Protocol
모든 동물은 보관과 전국 및 관리 및 실험 동물의 사용을위한 제도적 지침에 따라 마음에 든다고했다. 이 프로토콜에 대한 윤리 승인은 브리티시 컬럼비아의 동물 관리위원회의 대학에 의해 수여되었다. 300 사이 계량 남성, 흰쥐 - 450 g을이 프로토콜에 사용 하였다.
1. 기부자 운영
- 3 방향 스톱 콕 장거리 정맥 내 (IV) 카테터 튜브에 연결된 원통형 플라스크에 심정지 (RT)의 약 100 mL의 유무. 중력에 의해 심정지 전달을 가능하게 약 80cm 수술 표면 위의 플라스크를 상승 스탠드를 사용합니다.
- 적절하게 구조를 시각화하기 위해, 수술 돋보기 한 쌍 또는 해부 현미경 중 하나를 사용하십시오.
참고 : 우리는 현재 3.4 쌍안경 운영 현미경을 사용 - 21.3X 배율. - 마취 실에서 기증자를 놓고 4 마취 유도 - 5 %의 이소 플루 란을. 운영 플랫폼에 쥐를 전송하고 1 코 콘에 의해 마취 유지 - 2 % 이소 플루 란을. 건조를 방지하기 위해 동물의 눈에 수의사 연고를 적용합니다. 25 G 바늘과 미다 졸람 (2 ㎎ / ㎏) 내 복강을 관리합니다.
- 수술 가위를 사용하여, 하악에 조류 늑골의 검상 돌기에서 기증자를 면도. (이후 IV 액세스) 왼쪽 사타구니의 작은 영역을 면도. 수술 표면에 제모 제를 적용, 약 5 분 정도 기다린 거즈 조각으로 머리를 제거합니다.
- 포비돈 - 요오드 또는 chlorexidine 기반 솔루션과 수술 사이트를 (우리는 단지 클로르헥시딘 사용) 준비. 0.5 % 리도카인 피하 - 0.1와 절개 사이트를 침투.
- 마취 깊이와 생체 신호의 모니터링을위한 무료 오른쪽 뒷다리를 떠나, 접착 테이프와 운영 플랫폼에 앞발과 왼쪽 뒷다리를 고정합니다.
- 페달 핀치에 의해 적절한 마취 깊이를 확인한 후 사용 왼쪽 사타구니 주름에 절개를22 블레이드 메스. 무딘 절개하여 좌측 대퇴 정맥을 노출하고 다음과 같이 IV 액세스를 얻을 :
- 부드럽게 대퇴 정맥을 덮는 조직을 철회하고, 24 G 4과 정맥을 cannulate. 식염수 채워진 IV 튜브의 짧은 길이로 IV를 연결하고 접착 테이프로 장소에 튜브를 고정합니다.
참고 : 쥐에 대퇴 정맥 삽관에 대한 절차는 제스 퍼슨 및 동료 (14)에 의해 다른 곳에서 설명되어 있습니다. - IV의 정확한 위치를 확인하기 위해 혈액을 대기음 부드럽게 IV 튜브에 식염수로 채워진 10 ML의 주사기를 연결합니다.
- IV 튜브를 통해 미분 획 헤파린 500 IU, 이후 3 튜브를 세척 - - (300)를 주입 식염수 5 ㎖.
- 부드럽게 대퇴 정맥을 덮는 조직을 철회하고, 24 G 4과 정맥을 cannulate. 식염수 채워진 IV 튜브의 짧은 길이로 IV를 연결하고 접착 테이프로 장소에 튜브를 고정합니다.
- 다음 다음, 도너를 tracheotomize :
- 22 블레이드 메스를 사용하여 경정맥 노치과 하악골 사이의 부드러운 조직에서 중간 선 절개를합니다. 멧젠를 사용하여 중간 선에서 갑상선의 캡슐을 침투무딘 절개를 사용 바움 가위, 별도의 로브.
- 무딘 절개를 사용하여 기관의 전방 표면을 노출 정중선에 목의 근육 스트랩을 분리한다.
- 퉁명스럽게 기관 주위에 원주면을 해부 곡선 집게를 사용합니다. 4-0 실크 넥타이 기관을 둘러싸.
- 홍채 가위를 사용하여, 갑상선 연골에 약 5mm 열등, 전방 기관에 횡 절개를합니다. 조심스럽게 기관 캐뉼라 (14 G IV)를 소개하고 4-0 실크 넥타이를 사용하여 제자리에 고정합니다.
- 인공 호흡기에 기관 정맥을 연결합니다. 인공 호흡기 회로를 통해 산소와 이소 플루 란의 흐름을 리디렉션 및 속도와 무게 (13)에 의해 예측 호흡량에서 기증자를 환기 시키십시오.
- xipisternum 아래에 경정맥 노치의 절개를 연장 (22 블레이드 메스를 사용하여) 가슴의 중간 선에 절개를합니다.
- 중간 선에 머물고, 뼈 커터를 사용하여 중간 흉골 절개를 수행합니다. 자기 유지 권취으로 흉골의 가장자리 후퇴. 심낭 및 흉막 충치를 입력합니다.
- 흉선을 수행합니다. 먼저 퉁명스럽게 중간 선에서 흉선을 분할하고 무딘과 날카로운 해부의 조합을 사용하여 주변의 구조에서 분리하는 가장 쉬운 방법입니다.
참고 : 흉선 멀리 우수한 흉골 가장자리에서 해부시 내흉 동맥의 기원은 부상의 원인이 될 수 있습니다. 출혈을 방지하기 위해, 지혈 클립이 지점에서 흉선을 분리하기 전에 적용될 수있다. - Metzenbaum 가위를 사용 및 / 또는 날카로운 로어, 하대 정맥 (IVC)에서 멀리 지방 근교 대정맥 해부. IVC는 하방 다이어프램에, 우량 CAVO - 심방 접합에서 지방과 결합 조직의 상대적 없는지 확인합니다.
- 날카로운 로어, 원주없는 상대 정맥 (SVC)를 사용하고 4-0 실크 넥타이를 둘러싸.
- 다음에, 해부주변 구조에서 무료로 대정맥을 떠났고, 근위 및 원위 4-0 실크 넥타이와 그것을 결찰. 왼쪽 쇄골 하 동맥을 노출 맥의 중간 부분을 절제.
- 원주 무료 날카로운 로어를 사용하여 대동맥 궁 혈관. 무명 동맥 근위부와 원위부 수술 클립을 적용하고, 클립 사이를 나눕니다. 왼쪽 경동맥과 좌측 쇄골 하 동맥 않은 클립을 남겨주세요.
- 다음, 24 G IV 카테터 SVC를 cannulate. 이전에 배치 4-0 실크 넥타이와 카테터를 고정합니다.
- 편법,하지만 부드러운 이식 수확을 준비합니다.
- 날카로운 가위를 사용하여, 횡격막 표면에 IVC 그냥 우수한 나눕니다. 근처의기도 구조가 손상되지 않도록 보장의 삽관 사이트에 SVC 우수한 나눈다.
- 인공 호흡기의 전원을 끄고 기관 정맥을 분리합니다. 근위 기관을 가로로 쪼개다.
- 집게로 횡단 기관을 잡고 마음을 제거폐 KO-블록. 심장 - 폐 이식이 제거 될 때이 날카로운 해부와 부드러운 견인을 필요로 할 것이다. 기본 식도에서 기관을 분리합니다. 그것의 긴 부분은 수확 후 그대로 유지되도록, 하행 대동맥 부상을 피한다.
심장 - 폐 이식 2. 준비
참고 : 프로 시저의이 부분을 완료하는 동안, 조수는받는 사람 쥐를 마취 이식 주입을 준비해야한다.
- 아래로 향하게 마음의 전방 표면과 수술 거즈에 심장 - 폐 이식을 놓습니다. 날카로운 해부를 사용하여 후방기도에 손상을 방지 남아있는 식도를 제거합니다.
- 하행 흉부 대동맥을 찾아 16 G의 무딘 팁 캐뉼라를 삽입합니다. 4-0 실크 넥타이와 장소에 캐 뉼러를 고정합니다.
- 대동맥 궁 혈관을 찾아 왼쪽 쇄골 하 동맥에 외과 용 클립을 적용합니다. 취소 잘린 왼쪽 경동맥을 남겨 서브에 대한필연 드 - 방송.
- 16 G 대동맥 캐뉼라로 심정지 튜브를 접속함으로써 심정지의 제 투여를 관리. 경동맥은 일시적으로 심정지의 적절한 공급을 보장하기 위해 집게로 폐색해야합니다.
주 : 부착 대동맥 캐뉼라를 갖는 이점에 원하는대로 심정지 연속적 및 / 또는 간헐적으로 투여 될 수 있다는 점이다. 45 초 - 30 5 ml의 환약 15 분 - 간헐적 투여를 들어, 우리는 일반적으로 심정지마다 10을 제공합니다. - Metzenbaum 가위를 사용 및 / 또는 날카로운 로어, 멀리 대동맥에서 요정 대동맥의 지방을 해부하다. 대동맥은 삽관 사이트에 왼쪽 쇄골 하 동맥 (말초 아치)에서 지방과 결합 조직의 상대적으로 자유로운 지 확인합니다.
- 다음, 날카로운 로어를 사용하여 왼쪽 mainstem 기관지를 노출하고 4-0 실크 넥타이와 근위을 결찰. 홍채 가위를 사용하여 합자 왼쪽 기관지의 말단을 가로로 쪼개다. 왼쪽 폐를 결찰에 의해 왼쪽 폐 절제술을 수행4-0 실크 넥타이와 동맥과 정맥. 합자에 말단 횡단면과 왼쪽 폐를 제거합니다.
- 상기와 같이, 오른쪽 상단 및 중간 엽을 제외하고 다른 모든 폐 엽을 제거합니다. 명중 폐엽을 수행하는 과정에서 부상 IVC 피한다.
- 대동맥 정맥에 심정지 튜브를 연결하고받는 사람이 준비되는 동안 지속적으로 심정지를 관리 할 수 있습니다. 멸균 용기 (예를 들어, 비커)에 심장 - 폐 이식을 놓습니다.
3.받는 사람 운영
- 상기 도너 조작에 따라 수신자 마취. 건조에서 동물의 눈을 보호하기 위해 수의사 연고를 사용합니다. 페달 핀치에 의해 자주 마취를 확인합니다.
- 활력 징후 및 마취 깊이를 모니터 무료 오른쪽 앞다리를 떠나, 기증자 작업에 따라이 시간을 동물을 배치합니다.
- 조류 늑골의 검상 돌기에서 음경에 복부를 면도. (이후 IV 액세스) 왼쪽 사타구니의 작은 영역을 면도. 적용수술 표면에 에이전트를 제모, 약 5 분 정도 기다린 거즈 조각으로 머리를 제거합니다.
- 포비돈 - 요오드 또는 chlorexidine 기반 솔루션과 수술 사이트를 준비. 0.5 % 리도카인 피하 - 0.1와 절개 사이트를 침투.
- Tracheotomize 위의 지시에 따라 수신자를 환기 시키십시오. 또한, 코 콘 마취하에받는 사람을 유지한다.
- 전술 한 바와 같이 대퇴 정맥에 카테터를 소개한다. IV 튜브를 통해 미분 획 헤파린 500 IU, 이후 3 튜브를 세척 - - (300)를 주입 식염수 5 ㎖.
- 음경에 조류 늑골의 검상 돌기에서 22 블레이드 메스로 중간 선 복부 절개를하여 개복술을 수행합니다. 자체 유지 견인기를 사용하여 복벽을 후퇴. 다음으로, 우량와 쥐의 왼쪽에 창자를 철회. 따뜻한 식염수를 적신 거즈를 감싸.
- 크게 상부 재를 통해 해부하여 IVC 및 복부 대동맥을 노출TRO-복막 지방.
- 곡선 용기 클램프가 가능하고 준비합니다.
- 원주 근위 및 원위 하대 정맥과 대동맥를 해제하고 4-0 실크 넥타이로 둘러싸. 이 사이트 사이의 공간의 3 CM - 약 2가 있어야합니다.
- 조심스럽게 하대 정맥과 대동맥 모두의 충분한 부분이 클램프의 턱 위에 노출되는 것을 보장, 곡선 용기 클램프를 적용합니다.
- 식염수로 채워진 1 ML의 주사기에 연결된 25 G 바늘 IVC의 앞쪽 벽에 절개를합니다. 기증자 IVC 구멍의 길이에 맞게 포츠 가위로 절개를 확장 할 수 있습니다.
- 컨테이너에서 심장 - 폐 이식을 제거하고는 심정지에서 분리합니다. 정맥 문합을 수행 할 최적의 위치에받는 사람의 복부에 이식을 놓습니다.
참고 : 심장 - 폐 이식이 궁극적으로 복부의 방향으로 정점을 가리키는, 약간 비스듬하게 지향한다 낮은 사분면을 떠났습니다. - 발 뒤꿈치를 고정발가락은 9-0 나일론 봉합사와 봉합의 끝납니다. 봉합의 긴 팔에 부착 된 바늘, 이후에 연결되는 봉합사의 짧은 끝을 떠나, 각 끝 부분에 안전한 매듭을 묶어. 심정지의 복용량을 관리합니다.
- 패션을 실행에, 반대 짧은 봉합 팔에 봉합 라인과 넥타이의 완전한 절반. 심정지의 복용량을 관리합니다.
- 봉합 라인의 나머지 절반을 완료하고 넥타이. 정맥 문합이 완료됩니다. 심정지의 복용량을 관리합니다
- 동양은 복부의의를 향한 마음의 정점을 가리키는 심장 - 폐 이식은 하복부를 떠났다. 정맥 문합이 꼬거나 비틀어되지 않았는지 확인합니다.
- 긴장 - 무료 및 취소 꼬여 구성에서 IVC와 대동맥 문합을 모두 유지,받는 사람 대동맥에 도달해야합니다 기증자의 대동맥의 길이를 평가합니다.
- 홍채 가위 (왼쪽 쇄골 하 동맥 원위부) 하행 대동맥을 나눈다.
- incisio 확인N 식염수로 채워진 1 ML의 주사기에 연결된 25 G 바늘받는 사람 대동맥의 앞쪽 벽에. 도너 대동맥 오리피스의 길이와 일치하도록 포츠 가위로 절개 확장.
- 9-0 나일론 봉합사를 이용하여 대동맥받는 사람에게 기증자의 대동맥의 발가락 (우수한 측면을) 앵커. 이어서, 대동맥의 중간 형태에 바늘을 통과 패션에서 실행 문합의 절반을 완성.
- 대동맥 문합 뒤꿈치에서 봉합 라인 (스티치의 방향 전환)의 방향을 반대로하고, 패션에서 실행 문합의 좌우 절반을 완료.
- 천천히 SVC의 IV 카테터를 제거하고 수술 클립 SVC를 결찰.
- 드 공기 않은 잘린 왼쪽 경동맥의 위치에 의해 대동맥. 공기가 자유롭게 대피 할 수 있도록 수직 위치에서 열기 동맥을 잡으십시오.
- 간단히 D 곡선 용기 클램프의 턱을 열고 (경동맥은 피 할 수 있도록전자 공기) 2 - 3 초. 선박 클램프를 다시 적용 할 수 있습니다.
- 경동맥을 외과 용 클립을 적용합니다. 곡선 용기 클램프를 제거합니다.
- 봉합 라인에서 출혈이 있는지 확인합니다. 존재하는 경우, 9-0 나일론 봉합사 (출혈의 정도에 따라 다름)의 길이와 수술 거즈 또는 수리와 부드러운 압축을 적용합니다.
- 기증자 심장 분 이내에 치고 다시 시작해야합니다.
- 받는 사람의 생체 신호, 마취의 깊이에주의하고 필요에 따라 볼륨 소생술을 관리 할 수 있습니다.
- 중, 실험 엔드 포인트에 따라 동물의 복부를 닫고 마취에서 회복하자, 또는 심장 혈관 평가를 위해 동물을 준비합니다.
참고 : 이식 평가의 예는 부하에 따라 부하 독립적 인 혈역학의 생체 측정, 시험 관내 랑겐 돌프 함수의 측정 및 작업 심장 모드, (생존 수술) 심 초음파 나 MRI 조사에 포함. - 에서급성 터미널 실험의 끝, 동물 방혈에 의해 안락사된다.
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Representative Results
위에서 설명한 HAHLT 기술은 고도의 기술과 세부 사항입니다. 표에 세심한주의를 필요로 한 하이라이트 실패 절차 대 성공과 관련된 중요한 요소의 일부, 그리고 기술적 인 문제를 해결하기위한 가이드로 사용할 수 있습니다.
받는 사람 대동맥이 클램핑 해제 한 후, 이식 관상 동맥은 산소가 혈액으로 채우기 위해 볼 수 있어야합니다. 따라서, 심근는 핑크와 잘 관류가 될 것이다. 기술적으로 성공적인 실험에서 심장 이식 재관류 직후 이길 시작합니다. 기능 회복을 허용하기 위해 30 분 - 그래프트는 적어도 20의 기간 (IVC 수신자는 클램프로) 무부하 상태로 남아있을 것이다. 그 후, 그래프트의 하중 조건은 실험 목적에 맞게 변경 될 수있다. 원하는 그래프트 기능 (및 성공적인 결과)의 정량적 인 측정이 사용될 수있다. 프로토콜에서 언급 한 바와 같이, 생체 내 시험 관내 기능 연구뿐만 아니라, 심 초음파 및 MRI 조사한다. 이러한 정보를 제공하는 제 1 및도 2는 시험 관내 초기의 예이며,이 방법으로 날카롭게 유도 될 수 압력 볼륨 데이터 클루 젼을 프리로드 할 수있다. 이 연구에서 혈역학 데이터는 심 박출량, 심 박출량, 챔버 볼륨, 심장 박동, 구혈률, 수축 기말 elastance와 연구자를 제공하고, recruitable 스트로크 작업을 미리로드 할 수 있습니다. 필요에 따라 여러 다른 매개 변수, 정량화 할 수있다.
그림 1. 기준 압력 볼륨 데이터. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 1은 기본 프레스를 보여줍니다심장 기능의 체외 작업 심장 평가에서 URE-볼륨 데이터. EDV, 이완 기말 용적 EDP, 이완 기말 압력; ESV, 수축 기말 용적 ESP, 최종 수축기 혈압.
그림 2. 예압 - 폐쇄 압력 볼륨 데이터. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
심장 기능의 체외 작업 심장 평가에서 그림 2 미리로드 - 폐쇄 압력 볼륨 데이터. EDPVR, 이완 기말 압력 볼륨 관계; ESPVR, 최종 수축기 혈압 볼륨 관계.
| 성공적인 절차 | 실패 절차 | |
| 기증자 | ||
| 기부자 안정성 | 안정된 | 불안정한 |
| 준비 해부 | 효율적인 제한 | 비효율적, 과도한 |
| 혈액 손실 | 최소의 | 과도한 |
| 시간 이식편하기 | 최소화 | 장시간 |
| 심정지 체포 | 빠른 | 지연 |
| 이식 | ||
| 총 허혈 시간 | <90 분 | > 90 분 |
| 심정지 체포 | 주기적으로 유지 | 불완전한 |
| 받는 사람 | ||
| 받는 사람 안정성 | 안정된 | 불안정한 |
| 준비 해부 | 능률적 인 | 비효율적 |
| 클램프 타임즈 | <45 분 | > 45 분 |
| 문합 시간 | <30 분 | > 30 분 |
| 혈액 손실 | 최소의 | 과도한 |
| 이식 드 - 방송 | 알맞은 | 부적당 한 |
| 볼륨 소생술 | 알맞은 | 부적당 한 |
| 성공적인 재관류 | 예 | 아니 |
| 안정 심장 기능의 반환 | 예 | 아니 |
표 실패 HAHLT 절차 대 성공 1. 특징.
표 1 </ strong>을 성공과 실패 기증자, 이식, 사람과받는 사람의 작업과 관련된 요소의 예제를 제공합니다.
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Discussion
여기에 설명 된 기술과 성공은 여러 가지 요인에 입각한다. 그 중 주요 균일 이식 냉각 완전한 심정지 체포, 총 허혈 시간을 최소화을 보장, 안전하고 최소한의 혈액 손실과 관련된 세심한 수술 기법을 채택, 모두 기증자와받는 사람 동물의 안정성을 보장하고, 적절하게 탈 방송 이식을 할 것이다. 위의 인정으로, 기술의 기술적 인 복잡성은 최고 제한 사항입니다.
우리는 여러 가지면에서 이전 HAHLT 기술을 전진했다. 도너와 수신자 동작에서 설명한 변형을 제어하고 효율적인 방식으로 필요한 수술 단계들을 수행하기위한 수단을 제공한다. 설명한 심근 보호 프로토콜 허혈 기간 동안 손상을 최소화하는 최적의 방법이다. 최종 결과는 형상이 최적화되어있는 HAHLT 그래프트이며, 부상이 최소화되었고, 극한 그래프트 기능 사전왔다가능한 최대한으로 봉사했다.
위에서 설명한 기술은 역동적이고 잠재적으로 거의 생리적 심실 로딩 조건 HAHLT 이식을 산출한다. 기술이 숙달되면, 이식 기능의 생체 특성에 완전 이식 구성 허용합니다. 언급 한 바와 같이, 프리로드 및 후 부하 조건은 급성 또는 만성적으로 변경 될 수 있고, 도너는 급성 폐 재 환기 될 수있다. 그래프트 구조 및 기능을 연구 할 수있는 능력을 유지하면서 조사자 용이하고 널리 많은 질환의 연구에이 모델을 적용 할 수있다.
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Disclosures
저자가 공개하는 게 없다.
Acknowledgments
마크 제이 컨즈는 (의사 및 캐나다의 왕립 외과 대학을 통해 수여) UBC 임상 탐정 프로그램 및 UBC 4YF 박사 원정대의 지원을받습니다.
존 H. 보이드는 건강 연구 학술위한 국가 Sanitorium 협회와 마이클 스미스 재단이다. CIHR을 통해 자금. 저자는 설치 및 관류 장비의 유지 보수와 그들의 도움 박사 엠 알라 리처드 Wamboldt을 감사드립니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Celsior Cardioplegic Soution | Genzyme | The solution is kept on ice throughout the procedure. We prepare our own solution, with slight modifications. | |
| Rodent Ventilator | Harvard Apparatus | Model 683 | |
| Vital Sign Monitor | Nonin | Model 9847V | Displays SpO2 and heart rate. |
| IV Cannulae | Jelco | 3063 | 24 - 26 G x 3/4" cannulae. |
| IV Tubing | CareFusion | MP9259-C | Short-length connector tubing (18 cm). |
| Surgical Clips | Teleflex Medical | 001204 | Horizon titanium ligating clips. |
| Sutures | Ethicon, Sharpoint | LA54G, AK-0107 | 3-0 silk reel, and 9-0 prolene suture (single-armed, DR5 needle). |
| Surgical Instruments | Not Applicable | Not Applicable | The instruments used are generic, and can be purchased from any surgical supply company. |
References
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