착 된 바늘없이) 10 ML의 주사기를 입력하고 기포를 제거합니다.
- PE 관의 바늘 끝으로 채워진 주사기를 연결합니다.
- 천천히 관찰 챔버에 못 그릇에 물을 제공 할 수있는 주사기의 플런저를 밀어 넣습니다. 페그 그릇이 거의 꽉 찼을 때 중지합니다. 마시는 동안 스플래터의 원인이됩니다 과충전을 피하십시오.
- 페그 그릇이 제대로 기입하지 않는 경우, PEG-그릇 위에 확장 PE 관의 길이를 조정합니다.
- PE의 오버 확장튜브 마우스는 오히려 못 그릇에서 마시는 것보다, 테스트 중에 씹기 유혹합니다.
- PE 관이 충분히 확장되지 않은 경우, 액체는 오히려 못 그릇을 채우는 것보다 관찰 챔버의 바닥에 실행됩니다.
- 사용 후에는, 주사기를 분리하여 물과 비누로 주사기 전체 전달 시스템을 씻는다. 물을 제거하기 위해 PE 관을 통해 공기를 밀어 10 ML의 주사기를 사용합니다. 필요에 따라 고압 증기 멸균 소독.
그림 4 :. 주사기 전달 시스템 왼쪽 : 조립되지 않은 구성 요소. 중동 : 조립 부품. 오른쪽 :. 관찰 실에서 페그 그릇에서 마우스 마시는 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
4. 전동 Sciss를 구축또는 관측 상공 회의소의 원격 위치 표를 올립니다 (그림 5)
- 올릴 수와 5cm로 낮은 뷰의 투시 분야 내에서 다른 위치에 볼 마우스를 수용하기 위해 12 X 12cm 플랫폼 시저 리프트를 구축 할 수 있습니다. 리프트 물질은 소독제로 청소의 용이성을 위해 금속 또는 플라스틱을해야합니다.
- 마운트 스테퍼 모터는 높이와 리프트의 종 방향 위치를 조정합니다.
- 커플 가위 리프트기구 내지 제 스테퍼 모터는 크로스바 변환하여 높이를 제어한다. 이 커플 링은 리드 스크루 또는 랙 앤드 피니언 기어 일 수있다.
- 커플 가위 승강 프레임에 제 스테퍼 모터는 테이블 승강 프레임 전체에 대하여 변환하여 종 방향 위치를 제어한다. 이 커플 링은 리드 스크루 또는 랙 앤드 피니언 기어 일 수있다.
- investiga을 최소화하면서 촬상 중에 관찰 챔버의 위치 조정을 허용하는 스테퍼 모터에 원격 제어 시스템 배선방사선에 토르 노출.
- 각각의 스텝퍼 모터의 활성화 및 방향을 제어하는 마이크로 칩 휴대용 리모컨 버튼을 인터페이스.
그림 5 :. 원격 제어 가위 리프트 테이블 왼쪽 : 가위 리프트 테이블의 측면보기. 오른쪽 : 형광 투시경에 위치 관찰 챔버와 리프트 테이블. 리프트 테이블보기의 분야에서 쥐를 유지하기 위해 관찰 챔버의 위치를 조정합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
5. 최대한의 참여를 보장하기 위해 VFSS 테스트하기 전에 행동 컨디셔닝을 수행
- 유도하는 하나의 하룻밤 (12-16 시간) 물 규제 기간에 시험, 주제 마우스를 VFSS 1 ~ 2 주 전에갈증,이 때 물 동안 홈 케이지에서 원천 징수된다. 동물들이 목 말라하지 탈수하는 물 규제의 목표입니다. 동물들은 경고하고 반응을 유지해야한다. 이 기간 및 시간 프레임 1 주일 이내에 2 물 규제 에피소드의 결과로 발생할 수있는 탈수를 방지하는 것이 필수적이다 (즉, 행동 조절을위한 하나 VFSS 테스트를위한 또 다른).
- 신선한 침구 재료를 함유 홈 케이지의 바닥에 (엔드 캡에 의해 폐쇄 일단) 단일 "스파우트 튜브"를 놓는다. 폐쇄 단부는 챔버의 천장에 주둥이 개방 가까운해야합니다. 여러 쥐의 수면 챔버 깊이 하룻밤 내에 모여있는 동안이 단계는 적절한 환기를 보장합니다. 오픈 엔드 쥐가 자유롭게 입력 / 챔버를 종료 할 수 있습니다.
- 밤새 챔버 (그림 6)에서 탐구하는 마우스와 잠을 장려하기 위해 다른 농축 물질 (예를 들어, nestlet 및 오두막)를 제거합니다. 이 단계는 그 쥐를 보장VFSS 테스트에 앞서 긴 기간에 대한 실에있는 풍토에 순화된다.
- 하룻밤 식습관 새장 바닥에 마우스 당 하나의 표준 식품 펠릿을 제공합니다; 수화 물 또는 다른 소스를 제공하지 않는다.
- 관측 실의 치수는 새장에 맞는에서 표준 와이어 덮개를 방지로, 하룻밤 케이지의 쥐를 포함하는 표준 필터 상단을 사용합니다. 뚜껑을 아래로 무게 탈출 쥐를 방지하기 위해 필터 상단의 상단에 제거 와이어 뚜껑 (포함 된 음식과 물을 병)를 저장합니다.
- 다음과 같이 설명, 다음날 아침 테스트 기호성을 수행합니다.
- 조영제 (iohexol에 대한 즉, 대체 물)을 추가하지 않고, 30 ml의 sipper 튜브 병에 초콜릿 맛 테스트 솔루션을합니다. 이 조리법은 표 1에 설명되어 있습니다. 케이지 당 하나의 병 테스트 할 수 있습니다.
- 관찰 챔버를 제거하고 표준 와이어 덮개를 교체합니다. 초콜릿 맛을 제공용액 (실온 ~ 22 ° C)의 리드 와이어를 통해 삽입 케이지 당 2 분 동안.
- 2 분의 시험 기간 동안 마시고 행동을 관찰하여 기호성 평가.
- 이하의 기준으로 점수를 기호성 :
- 중단없이 적어도 5 초 동안 주둥이에서 첫 번째 마우스 음료까지 대기 시간.
- 솔루션 음료 케이지 당 마우스의 백분율.
- 동시에 주둥이 마시 마우스의 수.
- 이 솔루션은 각 장에 쥐의 대부분이 음주의 여러 장기 (> 5 초) 관찰이 있으면 맛이있는 것으로 간주하고 여러 마우스를 동시에 주둥이 마실 경우 (그림 7).
- 초콜릿 맛 솔루션은 맛이없는 경우, 하나의 선호하는 솔루션을 식별하기 위해 다양한 농도에서 다른 풍미 증강과 기호성 테스트를 반복합니다.
- 한번에 (다양한 농도)으로 네 개의 다른 해법을 위로 제안세척 기간 또는 세척 솔루션없이 단일 테스트 하루에 마우스의 여러 케이지에 무작위 순서. 마우스에 대한 고려 적합한 맛을 증강 설탕, 치즈, 땅콩 버터, 각종 과일과 너트 맛, 우유 등이 있습니다.
참고 : 반복 물 규제 에피소드에서 탈수를 방지하기 위해 일주일에 한 번 이상 테스트 기호성을 수행하지 마십시오. - 그것은 성공적으로 마우스의 각 변형에 대한 선호 솔루션을 식별하는 데 몇 주가 걸릴 수 있습니다. 목표는 이러한 자격이 성공적으로 VFSS 결과를 얻기에 필수적인 것으로 간주되므로, 노출 후 (<30 초)을 즉시 마우스에 의해 후보의 여러 장기 (> 5 초)이 발생할 맛 음주 복싱을 식별하는 것입니다.
- 바람직한 맛 용액을 식별 한 후, 다음과 같이 설명 된 컨디셔닝 행동을 계속하는 각 홈 케이지로 관찰 챔버를 반환한다.
- 가까운 단부에서 관찰 챔버 한 엔드 캡을 부착타원형 (주둥이) 홀.
- 챔버의 상부에있는 타원형 구멍을 통해 sipper 튜브 병을 삽입하여 쥐에게 2 ~ 3 시간 동안 초콜릿 맛 솔루션을 제공합니다. 이 단계는 모든 마우스가 관찰 챔버 내에서 깊은 음주로 조절되어 있는지 확인합니다.
- 관찰 챔버를 수용 할 수 와이어 뚜껑을 제거합니다.
- 테스트 기간 동안 광고 무제한 소비를위한 케이지 바닥에 마우스 당 1 음식 펠렛을 놓습니다.
- 행동 조절 기간의 잔여 탈출 쥐를 방지하기 위해 표준 필터 상단 케이스를 커버. 뚜껑을 아래로 무게 필터 상단의 상단에 제거 와이어 뚜껑 (포함 된 음식과 물을 병)를 저장합니다.
- 행동 조절이 완료되면 홈 케이지에서 물과 음식 광고를 무제한으로 제공합니다.
- 비누와 물로 관찰 실 (튜브 및 엔드 캡) 및 sipper 튜브 병 (스파우트 및 원심 분리기 튜브) 세척; 필요에 따라 고압 증기 멸균 소독. 기피가 불투명이 아닌 반투명 튜브를 만드는 영구적 인 혼탁 효과 발생의 원인이되므로 아세톤을 사용하여 튜브를 청소합니다.
그림 6 :. 관측 챔버 마우스 탐색 마우스는 작은 공간에서 피난처를 추구하는 자연적 경향이 있습니다. 결과적으로, 이들은 자유롭게 선택하고이를 홈 케이지에 배치 될 때 관측 튜브를 탐구한다. 대부분의 마우스는 아침에 방에서 잠을 찾을 수 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
| 성분 | (기호성 테스트를위한) 초콜릿 솔루션 | 초콜릿 맛을 낸 (VFSS 테스트를위한) Iohexol |
| 3 ㎖ | 3 ㎖ | |
| Iohexol (350 mg을 요오드 / ㎖) | 0 ml의 | 15 ml의 |
| 물 (DI 또는 필터링) | 30 ㎖로 조정하여 최종 부피 (27 mL) 중 | 30 ㎖로 조정하여 최종 부피 (12 mL) 중 |
| 최종 권 | 30 ml의 | 30 ml의 |
표 1 : 초콜릿 맛 C57 및 C57 / SJL 마우스 균주가 선호하는 테스트 솔루션.
그림 7 :. 기호성 테스트 기호성 테스트하는 동안 맛을 선호 하나의 표시등이 동시에 홈 케이지에서 하나의 주둥이에서 마시는 쥐의 수입니다. 이 이미지를 동시에 확인되었다 초콜릿 맛 솔루션을 마시는 네 마우스를 보여줍니다C57 및 C57 / SJL 균주가 선호하는 맛 증강.
6. VFSS 시험 준비
- 위의 5 단계에 설명 된대로 밤새 물 규제 기간에 따라 마우스 (즉, 12 ~ 16 시간 동안 물을 보류).
- 신선한 침구 재료를 함유 홈 케이지의 바닥에 (엔드 캡에 의해 폐쇄 일단) 단일 "환기 튜브"를 놓는다. 폐쇄 단부는 챔버의 천장에 환기 구멍 가장 가까운해야합니다. 여러 쥐의 수면 챔버 깊이 하룻밤 내에 모여있는 동안이 단계는 적절한 환기를 보장합니다. 오픈 엔드 쥐가 자유롭게 입력 / 챔버를 종료 할 수 있습니다.
- 다음날 아침, 케이지에서 오염 된 관찰 실을 제거하고 간단히 수돗물로 씻어 VFSS 테스트를위한 준비에 완전히 건조.
- 과도한 탐색 적 행동을 일으킬 수있는, 새장 사이에 실을 혼합 방지하기 위해 한 번에 하나의 챔버를 제거하고 청소하는 것이크게 VFSS 테스트를 방해합니다.
- "주둥이 관은"대신 VFSS 테스트를위한 "환기 튜브"에 사용되는 경우, 탐색 행동 (그림 8)을 방지하기 위해 관찰 챔버 천장의 분출 구멍에 실리콘 플러그를 삽입합니다.
- 혼합을 방지하기 위해 (홈 케이지 번호 예) 각 실 레이블.
참고 : 홈 케이지에 다시 배치하기 전에 각 청소 튜브에 라벨을 건조 지우기 마커를 사용합니다. 이 튜브 재료에 의해 흡수되고, 심지어 알코올이나 아세톤으로 씻어하지 않기 때문에 영구 마커 피해야한다.
- 초콜릿 맛 iohexol 솔루션 (또는 다른 맛이 솔루션을) 준비합니다.
- 새장 여러 시험 용액 (표 1)의 하나의 레시피 (30 ㎖)을 만든다.
- IOHEXOL에 대한주의 사항 : 실온에서 보관 개봉 iohexol 병, 빛으로부터 보호. 사용은 24에서 iohexol 병을 열어시간, 점도 맛이 하루 만 정도 공기에 노출 된 후 변경 될 수있다. 대안 적으로, 장기 보관 용 원심 분리기 튜브에서 단일 서빙 (15 ㎖)의 분취 량을 동결. 준비 iohexol 테스트 솔루션은 신선도를 보장하고 마우스로 회피를 방지하기 위해 몇 시간 내에 사용해야합니다. 때문에 제비 기능에 대한 온도의 영향에 대한 연구를 혼동하지 않도록 상온에서 iohexol 솔루션을 관리합니다. 초콜릿 맛을 마우스로 회피의 동결 및 결과에 쓴대로, 나머지 준비 테스트 솔루션을 동결하지 마십시오.
- 투시 환경을 준비합니다.
- 횡 (가로) 평면에서 마시는 시각화를 허용하는 형광 투시경 빔 내에서 최적의 높이와 위치를 결정하기 위해 예비 (빈) 관찰 챔버 및 PEG-그릇 (또는 sipper 튜브 주둥이)를 사용합니다.
- 초당 30 프레임 투시 프레임 속도를 설정하고, 높은 (그러나 낮추지) 프레임 레이트를 사용할 경우 사용될 수있다.
- E그것은 전체 시험 동안 디스플레이 모니터에 표시되도록 캘리브레이션 방사선 불 투과성 마커를 적절히 투시기 카메라 / 검출기 상에 배치되는 것을 nsure. 이 단계는 삼키기 파라미터를 정량화 이용 길이 측정치의 보정을 허용 할 필요가있다.
그림 8 :. 실리콘 플러그 페그 - 그릇을 사용하여 왼쪽 : 실리콘 플러그. 오른쪽 : 실리콘 플러그 관찰 챔버의 상부에 sipper 튜브 개구를 통해 당겨진다. 이 플러그는 VFSS 테스트 동안 sipper 튜브보다는 못 그릇을 사용할 때 주둥이 개방 정신이되는 것을 쥐를 방지 할 수 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
마우스의 7 VFSS 테스트
- (sipper 튜브를 사용하지 않을 경우, 부착 된 PEG-그릇) 2 차 엔드 캡을 부착 마우스 (특히 꼬리)이 끼지 않도록주의하면서 조심스럽게 케이지에서 챔버를 들어 올리고.
주 :이 방법은 처음 테스트중인 생쥐 특히 중요 처리 도중에 마우스의 스트레스 반응을 최소화한다. - 이 케이지 안에 그 앞에 위치 될 때, 또는 챔버 개구 위에 꼬리 현탁 반복 테스트를 할 때, 마우스 쉽게 챔버를 입력 기른 수있다.
- 페그 그릇을 사용하는 경우상기 단계 3에서 설명 된, 주사기를 통한 전달 시스템 솔루션을 제공한다. 이 시스템은 필요에 따라 페그 그릇 쉽고 빠르게 리필을 허용합니다.
- sipper 튜브 병을 사용하는 경우, 관찰 챔버의 상부에있는 타원형 구멍을 통해 sipper 튜브를 삽입합니다. 스파우트가 챔버의 중심을 향해 지향되도록 병을 기울.
- 연하기구가 시야에 표시되도록한다 (단계 4에 기재된 원격 제어 가위 리프트 테이블을 이용하여) 관찰 챔버의 위치를 조정한다.
- 마우스를 멀리 못 그릇에서 회전 할 때마다 녹화를 일시 중지 또는 방사선 노출 기간을 최소화하기 위해 르네.
- 녹음을 재개 할 때 주둥이 또는 페그 그릇에 마우스 돌아갑니다.
- 필요에 따라 페그 그릇을 채우십시오.
- 마우스가 5 분 이내에 마시는하지 않는 경우 테스트를 중지합니다. 목표는 여러 LON 기록인데g 테스트의 첫 번째 2 분 이내에 대부분의 마우스에 대한 일반적인 (> 5 초) 연속 음주의 관찰.
- 나중에 같은 날에 다시 테스트 (물 제외) 홈 케이지에 비 호환 마우스를 반환; 24 시간 물 규제 기간을 초과하지 마십시오. 세 가지 시험을위한 정책을 준수하지 않는 남아 쥐 연구에서 제거됩니다.
- 마우스의 건조 종이 타월 못 그릇 (팁 PE 배관의) 또는 sipper 튜브 주둥이를 청소합니다.
- 챔버 벽에있는 산 산 조각 iohexol을 제거하기 위해 마우스 사이에 필요에 따라 관찰 챔버를 청소합니다. 종이 타월로 수돗물 건조와 챔버를 씻어.
- 새로운 페그 그릇을 사용 (또는 sipper 튜브 주둥이 변경). 그렇지 않으면, 마우스 같은 페그 그릇 또는 sipper 튜브에서 마신 다른 쥐의 냄새에 의해 산만 할 수있다. 페그 그릇과 sipper 튜브는 혼동을 피하기 위해 표시되어야합니다.
8. 영상 분석
- 이자 (표 2)의 파라미터를 삼키기 정량화 videofluoroscopy 레코딩 프레임 별 분석을 허용 비디오 편집 소프트웨어 프로그램을 사용한다. 차 검토 및 하나 또는 두 개의 보조 검토 : 눈을 멀게 방식으로 각각의 비디오를 분석하기 위해 두 개 이상의 훈련 검토를 식별합니다.
- 차 검토 : 3-5 긴 (약 5 초) 마시는 복싱을 파악하고 분석 할 수있는 각각의 비디오를 볼 수 있습니다. 제비 매개 변수 당 5 측정 통계 분석에 충분 -이 기준은 3 보여주는 쥐 12 쥐 13, 14 및 VFSS 게시 된 비 방사선 제비 연구를 기반으로합니다.
- 차 검토 : 독립적으로 처음 확인하고 기본 검토하여 분석 하였다 각각의 마우스 제비 매개 변수 당 3-5 조치를 분석 할 수 있습니다.
- 각 마우스에 대한 검토 불일치를 확인합니다. 100 % 합의에 도달하기 위해 검토 그룹으로 모든 불일치를 다시하는 것은-분석 할 수 있습니다.
- 각각 3-5 컨센서스 (즉, 확실한) 값은 통계 분석에 사용하기위한 각 마우스에 대한 평균 값을 획득 파라미터를 삼킬 평균값. 때보다 적은 3 지표 성과ES는 누락 된 값을 입력, 주어진 마우스 단일 제비 매개 변수에 대해 얻을 수있다 (즉,하지 영) 해당 제비 매개 변수에 대한 통계 데이터베이스.
| 제비 파라미터 | 설명 |
| 간 제비 간격 (ISI) | 영상의 개수는 두 개의 연속적이고 중단 스왈 프레임 사이. ISI를 계산하기위한 시작 프레임은 즉시 식도 valleculae에서 볼 루스의 전송에 선행 "나머지 프레임"이다. 최종 프레임은 다음 제비 "나머지 프레임"이다. 두 개의 연속 제비 사이의 프레임 수는 시간 (초)로 변환 초당 30 프레임 수 (fps)에 의해 구분 될 수 있습니다. |
| 턱 관광 요금 (핥아 비율과 동일) | 혀는 명확하지 않다VFSS 동안 볼 수는 핥아 속도의 정량화를 허용합니다; 그러나, 턱 여행 속도는 쉽게 정량화 할 수있다. 핥는 동안, 턱은 입에서 돌출 혀를 허용하기 위해 열어야합니다. 따라서, 초당 턱 열기 / 닫기 (여행) 사이클 수 (30 프레임) 마시는 속도를 핥아에 해당한다. 각 턱 여행 사이클은 (혀 돌기과 일치)과 턱은 최대한 위치를 개설하기 위해 반환 할 때 종료 최대한 열린 턱으로 시작한다. 턱 폐쇄 및 재 개방의 후속 사이클은 개별 턱 여행 에피소드로 계산됩니다. |
| 턱 관광 거리 | 턱 여행 사이클 동안 턱이 열립니다 거리, 상악과 하악의 앞니 사이 mm에서 측정한다. |
| 릭 - 제비 비율 | (두 개의 연속 중단 제비 사이 즉,) 각 ISI 중에 발생하는 턱 여행 사이클의 수입니다. |
| 제비 평가 | 주둥이에서 중단 음주 각각 2 초 에피소드 중에 발생하는 제비의 수입니다. |
| 인두 배송 시간 (PTT) | 그것은 루스 걸리는 시간은 인두를 통해 삼켜. 시작 프레임은 ISI의 시작 프레임과 동일하다 (즉, 즉시 valleculae에서 루스의 눈에 보이는 이동하게됩니다 "나머지 프레임"). 엔드 프레임 루스의 꼬리 완전히 마우스 경추 가장 명백한 해부학 랜드 마크 2 차 경추 (C2)를 통과 한 경우이다. 시작 및 종료 프레임 사이의 프레임 수는 초당 30 프레임으로 분할하여 밀리 초 (밀리 초)로 변환된다. |
| 인두를 통해 일시 속도 | 인두 루스 속도는 PTT (상술)에 대하여 측정된다. ImageJ에 소프트웨어를 사용하여 C2에 척추 valleculae으로부터의 거리 (mm)를 측정하여 보정 마커를 이용하여 스케일링된다. 이 distanc전자 (mm)는 다음 PTT 일시 속도 (mm / 밀리 초)를 결정하기 (밀리 초)에 의해 구분 될 수 있습니다. |
| 식도 배송 시간 (ETT) | ETT 개시 프레임 (전술) PTT 엔드 프레임과 동일하다. 루스 완전히 식도 루스의 소실로 정의 위장, 진입시 ETT 엔드 프레임이다. ETT 시작 및 종료 프레임 사이의 프레임 수는 초당 30 프레임으로 나눈 msec로 변환된다. |
| 식도를 통해 일시 속도 | 식도 루스 ETT 속도는 (위에서 설명 됨)에 대하여 측정된다. ImageJ에 소프트웨어를 사용하여 측정 된 거리 (mm)를 식도 접합부 C2 내지 척추 교정 마커를 이용한 스케일링. 이 거리 (mm)는 다음 ETT 일시 속도 (mm / 밀리 초)를 결정하기 (밀리 초)에 의해 구분 될 수 있습니다. |
| 인두 및 식도를 통해 러스 속도 | C2는 쉽게 볼 수 해부학 적 랜드 마크가 아닌 경우이 매개 변수가 사용됩니다; 따라서,그것은 인두 및 식도 연하의 단계를 구별 할 수 없습니다. 이러한 경우에, 후두 인두를 통해 볼 루스 속도는 단일 파라미터 스왈로 결합된다. 시작 프레임이 PTT의 시작 프레임과 동일하다 (즉, 즉시 valleculae에서 루스의 눈에 보이는 이동하게됩니다 "나머지 프레임"). 엔드 프레임 ETT 엔드 프레임과 동일하다 (즉, 볼 루스가 완전히 위장 들어간 경우). 이러한 두 이벤트 사이의 프레임 수는 초당 30 프레임으로 나눈 msec로 변환된다. |
| 루스 지역 | ImageJ에 소프트웨어를 사용 루스 영역 인두 삼키기 개시전 vallecular "나머지 프레임"에서 측정, 교정 마커를 이용한 스케일링. |
| 인두 잔류 영역 | 인두 잔류 영역은 ImageJ에 소프트웨어를 사용하여 측정하고, 교정을 이용하여 스케일링 된 마커. |
| 액체 Consu의 볼륨메드 | sipper 튜브 병에서 소비되는 액체의 부피 때문에 스파우트로부터 누출 추정하기 어렵다. 그러나 다음과 같은 PEG-그릇에서 소비되는 액체의 체적은 더욱 정확하게 계산 될 수있다 : 1) 밀도를 결정 (즉, PEG-사발로 투여 하였다 액체 검정 된 체적 중량의 비) (2) ) 잔류 액을 포함하는 PEG-그릇의 중량을 결정, 3) 체적 변환기 (예를 들면, 행 무게에이 값을 입력 http://www.thecalculatorsite.com/conversions/weighttovolume.php . |
표 2 : 설치류 VFSS 동안 매개 변수 계량화을 삼켜.
Representative Results
우리는 성공적으로 테스트 자체 공급을 허용 챔버, 경구 조영제를 조미료 조리법, 그리고 제비 생리학의 정량화를 허용하는 단계별 시험 프로토콜을 포함하는 소설과 복제 쥐의 특정 VFSS 프로토콜을 설계했다. 투시 시스템의 에너지 준위 능력 파라미터 마우스에서 조사 될 수있는 삼 결정. 우리는 처음에 사람들과 더 큰 동물과 함께 사용하도록 설계 높은 에너지 fluoroscopes을 사용 (예를 들어, GE Advantx, 9600 GE OEC, 오메가 심장 캐서린 CS-25, 초당 30 프레임의 각). 그러나, 이러한 시스템은 동물 채우는 시야의 작은 부분만을 초래되는 검사 생쥐 불충분 배율 기능을 가지고 (그림 9). 결과적으로, 화질이 불가능 삼키는기구의 대부분 구조를 시각화 렌더링 매우 불량 하였다. 이러한 한계에도 불구하고, 우리는 7 목적 VFS를 확인S는 새로운 뮤린 VFSS 프로토콜 (표 3)과 함께 통상의 (즉, 높은 에너지) 투시기를 사용할 때 쥐 일관 정량화 하였다 파라미터 삼키기. 또한, 우리는 고령 (> 18 개월) 및 말기 ALS의 조건 vallecular의 건강한 성인 마우스에 삼키는에 대한 해부학 적 트리거 포인트와 같은 공간 (나이 3-17 개월),뿐만 아니라 쥐를 확인했다.
그림 9 :. 고 에너지 투시 시스템 왼쪽 : 고 에너지 (즉, 기존의) 투시 시스템을 사용하여 얻은 마우스의 대표 이미지입니다. 마우스함으로써 이미징 설치류에 대한 기존의 fluoroscopes의 부족 확대 기능을 보여주는 뷰의 투시 필드의 작은 부분을 채우고 있습니다. 오른쪽 : 같은 이미지 확대 후 captu비디오 편집 소프트웨어 프로그램을 사용하여 재. 검은 색 화살표 : 트리거 포인트 (valleculae)를 삼킬. 흰색 화살표 :. 식도에 루스, GE 접합 (흰색 별표)를 통과 직전에 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
| 제비 파라미터 | 고 에너지 시스템 | 낮은 에너지 시스템 |
| 간 제비 간격 (ISI) | 엑스 | 엑스 |
| 턱 관광 요금 (핥아 비율과 동일) | 엑스 | 엑스 |
| 턱 관광 거리 | 엑스 | 엑스 |
| 릭 - 제비 비율 | 엑스 | 엑스 |
| 제비 평가 | 엑스 | 엑스 |
| PharyngEAL 배송 시간 (PTT) | 엑스 | |
| 인두를 통해 일시 속도 | 엑스 | |
| 식도 배송 시간 (ETT) | 엑스 | |
| 식도를 통해 일시 속도 | 엑스 | |
| 인두 및 식도를 통해 러스 속도 | 엑스 | 엑스 |
| 루스 지역 | 엑스 | |
| 인두 잔류 영역 | 엑스 | |
| 액체의 볼륨 소비 | 엑스 | 엑스 |
표 3 : 낮은 에너지 투시 시스템 대 높은 사용하여 매개 변수 계량화을 삼켜.
우리는 최근 낮은 에너지 확대 투시 시스템이 구체적으로 사용하기 위해 우리가 실험실 위해 설계되었습니다 LabScope (글렌 브룩 기술, 랜돌프, 뉴저지)라고 획득마우스 및 다른 작은 설치류 (그림 10). 그러나,이 시스템의 배율보다 현저 수준은 불가능 하나의 뷰 필드에서 마우스의 전체 삼키는기구를 볼 렌더링. 그림 11. 위치 1을 허용 전체 머리의 시각화 및 근위 흉부 지역과 같이 대신, 두 개의 테스트 위치가 필요합니다. 이 위치는 연하의 구강 및 인두 단계를 평가하는 것이 필요하다. 위식도 (GE) 접합에 제비 트리거 포인트 (즉, valleculae)에서 위치이 허가 시각화. 이 위치는 연하의 식도 단계를 평가하는 것이 필요하다. 새로운 뮤린 VFSS 프로토콜 조합 LabScope를 이용한 예비 작업은 높은 에너지 (즉, 종래의) fluoroscopes (표 3)을 사용하여 얻어진 두 배에 가까운 수인, 마우스에서 일관 계량화 13 대물 삼키기 매개 변수를 확인 하였다. 이 오 예를 들어, 설골, 기관 및 경추 : utcome은 기존의 체제를 사용하는 경우 기본적으로 눈에 보이지 않는이었다 다수의 해부학 적 구조의 시각화 수 있습니다 LabScope, (그림 12)의 고급 확대 기능에 기인한다. 그 결과, 우리는 또한 후두 침투와 열망의 증거 동영상을 분석 할 수 있었다. 어느 침투도 포부에 관계없이 건강이나 질병 상태의, 본 연구의 모든 마우스에서 관찰되었다.
그림 10 :. LabScope 왼쪽 : LabScope 작은 동물 용 데스크톱 형광 투시경으로 수행한다. 오른쪽 : 레이블 구성 요소 LabScope의 근접 촬영보기. 가위 리프트 테이블 뷰의 형광 투시경 필드 내에서 관찰 실을 위치입니다. tp_upload / 52319 / 52319fig10highres.jpg "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
도 11 :. 저에너지 투시 시스템을 사용하여 수득 된 마우스의 저에너지 투시 이미지 시스템. 고배율 기능은 뷰의 투시 분야 내에서 전체 제비 메커니즘의 시각화를 방지합니다. 왼쪽 : 위치 1 - 전체 머리와 근위 흉부 영역의 시각화를 허용합니다. 제비 트리거 포인트 (검은 색 화살표)은 본질적으로 시야 내에서 중심. 오른쪽 : 위치 2 - GE 접합 (흰색 별표)에 제비 트리거 포인트 (검은 색 화살표)에서 허가 시각화. 식도 (흰색 화살표)를 통과하는 알약을합니다. g11highres.jpg "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
도 12 :. 해부학 적 구조 가시 심지어 낮은 배율 설정 (왼쪽)에서 저에너지 투시 시스템을 사용하여, 마우스의 머리와 목의 보니 구조 (즉, LabScope) 우리 저에너지 투시 시스템을 이용하여 용이하게 볼 수있다. 검은 사각형 내의 해부학 적 구조가 표시 (및 표시) 오른쪽으로 더 높은 배율된다. 보니 구조의 개선 시각화 높은 에너지 fluoroscopes를 사용하여 분석 할 불가능했던 몇 가지 추가 제비 매개 변수의 정량화를 허용합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 13 :. 예비 조사 결과이 그림은 쥐 VFSS 프로토콜을 사용하여 정량화 두 VFSS 제비 매개 변수에 대한 대표 예비 조사 결과를 보여줍니다 속도 (왼쪽)과 간 제비 간격 (오른쪽)를 삼킬. 삼키기 속도는 세 C57 마우스와 컨트롤에 비해 SOD1 마우스에 대한 상당히 느렸다. 유의 그룹 간 차이는 스왈 인터 대해 식별되지 않았다발. 바의 상단 라인은 그룹간에 유의 한 차이 (p <0.05)를 나타내 페로 니 페어 와이즈 비교하여 확인 하였다. 오류 바 ± 1 SEM을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
Discussion
쥐 (마우스 및 쥐) 모델의 수백은 인간의 질병을 연구하기 위해 상업적으로 사용할 수 있습니다. 그러나, 세 쥐 질병 모델은 특히 연하 곤란을 기준으로 조사되었다 : 파킨슨 병 12,15-17과 뇌졸중 (18)의 마우스 ALS 13, 14의 모델 쥐 모델. 이들 예비적인 연구 각각 불가능 종과 질병 간의 의미있는 비교를 도출하도록 렌더링, 연하 곤란을 평가하기 위해 다른 방법을 이용했다. 이 주요 제한은 자기 수많은 동물 먹이 스왈 파라미터 대물 정량화를 허용 새롭게 개발 뮤린 VFSS 프로토콜을 이용하여 향후 연구에서 극복 될 수있다.
성공적인 VFSS 결과는 세 가지 중요한 구성 요소에 따라 달라집니다 : 밀폐 된 공간에서 무제한 서있는 동안 시판 구강 대비 AG의 혐오 맛 / 냄새 마스크, 2) 조리법을 자체 공급을 허용 1) 시험 챔버엔트, 3) 제비 생리학의 정량화를 허용하는 단계별 시험 프로토콜입니다. 결합 효과는 전형적인 공급 및 삼키는 행동을 불러 일으키는 편안하고, 낮은 스트레스, 자기 먹이 시험 환경을 생성합니다. 이들 성분 중 하나 이상의 제거는 연구 결과에 불리한 영향을 미칠 것이다. 부정적인 결과의 예는 부족 마시는 에피소드로 인해 제비 매개 변수를 정량화 할 수있는 경구 용 조영제에 음주, 혐오 산만보기, 바람직하지 않은 행동의 투시 분야에서 동물을 유지 할 수없는, 그리고 무능력을 포함한다.
최적의 VFSS 결과를 얻는 주요 과제는 적절한 시험 챔버를 설계했다. 우리의 프로토 타입 디자인의 많은 수정이 충분히 시야에 마우스를 유지하고 음주 산만 행동을 방지하는 관찰 실에서 절정. 챔버는 균일 한 치수의 차를 얻기 위해 밀링 기계를 사용하여 제조 된E 튜브 및 엔드 캡함으로써 동일한 직경의 몇몇 관찰 챔버 용 부품의 호환성을 보장한다. 내부 크기 (직경 및 길이)을 충분히 직선으로 걸어 도는 허용하는 좁은 시험 챔버 결과 성인 마우스의 신체 사이즈보다 약간 큰 것으로 일치했다. 좁은 디자인은, 단지 단부 스파우트 및 PEG-그릇의 전략적 위치와 함께, 마시는 동안 상기 챔버의 길이를 따라 정렬 된 쥐의 머리와 신체를 유지한다. 음주에 종사하면, 마우스는 시험에 방해가 최소한의 움직임 유물의 결과로, 한 번에 현저하게 자기 안정화 주둥이 또는 그릇에 몇 초 동안 유지됩니다. 따라서, 왜곡, 확대 관찰 / 비디오 기록 및 횡 - 복부와 등쪽면에 마시면서 생쥐 videofluoroscopic 영상을 얻을 수있다.
마우스 (및 다른 작은 설치류)를 참조 자연스럽게 경 사진작은 공간에서 K 쉼터. 그 결과, 자유롭게 그것을함으로써 (즉 수동으로 동물을 픽업하여 두는 것이 취급으로 인한 응력 / 불안 제거 홈 케이지에 배치된다 (이미 엔드 캡에 의해 폐쇄 일단) 시험 챔버를 입력 챔버 내에서). 마우스를 챔버로 들어가면, 타단은 2 차 엔드 캡을 부착시킴으로써 폐쇄된다. 마우스를 자유롭게 둘러 보며 낮은 불안 시험 챔버를 만드는 동안이 디자인은 탈출을 방지 할 수 있습니다.
챔버의 사각형 모양이 내장되어 제공하며, 따라서 표준 설치류 케이지 내에서 테스트에 대한 필요성을 제거 독립 방식으로 사용되도록 허용하는 모션 안정성. 전체 장치는 청소하기 쉬운 튼튼한 저장 목적으로, 경량, 휴대용, 스택, 그리고 멸균 할 수 있습니다. 챔버가 초기에 투시에 사용하도록 고안되었지만 그들은 또한 스폿 필름 방사선, 뇌 영상 (예, MRI, PET, CT), 및 visua와 호환L 관찰 / 다양한 행동의 비디오 녹화.
극복 번째 주요 과제는 경구 조영제 (예, 황산 바륨 iohexol)의 혐오 맛 / 냄새 마스킹했다. 맛이 감도는 마우스 균주 19-21 아마도 나이 (22, 23)와 사이에 넓게 변화 점을 감안, 관계없이 변형과 연령, 모든 마우스에 좋고 맛 있었다 단일 테스트 솔루션을 식별 할 필요가 있었다. 이 결과로 인해 유동 학적 (예를 들어, 점도, 밀도 등) 및 시험 용액의 화학적 특성의 차이에 혼동 결과를 제거하면서, 삼키기 기능 / 균주 나이 걸쳐 장애의 직접적인 비교를 허용하는 것이 필수적이다. 이를 위해, 우리는 뮤린 VFSS 동안 경구 조영제의 혐오 맛 / 냄새를 마스크 바람직한 향미 증진제를 확인하는 간단하고 신속한 식미 스크리닝 방법을 개발했다. 방법은 소량을 필요로 간단한 노출 테스트를 모델로했다전위차계 (즉, 핥기 센서) 갈증 (24, 25)을 유도하는 물 규제 기간 (즉, 원천 징수 하룻밤 물) 후 처음 2 분 동안 핥기 비율을 기록합니다. lickometer이 연구를 위해 사용할 수 없습니다; 따라서, 선호 행동 관찰뿐만 아니라 이전에 우리의 실험실 13, 14에서 검증 된 핥기 속도에 대한 표준 비디오 녹화 방법으로 평가 하였다. 이 기호성 심사 방식을 사용하여, 초콜릿 C57 및 C57 / SJL 균주에 의해 선호하는 맛 강화제로 확인되었다. 특히, 각 장에 쥐의 100 %가 쉽게 여러 마우스를 동시에 주둥이에서 마시는, 노출의 30 초 이내에 초콜릿 맛 솔루션을 마셨다. 그러나, 바륨의 추가에 관계없이 바륨 또는 초콜릿 농도, 대부분의 마우스 만 간단히 마시는 복싱 경기에서 결과.
바륨의 대안 iohexol이며, 최근 수이로 인식 된 요오드 계 조영제인간의 VFSS 10 황산 바륨에 테이블 대체; 따라서,이 목적을 위해 아직 표준화되지 않았다. 초콜릿 맛 iohexol의 몇 가지 다른 농도는 마우스에 제공되었다. 스톡 iohexol (ML 당 350mg의 요오드)의 50 % 용액에 함유 된 조리법은 쉽게 하룻밤 물 규제 기간 이후 대부분의 마우스에 의해 마신했다. 높은 농도는 회피 행동의 결과. 50 % iohexol (ML 당 350mg의 요오드) 솔루션은 낮은 농도가 현저하게 보이지했고, 제비 생리학의 정량을 방해하는 반면, 마우스에 의해 섭취하면서 충분한 radiodensity를 생산했다. 초콜릿의 풍미와 50 % iohexol 용액을 첨가 따라서, 마우스와 VFSS을위한 최적의 테스트 솔루션은 확인되었다. 반복 기호성 테스트는 회피 행동이나 부작용을 초래하지 않았다.
극복하기 위해 세 번째 도전은 시각화를 모호하게 마시는 동안 자신의 머리를, / 틸트 회전에서 쥐를 방지했다VFSS 동안 삼키는 메커니즘. 페그 그릇에서 마시는는이 문제를 해결 실의 한쪽 끝에서 바닥 위에 위치. 페그 그릇 대신 sipper 튜브 병을 사용하는 경우 다음과 같은 몇 가지 추가 이점이 있습니다. 예를 들어, 액체의 부피 보정 관측 튜브의 엔드 캡에 통기구를 통해 PEG-사발로 피펫 팅 될 수있다. 이 접근은 간단한 VFSS 시험 기간 동안 소비 된 시험 용액의 체적 분의 정량을 허용한다. 또한, 작은 sipper 튜브 개구에 비해 PEG-그릇에 시험 용액의 증가 된 표면 영역은, 상기 동기를 마시는 후각을 자극 증가 제공 할 수있다. 그릇의 높이가 바닥에서 표준화 된 거리가 그대로 페그 - 그릇, 젊은 이하 변형 쥐를 공부에 더 적합 할 수있다. 반면, sipper 튜브 길이는 다른 잠재적 교란 변수가 고려하는 추가 다른 크기의 마우스를 수용 할 수 있도록 조정해야합니다. 또한, 마우스 모드그들은 쉽게 못 그릇에 도달 할 수있는 반면 신경 질환의 LS는, 어려움으로 인해 사지의 운동 장애에 sipper 튜브 병에 도달을 가질 수있다. 혀 및 / 또는 턱 기능 장애와 마우스는 충분히 액체에 액세스 할 수있는 주둥이에 공을 누르 못할 수 있습니다; PEG-그릇을 사용하면이 혼동을 제거 할 수있다. 이러한 이유로, sipper 튜브 병 위에 PEG-그릇의 사용은 뮤린 VFSS 시험의 바람직한 방법이다. 그러나, 관찰 실 필요에 따라 주둥이 음주를 수용 할 수 있도록 설계되었다. 고려해야 할 중요한주의해야 할 점은 핥아 요금 주둥이와 그릇 13,26 마시는 사이에 차이가 알려진 것입니다. 따라서, VFSS에 대한 주둥이 또는 페그 그릇 중 하나의 선택은 내 실험 사이에 일관성이 있어야합니다.
네 번째 문제는 일반적으로 인간의 조사 연구 및 임상에서 사용되는 VFSS 매개 변수에 필적 마우스에 대한 정량화 제비 매개 변수를 식별 할 수 있었다. 우리의 예비 연구 결과는 보여 주었다투시 시스템의 유형은 매개 변수를 마우스에서 조사 할 수 있습니다 제비를 결정합니다. 대부분의 연구 센터 및 의료 설정은 마우스 및 다른 작은 동물을 테스트 할 때 매우 가난한 이미지 품질이 저하 될 사람과 더 큰 동물과 함께 사용하도록 설계 fluoroscopes 높은 에너지 (75 ~ 95 kV의 1-5 석사)이있다. 예로서, 래트와 높은 에너지 투시기를 사용하는 최근 연구는 단지 4 삼키기 정량화 파라미터 (12)를 확인할 수 있었고, 우리는 본 연구에서 쥐 단지 7 삼키기 파라미터를 확인할 수 있었다. 이 주요 한계를 극복하기 위해, 우리는 최근에 LabScope (글렌 브룩 기술)라는 낮은 에너지 투시 시스템을 얻을. 시스템 (15) 및 40 kV로하고 (최대 전력 W 8) 0.2 mA의 피크 관전류 사이 광자 에너지와 X 선의 연속 콘빔 생성 미니어처 투시기이다. 본 시스템의 낮은 에너지 수준보다 마우스의 얇은 뼈와 연부 조직에 의해 감쇠 따라서 제공된다 highe기존의 (즉, 높은 에너지)에 비해 R 대비 해상도가 fluoroscopes. LabScope의 X 선 빔이 종래의 fluoroscopes 15~57cm 직경 이미지 인 텐시보다 현저하게 작은 직경 5cm 이미지 증,에 관한 것이다. LabScope 최소의 소스 - 텐시 거리 (SID)는 배율 기능을 제공 증가 ~ 6cm (달리 종래 fluoroscopes ~ 30 ㎝)이다. 또한, 디지털 LabScope SID를 변경하지 않고, 실시간으로 최대 40 배 확대 화상을 특허 기술을 사용한다. 결과는 본질적으로 마우스의 삼키는 메커니즘으로 작은 관심 영역을보고, 실시간으로 확대 및 축소 할 수있는 X 선 현미경이다.
이 저에너지 투시 시스템의 큰 장점은 방사선 안전을 개선된다. LabScope으로 낮은 방사선 량을 수신 한 동물 외에도, 시스템을 사용하는 연구자에 노출되어 상당히 레의 방사선 산란. 직접 제어반 부 앞의 방사선 노출은 MR을 10.3 /의 시간이다. 단위 앞 거리 1m에서 노출은 580 μR / 시간에 떨어진다. 방에있는 대부분의 다른 위치는 10 μR / 시간 아래 매우 낮은 노출이있다. 이러한 개선에도 불구하고, 우리는 방사선 안전을 개선하기 위해 추가 조치를 촬영했습니다. 예를 들어, 납이 함유 된 아크릴 차폐 산란 X 선 개인 차폐 착용하지 않고 쥐 VFSS 테스트를 수행하는 연구자 수 있도록 광자 (예를 들면, 납 앞치마, 갑상선 방패를하고, 안경)을 차단하는 LabScope 주위에 추가되었습니다. 또한, 클리어 아크릴 멀리서 마우스의 시각화를 허용한다. 또한 방사선 안전은 연구자에 의해 원격 제어되는 전동 가위 리프트 테이블에 의해 제공됩니다. 투시기에서 3m까지 최대 거리에서, 연구자들은 X 선 BEA 내 관찰 챔버의 수직 및 수평 위치를 조절하는 원격 제어 장치를 사용하여m. 마우스 자유롭게 관찰 챔버 내에서 이동하는 동안 결과로서, 관심 해부학 영역의 투시 뷰 필드 내에서 유지 될 수있다. 가위 리프트가 LabScope와 함께 사용하도록 설계되었지만, 그것은 또한 연구자 방사선 안전을 향상시키기 위해 종래 fluoroscopes 함께 사용하기위한 호환된다. 뮤린 VFSS 액체가 주사기 배출 시스템의 사용을 수반 중 마지막 단계는 방사선 안전을 향상시킬 수있다. 이 시스템은 3 ~ 4 발을 포함 (이상, 필요한 경우) 거리에서 페그 그릇에 액체의 신속하고 효율적인 전송을 허용 PE 관의 길이. 시린지 액체 전달 시스템은, 관찰 챔버와 조합하여, 종래의 fluoroscopes 함께 사용될 수있다.
뮤린 VFSS 새로운 프로토콜과 함께 사용을 LabScope 예비 작업은 종래의 시스템에 비해 큰 장점을 보여줍니다 확실 I를 정량화 할 수있다 스왈 파라미터의 개수s의 거의 두 배. 낮거나 높은 에너지 투시 시스템을 사용하는 경우에는, 마우스의 삼키는 메커니즘 (예를 들어, 혀, 연구 개, 인두 벽 및 후두개)의 부드러운 조직 구조는 쉽게 볼 수 없습니다. 따라서, 우리는 일시 흐름을 측정하기보다는 연하의 생체 역학을 정량화에 초점을 맞추었다. 우리는 시간, 공간, 거리, 볼륨 등보다는 리 커트 타입 척도를 사용하여 측정의 단위를 기준으로 정량화 될 수있는 매개 변수에 주로 관심이 있었다. 수많은 루스 흐름 매개 변수 회의는이 요구 사항은 소수지만, 경구 통과 시간 27 ~ 29, 인두 통과 시간 (27 ~ 33), 식도 통과 시간 34 ~ 36으로, 인간의 VFSS 문헌에 기술되어있다. 구강을 통해 일시 전송으로 인해 자연 마시는 동안 작은 알약 크기 가능성이 생쥐에서 쉽게 볼 수 없었다. 그러나, 우리는뿐만 아니라, 안정적으로 인두 및 식도 통과 시간을 정량화 할 수 있었다일시 흐름과 통관에 관한 여러 가지 다른 방법으로. 우리 LabScope의 기능을 추가로 최적화 병진 삼키기 파라미터 식별 예상된다.
이 연구 결과는 쥐가 인두 제비를 트리거하기 전에 vallecular 공간을 채우는 각각의 작은 액체 일시 순차적으로, 자연을 마시는 동안 제비 당 여러 리듬 핥는를 취할 것으로 나타났다. 액체 37-40 섭취의 주요 수단으로 핥아 사용하십시오 포유 동물에 대한 일반적인이 동작은, 인간의 유아 삼키는 그리고 일반적으로 모든 유아 포유 동물의 리듬 빨아-제비 패턴과 유사합니다. 유아 삼키는 생리가 여러 리듬을 특징으로 일반적으로 빨아 스왈주기 37,41-43 설명, 재귀 인두 제비 다음 안됐다. 따라서, 마우스의 ingestive 핥는 행동에 관련된 리듬 혀와 턱의 움직임은 험 빠는 행동을 ingestive 더 비교 될 수있다어린이와 성인에 의해 유아가 아닌 컵 마시는. 따라서 우리는 인간의 유아의 속도를 빨아 빨아 스왈 비율로 미래의 비교에 마우스의 핥아 속도 핥아-제비 비율을 정량화하고있다. 아마 쥐 VFSS 연구 개발 연하 장애에 대한 통찰력을 제공 할 것입니다.
새로운 연구 방법과 마찬가지로, 개선을위한 영역이 확인되었다. 예를 들어, 뮤린 VFSS 프로토콜은 C57 및 C57 / SJL 마우스 균주를 사용하여 개발되었다; 아직 쥐 테스트되지 않았습니다. 관찰 챔버는 쥐의 큰 몸 크기를 수용 할 수 있도록 크기 (직경 및 길이)에 확장 할 필요가있을 것이다. 초콜릿 맛 iohexol 범용 뮤린 VFSS 시험 용액으로서 적합한 지 또한, 알 수 없다. 따라서, 마우스 및 래트의 여러 균주 대규모 시험은 이러한 목적을 보증한다. 또한 뮤린 VFSS 용 조영제로서 바륨의 사용이 배제되지 않아야한다. 마우스는 명확하게 iohex를 선호바륨을 통해 조리법을 올; 바륨의 혐오 맛 / 냄새를 마스킹에서 그러나 더 엄격하고 체계적인 시도 iohexol에 입에 대안을 제공 할 수있다. 맛 환경에 iohexol과 황산 바륨의 효과를 비교하는 미래 연구 (뿐만 아니라 다른 잠재적 경구 조영제)과는 의심의 여지없이 인간의 VFSS 직접적으로 관련 및 번역입니다 중요한 정보를 제공 할 수 마우스 및 쥐의 생리를 삼킬.
인간과 VFSS는 음식과 액체의 여러 일관성을 포함하고 얇은 액체 및 건조, 단단한 음식 (44, 45)를 삼키는 경우 연하 곤란이 가장 명백하다. 뮤린 VFSS 프로토콜 따라서 질병 모델에 연하 장애의 검출 및 정량을 용이하게하는 추가 일관성을 포함하도록 확장되고있다. 또한 인간 VFSS 중에 사용 된 것과 일치하도록 점도를 조정하기 위해 뮤린 VFSS 용 액체 레시피 점도 시험을 수행 할 필요가있다. 이러한 제한을 주소관리 포인트는 직접 마우스, 쥐와 인간 사이에 비교 될 수 연하 곤란의 번역 VFSS 바이오 마커의 식별을 용이하게합니다.
쥐 VFSS의 유용성이 크게함으로써 연하의 생체 역학 조사를 허용, 그렇지 않으면 보이지 않는 삼키는 메커니즘의 부드러운 조직 구조로 방사선 불 투과성 마커를 주입하여 개선 될 수있다. 이 접근법은 성공적 유아 돼지 연하 금속 클립과 전선 37,42되지만 사용의 생체 역학을 연구하기 위해 수년 동안 사용되어왔다. 우리는 쥐, 비슷하지만 작은 마커의 사용은 인간을 포함한 더 큰 포유 동물과의 비교를 위해 몇 가지 추가 제비 매개 변수의 정량화를 허용 할 것으로 예상된다. 우리는 현재 혀에 방사선 불 투과성 마커, 부드러운 구개, 인두, 후두,이 가설을 테스트하기 위해 쥐의 근위부 식도를 주입하는 방법을 개발하고있다.
비디오 recordinLabScope 기존 fluoroscopes g의 프레임 속도는 초 (FPS) 당 30 프레임으로 제한됩니다. 그러나, 우리의 예비 결과는 건강한 쥐에 대한 연하의 전체 인두 단계는 약 10 배 빠른 인간보다 미만 66 밀리 초 (즉, 2 프레임)에서 발생하는 것으로 나타났다. 따라서, 생쥐에서 연하의 인두 단계는 세부 사항은 30 프레임 카메라로 감지되지 않도록 신속하게 발생합니다. 더 높은 프레임 속도 (가능성> 100 FPS)은 충분히 시각화하고 마우스 및 기타 설치류에 연하의 인두 단계의 매우 신속하고 복잡한 움직임을 정량화 할 필요가있다. 높은 프레임 레이트와 관련하여, 3D 이미징 biplanar 투시 기술을 통합하는 것은 확실히 뮤린 VFSS 유틸리티를 확장한다. 따라서, 미래의 설계 고려 사항은 더 높은 프레임 속도 카메라와 biplanar 이미징 기능을 포함해야한다.
마지막으로, 저용량 방사선은 불임을 유발하는 것으로 밝혀졌다수명 연구 (46)를 혼동 할 수 있습니다 난소 자극 호르몬의 수준 변화의 결과로 여성 C57 마우스. VFSS 테스트와 관련된 반복 저용량 방사선 노출의 영향에 관한 구체적 결과는 아직 마우스, 다른 동물 또는 인간에서 조사되지 않음. 그러나, 인간의 암컷 (방사선 노출 관련이없는) 난소 기능 장애는 위장 운동 장애에 연결되어 있으며, 특히 여성 (동물과 인간을 포함하는 미래 VFSS 연구를 설계 할 때 고려해야 할 또 다른 경고를 제공하는 경우 47 연하 곤란,에 ). 제비 기능에 상당한 성별 차이가 사람들 48,49보고 된 탐지뿐만 아니라 동물 질병 모델에서의 특성을하는 것이 중요 할 것 같은 여성의 배제는 피해야한다. 따라서, 마우스 및 남녀 쥐 종 VFSS의 연구 결과는 D를 기준으로 인간을위한 엄청난 번역 잠재력을 가지고ysphagia뿐만 아니라 반복 VFSS 테스트와 연관된 저용량 방사선 노출의 위험.
Disclosures
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Polycarbonate tubing for observation chambers | McMaster-Carr | 3161T41 | Body of observation tubes, 2"X2" diameter, 0.080" thick wall |
| Polycarbonate sheet for observation chambers | McMaster-Carr | 9115K71 | End-caps for observation tubes, 2"x12"x3/4" |
| Polycarbonate sheet for observation chambers | McMaster-Carr | 8574K281 | Peg-bowls for observation tubes |
| Silicone O-rings for end-caps of observation chambers | McMaster-Carr | 9396K108 | S1138 AS568-029, pack of 25 http://www.mcmaster.com/#o-rings/=t0wt5r |
| Silicone stoppers for observation chambers | McMaster-Carr | 2903K22 | Package of 10 stoppers to plug the oval opening in the top of the observation chamber when using a peg-bowl http://www.mcmaster.com/#catalog/120/3803/=t0y5at |
| Centrifuge tubes for sipper tube bottles | Evergreen Scientific | 222-3530-G80 | 30 ml freestanding centrifuge tubes, with caps, sterile https://www.evergreensci.com/labware-catalog/tubes-and-vials/30-and-50-ml-centrifuge-tubes/ |
| Silcone stoppers for sipper tube bottles | Saint-Gobain Performance Plastics | DX263031-10 | Number 31D, size: 26 mm bottom, 32 mm top, 30 mm high; 10 pack; http://www.labpure.com/en/Products.asp?ID=179&PageBrand=STOPPERS |
| Stopper borers for sipper tube bottles | Thomas Scientific | 3276G40 | Cork Borer Set that ranges from 3/16-15/16 inch http://www.thomassci.com/Supplies/Corks/_/CORK-BORER-SET-316-1516-IN?q=Humboldt |
| Drinking tubes for sipper tube bottles | Ancare | TD-100 | 2 1/2” long drinking tubes with 5/16” opening, straight ball-spout http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point |
| Iohexol for making oral contrast agent solution | GE Healthcare | 350 mg iodine per ml http://www3.gehealthcare.com/en/products/categories/contrast_media/omnipaque |
|
| Chocolate syrup for flavoring oral contrast agent | Herseys | ||
| 10 ml syringe for syringe delivery system | Becton, Dickinson and Company | 309604 | Luer lock tip syringe without needle, 100 per box http://www.bd.com/hypodermic/products/syringeswithoutneedles.asp |
| Catheter tubing for syringe delivery system | Becton, Dickinson and Company | 427451 | Polyethylene Tubing (Non-Sterile) (PE 240) 100' http://www.bd.com/ds/productCenter/427451.asp |
| Needle for syringe delivery system | Becton, Dickinson and Company | 427560 | 15-gauge needle, fits into PE 240 catheter tubing http://www.bd.com/ds/productCenter/427560.asp |
| Delrin acetal resin rod for syringe delivery system | McMaster-Carr | 8576K15 | 1/2 inch diameter, black http://www.mcmaster.com/#catalog/120/3609/=t0wvaf |
| Acrylic sheeting for scissor lift | Ponoko | Laser cut http://www.ponoko.com |
|
| 3D printed ABS frame | Engineering Rapid Prototyping Facility, University of Missouri | ||
| Brass rods for scissor lift | Amazon | TTRB-03-12-03 | made into axles http://www.amazon.com/Brass-Seamless-Round-Tubing-Length/dp/B000FN898M |
| Drawer slide for scissor lift | Richelieu | 10292G116 | Attaches to base of scissor lift http://www.lowes.com/pd_380986-93052-T35072G16_0__?productId=50041754 |
| 28BYJ-48 stepper motor for scissor lift | 2 each | ||
| ULN2003 Darlington transistor array for scissor lift | Toshiba | ULN2003APG | Used as stepper drivers (2 each) |
| ATTINY85 microcontroller for scissor lift | Atmel | ATTINY85-20PU | 2 each http://www.taydaelectronics.com/attiny85-attiny85-20pu-8-bit-20mhz-microcontroller-ic.html |
| Nylon spur gear | McMaster-Carr | 57655K34 | 2 each http://www.mcmaster.com/#57655k34/=t0yaqz |
| Nylon spur gear rack | McMaster-Carr | 57655K62 | 2 each http://www.mcmaster.com/#57655k62/=t0ybh9 |
| 4-40 nylon machine screws | McMaster-Carr | 95133A315 | Lift assembly http://www.mcmaster.com/#95133a315/=t0yd8q |
| 4-40 nylon hex nuts | McMaster-Carr | 94812A200 | Lift assembly http://www.mcmaster.com/#94812a200/=t0ye29 |
| Buna-N O-Ring AS568A Dash No. 104 | McMaster-Carr | 9452K318 | Lift assembly http://www.mcmaster.com/#9452k318/=t0yem7 |
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