Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

تسجيل الخفيفة أثار-الردود بعد المشبكي في الخلايا العصبية في الظلام تكييفها، الاستعدادات ماوس الشبكية شريحة عن طريق تقنيات المشبك التصحيح

Published: February 11, 2015 doi: 10.3791/52422

Abstract

شبكية العين هي بوابة الدخول إلى النظام البصري. لفهم آليات معالجة الإشارات المرئية، ونحن التحقيق في وظائف الشبكة العصبية في شبكية العين. تتكون الخلايا العصبية للشبكية في الشبكة العديد من الأنواع الفرعية. وقد تم تحديد أكثر من 10 أنواع فرعية من الخلايا القطبين، خلايا العقدة، والخلايا عديم الاستطالات التي كتبها الدراسات المورفولوجية. ويعتقد فرعية متعددة من الخلايا العصبية للشبكية لترميز سمات مميزة من الإشارات البصرية، مثل الحركة واللون، وتشكل المسارات العصبية متعددة. ومع ذلك، لا يفهم تماما الأدوار الوظيفية لكل الخلايا العصبية في معالجة الإشارات البصرية. طريقة المشبك التصحيح هو مفيد لمعالجة هذه المسألة الأساسية. هنا، وبروتوكول لتسجيل ردود متشابك أثار الخفيفة في الماوس الخلايا العصبية للشبكية باستخدام التصحيح التسجيلات المشبك في ظروف الظلام تكييفها يتم توفيرها. عيون الماوس تتكيف الداكنة-O / N، ويتم تشريح الاستعدادات شريحة الشبكية في غرفة مظلمة باستخدام الإضاءة بالأشعة تحت الحمراء والمشاهدين. ضوء الأشعة تحت الحمراء لاتنشيط المستقبلات الضوئية الماوس وبالتالي يحافظ على الاستجابة ضوءها. يستخدم التصحيح المشبك لتسجيل استجابات أثار ضوئية في الخلايا العصبية للشبكية. يتم حقن صبغة الفلورسنت خلال تسجيلات لوصف أنواع فرعية المورفولوجية الخلايا العصبية. هذا الإجراء تمكننا من تحديد الوظائف الفسيولوجية من كل عصبون في شبكية العين الماوس.

Protocol

بيان الأخلاق: إجراءات التي تجرى على الحيوانات وتمت الموافقة من قبل لجنة المؤسسي رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في جامعة واين ستيت.

1. إعداد الحل التجريبي

  1. إعداد الحل تشريح 1 يوم ل1 قبل أسبوع من التجربة الفعلية. استخدام حل العازلة HEPES للتشريح في شبكية العين بسبب قدرته التخزين المؤقت قوية في درجات حرارة منخفضة 16. تخلط جميع المواد الكيميائية على النحو التالي (مم): 115 كلوريد الصوديوم، و 2.5 بوكل، 2.5 CaCl 1.0 MgCl 10 HEPES، 28 الجلوكوز. ضبط درجة الحموضة إلى 7.4 مع هيدروكسيد الصوديوم. إبقاء الحل في الثلاجة تصل إلى 1 في الاسبوع.
  2. الحل هو تسجيل أميس "المتوسطة، وهو السائل الشوكي الدماغي الاصطناعي (ACSF) مصممة لالاستعدادات الشبكية 17. قبل يوم من التجربة، تزن من مسحوق أميس "(4.4 ز ل 500 مل من محلول) في أنبوب. أيضا، تزن من NaHCO 3 (0.95 ز ل 500 مل من محلول) وتخلط مع Aمسحوق زارة التربية والعلم ".
  3. إعداد الحل ماصة داخل الخلايا للتسجيلات المشبك التصحيح من قبل يوم من التجربة. تخلط جميع المواد الكيميائية على النحو التالي (مم): 111 K-غلوكونات، 1.0 CaCl 10 HEPES، 1.1 EGTA، 10 كلوريد الصوديوم، 1.0 MgCl 5 ATP-المغنيسيوم، و 1.0 GTP-نا. ضبط درجة الحموضة إلى 7.2 مع KOH. تصفية الحل ماصة مع فلتر حقنة التقليدي. جعل ~ 500 مكل وتخزينها في الثلاجة أو الفريزر العميق.

2. إعداد لليوم للتجربة

  1. في الليلة التي سبقت التجربة، ضع الماوس في قفص (C57BL / 6J أو خلفية مماثلة، من 4 - 8 أسابيع من العمر، من الذكور) في مكان مظلم لO / N التكيف مع الظلام.
  2. استعدادا لتشريح:
    1. ملء تشريح الحل (100-200 مل) في كوب من الزجاج، وضعه على الجليد، وفقاعة مع الأكسجين لمدة 10 دقيقة على الأقل.
    2. بدء الأوكسجين من مربع مظلم لتخزين إعداد الشبكية.
    3. إعداد coverslips من البلاستيك مع القضبان الشحوم لإعادةالاستعدادات شريحة tinal ووضع كل منهم في طبق من البلاستيك 35 ملم.
    4. إرفاق شفرة حلاقة جديدة إلى المروحية (تقطيع الأنسجة).
    5. قطع غشاء مرشح إلى نصفين. هذا هو لتشريح شبكية العين.
    6. محاذاة أدوات تشريح والماصات نقل قرب المجهر تشريح. يجب تنظيم منطقة العمل جيدا بحيث يكون لكل أداة يمكن الوصول إليها بسهولة في الظلام.
  3. استعدادا لتسجيلات المشبك التصحيح:
    1. حل مسحوق أميس "وNaHCO 3 في الماء المقطر (أميس 4.4 غرام وNaHCO 3 0.95g / 500 مل DDH 2 O). متوسطة فقاعة أميس "مع الأكسجين المختلط (95٪ O 2 و 5٪ CO 2) لمدة 30 دقيقة على الأقل بينما التدفئة إلى مستوى درجة حرارة تسجيل (~ 35 ° C). ضبط درجة الحموضة إلى 7.4 مع NaHCO 3 في حين لا يزال محتدما.
    2. ذوبان الجليد الحل ماصة الداخلي أثناء تشريح. بعد إذابة ذلك، إضافة 0.01٪ sulforhodamine B لتلطيخ الخلايا.

3. الشبكية تشريح

  1. في غرفة مظلمة، الموت ببطء الماوس باستخدام ثاني أكسيد الكربون واسترواح الصدر الثنائي. بعد 2-3 دقائق من استخدام ثاني أكسيد الكربون، فإن الماوس يفقد وعيه.
  2. عندما الماوس لم يعد يستجيب لقرصة الذيل، واستأصل بسرعة عيون ووضعها في محلول تشريح الباردة في طبق من البلاستيك. أداء استرواح الصدر الثنائي لضمان موت الحيوان. تخزين بسرعة العين في طبق في مربع مظلم. استخدام المشاهد الأشعة تحت الحمراء لاجراء العملية في الظلام.
    ملاحظة: بدلا من ذلك، الأيزوفلورين، قطع الرأس، أو خلع عنق الرحم يمكن أن تستخدم للقتل الرحيم. طريقة القتل الرحيم ينبغي أن يتبع المبادئ التوجيهية للمعهد الوطني للصحة (NIH) و / أو لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي.
  3. في غرفة مظلمة، وضبط مجهر تشريح وإضاءة الأشعة تحت الحمراء. تحت المجهر، ونقل العين من طبق لها في طبق من البلاستيك 10 سم ثإيث الحل تشريح تبرد. باستمرار الأكسجين فقاعة من خلال أنابيب توضع على الجزء السفلي من صحن بلاستيكي. ضبط حجم التدفق حتى لا يكون منخفضا جدا، ولكن تأكد من أنها ليست عالية بما يكفي لتعكير صفو تشريح.
  4. القرنية والعدسة إزالة:
    1. إجراء شق في الجزء العلوي من القرنية بسكين الجراحية الصغرى. عقد العصب البصري في الطرف الآخر من مقلة العين يمنع العين من التحرك. تمديد خفض باستخدام زوج من مقص جراحي. قطع القرنية مع بعض الصلبة من حوله.
    2. الاستيلاء على العدسة مع ملقط غرامة وسحب ببطء عدسة بها. إذا كان الجسم الزجاجي لزجة جدا لإزالة العدسة، وقطع الجسم الزجاجي مع زوج من مقص.
    3. مرة واحدة يتم العين كوب، صب بلطف البارد، حل تشريح المؤكسج إلى فنجان العين مع ماصة نقل صغيرة.
      ملاحظة: إن مقلة العين تفرغ بسرعة بعد يتم إجراء شق في القرنية. فمن المهم للحفاظ على شكل العين كما التشويه العين خلال هذه المواليةسوف التعريف الشخصي إجراءات تلف شبكية العين ويسبب انفصال الشبكية.
  5. التعرف على الجانبين الظهرية والبطنية من شبكية العين:
    ملاحظة: بسبب التوزيع غير المتكافئ للالأخضر والأشعة فوق البنفسجية (UV) والأقماع 18، وتحديد منطقة الشبكية محددة أمر مهم للتسجيلات استجابة الخفيفة.
    1. تحديد خط الذهاب عبر كوب العين الشبكية يمر بالقرب من رأس العصب البصري. هذا الخط يمر معظمها عبر الجانب البطني العصب البصري. الجانب بما في ذلك العصب البصري هو الجانب الظهري، في حين أن الآخر هو بطني 19. رؤية هذا المعلم بوضوح تحت المشاهدين الأشعة تحت الحمراء.
    2. اعتمادا على الغرض من التجربة، اجراء خفض على الجانب لا داعي لها. هذا وسوف يكون من المفيد بعد عزل شبكية العين من الكأس العين.
  6. إزالة زجاجي:
    1. اختياريا، واحتضان العين كوب مع هيالورونيداز (0.5 ملغ / مل) لمدة 15 دقيقة.
    2. إزالة الجسم الزجاجي مع ملقط خارج غرامة. الجسم الزجاجي هو أساساتعلق على الجزء السفلي والحافة الخارجية للعين كوب. بلطف إزالته دون لمس أو بدس شبكية العين. كما يمكن أن تعلق زجاجي محكم لفنجان العين، وإزالة بلطف لتجنب انفصال الشبكية من العين الكأس. مواصلة سحب حتى يشعر أي توتر.
      ملاحظة: هذه الخطوة مهمة بشكل خاص لتشريح شبكية العين الماوس؛ ومع ذلك، فإنه ليست مشكلة لشبكية العين من الأنواع الأخرى مثل الفئران أو السمندل.
  7. عزل شبكية العين من العين الكأس. انتزاع الصلبة وتقشر بلطف شبكية العين باستخدام مساعدات من الملقط.
    ملاحظة: الجامع جبل الاستعدادات الشبكية يمكن أن تكون مصنوعة من شبكية العين معزولة. جعل 3-4 تخفيضات على حواف وتتسطح في شبكية العين، أو قطع الشبكية إلى عدة قطع.
  8. تقليم شبكية العين وتجاهل النصف غير الضروري للشبكية العين (الخطوة 3.5). في نفس طبق من البلاستيك، وقطع في الشبكية المتبقية إلى قطعتين. لكل قطعة من شبكية العين، وقطع الحواف لجعللوح شبكية العين، وتقليم حواف للطي.
  9. نقل لوح شبكية العين على طبق من ذهب الزجاج باستخدام ماصة نقل كبيرة (~ 2 مل). تمتص الحل الزائد مع ماصة صغيرة، استخدام قطعة من ورق الترشيح لشد بلاطة، وبعد ذلك وضعت بسرعة قطعة من الغشاء المرشح على رأس الأنسجة.
    1. باستخدام ماصة نقل صغيرة، ضع قطرة من تشريح حل على غشاء التصفية. الانتظار ~ 15 ثانية حتى ينتشر الحل عبر الغشاء. خلال هذا الوقت، فإن أنسجة الشبكية التمسك غشاء التصفية.
    2. صب حل تشريح أكثر البارد تحت وحول المرشح. سوف الأنسجة الشبكية مع غشاء فلتر تطفو. الاستيلاء على غشاء التصفية مع ملقط ووضعه في غرفة تشريح. صب تشريح حل على الأنسجة، وتخزين إعداد في مربع مظلم.
      ملاحظة: الإجراء الموضح هنا أمر بالغ الأهمية. من المهم أن تنفيذ هذه الخطوات بسرعة لضمان أن العصي أنسجة الشبكية إلى ذاكرة فلتر الغشاء ولا تجف.
  10. باستخدام المروحية، وقطع الأنسجة الشبكية إلى شرائح. حوالي 200 ميكرون سمك هو ممكن للدراسات المشبك التصحيح.
  11. وضع ساترة البلاستيك مع القضبان الشحوم في غرفة تشريح. نقل شريحة الشبكية على رأس القضبان الشحوم على ساترة البلاستيكية. تدوير شريحة 90 درجة بحيث المقطع العرضي مرئيا. اضغط على غشاء فلتر أسفل على ساترة، ثم، وتغطي الجانبين من ورقة الترشيح مع الشحوم.
    1. بعد يجمد شريحة على ساترة البلاستيك، والاستيلاء على ساترة وتحويلها إلى طبق من البلاستيك 35 ملم. صب حل تشريح الباردة على إعداد الشبكية وغمر التحضير. تخزين كل طبق في مربع مظلم، التي ينبغي أن المؤكسج بشكل مستمر.
      ملاحظة: يحتاج هذا الإجراء بأكمله إلى أن يتم بعناية بحيث لا تشوه غشاء التصفية. خلاف ذلك، فإن شريحة الشبكية يفصل بسهولة من غشاء التصفية.

ق ق = "jove_title"> 4. تسجيلات المشبك من تصحيح الشبكية شريحة التحضير

  1. تسجيل إعداد:
    1. رئيس وأنابيب نضح مع أميس "المتوسطة. السماح لجميع فقاعات بالمرور عند ملء الأنبوب.
    2. جعل الماصات تسجيل المشبك التصحيح مع مجتذب. لملء ماصة مع الحل ماصة، وتراجع في المؤخر من ماصة لمدة 1 دقيقة حتى يتم ردم طرف ماصة. التالي، وملء ~ 1/3 من ماصة باستخدام حشو ماصة الدقيقة. تخزين كل ماصة في مربع ماصة رطبة.
    3. تشغيل المعدات اللازمة لتسجيلات المشبك التصحيح. بما في ذلك الكمبيوتر، مكبر للصوت، وكاميرا CCD، والمجهر.
  2. اغلاق ضوء الغرفة. وضع إعداد شريحة الشبكية على غرفة مرحلة المجهر باستخدام المشاهد الأشعة تحت الحمراء. بعد ثبتوا عليه، والبدء نضح المستمر. ضبط درجة الحرارة نضح عند 33 إلى 37 درجة مئوية.
  3. عرض سطح شريحة مع كاميرا CCD. التركيز على موقع الهدف حيث الهدف مأنواع ليرة لبنانية يقيمون. حدد خلية صحية-تبحث عن التصحيح تسجيل المشبك (أي ينبغي أن يكون على نحو سلس المظهر السطحي وشكل خلية جيد).
  4. وضع ماصة تسجيل في حامل ماصة. دفع ماصة لإعداد شريحة. عندما يكون على مقربة من إعداد شريحة (~ 2 مم أعلاه)، والعثور على غيض من ماصة مع المجهر. مرة واحدة طرف ماصة غير مرئية تحت المجهر، نقل معلومات سرية إلى أسفل نحو الخلية المستهدفة.
  5. تعيين مكبر للصوت. ضبط ماصة في 0 بالسيارات / 0 باسكال (التصفير) وبدء النبض الكهربائي المستمر لل~ 5 بالسيارات في ~ 10 هرتز. تحقق المقاومة ماصة. المقاومة المثالية هي ما بين 5 و 10 MΩ لمعظم الخلايا العصبية للشبكية.
  6. بدء تطاير من غيض. استخدام بوق، أو استخدام حقنة، لتطبيق الضغط الايجابي عند الانخفاضات ماصة في حل حمام. تفجير باستمرار من الحل الداخلي حتى غيض هو على سطح الخلية المستهدفة.
    1. عندما يجعل ضغط إيجابي الدمل صغير على السطح الخلية الإلكترونية، ودفع الطرف قليلا ووقف تطاير. تحقق المقاومة ماصة، والتي ينبغي زيادة. إذا كان يتزايد باستمرار، وترك الأمر ورصد المقاومة حتى يصل> 1 GΩ (gigaseal). إذا لا يزيد من مقاومة من تلقاء أنفسهم، وتطبيق بلطف ضغط سلبي حتى يصبح gigaseal.
  7. بعد يتحقق gigaseal، تغيير إمكانية عقد ل-70 بالسيارات. ثم، وتطبيق متقطع الضغط السلبي للتمزق الغشاء داخل طرف ماصة. عندما يتم تكوين خلية كاملة، لا يمكن للمقاومة ماصة ما بين 500 MΩ و1 GΩ، وينظر إلى بالسعة الحالية. أحيانا يمكن ملاحظتها التيارات بعد المشبكي عفوية.
  8. تسجيل العلاقة الرابع من -80 إلى +40 بالسيارات. نشطت أنواع مختلفة من قنوات الجهد بوابات اعتمادا على نوع من الخلايا.
  9. أثار ضوء سجل التيارات متشابك أو الفولتية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

ويرد إعداد شريحة تمثيلية في الشكل 1. إن إعداد شريحة هو في وضع مستقيم، والتي تبين المستقبلات الضوئية إلى خلايا العقدة في سطح مستو، ولا مفرزة من ورقة الترشيح. إذا كان يميل شريحة، سوى جزء من التحضير هو في التركيز، الأمر الذي يجعل من الصعب تحديد خلية المناسبة للقط التصحيح. للتسجيلات، من المهم لاختيار سوما جيدة، والتي عادة لديه سطح لامع، وهو الشكل حتى مستديرة، وليس لويحات المظلمة مرئية. بعد إجراء تكوين خلية كاملة، تعرضت شريحة للضوء الخلفية ومن ثم إلى الضوء خطوة (الشكل 2). وقد أثار امكانات بعد المشبكي مثير للضوء أثار (L-EPSPS) ردا على ضوء خطوة (يظهر توقيت باللون الأصفر). السعة الذروة ووقت تسوس تنوعت تبعا لنوع الخلية ونوع فرعي. خلية العقدة ولدت إمكانات العمل استجابة للمؤثرات مشرق (الشكل 2 D & E). وسل تم الكشف عن نوع لتر والنوع الفرعي من الصرفي التي وصفها sulforhodamine بعد التسجيلات الفسيولوجية (الشكل 2، يمين).

الشكل (1)
الشكل 1. الاستعدادات شريحة الشبكية. (A) شريحة إعداد الشبكية ينظر مع الهدف 10X. كان يعلق على إعداد شريحة الشبكية (أعلى) إلى قطعة من ورق الترشيح (القاع). (ب) تجميع أربع سنوات صورة تظهر شريحة إعداد الشبكية ينظر مع الهدف 60X. ويلاحظ كل طبقة الخلايا بشكل واضح (ONL: الخارجي طبقة النووية، OPL: طبقة ضفيري الخارجي، INL: الطبقة النووية الداخلية، IPL: ضفيري طبقة الداخلية، GCL: طبقة الخلايا العقدية) الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

. في غضون صفحة = "دائما"> الشكل 2
الشكل 2. إمكانات بعد المشبكي مثير الخفيف أثار (L-EPSPS) من الخلايا العصبية للشبكية. خطوة ضوء أثار L-EPSPS (يسار). وكانت شدة الضوء 30 - 60٪ ويبر التباين. كان مستوى الخلفية التكيف ضوء 4 × 10 4 الفوتونات / ميكرون 2 / ثانية. تم حقن Sulforhodamine B خلال المشبك التصحيح تسجيل لتصور الخلايا العصبية المسجلة (يمين). ما زالت ترد ماصة لتسجيل سوما (A) L-EPSPS وsulforhodamine تلطيخ من مخروط خلية القطبين ON. (B) OFF خلية مخروط القطبين. (C) خلية عديم الاستطالات. (D) على الخلايا العقدية. (E) OFF الخلايا العقدية. يشير مقياس شريط 2 أو 5 بالسيارات على النحو المبين. تم تطبيق التحفيز الخفيف ل1 ثانية. الرجاء انقر هنالعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Mice (28-60 days old, male) Jackson laboratory C57BL/6J strain
Ames' medium powder Sigma A1420 excellent
Stereo microscope Nikon SMZ745 excellent
Dissecting tool: forceps Dumont #4, #5, #55 excellent
Dissecting tool: scissors Roboz RS-5605 excellent
Dissecting tool: surgery knife Surgistar 7514 excellent
Razor blade (for chopper) EMS 71970 excellent
Chopper handmade
Infrared viewer Night Owl Optics NOBG1 It shows bright view. Focusing small objects is an issue.
Puller Sutter P-1000 excellent; makes consistent size pipettes.
Dark box Pelican dark box excellent
Patch clamp system Scientifica slice scope 2000 Excellent setup. Most key components are included in one package. Micromanipulators are excellent.
Amplifier Molecular Devices multiclamp 700B Excellent and easy control.
Acquiring software Molecular Devices pClamp software Excellent and easy control.
Light source (LED) Cool LED pE-2 4 channel system Excellent
CCD camera Q-imaging Retiga 2000 Excellent
Faraday cage handmade

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Werblin, F. S., Dowling, J. E. Organization of the retina of the mudpuppy, Necturus maculosus II. Intracellular recording. J Neurophysiol. 32 (3), 339-355 (1969).
  2. Sakmann, B., Neher, E. Patch clamp techniques for studying ionic channels in excitable membranes. Annu Rev Physiol. 46, 455-472 (1984).
  3. Lukasiewicz, P., Werblin, F. A slowly inactivating potassium current truncates spike activity in ganglion cells of the tiger salamander retina. J Neurosci. 8 (12), 4470-4481 (1988).
  4. Kaneko, A., Tachibana, M. Effects of L-glutamate on the anomalous rectifier potassium current in horizontal cells of Carassius auratus retina. J Physiol. 358, 169-182 (1985).
  5. Kamermans, M., Werblin, F. GABA-mediated positive autofeedback loop controls horizontal cell kinetics in tiger salamander retina. J Neurosci. 12 (7), 2451-2463 (1992).
  6. Cook, P. B., McReynolds, J. S. Lateral inhibition in the inner retina is important for spatial tuning of ganglion cells. Nat Neurosci. 1 (8), 714-719 (1998).
  7. Pang, J. J., Gao, F., Wu , J. S. Light-evoked current responses in rod bipolar cells, cone depolarizing bipolar cells and AII amacrine cells in dark-adapted mouse retina. J Physiol. 558 (Pt. 558 (Pt 3), 897-912 (2004).
  8. Euler, T., Masland , R. H. Light-evoked responses of bipolar cells in a mammalian retina). J Neurophysiol. 83 (4), 1817-1829 (2000).
  9. Berntson, A., Taylor , W. R. Response characteristics and receptive field widths of on-bipolar cells in the mouse retina. J Physiol. 524 Pt. 524 (Pt 3), 879-889 (2000).
  10. Sterling, P., Smith, R. G. Design for a binary synapse. Neuron. 41 (3), 313-315 (2004).
  11. Borghuis, B. G., Marvin, J. S., Looger, L. L., Demb, J. B. Two-photon imaging of nonlinear glutamate release dynamics at bipolar cell synapses in the mouse retina. J Neurosci. 33 (27), 10972-10985 (2013).
  12. Dowling, J. E., Sidman, R. L. Inherited retinal dystrophy in the rat. J Cell Biol. 14, 73-109 (1962).
  13. Eggers, E. D., Lukasiewicz, P. D. GABA(A), GABA(C) and glycine receptor-mediated inhibition differentially affects light-evoked signalling from mouse retinal rod bipolar cells. J Physiol. 572 (Pt 1), 215-225 (2006).
  14. Ichinose, T., Lukasiewicz, P. D. The mode of retinal presynaptic inhibition switches with light intensity). J Neurosci. 32 (13), 4360-4371 (2012).
  15. Ichinose, T., Fyk-Kolodziej, B., Cohn, J. Roles of ON cone bipolar cell subtypes in temporal coding in the mouse retina. J Neurosci. 34 (26), 8761-8771 (2014).
  16. Baicu, S. C., Taylor, M. J. Acid-base buffering in organ preservation solutions as a function of temperature: new parameters for comparing buffer capacity and efficiency. Cryobiology. 45 (1), 33-48 (2002).
  17. Ames, A. 3rd, Nesbett, F. B. In vitro retina as an experimental model of the central nervous system. J Neurochem. 37 (4), 867-877 (1981).
  18. Haverkamp, S., et al. The primordial, blue-cone color system of the mouse retina. J Neurosci. 25 (22), 5438-5445 (2005).
  19. Wei, W., Elstrott, J., Feller, M. B. Two-photon targeted recording of GFP-expressing neurons for light responses and live-cell imaging in the mouse retina. Nat Protoc. 5 (7), 1347-1352 (2010).
  20. Farre, C. G., M Bruggemann, A., Fertig, N. Ion channel screening - automated patch clamp on the rise. Drug discovery today. Technologies. 5 (1), e1-e34 (2008).

Tags

علم الأعصاب، العدد 96، الشبكية، تصحيح تسجيل المشبك، والاستجابة الخفيفة، والماوس، والتكيف مع الظلام، والأشعة تحت الحمراء
تسجيل الخفيفة أثار-الردود بعد المشبكي في الخلايا العصبية في الظلام تكييفها، الاستعدادات ماوس الشبكية شريحة عن طريق تقنيات المشبك التصحيح
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Hellmer, C. B., Ichinose, T.More

Hellmer, C. B., Ichinose, T. Recording Light-evoked Postsynaptic Responses in Neurons in Dark-adapted, Mouse Retinal Slice Preparations Using Patch Clamp Techniques. J. Vis. Exp. (96), e52422, doi:10.3791/52422 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter