Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Het evalueren van de effectiviteit van Cancer Drug Overgevoeligheid Published: February 6, 2015 doi: 10.3791/52388

Abstract

Vanwege de hoge heterogeniteit en mutaties inherent in menselijke kankers, enkel middel therapieën of combinatietherapieën die dezelfde route targeten waarschijnlijk mislukken. De nadruk moet op de remming van de routes die verantwoordelijk zijn voor intrinsieke en / of adaptieve weerstand tegen therapie worden geplaatst. Een actief gebied van onderzoek is de ontwikkeling en het testen van DNA-reparatie-remmers die de actie van te bevorderen, en weerstand te voorkomen, veelgebruikte chemotherapie en radiotherapie. We gebruikten een nieuw protocol voor de doeltreffendheid van BRCA2 inhibitie evalueren middel om tumorcellen gevoelig te maken het DNA beschadigende middel cisplatine. Tumorcel metabolisme (verzuring en ademhaling) werd gecontroleerd in real-time voor een periode van 72 uur tot doeltreffendheid van de behandeling af te bakenen op een van minuut tot minuut basis. In combinatie, we een evaluatie van metastatische frequentie uitgevoerd met behulp van een kippenembryo chorioallantoïsmembraan (CAM) model van extravasatie en invasie. Ditprotocol wordt een aantal van de tekortkomingen van de gebruikelijke in vitro en in vivo methoden om nieuwe kankertherapie regimes evalueren. Het kan worden gebruikt naast gewone werkwijzen zoals celproliferatie assays, celdood assays en in vivo muis xenograft studies nader discrimineren tussen kandidaatdoelwitten en middelen en selecteren alleen de meest veelbelovende kandidaten voor verdere ontwikkeling.

Introduction

Verworven resistentie tegen doelgerichte en / of cytotoxische behandeling van kanker is een belangrijk klinisch probleem dat kan leiden tot falen van de behandeling, terugval, en verhoogde patiënt mortaliteit 1. Gezien de hoge heterogeniteit in de meeste tumoren, is een wiskundige zekerheid dat een tumor voldoende groot aantal cellen een subset van cellen resistent of gecombineerde behandelingen die moleculaire mechanismen waarop deze cellen afhankelijk zijn voor overleving 2,3 bevat. Dergelijke tumorcellen positief geselecteerd tijdens de behandeling, leidt tot terugkeer van de ziekte. Ontwikkeling van nieuwe therapieën die gelijktijdig richten op verschillende kankercellijnen overleving mechanismen voor of nabehandeling gemedieerde selectie, dus klinisch belang.

Een hoog genoom instabiliteit en mutaties in tumor genomen is een fundamenteel kenmerk dat kankercellen onderscheidt van niet-tumor- gastheercellen 4. Bijgevolg is een useful strategie om de doeltreffendheid van DNA-beschadigende chemotherapie te verhogen en om de ontwikkeling van resistentie te voorkomen is het actief remmen DNA herstel in tumorcellen 5. Dit is een actief gebied van onderzoek en een verscheidenheid van nieuwe DNA herstel doelstellingen worden onderzocht in een pre-klinische omgeving. Een aantal kleine molecuul of-antisense gebaseerde remmers van deze doelstellingen zijn ontwikkeld en ondergaan testen 6-8. Het doel is om de meest veelbelovende preklinische kandidaten hun veiligheid en de werkzaamheid in klinische studies te identificeren en te evalueren.

De hoge kosten van klinische proeven en het risico van mislukking (om verschillende redenen, waaronder suboptimale pre-klinische evaluatie) zijn formidabele obstakels voor vooruitgang in de ontwikkeling van nieuwe therapieën 9. Het gebruik van geschikte en strenge pre-klinische modellen om adequaat nieuwe therapeutische targets en kandidaat-medicijnen te evalueren kan de hoge uitvalpercentage van klinische proeven 10 verlagen

A) inhoudsmetingen tumorcel proliferatie te verminderen in vitro (celproliferatie assays), b) reductie-induceren capaciteit van tumorcellen: Sommige veelgebruikte preklinische methoden om de doeltreffendheid van nieuwe anti-kanker regimes evalueren vorm weefselkweek kolonies (kolonievorming assays), c) reductie-induceren in tumorcellen metabole activiteit in vitro (redox-kleurstof conversie), d) therapie geïnduceerde inductie in vitro tumor celdood (apoptose, necrotische, autofagocytische, geassocieerde met mitose en anderen) 11, en ​​e) in vivo therapie-geïnduceerde reductie van de groei of ablatie van mens en muis xenograften 12-14.

Een belangrijke tekortkoming van het vermelde in vitro werkwijzen is dat geen van hen continue real-time evaluatie van het effect van kandidaat therapieën. Integendeel, zij geven informatie alleen bij geselecteerde, ver uiteenliggende tijdstippentijdens de behandeling. Dergelijke metingen zijn afgenomen vermogen om nauwkeurig de omvang en de timing van de tumor cel responsen. In vivo muis xenotransplantaatmodellen zijn ook beperkt door de hoge kosten, de lengte van de tijd in beslag, en het risico van sub-optimale dosering en behandeling timing (scheduling). Daarnaast zijn er aanwijzingen dat knaagdier xenotransplantaatmodellen beperkt voorspellers van klinische werkzaamheid bij de mens, in vergelijking met in vitro evaluatie van de reacties van primaire humane tumorcellen en gevestigde humane tumorcellijnen kandidaat therapeutische interventies 15,16.

Wij bedachten een nieuwe combinatie protocol om nieuwe combinaties van geneesmiddelen preklinisch evalueren op een wijze die de tekortkomingen van de hierboven genoemde meer gemeenschappelijke procedures adressen. In plaats van proliferatie, kolonie vorming, of redox-dye conversie testen, hebben we gebruik gemaakt van een stofwisseling meeteenheid naar cel adhesie, ademhaling, en verzuring in real time te analyserenTijdens de gehele behandelingsperiode 17. Tegelijkertijd onderzochten we de effecten van de behandeling combinatie in vivo door een kippenembryo chorioallantoïsmembraan (CAM) model van invasie en metastase 18,19. We gebruikten deze werkwijzen het vermogen van een antisense oligonucleotide (ASO) gericht BRCA2 de doeltreffendheid van het gebruikte chemotherapeuticum cisplatin versterken evalueren.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Opmerking: Het volgende protocol is ontworpen voor gebruik met hechtende cellen. Aanpassingen nodig zijn om de methode van toepassing op niet-hechtende cellen gekweekt in suspensie. De CAM experimenten in het protocol beschreven zijn ontworpen voor gebruik met cellen die een fluorescente merker (bijvoorbeeld GFP, RFP, enz.) Tot expressie. Negen dagen oude kippenembryo's zijn vereist op dag 2 van de experimentele protocol voor de CAM-experimenten.

1. Voorbereiding en transfectie van tumorcellen met antisense-oligonucleotiden (ASO)

  1. Zuig medium uit T75 fles (s) met cellen van belang, wassen met 1XPBS, en voeg 2 ml van 0,25% trypsine / EDTA. Voeg 10 ml compleet kweekmedium aan elke kolf en de cellen in oplossing in een 50 ml buis. Tel de cellen en het volume aan te passen, zodat de uiteindelijke concentratie is 1.0x10 5 cellen per ml.
  2. Neem twee groepen T25 flessen: één groep acht kolven, gelabeld 1-8 bevatten, en u zal wordensed voor de real-time metabolisme meting experiment; en de tweede groep ook 8 kolven bevatten en zullen worden gebruikt voor het kippenembryo CAM experiment. Voeg 2 ml van cellen in oplossing aan elke kolf en plaats in de incubator (37 ° C, 5% CO 2 O / N).
  3. De volgende ochtend (dag 0, Time 0), label drie 5 ml buisjes als volgt: controle (niet-targeting ASO of siRNA), 'target of interest' (dat wil zeggen, gericht ASO of siRNA) en Lipofectamine 2000 (of een soortgelijke transfectie reagens). Verdun de voorraad ASO oplossingen voor geschikte concentratie serumvrij medium in de betreffende buis.
    1. Voeg de vereiste hoeveelheid transfectie reagens passende buis en incubeer in serumvrij medium gedurende 5 min. Voeg de transfectie reagens oplossing ASO buizen en incubeer gedurende 20 minuten.
  4. Voeg 250 ul van controle ASO transfectiereagens oplossing in elk van kolven 1-4 in elke groep, en 250gl "doelwit van belang ASO transfectie reagens oplossing in elk van kolven 5-8 in elke groep. Incubeer gedurende 4 uur (37 ᵒC, 5% CO2).
    1. Tijdens de incubatie, het uitvoeren van de stappen in paragraaf 2.1 beschreven. Na de incubatie, 3 ml compleet medium aan elke kolf in de CAM experiment groep en terug naar de incubator O / N (37 ᵒC, 5% CO2). Verwerk de stofwisseling experiment groep volgens de beschrijving in paragraaf 2.2. Verwerk de CAM experiment ingesteld op basis van de beschrijving in punt 4.

2. biosensorchip Voorbereiding en Cell Seeding

  1. In een steriele omgeving, zorgvuldig wassen zes biosensor chips met 400 ul PBS. Steriliseer de chips met 400 pl 70% ethanol gedurende 20 minuten. Was driemaal met 400 ul PBS.
    1. Leg de chips in steriele culture gerechten om besmetting te voorkomen. Plaats drie chips in een schotel met het label 'control', en drie in een schotel met het label 'doelwit van belang'.
  2. Label twee 50 ml buisjes als 'controle' en 'doelwit van belang'. Was de cellen met PBS en voeg een geschikt volume van 0,25% trypsine / EDTA. Wacht tot de monolaag los en het verzamelen van de cellen van elke kolf. Storten de oplossing in het juiste buisje.
    1. Tel de cellen en het volume aan te passen, zodat de uiteindelijke concentratie is 6.0x10 5 cellen / ml. Centrifugeer en resuspendeer de cellen als de beginconcentratie te laag.
  3. Voeg 250 ul van de cel oplossing in elk biosensor chip in de juiste groep (in totaal 1.25x10 5 cellen per chip). Voer deze taak één groep tegelijk het risico van verwarring de chips minimaliseren. Plaats de steriele schalen met de chips in een vochtige kamer om verdamping te voorkomen, en plaats de vochtigheid chamber in de incubator O / N (37 ᵒC, 5% CO2).
  4. De volgende dag (dag 1), voorzichtig Zuig het medium van elke chip en vervangen met 250 ul groeimedium aangevuld met 0,2% foetaal runderserum (FBS) en 1 x penicilline en streptomycine (P / S). Incubeer gedurende 4 uur (37 ᵒC, 5% CO2).

3. Metabolisme Measurement System Voorbereiding en oplossing Voorbereiding

  1. Tijdens de incubatie verzorgt de geneesmiddeloplossingen en het metabolisme meetsysteem voor de volgende test.
    OPMERKING: Het metabolisme meetsysteem bevat in totaal zes modules. Elke module is geschikt voor één chip per experiment.
    1. Verdeel de assay in de volgende experimentele groepen: één chip van elk van de "controle" en "doelwit van belang" groepen voertuig voor de duur van de test; twee chips uit elke groep om medicamenteuze behandeling ontvangen voor een bepaalde periode tijdens de eenssay, gevolgd door het voertuig tijdens de wash-out periode.
    2. Voor drug sensibilisatie studies, wijzigt de lengte, timing en concentratie geneesmiddel behandeling voor het bepaalde geneesmiddel in kwestie passen.
      OPMERKING: Voor cisplatine, de volgende stappen werden empirisch bepaald met A549 cellen, en kunnen variëren afhankelijk van cellijn. Voer alle stadia met de standaard debiet van 4 pl / min.
      6 uur groeimedium + 0,2% FBS en 1 x P / S
      24 uur van 6 uM cisplatine in medium + 0,2% FBS 1x P / S
      24 uur groeimedium + 0,2% FBS en 1 x P / S
      18 uur groeimedium + 0,2% FBS en 1 x P / S
      4 uur 0,1% Triton-X
      Opmerking Afwijkingen van deze stappen berekening vereisen om de benodigde hoeveelheid medium en geneesmiddeloplossingen basis van de gewenste stroomsnelheid en duur van het experiment bepaald. De volgende paragrafen zijn gebaseerd op de hierboven beschreven stappen.
  2. Label en vul veertien buizen van 50 ml met 50 ml kweekmedium + 0,2% FBS eend 1x P / S. Plaats zes in één metabolisme meetsysteem tube rack, zes andere, en de resterende twee in een derde buis rek waarin ook buizen met cisplatine. Verzegel de eerste twee rekken met een lucht doorlatend membraan om verdamping te voorkomen.
  3. Bereid een oplossing van 6 uM cisplatine (van het juiste volume) in medium + 0,2% FBS met 1x P / S. Verdeel het vereiste volume cisplatine oplossing in vier gemerkte buizen van 50 ml.
    1. Plaats de buizen in de resterende vier sleuven in de derde metabolisme meetbuis rek. Zorg ervoor dat de buizen in de juiste sleuven die overeenkomen met de gewenste biomodules geplaatst. Verzegeling van de buizen met een lucht doorlatend membraan.
  4. Bereiden en label zes 50 ml buizen en vul ze met 20 ml elk van 0,1% Triton-X-oplossing in medium. De Triton-X oplossing zal alle resterende cellen te lyseren en zorgen voor een 'nul' waarde voor elke chip. Plaats de buizen in een vierde metabolisme meeteenheid buis rek en verzegelen with een lucht permable membraan om overmatige verdamping te voorkomen.
  5. Laad de chips in de biomodules en start het experiment.

4. CAM Experiment Drug Treatment en Injection

OPMERKING: De stappen en de procedure voor het bereiden van kip embryo's voor een CAM-experiment worden elders beschreven 19

  1. Beginnen met het verwerken van de CAM-experiment 48 uur na transfectie (Dag 2). Onderverdelen van de 'control' en 'target of interest' groepen in twee flesjes voor voertuig, en twee voor cisplatine. Zuig het medium uit de kolven en aan te vullen met ofwel 3 ml vers medium, of 6 uM cisplatine. Incubeer gedurende 6 uur (37 ᵒC, 5% CO2).
  2. Zuig het medium, dan wassen en trypsinize de cellen; het verzamelen van de cellen getrypsiniseerd in oplossing in vier gemerkte buizen van 15 ml.
    1. Centrifugeer en was de cellen driemaal met PBS. Re-schorten de cel pellet in 5 ml PBS eend tel de cellen.
    2. Stel het volume zo in dat de eindcelconcentratie is 1.0x10 6 cellen / ml. Breng de celoplossing in geëtiketteerde 5 ml buizen voor injectie en plaats op ijs. Inverteer de buizen voorzichtig vóór injectie te zorgen dat de cellen goed gemengd.
  3. Vernietiging van een totaal van 24 kippenembryo's (9 dagen oud) voor injectie (6 per groep). Voer de injectie met een glazen naald bevestigd aan een flexibele slang verbonden met een 1 ml spuit. De persoon van de injectie worden verblind de behandelingsgroep.
    1. Met behulp van een stereomicroscoop, injecteren 1.0x10 5 cellen in een volume van 100 ul in de veneuze circulatie van de CAM. Gebruik een langzame, pulserende techniek om het volledige volume van de cellen te injecteren. Zachtjes dep de injectieplaats met een zacht doekje om de doorstroming van het bloed stengel en absorberen elke morsen. Label elke embryo container op de juiste wijze na elke injectie.
  4. Bevestigen de aanwezigheid en distridrage van fluorescerende cellen in de vasculatuur van de CAM volgende injectie visualiseren ze met een fluorescentiemicroscoop. Dan ook de eventuele embryo's waarin het aantal tumorcellen lijkt laag, of de distributie is slecht.
  5. Leg de kippen embryo in een vochtige kamer en opslaan in een incubator (37 ° C, 60% luchtvochtigheid). Wacht 7-9 dagen voor het opsommen van metastatische foci.

5. gemetastaseerde Focus Enumeratie

  1. Tijdens de 7-9 dag incubatietijd, toezicht houden op de embryo's en gooi geen doden. Zorg ervoor dat de vochtige kamer vochtig blijft te allen tijde tijdens de incubatieperiode.
  2. Met behulp van een fluorescentie stereomicroscoop bij 20X vergroting scant het gehele bovenoppervlak van het embryo CAM in een regelmatige raster patroon.
  3. Tel het aantal metastatische foci in elk gezichtsveld, dan strookt het nummer voor een eindtotaal per embryo. Te doen voor de zes embryo's in elke groep zal een gemiddeld aantal o biedenf metastatische foci per behandeling.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Resultaten en cijfers aangepast met toestemming van gepubliceerde werk 22.

BRCA2 remming induceert een verlaging van de ademhaling van cisplatine behandelde tumorcellen

Menselijke A549 longkankercellen behandeld met BRCA2-targeting ASO en cisplatine vertoonde een vroege en onomkeerbare afname ademhaling, vergeleken met cellen die controle ASO en cisplatine alleen kregen; na 24 uur van behandeling met cisplatine het verschil tussen ademhaling BRCA2 ASO en controle ASO behandelde cellen was 39% (Figuur 1A). Belangrijk is dat deze afname ademhaling die vóór een detecteerbare daling celadhesie, suggereert dat dit gebeurde onafhankelijk van schommelingen in celaantal. Ademhaling begon ongeveer 10 uur dalen voordat de eerste waarneembare afname van adhesie, suggereert dat een daling van de ademhaling een vormende gebeurtenis die celdood (Figuur 1B) vooraf kan zijn. Geen verschil in acidification werd waargenomen tijdens de 72 uur experiment tijdsduur, suggereert dat BRCA2 ASO en cisplatine behandeling heeft weinig tot geen invloed op het glucosemetabolisme (figuur 1C).

BRCA2 remming in combinatie met cisplatine behandeling verlaagt de frequentie van metastase

Menselijke A549 longkankercellen werden behandeld met controle-ASO of BRCA2 ASO in aanwezigheid of afwezigheid van cisplatine, en geïnjecteerd in de veneuze circulatie van de CAM (Figuur 2A). Negen dagen na de injectie, cellen behandeld met BRCA2 ASO en cisplatine vertoonde een 77% lagere frequentie van metastatische foci vergelijking met cellen behandeld met controle-ASO en cisplatine of BRCA2 ASO alleen (Figuur 2B). Dit suggereert dat BRCA2 ASO en cisplatine behandeling heeft het potentieel te verlagen of voorkomen metastatische belasting bij patiënten met solide tumoren.

Figuur 1 Figuur 1. Real-time monitoring van de tumorcel therapietrouw, ademhaling, en verzuring. A549-cellen werden met BRCA2 ASO, uitgeplaat op biosensor chips, en behandeld met cisplatine voor 24 uur gebruik van de Bionas Discovery System. Metingen van (A) ademhaling, (B) hechting, en (C) aanzuren werden uitgevoerd om 4 min gedurende 72 uur. Roze = controle ASO, blauw = BRCA2 ASO, groen = controle ASO + cisplatine, rood = BRCA2 ASO + cisplatine. Figuur aangepast van gepubliceerde werk met toestemming 22. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

Figuur 2
Figuur 2. opsommen van uitgezaaide fretie met een kippenembryo CAM model. A549-cellen die met BRCA2 ASO werden behandeld met cisplatine 6 uur, en vervolgens geïnjecteerd in de veneuze circulatie van 9 dagen oude kippenembryo (A). Metastatische foci (B) (gevisualiseerd met behulp van een confocale microscoop met 40x objectief) geteld negen dagen na injectie (C). Figuur aangepast van gepubliceerde werk met toestemming 22. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Vanwege de inherente kosten en risico klinische studies is er behoefte aan betere en meer rigoureuze pre-klinische testmethoden om nieuwe anti-kanker behandelingen gedegen evaluatie ontwikkelen. Huidige veelgebruikte technieken al vertonen zwakke punten die hun vermogen om onderscheid te maken tussen potentieel veelbelovende therapeutische doelen / middelen kunnen beperken, en degenen die minder effectief kunnen zijn. Wij bedachten een protocol om nieuwe anti-kanker benaderingen die veel van de tekortkomingen van traditionele methoden adressen evalueren.

Een bijzonder belangrijk kenmerk van de beschreven protocol is de mogelijkheid om cellulaire responsen in real time te meten en om veranderingen in de stofwisseling en hechting minuut tot minuut volgen. Dit maakt de identificatie van piek geneesmiddeleffecten, optimale dosering en een meer gedetailleerd begrip van de interactie tussen de bestanddelen van geneesmiddelen combinatiebehandeling. Tegelijkertijd biedt het inzicht in discrete metabole veranderingen in kankercellen, die informatie die niet door celtelling, apoptose of kleurstof-conversie assays. Een beperking van deze test is het onvermogen om nauwkeurig te bepalen welk type van celdood die optreedt tijdens de behandeling met geneesmiddelen. Veranderingen in de levensvatbaarheid wordt gereflecteerd door veranderingen in naleving van de biosensor chip, maar geen informatie over de wijze van celdood verschaffen. Het is ook mogelijk fluorescentiemicroscopie gebruiken en live cell imaging technieken soortgelijke metabolische gegevens worden bepaald, en kan worden gebruikt naast de in dit protocol 20,21 beschreven experimenten.

Bovendien wordt het gebruik van het kippenembryo CAM model metastatische frequency following onderzoeksbehandeling is een effectieve manier om te bepalen of een nieuwe doelstelling geneesmiddel of combinatie van geneesmiddelen verlaagt de frequentie van kankercellen die extravasatie en / of binnenvallen omliggende weefsel. Dit is bijzonder relevant vraag van een clinisch oogpunt, omdat metastatische ziekte veroorzaakt een hoog percentage mortaliteit bij kankerpatiënten. Een potentiële beperkende factor is dat de werkelijke behandelingsdruk niet voorkomt in de CAM. In plaats daarvan gebeurt ex vivo en het voorbehandelde cellen worden vervolgens geïnjecteerd in de CAM. Daarom is deze test geen informatie over medicijnen opname of distributie in vivo. Bovendien, de intraveneuze injecties CAM technisch uitdagend en vereisen aanzienlijke praktijk / ervaring.

We hebben dit protocol het vermogen van BRCA2-targeting ASO om tumorcellen gevoelig te maken het DNA beschadigende middel cisplatine evalueren. De resultaten van onze experimenten die BRCA2 als een veelbelovend doelwit voor therapeutische aanval en tevens beweegreden voor verdere preklinische ontwikkeling van de BRCA2 ASO als kandidaat medicijn. We zien dit protocol gebruikt om nieuwe targets te identificeren voor combinatiebehandeling met name op het gebied van ontluikende DNEen reparatie remming. Wij vinden dit protocol wordt het beste gebruikt in aanvulling op de meer gebruikelijke technieken kankerbiologie, in een poging om nieuwe anti-kanker benaderingen strengere evalueren.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

De auteurs hebben niets te onthullen.

Acknowledgments

Dit werk werd mogelijk gemaakt door subsidies aan JK uit de Ontario Centres of Excellence en het Fonds Ontario Research.

We willen graag Siddika Pardhan en Dr. Peter Ferguson bedanken voor technische bijstand tijdens het filmen.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
A549 cells ATCC CCL-185 http://www.atcc.org/products/all/CCL-185.aspx
AeraSeal film Carl Roth GmbH
AMEM Wisent Bioproducts 210-011-QK
Antisense oligodeoxynucleotides Avecia BRCA2 target sequence: 5' - UAAGGAACGUCAAGAGAUAC - 3' (bases 7241-7259 )
Axio Zoom V16 Microscope Carl Zeiss http://www.zeiss.ca/microscopy/en_ca/products/stereo-zoom-microscopes/axio-zoom-v16.html
Bionas Biosensor Chips Bionas GmbH and Micronas GmbH BIS8001D
Bionas Discovery 2500 System  Bionas GmbH http://www.bionas-discovery.com/prodservices/instruments/system2500/
Cisplatin Sigma Aldrich 479306
Fertilized chicken eggs Sourced locally
Fetal bovine serum  Gibco - Life Technologies
Lipofectamine 2000  Invitrogen - Life Technologies  12566014 http://www.lifetechnologies.com/ca/en/home/life-science/protein-expression-and-analysis/transfection-selection/lipofectamine-2000.html
PBS Wisent Bioproducts 311-010-CL
Trypsin (0.25%)/EDTA Wisent Bioproducts 325-043-CL

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bouwman, P., Jonkers, J. The effects of deregulated DNA damage signalling on cancer chemotherapy response and resistance. Nat Rev Cancer. 12, 587-598 (2012).
  2. Bozic, I., et al. Evolutionary dynamics of cancer in response to targeted combination therapy. Elife. 2, e00747 (2013).
  3. Diaz, L. A., et al. The molecular evolution of acquired resistance to targeted EGFR blockade in colorectal cancers. Nature. 486, 537-540 (2012).
  4. Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144, 646-674 (2011).
  5. Rytelewski, M., et al. Inhibition of BRCA2 and Thymidylate Synthase Creates Multidrug Sensitive Tumor Cells via the Induction of Combined 'Complementary Lethality'. Mol Ther Nucleic Acids. 2, e78 (2013).
  6. Lord, C. J., Ashworth, A. The DNA damage response and cancer therapy. Nature. 481, 287-294 (2012).
  7. Helleday, T., Petermann, E., Lundin, C., Hodgson, B., Sharma, R. A. DNA repair pathways as targets for cancer therapy. Nat Rev Cancer. 8, 193-204 (2008).
  8. Shaheen, M., Allen, C., Nickoloff, J. A., Hromas, R. Synthetic lethality: exploiting the addiction of cancer to DNA repair. Blood. 117, 6074-6082 (2011).
  9. Green, S., Benedetti, J., Smith, A., Crowley, J. Clinical trials in oncology. 28, CRC press. (2012).
  10. Begley, C. G., Ellis, L. M. Drug development: Raise standards for preclinical cancer research. Nature. 483, 531-533 (2012).
  11. Galluzzi, L., et al. Molecular definitions of cell death subroutines: recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2012. Cell Death Differ. 19, 531-533 (2012).
  12. Ruggeri, B. A., Camp, F., Miknyoczki, S. Animal models of disease: pre-clinical animal models of cancer and their applications and utility in drug discovery. Biochem Pharmacol. 87, 150-161 (2014).
  13. Kwon, M. C., Berns, A. Mouse models for lung cancer. Mol Oncol. 7, 165-177 (2013).
  14. Young, M., Ordonez, L., Clarke, A. R. What are the best routes to effectively model human colorectal cancer. Mol Oncol. 7, 178-189 (2013).
  15. Sharma, S. V., Haber, D. A., Settleman, J. Cell line-based platforms to evaluate the therapeutic efficacy of candidate anticancer agents. Nat Rev Cancer. 10, 241-253 (2010).
  16. Garnett, M. J., et al. Systematic identification of genomic markers of drug sensitivity in cancer cells. Nature. 483, 570-575 (2012).
  17. Alborzinia, H., et al. Real-time monitoring of cisplatin-induced cell death. PLoS One. 6, e19714 (2011).
  18. Cvetkovic, D., et al. KISS1R induces invasiveness of estrogen receptor-negative human mammary epithelial and breast cancer cells. Endocrinology. 154, 1999-2014 (2013).
  19. Leong, H. S., Chambers, A. F., Lewis, J. D. Assessing cancer cell migration and metastatic growth in vivo in the chick embryo using fluorescence intravital imaging. Methods Mol Biol. 872, 1-14 (2012).
  20. Hung, Y. P., Albeck, J. G., Tantama, M., Yellen, G. Imaging cytosolic NADH-NAD(+) redox state with a genetically encoded fluorescent biosensor. Cell Metab. 14, 545-554 (2011).
  21. Tantama, M., Hung, Y. P., Yellen, G. Imaging intracellular pH in live cells with a genetically encoded red fluorescent protein sensor. J Am Chem Soc. 133, 10034-10037 (2011).
  22. Rytelewski, M., et al. BRCA2 inhibition enhances cisplatin-mediated alterations in tumor cell proliferation, metabolism, and metastasis. Mol. Onc. 8 (8), 1429-1440 (2014).

Tags

Geneeskunde kippenembryo chorio- allantoïsche membraan model real-time controle van de stofwisseling anti-kanker medicijn testen pre-klinische ontwikkeling DNA-reparatie
Het evalueren van de effectiviteit van Cancer Drug Overgevoeligheid<em&gt; In Vitro</em&gt; En<em&gt; In Vivo</em
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Rytelewski, M., Buensuceso, A.,More

Rytelewski, M., Buensuceso, A., Leong, H. S., Deroo, B. J., Chambers, A. F., Koropatnick, J. Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo. J. Vis. Exp. (96), e52388, doi:10.3791/52388 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter