Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

אפנון סביבתי של מספר המוח התיכון דופמין נוירונים בעכברים בוגרים

Published: January 20, 2015 doi: 10.3791/52329
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 1
1Florey Institute of Neuroscience and Mental Health, The University of Melbourne

Abstract

שינויים ארוכי טווח במוח או 'הגמישות מוחית' עומדים בבסיס התנהגות מסתגלת ותיקון המוח הבא מחלה או פציעה. יתר על כן, יחסי גומלין עם הסביבה שלנו יכולים לגרום לגמישות מוחית. יותר ויותר, מחקר מנסה לזהות אילו סביבות לעורר גמישות מוחית מועילה לטיפול במוח והפרעות התנהגות. שתי מניפולציות סביבתיות מתוארות בי להגדיל או להקטין את מספר immunopositive hydroxylase טירוזין (TH +, אנזים שער הגבלה בדופמין סינתזה (DA)) תאי עצב במוח התיכון העכבר הבוגר. הראשון כולל גברים זיווג ונקבות עכברים יחד ברציפות במשך השבוע 1, אשר מגדיל TH + נוירונים המוח התיכון בכ -12% בגברים, אך יורד TH + נוירונים המוח התיכון בכ -12% בנשים. השנייה כוללת עכברי דיור ברציפות במשך 2 שבועות ב'סביבות מועשרים "(EE) המכילות גלגלי ריצה, צעצועים, חבלים, חומר קינון, וכו ', שבו אניncreases TH + נוירונים המוח התיכון בכ -14% בגברים. בנוסף, פרוטוקול מתואר במקביל יציקת תרופות ישירות לתוך המוח התיכון במניפולציות הסביבתיות אלה כדי לסייע בזיהוי מנגנוני פלסטיות מוח לסביבה מושרה. לדוגמא, EE-גיוס של יותר TH + נוירונים המוח התיכון הוא בוטל על ידי מצור מקביל של קלט סינפטי על נוירונים המוח התיכון. יחד, נתונים אלה מצביעים על כך שמידע על הסביבה מועבר באמצעות קלט סינפטי לנוירונים המוח התיכון כדי לעבור או לבטל ביטוי של גני 'DA'. כך, גירוי סביבתי מתאים, או תרופת מיקוד של המנגנונים העומדים בבסיס, עשויה להיות מועילה לטיפול בהפרעות במוח והתנהגות הקשורים לחוסר איזון בDA המוח התיכון (למשל מחלת פרקינסון, קשב וריכוז והפרעת היפראקטיביות, סכיזופרניה, והתמכרות לסמים).

Introduction

הוא חשב DArgic איתות על ידי תאי עצב באזור הגחון tegmental (VTA) וcompacta סעיפי nigra substantia (SNC) של המוח התיכון להיות חשוב להתנהגויות קוגניטיביות, רגשיות ומוטורי מוטיבציה גמול. עם זאת, איתות DA המוח התיכון יותר מדי או מעט מדי גורמת לתסמינים רבים השבתה במגוון רחב של הפרעות נוירולוגיות (למשל מחלת פרקינסון, קשב וריכוז והפרעת היפראקטיביות, סכיזופרניה, והתמכרות לסמים). תרופות שתגדלנה או יקטינו DA האיתות להקל על תסמינים אלה, אולם הם גם מייצרים תופעות לוואי מיוחסות לאיתות dysregulated והשפעות חוץ-היעד. יעילות תרופה גם יורדת לאורך זמן בשל תגובות מפצות של המוח. האתגר לכן הוא להחזיר איתות DA המוח התיכון נורמלית באופן יותר ממוקד ופיזיולוגי, וגישה מועדפת היא על ידי הגדלת או הפחתת מספר תאי עצב DA המוח התיכון.

ראיות הולכות ומצטברות במשך sevהעשורים eral שהביטוי של גנים וחלבונים מעורבים בחילוף חומרים וDA סחר וקטכולאמינים אחרים בתאים בוגרים הוא לשינוי (שנסקרו ב1). במוח תיכון, מספר immunopositive hydroxylase טירוזין (TH +, אנזים שער הגבלה בסינתזת DA) נוירונים ירידות לאחר מכן מגדילה הבא ממשל עצבי 2,3, בעוד שמספר TH immunonegative (TH-) נוירונים מציג את הדפוס ההפוך (כלומר עליות לאחר מכן יורד 3). זה עולה בקנה אחד עם אובדן ולאחר מכן לקבל של 'פנוטיפ DA "על ידי חלק מתאים. מספר הנוירונים TH + וTH- SNC גם הוכח לשנות כיוונים שווים אך הפוכים לאחר טיפולים שונים המשנים את הפעילות החשמלית של תאים אלה 4,5. לדוגמא, עירוי של הקטנות-המוליכות, אשלגן מופעל סידן (SK) apamin אנטגוניסט ערוץ למוח תיכון 2 שבועות מקטין את מספר TH + ועליות (באותו הסכום) נוmber של TH- SNC נוירונים 4,5. בניגוד לכך, עירוי של SK אגוניסט ערוץ 1-EBIO מגדיל את מספר TH + ויורד (באותו הסכום) מספר הנוירונים TH- SNC 4,5. שינויים דומים נראו הבא מגוון טיפולי מיקוד פעילות עצבית SNC, כוללים כמה שממוקדים תשומות מביא 4. תקנה זו לכאורה של מספר הנוירונים SNC DArgic על ידי פעילות עצבית וקלט מביא מעלה את האפשרות שהסביבה או ההתנהגות יכולה להשפיע על מספר הנוירונים SNC. יש אכן עכברים בוגרים שנחשפו לסביבות שונות TH פחות או יותר המוח התיכון (SNC וVTA) + נוירונים, ולפחות חלק משינויים הנגרם סביבה אלה בוטלו על ידי מצור מקביל של קלט הסינפטי במוח תיכון 6. המטרות של תקשורת זו הן: (1) לספק פרטים נוספים על כיצד ליישם המניפולציות הסביבתיות שלנו וחליטות בסמים; ו- (2) ולמסור נתונים נוספים התומכים לטענה שלנו שהדוארnvironment מסדיר את מספר תאי עצב DA המוח התיכון, באמצעות קלט מביא.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

הערה: כל הליכי הניסוי על בעלי חיים אושרו על ידי מכון Florey של ועדת בריאות בעלי החיים Neuroscience ונפש אתיקה ולהתאים לבריאות הלאומית של אוסטרליה ומועצה למחקר רפואי שפורסמה קוד של תרגול לטיפול ולשימוש בבעלי חיים למטרות מדעיות (7 מהדורה ה, 2004).

1. מניפולציות סביבתיות

  1. שיוך מגדרי
    1. השתמש ב(> 8 שבוע ישן), גבר באותו גיל בגרות מיני ונקבות עכברים.
      הערה: אנו משתמשים בדרך כלל עכברי C57BL / 6, אבל יש לי אותו התוצאות באמצעות עכברים שוויצריים בפרוטוקול זה. אנחנו בדרך כלל להשתמש n = 8 זכרים וn = 8 נקבות לכל ניסוי, מחולק ל= 2 זוגות של גברים וגבריים n (n = 4 זכרים), n = 2 זוגות נקבה-נקבה (n = 4 נשים), וn = 4 זוגות של גברים ונשים (n = 4 זכרים ונקבות n = 4).
    2. עם ההגעה למתקן החזקת בעלי חיים, הקבוצה-בית העכברים לפי מגדר ל> 3 ימים להתאקלם. פה וthrougHout הזיווג בין המינים, לשמור על גירויים סביבתיים חיצוניים (טמפרטורת סביבה לדוגמא, אור: מחזור כהה, מזון, מים, טיפול וניקוי) קבועה או להפיץ באופן שווה לכל העכברים.
    3. באופן אקראי להקצות לכל עכבר לזוג גברי-גברי, זוג נקבה-נקבה, או זוג של זכר ונקבה. מניחים כל זוג לכלוב נקי בבידוד (2 עכברים / כלוב) גישה כרצונך מודעת מזון ומים עם, ופשוט לשכן אותם בדרך זו ברציפות במשך 7 ימים.
      הערה: בעלי חיים שגרתיים בסדר בתקופה זו, אך חייב להיות מופץ באופן שווה לכל העכברים. תשמור על עצמך כדי להימנע מזיווג של המלטת זכר ונקבה.
  2. העשרה סביבתית
    1. השתמש ב(> 8 שבוע ישן) עכברי זכר או נקבה מגיעה לבגרות מינית, באותו גיל.
      הערה: אנו משתמשים בדרך כלל n = 18 עכברים לכל ניסוי, מחולקים לקבוצת n = 6 / טיפול.
    2. עם ההגעה למתקן החזקת בעלי החיים לשמור אותם שוכנו בתקן זהה-שוכנו קבוצה (SH) (לדוגמא: לדוגמא, אור: מחזור כהה, מזון, מים, טיפול וניקוי) קבועה או להפיץ באופן שווה לכל העכברים.
    3. כדי להתחיל העשרה סביבתית, באופן אקראי להקצות לכל עכבר לאחת מהקבוצות 3: SH; גלגל ריצה (RW), או בסביבה מועשרת (EE) ולמקם את כל קבוצה של עכברים לכלוב נקי זהה גישה כרצונך מודעת מזון ומים עם יחד.
      הערה: הנה, כלובים גדולים מחזיק חולדה לכל הקבוצות, מדידת 27 סנטימטרים רוחב, 42 סנטימטרים ארוכים, ו -16 סנטימטרים העומק הייתה בשימוש.
      1. בנוסף, מספק התנאים הבאים סביבתיים לכל קבוצה: SH הכולל המלטה בלבד (כדורי נייר או נסורת) על הרצפה; גלגלי SH הכולל RW בתוספת 2 ריצה; EE הכולל RW בתוספת צעצועים (חבלים, סולמות, מנהרות, ואובייקטים כגון לחמניות מגבת נייר ריקות וחתיכות של נייר טישו) שבה לשעבר plore, לשחק, לטפס, להסתיר, וקן.
      2. לשכן אותם בדרך זו ברציפות במשך 14 ימים.
        הערה: בעלי חיים שגרתיים בסדר בתקופה זו, אך חייב להיות מופץ באופן שווה לכל העכברים.
    4. עכברי נושא EE ל'סופר-העשרה 'נוספת (SE) על ידי הצבת אותם יחד לכלוב גדול יותר המכיל צעצועים חדשניים ל1hour, 5days / שבוע / יום (אותה שעה בכל יום).
      הערה: הנה, אמבטיה פלסטיק 46 סנטימטרים רוחב, 69 סנטימטרים ארוכים, ו -40 סנטימטרים עומק הייתה בשימוש.
      1. לשמור על חידוש על ידי הצגת קבוצה שונה של צעצועים בכל מפגש. צעצועים נקיים שיש מחדש הציגו לעכברים עם מים וסבון ו- 80% אתנול להסיר ריחות.
      2. בעקבות כל פגישת SE, להחזיר את העכברים לכלוב EE. SH ידית והעכברים RW זהה עכברי SE (פרט לSE עצמו) בתקופה זו (למשל להסיר ולהחזיר כל SH ועכבר RW ולכלוב שלה).

התחת = "jove_title"> 2. אוסמוטי משאבה ומוח עירוי צינורית שתלים לעירוי תרופות

  1. הכנה
    1. השתמש במשאבות סטרילי האוסמוטי וערכות עירוי מוח, אשר זמינות באופן מסחרי. היום לפני ההשתלה, באמצעות טכניקת aseptic, ראש השתלים ידי מילוי כל משאבה, חיבור צינור וצינורית עם פתרון סמים או כלי רכב סטרילי (כפי שמתואר בהוראות המצורפות למשאבות). לחבר אותם יחד ודגירה בתמיסת מלח סטרילית לילה בשעה 37 ° C. דגירה שתלי סמים ומלא כלי רכב בנפרד, כדי למנוע זיהום צולב.
  2. ניתוח.
    הערה: בהתאם למדינה של הנסיין, היתרי ניסויים בבעלי חיים מיוחדים או קצבאות נדרשות להמשיך סוגים כאלה של ניתוח וניסויים שלאחר ניתוח.
    1. לעקר את כל הציוד כירורגי ולהעסיק טכניקת ספטית לאורך כל דרך. הרדימי עכבר (למשל באמצעות isofluorane 1-2% באוויר) ולמקם אותו בstereheadframe otaxic. בדוק את עומק ההרדמה לאורך כל ההליך ולנהל הרדמה נוספת במידת צורך (למשל העדר נסיגת איבר לקמצוץ כפה רעיל מעיד על הרדמה נאותה). מוגנות להבטיח את העיניים מהתייבשות על ידי משחה עין חומר סיכה, ושטמפרטורת הגוף של העכבר נשארה נורמלית לאורך כל ההליך.
    2. לעשות חתך קו האמצע דרך העור החל מבין העיניים וגימור 2 סנטימטר אחורי עד לקצה האחורי של הגולגולת. בוטה לנתח את העור מfascia הבסיסי במורד הגב של העכבר כדי ליצור "כיס" גדול מספיק כדי להתאים את המשאבה וצינור חיבור פעם הצינורית מושתלת (צינור החיבור לא צריך להיות כפוף עם השלמה) בנוחות תת-עורי. לגרד לנקות את fascia מרחבי היבט הגב של הגולגולת.
    3. שימוש בר שיניים קוטר כ 1.5 מ"מ, לתחקר מטה לתוך הגולגולת בstereotaxic המתאים מרכז until שכבה דקה וגמישה של עצמות שרידים. פיל שכבה זו משם באמצעות מלקחיים עדינים (זה ימנע נזק למאטר בסיס הדורה ומוח עם בר השיניים). להבטיח את הגולגולת הוא ניקה מכל שברי העצם ודם, וכי אין דימום נוסף.
    4. עם הצינורית שנערכה על ידי בעל צינורית, למקם את המשאבה וצינור חיבור ל'הכיס 'תת-עורי מעל גבו של העכבר. בשלב הבא, עמדת הקצה של הצינורית בקואורדינטות stereotaxic המתאימות ועל פני השטח של המוח. בזהירות להוריד את הצינורית לתוך המוח אבל להפסיק כ 1 מ"מ קצר של העומק הנדרש.
      הערה: העומק שנותר יהיה משא ומתן הבא של יישום השכבה הראשונה של אקריליק שיניים.
    5. ודא שוב את פני השטח של הגולגולת הוא נקי ויבש, ואז להכין נפח קטן של אקריליק שיניים ולהשתמש בקיסם כדי להחליק אותו על האזור כולו החשוף של גולגולת, ובכלל זה לבר-החור דרך הגולגולת סביב הצינורית דואר. לפני אקריליק מתקשה, להוריד את הצינורית להטות את העומק שנותר ליעד.
    6. הכן עוד נפח קטן של אקריליק שיניים ושכבה זו מעל הראשון, כמו גם על תמיכת הפלסטיק הלבנה לצינורית, כדי לתקן את הצינורית במקום. חזור עם שכבות נוספות של אקריליק על פי צורך.
    7. ברגע אקריליק יש קשוח, להסיר בזהירות את בעל צינורית ומנותק הכרטיסייה הלבנה הפלסטיק נשלפת צינורית באמצעות סכין אזמל מחומם עם להבה בוטאן. לבסוף, תפר את העור נסגר מעל כל השתל.
  3. טיפול לאחר ניתוח של בעלי חיים
    1. החל משחה אנטיספטית לשוליים העור, ולנהל אנטי דלקתי לעכבר (למשל Meloxicam, 3 מ"ג / קילוגרם sc). הסר את העכבר מהמסגרת, למקם אותו מתחת לפנס חום, ולהתבונן עד שהוא חוזר להכרה. אל תחזור עכבר שעבר ניתוח לחברה של בעלי חיים אחרים, עד שהתאושש לחלוטין.
      הערה: Expיכולות להיות יזם מניפולציות erimental כגון זיווג בין המינים והעשרת סביבה או חידשו היום לאחר ניתוח בבית המוקדם.
    2. לפקח על משקל גופם, התנהגות כללית ומראה יומיומי. פנק את סימני הזיהום (למשל נפיחות, אדמומיות, מוגלה) סביב חתכים ניתוחיים במשחה אנטיספטית אקטואלית. לטפל בכל מחלה סימנים, כאב, מתח או אי נוחות (למשל אובדן> 10% ממשקל גוף, הנסיגה חברתית, חוסר הטיפוח, "מתפיח", תפקוד לקוי של תנועה, פרכוסים) עם משככי כאבים ו / או אנטיביוטיקה מערכתיים בהתאם לצורך.
    3. להרדים עכברים אם> 15% ירידה במשקל או תסמינים של מחלה, כאב, מתח או אי נוחות הן לא-ההשבה בתוך השבוע של טיפול מתקנת 1.

רקמות הכנת 3. מוח, אימונוהיסטוכימיים עיבוד, וstereology

  1. זלוף
    1. מייד לאחר מניפולציות / סמים סביבתיים, להכין את המוח למחקר.
    2. ראשית לנהל מנת יתר של חומר הרדמה כדי להרוג את העכברים (למשל 100 מ"ג / קילוגרם ip נתרן pentobarbitone). ברגע שהרדים אבל לפני הלב מפסיק לפעום, להניח את העכבר על גבה ולקשור או להצמיד את שני forelimbs.
    3. באמצעות אזמל לחתוך את העור שמעל בית החזה ואז לחתוך דרך השריר, ממש מתחת לכלוב הצלעות לתוך חלל הבטן. הנח מהדק על תהליך xiphoid של בית החזה ולהרים את החזה למעלה מן הכבד חושף את הסרעפת.
    4. לחתוך דרך הסרעפת ודרך הצלעות רוחבית בשני הצדדים באמצעות מספריים גדולים עד בית החזה יכול להיות מקופל לאחור על הראש כדי לחשוף את הריאות ולב. בעזרת מספריים בסדר לעשות חתך קטן בעלייה הימנית כנקודת יציאה לדם ופתרונות perfused, ואז לחתוך דרך הבסיס של ventri השמאלCLE ולמקם את צינורית דרך החדר השמאלי, אטריום השמאל, ולתוך אב העורקים.
    5. הצמד את הצינורית במקום ולאחר מכן לשאוב (37 ° C) החם heparinized ו -0.1 מלוח M פוספט שנאגרו פיסיולוגי (PBS) דרך כלי הדם עד פתרון יציאת העלייה הימנית הוא חופשי לחלוטין של דם. בשלב הבא, לשאוב (4 ° C) פתרון מקבע קר (paraformaldehyde כגון 4% בPBS) דרך כלי הדם, עד שכל העכבר הוא קבוע גם. הסר את המוח ואת המקום בPBS עם סוכרוז 30% במשך 2-3 ימים עד כיורים המוח.
      הערה: סוגים אחרים של הכנת רקמה עשויים להיות מיושמים בהתאם למומחיות במעבדה המקבילה.
  2. הכנת cryosections צפה חינם
    1. לחתוך קטעי סדרתי דרך אזורי המוח של עניין ולאסוף אלה בPBS.
      הערה: אנחנו חותכים 40 מיקרומטר חלקים עבים באמצעות cryostat. סוגים אחרים של חתך ברקמה עשויים להיות מיושמים בהתאם למומחיות בcorrespondiהמעבדה ng.
  3. אימונוהיסטוכימיה
    1. בצע אימונוהיסטוכימיה סטנדרטית לחלבונים של עניין. דגירה סעיפים 5% בסרום נורמלי עז ושל 0.3% X-100 טריטון בPBS בטמפרטורת חדר למשך 30 דקות, ולאחר מכן immunoreact עם אנטי-TH ארנב polyclonal (1: 400) בשעה 4 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות, אנטי biotinylated אז polyclonal עז -rabbit (1: 1000) בטמפרטורת חדר למשך שעה 2.
    2. בשלב הבא, דגירה בavidin-peroxidase (1: 500) בטמפרטורת חדר למשך 1 שעות, ולאחר מכן בcobalt- וdiamino-benzidine-התעצם ניקל (0.5 מ"ג / מיליליטר) בטמפרטורת חדר למשך 18-20 דקות; ל3-5 דקות האחרונות של הדגירה diamino-benzidine להוסיף מי חמצן (0.01%) כדי לזרז ממטרים כרומגן. לשטוף חלקים שלוש פעמים לכל 10min בPBS לפני, אחרי, ובין כל אחד מהשלבים לעיל.
    3. הר הסעיפים בשקופיות מיקרוסקופ gelatinized, אוויר היבש אותם, אז כתם Nissl (אדום ניטראלי), ליבש באלכוהול, (X-3B) ברור, וcoverslip.
  4. להעריך את המספר הכולל של TH + וTH- SNC (וVTA וLC) נוירונים בשיטות stereological משוחדות. ודא שstereologist עיוור לטיפול שקיבל. תכלול גליה על בסיס קוטר סומה <מיקרומטר 5 ולספור רק את תאים עם גרעין גלוי.
  5. זהה את SNC (וVTA וLC) על ידי המקומות המרחבי של תאי TH + וציוני דרך / גבולות אנטומיים לפי אטלס המוח של Paxinos ווטסון 7. רוזן TH + תאים בתוך מסגרת ספירה (55 x 55 מיקרומטר = 3025 מיקרומטר 2) במרווחי זמן קבוע מראש רגילים (x = 140 מיקרומטר, y = 140 מיקרומטר לSNC; x = 100 מיקרומטר, y = 100 מיקרומטר לVTA וLC) לאורך כל גרעין בכל חלק רביעי.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

עכברים בוגרים נתון למניפולציות הסביבתיות אלה שינו מספרים של המוח התיכון (SNC וVTA), אבל לא LC, TH + נוירונים, וEE בתוספת עירוי המוח התיכון במקביל של שני picrotoxin או bicuculline (GABA יריבים הקולטן) מבטל EE-גיוס של יותר SNC TH + נוירונים. נתונים אלו פורסמו בעבר ב- 6. הנתונים הנוכחיים לוקטו בניסויים לשכפל בוצעו כחלק ממחקר שהקודם, אך עדיין לא פורסמו במקום אחר.

באופן ספציפי, יש לי עכברי זכרים בוגרים שהותאמו עם נקבות עכברים בוגרים יותר TH + SNC וVTA (המוח התיכון) נוירונים מאשר גברים יחד עם גברים, ואילו נשים יחד עם גברים יש פחות TH + נוירונים SNC וVTA מאשר נקבות יחד עם נקבות (איור 1 ב 6). דוגמא נוספת לכך ניתן כאן באיור 1, המציג את ממוצע ± מספר SE של נוירונים TH + SNC בזכר ונקבות עכברים מייד foזיווג בין המינים llowing. יש זכרים יחד עם נקבות למשך 7 ימים כ -12% יותר תאי עצב TH + SNC מאשר גברים יחד עם גברים (שתי עמודות כחולות באיור 1). בניגוד לכך, יש לי נקבות זיווג עם זכרים נוירונים TH + SNC כ -12% פחות מאשר נקבות יחד עם נקבות (שתי עמודות אדומות באיור 1).

מספר הנוירונים TH + SNC וVTA גם מגביר בעכברי זכרים בוגרים בכפוף לEE (איור 2 ב 6), וEE-גיוס של יותר + נוירונים SNC TH הוא בוטל על ידי מצור מקביל של קולטנים המוח התיכון GABA (איור 3 ב 6). דוגמא נוספת לכך ניתן כאן באיור 2, שבו א 'א' עם עירוי רכב הביא לכ 14% יותר תאי עצב TH + SNC מ SH עם עירוי רכב (משמאל שתי עמודות באיור 2). עם זאת, EE עם GABA עירוי אנטגוניסט לרצפטור (או picrotoxin מיקרומטר 10 או 51; bicuculline M) בוטל עלייה זו (מימין שתי עמודות באיור 2) לחלוטין. שים לב, נתונים אלה הם מנגדיים SNC לצינורית העירוי, וכמעט זהים להשפעות שנצפו בSNC ipsilateral שדווחו ב 6.

איור 1
איור 1:. השפעות של זיווג בין המינים במספר TH SNC + נוירונים מייד לאחר 7 ימים של זיווג בין המינים (פרוטוקול 1.1) עכברים בוגרים היו perfused (3.1), המוח התיכון היה מחולק (3.2), קטעים עובדו עבור hydroxylase טירוזין (TH , שיעור הגבלת אנזים בסינתזת DA) אימונוהיסטוכימיה (3.3), והמספרים של נוירונים TH + SNC נאמדו באמצעות stereology (3.4). זמם כאן הם הממוצע ± מספר SE של SNC TH נוירונים + בעכברי זכרים יחד עם עכברי זכרים (n = 4 עכברי זכרים מ= 2 זוגות של גברים וגבריים n col תכלת,טור ה), זכרים יחד עם נקבות (n = 6 עכברי זכרים מזוגות 6 זכר-נקבה, עמודה כחולה כהה), נקבות יחד עם נקבות (n = 8 נקבות עכברים מn = 4 זוגות נקבה-נקבה, עמודה אדומה אור), ו נקבות יחד עם גברים (n = 6 נקבות עכברים מn = 6 זוגות של זכר ונקבה, עמודה אדומה כהה). זיווג עם המין השני הביא לגידול במספר TH SNC + תאי עצב בזכרים אבל ירידה במספר SNC TH + תאי העצב בנקבות (p <0.001 כיוון אחד ANOVA; * p <0.05 השוואות מרובות pairwise Tukey).

איור 2
איור 2: אפקטים של העשרת הסביבה עם GABA המוח התיכון מצור קולט על מספר SNC TH + נוירונים מייד לאחר 14 ימים של העשרת סביבה (פרוטוקול 1.2) עם עירוי במקביל של שני כלי רכב, GABA p אנטגוניסט לרצפטור.icrotoxin (10 מיקרומטר), או GABA bicuculline אנטגוניסט לרצפטור (מיקרומטר 5) למוח התיכון שמאלה (פרוטוקול 2), עכברי זכרים בוגרים היו perfused (3.1), המוח התיכון היה מחולק (3.2), קטעים עובדו עבור hydroxylase טירוזין ( TH, אנזים שיעור הגבלה באימונוהיסטוכימיה DA סינתזה) (3.3), והמספרים של TH נוירונים + בצד הימין (הנגדי) SNC נאמדו באמצעות stereology (3.4). זממתי כאן הם הממוצע ± מספר SE של SNC TH נוירונים + בתקן שוכנו (SH) עכברי זכרים עם עירוי רכב (n = 6, טור תכלת), הסביבה מועשרת (EE) זכרים עם עירוי רכב (n = 6, כחול הכהה ראשונה טור), EE זכרים עם עירוי picrotoxin (n = 6 עמודה כחולה כהה שנייה,), וזכרי EE עם עירוי bicuculline (n = 6 עמודה כחולה כהה שלישית,). EE הביא לגידול במספר TH SNC + נוירונים, אבל זה בוטל על ידי עירוי של picrotoxin או bicuculline למוח התיכון הנגדי (p <0.001 כיוון אחד ANOVA; * P <0.001 השוואות מרובות pairwise Tukey).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

מניפולציות סביבתיות

המוטיבציה מאחורי העיצוב של מניפולציות אלה סביבתיים (זיווג בין המינים והעשרה סביבתית) הייתה לקבוע האם הסביבה, ו / או התנהגות תתבקש על ידי הסביבה, קשורה לשינויים במספר תאי עצב DA המוח התיכון. הדגש היה אפוא במתן סביבות ומגרים התנהגויות שעשויות לעסוק איתות DA המוח התיכון. זיווג אלה כללו עם המין השני, והעשרה סביבתית הכוללת גישה ולקן פועל גלגלים, חבלים, סולמות, מנהרות, ואובייקטים לחקור, לשחק, לטפס, להסתיר,. שתי סביבות אלה צריכים לטפח קוגניטיביים, רגשיות ומוטורי התנהגויות מוטיבציה גמול, אשר נקשרו עם עליות חדות בהפרשות עצביות DA המוח התיכון ושחרור DA (למשל 8). ההשערה שלנו היה שהם גם קשורים לשינויים שנמשך לזמן ארוכים יותר בbr DA המוח התיכון איתותצריך על ידי שינויים במספר תאי עצב DA המוח התיכון. כאן ובמקומות אחרים 6, ראיות שהוצגו שזה אכן כך.

החקירות שלנו החלו להשתמש בפרוטוקול הזיווג בין המינים (1.1) כי זה כולל התנהגות ליבה ראשונית וחיונית מוטיבציה גמול (כלומר הזדווגות). כמו כן,, זוג-מליטה רבייה, והתנהגויות חברתיות ידועות לגרום לשינויים מקבילים במערכות neurochemical אחרות (למשל שינויים בצפיפות של אוקסיטוצין, vasopressin ותאי שחרור הורמון קורטיקוטרופין בהיפותלמוס 9). והשפעות אלה מהוות SNC (מחקר נוכחי: אכן, לאחר 7 ימים של זיווג מתמשך עם המין השני, אנו מציגים כאן ובמקומות אחרים 6 שיש לי גברים כ -10% יותר TH + נוירונים המוח התיכון ואילו לנקבות יש כ 10% פחות TH + נוירונים המוח התיכון [הערה 6) וVTA 6, אך לא coeruleus הלוקוס 6, שבו TH עוזר לסנתז נוראדרנלין].זה תומך ברעיון כי מספר תאי עצב DA המוח התיכון במוח הבוגר אינו קבוע, אלא משתנה בהתאם לאינטראקציות סביבה, התנהגות, או סביבה / ההתנהגות. ראיות אחרות טוענת שינויים אלו הביאו על ידי שינויים בביטוי של גן TH וחלבון בתאי עצב המוח התיכון קיימים, בניגוד לneurogenesis DA או ניוון. (1) neurogenesis DA במוח התיכון עכבר המבוגר מתרחשת גם לא בכל 10-14, או בשיעורים נמוכים בהרבה מיכול להסביר את התוספת של כ 500 נוירונים SNC DA חדשים בשבוע 15,16. (2) מחקרי כימות שינויים במספר תאי עצב SNC הבאים 2 חליטות שבוע של תרופות שונות מיקוד הפעילות החשמלית של תאי עצב המוח התיכון חשפו באופן עקבי שינויים שווים (שוב כ -10%), אך ההפך TH תאים + וTH-, וכתוצאה מכך אין שינוי נטו ב 4,5 מספר התא הכולל. זה עולה בקנה אחד עם רגולציה של רמות חלבון TH מעל או מתחת immunohistochemically detרמות ectable ללא תוספת או גריעה של נוירונים. (3) מחקרים רבים דיווחו על שינויים תלויים-פעילות בגן TH וביטוי חלבון בתוך תאים על פני לוח זמנים של מספר שעות 17-23, ואותו כבר דווח במוח תיכון 4.

השאלה נשאלת מה הם מנגנוני שינויים בביטוי של גן TH וחלבון בתאי עצב המוח התיכון קיימים. אפשרויות כוללות סטרואידים מין, אשר עשוי בבסיס שני ההבדלים הבסיסיים במספר תאי עצב המוח התיכון TH + בזכרים ונקבות, כמו שינויי מין ספציפי היטב (עליות בזכרים ונקבות ביורדות) הבאים זיווג דווח כאן בעבר ו6. אפשרות נוספת היא רגולציה פעילות תלויה ביטוי TH. נוירונים SNC וVTA (שני DA ולא-DA) לקבל קלט סינפטי בעיקר מסטריאטום, ההיפותלמוס, גרעין subthalamic, וחזיתיים הקורטקס 24. בהקשר של שיוך מגדרי, תשומות אלהיכול להיות מוסדר על ידי הסנסורית התנהגות, olfaction, פרומונים, מתח, חילוף חומרים, או רבייה. רגולציה פעילות תלויה ביטוי TH יכולה להיות מתווכת באמצעות מסלולי סידן או איתות neuropeptide ביטוי של גן משפיעים וחלבון (לדוגמא 1).

כדי לעזור להבחין בין מין סטרואידים לעומת מנגנוני פעילות תלויה בבסיס ההשפעות של זיווג בין המינים במספר תאי עצב DA המוח התיכון אנחנו מועסקים פרוטוקול העשרת הסביבה (1.2), בקרות שטובות יותר מפני ההשפעה הפוטנציאלית של סטרואידים מין ואולי גם הורמונים אחרים ( למשל פרומונים, מתח, רבייה), ואת ההשפעה הפוטנציאלית של פעילות עצבית המונע מביא. הגורם הרלוונטי כאן הוא הקבוצות השונות היו הרבה יותר דומה מבחינת מין (כולם הזכרים), הורמונים, מעמד חברתי ולחץ. למשל גברי דומיננטי יותר ואגרסיווי למרות מעמד ולחץ חברתיים, עדיין עשוי להיות שונה בין קבוצות (בקבוצה אחת), אין זה סביר זה תמיד יהיה באותה הקבוצה (למשל EE), ואת ההשפעות של EE כעת שוחזרה מספר פעמים 6. בEE, סדר הגודל של הגידול בTH + נוירונים המוח התיכון היה זהה בפרוטוקול הזיווג בין המינים (השווה גברים באיורים 1 ו -2 מחקר נוכחי, ומספרים 1 ו -2 ב 6). יתר על כן, העלייה מושרה EE בTH + נוירונים SNC הנגרמים על ידי העשרה סביבתית בוטלה לחלוטין על ידי מצור מקביל של קולטנים המוח התיכון GABA (איור 2 הווה מחקר ואיור 3 ב 6), המספקים כ -70% מכל הקלט מביא לDA המוח התיכון נוירונים 25. יחד, נתונים אלה מצביעים על פעילות עצבית המונע מביא היא לפחות חזקה כמו השפעה על מספר תאי עצב DA המוח התיכון כהורמונים.

תובנה נוספת לתוך הסביבתי-פקטוrs המסדיר את מספר TH + נוירונים המוח התיכון מגיע מהשוואת ההשפעות של RW וEE. RW כולל פעילות למדה היטב או בנאלי מנוע (פועל על הגלגלים), ואילו א 'א' כוללת כמות דומה של פעילות כזו, אם כי של מגוון גדול יותר (כלומר צעצועים שונים אך ללא שינוי לאורך 14 ימים), בתוספת החשיפה מתמשכת לצעצועי רומן ב מרכיב SE (1.2.4). נתונים שפורסמו בעבר שלנו 6 גילו, אם בכלל, עלייה קטנה בנוירונים SNC וVTA TH + RW בהשוואה לעכברי SH, אבל עליות גדולות בהרבה בEE (+ SE) עכברים. זה מדגיש גירוי חושי, קוגניציה, חידוש ו / או למידה וזיכרון כרגולטורים חזקים יותר של מספר הנוירונים DA המוח התיכון מפעילות גופנית בנאלי לבד.

EE כבר נעשה שימוש נרחב כדי לגרום להשפעות טיפוליות ולשפר את תיקון מוח במודלים של בעלי חיים שונים של הפרעות במוח, כגון אלצהיימר, הנטינגטון ומחלת פרקינסון 26. Naטבעה של מניפולציות סביבתיות כאלה הוא שהם משתנים באופן נרחב בין מעבדות (כפי שעושה תנאים '-שוכנו סטנדרטיים'), עם זאת יש היבטים מרכזיים של פרוטוקולי EE שראויים לציון והיו בעבר דנו 27. EE מספק מוגבר חידוש ומורכבות יחסי לדיור תקן סביבתיים, כדי לשפר את הרמות של גירוי חושי, פעילות קוגניטיבית ופעילות גופנית. בתכנון ניסויי EE, צריך לקחת בחשבון גורמי האתולוגיה, כוללים יכולות החושיות והקוגניטיבית של בעלי החיים והדחפים האינסטינקטיביים שלהם. כמו עכברים (וחולדות) הם ליליים, עם יכולות הוויזואליות נחותות לבני אדם אבל החושית מצוין וחדות חוש הריח, חפצי ההעשרה צריכים לשקף את האינסטינקטים ויכולות מולדות של חיות ניסוי. לכן, זה החידוש, צורה, המרקם והריח של החפצים שעשויות להיות בולט במיוחד לעכברים. הערכות לעוצמתו היחסית של מוטי 'המכרסמיםvations עבור מגוון רחב של חפצי העשרה הוביל להמלצות להכללה של אובייקטי לעיסה כדי לאפשר את ההזדמנות כדי לממש את התנהגויות 28,29 בסיסיות, מינים-טיפוסיים. מתן חומר קינון נחשב למרכיב בסיסי של פרוטוקול ההעשרה ועכברים באופן אינסטינקטיבי לקרוע כל אובייקטים עשויים מנייר או קרטון, ובכך לספק הזדמנות לפעילות חושית, הקוגניטיבית ומוטורית 30,31. חשוב גם כי בניסוי עם כלובי EE מרובים, החידוש והמורכבות המקבילים של אובייקטים מסופקים, כדי למזער את השונות בתוך קבוצת EE, ושליטה דומה של פרמטרים סביבתיים צריכה להיות למימוש לקבוצת SH. באופן אידיאלי, המספרים של עכברים לכלוב צריכים להיות זהים בין EE וקבוצות SH (אלא אם כן את ההשפעות של גודל קבוצה חברתי נחקרות באופן ספציפי), ויש להשתמש בי לא 'פינוקים אוכל' בEE, כמו כל הבדלים תזונתיים בין קבוצות יכולים לבלבל tהוא הפרשנות של ההשפעות של הפעילות קוגניטיבית ופעילות גופנית שמשפר EE 12. שיקולים מרכזיים נוספים הם משך חשיפה לסביבה מועשרת והגיל שבו מתחילה העשרה. בעוד ביטוי ההפרש של גנים הוכח רק לאחר 3 שעות בסביבה מועשרת 32, תקופות ארוכות יותר של חשיפה עשויות להידרש לשינויים מבניים ותפקודיים להתרחש 33,34. יתר על כן, פלסטיות מושרה העשרה עשויה להשתפר בתקופות התפתחות קריטיות לאחר לידה 35.

שתלי צינורית אוסמוטי משאבה ועירוי המוח לאינפוזיות סמים

שתלי המשאבה וצינורית האוסמוטי יעילים מאוד להעברת תרופות ישירות לתוך המוח. עם ניסיון, ניתוח השתל לוקח כ 1 שעה לכל עכבר. אקריליק שיניים לבדו מספיק כדי לתקן את הצינורית במקום לפרקי זמן ארוך (הערה: יש לנו כבר עד 28 ימים בoניסויים שלהם); אין צורך בחומרה נוספת מצורף כגון ברגי עצם. זה חשוב לוודא שיש הרבה רפיון בצינור המחבר את המשאבה וצינורית כדי לאפשר לראש מקסימאלי וכיפוף צוואר בלי לשים יותר מדי דגש על הקשרים. זאת במיוחד לאינפוזיות לטווח ארוך, שבו צמיחה של רקמת חיבור סביב המשאבה יכולה לעגן אותו במקום ובכך להפחית את הגמישות של השתל. במידת האפשר, עכברים גם לאחר ניתוח, כדי למנוע פגיעה בhousemates השתל דרך מגרד, מושכים או הכסיסה שוכנו יחידים. המינון של תרופה נקבע במידה רבה על ידי הכמות הוסיפה למשאבה. עם זאת, בתשומת לב מבחינה זו צריכה להיות גם שילם לספיקת משאבה, היציבות הכימית של התרופה על 37 מעלות צלזיוס, והשיעור מהצינורית של דיפוזיה של התרופה דרך המוח. כיום משאבות זמינות מהספק שלנו יכולות לשמור על עירוי לתקופה של עד 6 שבועות בספיקה של 0.15 μl / hr; מהרספיקה זמינה est היא 10 μl / hr אבל נמשך רק 1 בשבוע. ניתן להשיג פעמים עירוי יותר על ידי ביצוע ניתוחי קטין נוספים כדי להחליף משאבות מדולדלות עם משאבות מלאים על הגב של צינור החיבור (כלומר מבלי להפריע את הצינורית המושתל). במידה המרחבי של מתילן כחול (1% מתילן כחול, MW 320, בשיעור של 0.9% NaCl) דיפוזיה מקצה צינורית מושתלת 0.3 מ"מ מעל אמצע הדרך SNC עזב יחד היבט mediolateral נמדד להאריך מהקצה לרוחב של המוח התיכון רק מעבר לקו אמצע mediolaterally, ובכל רחבי המידה dorsoventral השלם של המוח התיכון (לאחר 2 שבועות של עירוי). זה הרבה יותר נפוץ מאשר גרעין קטן כמו SNC, ואת ההתפשטות של תרופה עשויה להיות גדולה יותר (או קטנה יותר) בהתאם לMW, יציבות כימית, חציצה, וכו 'ואכן, ניתן להסיק מהנתונים הנוכחיים (איור 2) ש שני picrotoxin וbicuculline הגיעו SNC הנגדי בconcentrati הפעיל ביולוגיתוספות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Isofluorane Baxter Healthcare Pty Ltd, Baxter Drive, NSW 2146, Australia AHN3640
ALZET Osmotic pump 1002 DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530 0004317
ALZET Brain infusion kit 1 DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530 0004760
ALZET cannula holder 1 DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530 0008860
Vertex Monomer Self-curing (dental acrylic solvent) Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, The Netherlands n/a
Vertex Self Curing (dental acrylic powder) Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, The Netherlands n/a
METACAM (Meloxicam) Troy Laboratories, 98 long Street, smithfield NSW 2164 Australia L10100
Sodium Pentobarbitone Lethabarb, Virbac, Milperra, NSW, Australia 571177
Normal goat serum chemicon-temecula, CA S26-Litre
Triton X-100 Merck Millipore Headquarters , 290 Concord road, Billerica, MA 01821 1.08603.1000
Polyclonal rabbit anti-tyrosine hydroxylase Merck Millipore Headquarters , 290 Concord road, Billerica, MA 01821 AB152
Polyclonal biotinylated goat anti-rabbit Dako Australia Pty. Ltd., Suite 4, Level 4, 56 Berry street, North Sydney, NSW, Australia 2060 EO432
Avidin peroxidase Sigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AU A3151-1mg
Diamino-benzidine Sigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AU D-5637
Stereo Investigator MicroBrightField Bioscience, 185 Allen Brook Lane, Suite 101, Williston, VT 05495 n/a

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Aumann, T., Horne, M. Activity-dependent regulation of the dopamine phenotype in substantia nigra neurons. Journal of neurochemistry. 121, 497-515 (2012).
  2. Sauer, H., Oertel, W. H. Progressive degeneration of nigrostriatal dopamine neurons following intrastriatal terminal lesions with 6-hydroxydopamine: a combined retrograde tracing and immunocytochemical study in the rat. Neuroscience. 59, 401-415 (1994).
  3. Stanic, D., Finkelstein, D. I., Bourke, D. W., Drago, J., Horne, M. K. Timecourse of striatal re-innervation following lesions of dopaminergic SNpc neurons of the rat. The European journal of neuroscience. 18, 1175-1188 (2003).
  4. Aumann, T. D., et al. Neuronal activity regulates expression of tyrosine hydroxylase in adult mouse substantia nigra pars compacta neurons. Journal of neurochemistry. 116, 646-658 (2011).
  5. Aumann, T. D., et al. SK channel function regulates the dopamine phenotype of neurons in the substantia nigra pars compacta. Experimental neurology. 213, 419-430 (2008).
  6. Aumann, T. D., Tomas, D., Horne, M. K. Environmental and behavioral modulation of the number of substantia nigra dopamine neurons in adult mice. Brain and behavior. 3, 617-625 (2013).
  7. Paxinos, G., Franklin, K. B. J. The mouse brain in stereotaxic coordinates. , 2nd, Academic Press. (2001).
  8. Schultz, W. Behavioral dopamine signals. Trends in neurosciences. 30, 203-210 (2007).
  9. Sun, P., Smith, A. S., Lei, K., Liu, Y., Wang, Z. Breaking bonds in male prairie vole: long-term effects on emotional and social behavior, physiology, and neurochemistry. Behavioural brain research. 265, 22-31 (2014).
  10. Aponso, P. M., Faull, R. L., Connor, B. Increased progenitor cell proliferation and astrogenesis in the partial progressive 6-hydroxydopamine model of Parkinson's disease. Neuroscience. 151, 1142-1153 (2008).
  11. Frielingsdorf, H., Schwarz, K., Brundin, P., Mohapel, P. No evidence for new dopaminergic neurons in the adult mammalian substantia nigra. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 10177-10182 (2004).
  12. Lie, D. C., et al. The adult substantia nigra contains progenitor cells with neurogenic potential. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 22, 6639-6649 (2002).
  13. Chen, Y., Ai, Y., Slevin, J. R., Maley, B. E., Gash, D. M. Progenitor proliferation in the adult hippocampus and substantia nigra induced by glial cell line-derived neurotrophic factor. Experimental neurology. 196, 87-95 (2005).
  14. Yoshimi, K., et al. Possibility for neurogenesis in substantia nigra of parkinsonian brain. Ann Neurol. 58, 31-40 (2005).
  15. Shan, X., et al. Enhanced de novo neurogenesis and dopaminergic neurogenesis in the substantia nigra of 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-induced Parkinson's disease-like mice. Stem Cells. 24, 1280-1287 (2006).
  16. Zhao, M., et al. Evidence for neurogenesis in the adult mammalian substantia nigra. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 7925-7930 (2003).
  17. Baker, H., Kawano, T., Margolis, F. L., Joh, T. H. Transneuronal regulation of tyrosine hydroxylase expression in olfactory bulb of mouse and rat. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 3, 69-78 (1983).
  18. Black, I. B., Chikaraishi, D. M., Lewis, E. J. Trans-synaptic increase in RNA coding for tyrosine hydroxylase in a rat sympathetic ganglion. Brain research. 339, 151-153 (1985).
  19. Zigmond, R. E., Chalazonitis, A., Joh, T. Preganglionic nerve stimulation increases the amount of tyrosine hydroxylase in the rat superior cervical ganglion. Neuroscience letters. 20, 61-65 (1980).
  20. Biguet, N. F., Rittenhouse, A. R., Mallet, J., Zigmond, R. E. Preganglionic nerve stimulation increases mRNA levels for tyrosine hydroxylase in the rat superior cervical ganglion. Neuroscience letters. 104, 189-194 (1989).
  21. Richard, F., et al. Modulation of tyrosine hydroxylase gene expression in rat brain and adrenals by exposure to cold. Journal of neuroscience research. 20, 32-37 (1988).
  22. Schalling, M., Stieg, P. E., Lindquist, C., Goldstein, M., Hokfelt, T. Rapid increase in enzyme and peptide mRNA in sympathetic ganglia after electrical stimulation in humans. Proc Natl Acad Sci U S A. 86, 4302-4305 (1989).
  23. Liaw, J. J., He, J. R., Barraclough, C. A. Temporal changes in tyrosine hydroxylase mRNA levels in A1, A2 and locus ceruleus neurons following electrical stimulation of A1 noradrenergic neurons. Brain research. Molecular brain research. 13, 171-174 (1992).
  24. Watabe-Uchida, M., Zhu, L., Ogawa, S. K., Vamanrao, A., Uchida, N. Whole-brain mapping of direct inputs to midbrain dopamine neurons. Neuron. 74, 858-873 (2012).
  25. Tepper, J. M., Lee, C. R. GABAergic control of substantia nigra dopaminergic neurons. Progress in brain research. 160, 189-208 (2007).
  26. Hannan, A. J. Environmental enrichment and brain repair: harnessing the therapeutic effects of cognitive stimulation and physical activity to enhance experience-dependent plasticity. Neuropathology and applied neurobiology. 40, 13-25 (2014).
  27. Nithianantharajah, J., Hannan, A. J. Enriched environments, experience-dependent plasticity and disorders of the nervous system. Nature reviews. Neuroscience. 7, 697-709 (2006).
  28. Chmiel, D. J., Noonan, M. Preference of laboratory rats for potentially enriching stimulus objects. Laboratory animals. 30, 97-101 (1996).
  29. Hanmer, L. A., Riddell, P. M., Williams, C. M. Using a runway paradigm to assess the relative strength of rats' motivations for enrichment objects. Behavior research methods. 42, 517-524 (2010).
  30. Burrows, E. L., McOmish, C. E., Hannan, A. J. Gene-environment interactions and construct validity in preclinical models of psychiatric disorders. Progress in neuro-psychopharmacology & biological psychiatry. 35, 1376-1382 (2011).
  31. Van de Weerd, H. A., Van Loo, P. L. P., Van Zutphen, L. F. M., Koolhaas, J. M., Baumans, V. Strength of preference for nesting material as environmental enrichment for laboratory mice. Applied Animal Behaviour Science. 55, 369-382 (1998).
  32. Rampon, C., et al. Effects of environmental enrichment on gene expression in the brain. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 12880-12884 (2000).
  33. Eckert, M. J., Abraham, W. C. Effects of environmental enrichment exposure on synaptic transmission and plasticity in the hippocampus. Current topics in behavioral neurosciences. 15, 165-187 (2013).
  34. Sztainberg, Y., Chen, A. An environmental enrichment model for mice. Nature protocols. 5, 1535-1539 (2010).
  35. Sale, A., Berardi, N., Maffei, L. Environment and brain plasticity: towards an endogenous pharmacotherapy. Physiological reviews. 94, 189-234 (2014).

Tags

Neuroscience גיליון 95 התנהגות המוח התיכון hydroxylase טירוזין דופמין פלסטיות compacta הסעיפים nigra substantia
אפנון סביבתי של מספר המוח התיכון דופמין נוירונים בעכברים בוגרים
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Tomas, D., Prijanto, A. H., Burrows, … More

Tomas, D., Prijanto, A. H., Burrows, E. L., Hannan, A. J., Horne, M. K., Aumann, T. D. Environmental Modulations of the Number of Midbrain Dopamine Neurons in Adult Mice. J. Vis. Exp. (95), e52329, doi:10.3791/52329 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter