Protocol
לפני כל הליך בעלי חיים, טיפול בבעלי החיים הוועדה המוסדית ושימוש (IACUC) חייבת לאשר את הפרוטוקול. פרוטוקול זה אושר על ידי IACUC אוניברסיטת מדינת מישיגן.
1. הכנת מעבדה-טרום של פתרון FITC-אינולין
- 20 מיליליטר של תמיסת מלח חם עד 70 מעלות צלזיוס ולאט לאט מוסיפים של FITC-אינולין (5 מ"ג / מיליליטר FITC-אינולין) 100 מ"ג עד שכל אינולין נמס.
- פתרון מגניב RT ולהוסיף 800 מ"ג של אלבומין בסרום השור (40 מ"ג / מיליליטר BSA, אבקת lyophilized, בעצם גלובולין רעלן פנימי ללא תשלום, נמוך, טוהר ≥98% על ידי ג'ל אלקטרופורזה agarose).
- סנן את פתרון אינולין-BSA עם נייר סינון (כיתה 1). מניחים את הפתרון המסונן במזרק 20 מיליליטר עם מסנן מזרק-קצה (0.2 מיקרומטר) ומכסה בנייר כסף כדי להגן מפני אור.
2. הרדמה וניתוח
- מניחים את החולדה בתא אינדוקציה מלא isoflurane 5% כדי לגרום להרדמה. שיא דירקטוריוןמשקל y (250-350 ז) ומניח את החולדה על פלטפורמת ניתוח מחוממת נועדה לשמור על 37 מעלות צלזיוס טמפרטורת גוף לאורך כל הניסוי. בעדינות לאבטח את החולדה לפלטפורמה עם קלטת מעבדה על כפות. לשמור על הרדמה עם isoflurane 1-2% עם הכיתה רפואית O 100% 2 בקצב זרימת אוויר של .8-1.0 L / min.
- הכנס קטטר מחודד (OD תוך-הקצה, 2.7F) לתוך עורק הירך ללחץ דם וניטור קצב לב, ודגימת דם.
- הכנס קטטר (PE-50) לוריד הירך לעירוי אינולין. אבטח את הצנתר לרקמות עם תפר כירורגי משי קלוע 5-O 6.
- צרף את צנתר העורקים למתמר לחץ מד לחץ. לחץ שיא דם וקצב לב באמצעות תוכנת רכישת נתונים ותצוגה על מסך מחשב בזמן אמת. טכניקה זו באה לידי ביטוי בפירוט על וידאו 6.
- לחשוף את שלפוחית השתן דרך חתך suprapubic. חותך קטןחור בקצה של שלפוחית השתן ולהכניס צינורית (PE-190) עם חום התלקח קצה בתוך שלפוחית השתן לאיסוף שתן. אבטח את הצינורית לשלפוחית השתן עם תפרים טבעתיים.
3. תנו ודם אוסף
- מניחים את המזרק של FITC-אינולין במשאבת מזרק עם שיעור זרימת סט של 1 מיליליטר / שעה למשקל גוף 100 גרם (3 מיליליטר / שעה לעכברוש במשקל 300 גרם). צרף את המזרק לקטטר וריד הירך. התחל עירוי אינולין ולאפשר תקופת איזון 1-2 שעות. שמור מזרק מכוסה בנייר כסף כדי להגן מפני אור.
- לקבוע אם זרימת שתן השיעור יציב ומתאים לניתוח מדגם (20 μl / min) על ידי איסוף דגימת שתן בבקבוקון אוסף-שקל מראש לתקופה של 10 דקות. לקבוע נפח שתן gravimetrically עם סולם דיגיטלי. נפח שתן נאות לתקופה אוסף 10 דקות הוא 0.2 מיליליטר. תמשיך לאסוף דגימות שתן עד שני אוספים רצופים מצביעים זרימת שתן שיעור של 20 μl / מ 'באו יותר.
- דוגמאות טרום תרופות
- לאסוף דגימת שתן במהלך תקופה של 20 דקות. לאסוף דגימת דם (0.5 מיליליטר) מצנתר העורקים בנקודת האמצע של תקופת האיסוף שתן. היזהר ברור לחלוטין צנתר העורקים של תמיסת מלח לפני איסוף דגימת דם בבקבוקון המכיל אוסף 1 הפרין U. השתמש בקבוקוני אוסף עם סימוני נפח כדי להקל על האוסף של 0.5 מיליליטר של דם עורקים.
- רוקן את הקטטר עורקים עם הפרין-מלוח (20 U / ml) כדי לנקות את הקטטר של דם (כ. 0.1 מיליליטר). אורכו של צנתר העורקים צריך להיות קצר ככל האפשר כדי להגביל את הנפח של הפרין-מלוח הדרוש כדי לשטוף.
הערה: דגימות דם מדולל לייצר חישובים מדויקים של GFR והפרשה חלקית של Na וק - חכה 10 דקות, וחזור על האוסף של שתן טרום תרופה שנייה ודגימת דם.
- בעקבות האוסף של שתי דגימות טרום תרופה, לנהל DRU משתן g, פורוסמיד (10 מ"ג / קילוגרם), דרך צנתר העורקים. רוקן את הקטטר עורקים עם מלוחים heparinized כדי לנקות את הקטטר של תרופה. לטפל כדי למנוע את הזריקה של אוויר דרך צנתר העורקים. רשום את הזמן של הזרקת פורוסמיד.
- דוגמאות פוסט-סמים: בכל אחת מנקודות הזמן 3 להלן, לאסוף דגימת שתן בתקופה אוסף 10 דקות, ודגימת דם (0.5 מיליליטר) בנקודת האמצע של תקופת האיסוף שתן.
- לדוגמא הודעה בסמים 1 - לאסוף חמש דקות לאחר פורוסמיד.
- על הודעה בסמים לדוגמא 2 - לאסוף עשר דקות לאחר פורוסמיד.
- על הודעה בסמים לדוגמא 3 - לאסוף חמישה עשר דקות לאחר פורוסמיד.
- לאחר כל הדגימות נאספו, להרדים את העכברוש בהתאם לנהלים מוסדיים על ידי פתיחת בית החזה וההסרה של הלב. הסר את שני הכליות. Decapsulate (להסיר את הקרום המקיף) ולמחוק את הכליות כדי להסיר דם עודף. לשקול את הכליות.
התחת = "jove_title"> 4. ניתוח מדגם
- למדוד את כל כרכי דגימת שתן gravimetrically עם סולם דיגיטלי, ומשקלי שיא.
- דגימות דם כל צנטריפוגה עם צנטריפוגה בטבלה העליונה (1,800 XG) להפריד פלזמה. העבר את דגימות פלזמה לבקבוקונים קטנים שכותרתו.
- לנתח ריכוזי Na ו- K בדגימות שתן ופלזמה עם מנתח נתרן / אשלגן.
- מדידה של FITC-אינולין בפלזמה ובשתן
- לדלל את שתן מראש סמים (מ1: 200 עד 1: 400), ושתנו לאחר סמים (01:10) עם חיץ HEPES (500 מ"מ, pH 7.4).
- הוסף 40 μl של μl הסטנדרטי או מדגם ו -60 של חיץ HEPES בצלחת גם 96 (מדגם אחד לכל היטב) ולאפשר לערבב למשך 10 דקות בזמן מכוסה ברדיד אלומיניום.
- ליצור עקומה סטנדרטית עבור FITC-אינולין לריכוזים של 6.25, 12.5, 25, 50, 100, 200, 400 מיקרוגרם / מיליליטר (איור 1). לקבוע הקרינה FITC-אינולין בדגימות וסטנדרטים באמצעות קורא microplate עם האקסאורכי גל ציטוט ופליטה של 485 ו538 ננומטר, בהתאמה.
- התאם את ערכי ניאון לסטנדרטים לניתוח רגרסיה פונקציה לוגיסטית 4 paramter. הפרמטרים פונקצית רגרסיה משמשים לחישוב ריכוז FITC-אינולין בדגימות פלזמה ובשתן (טבלה 1).
ניתוח מעבדה ההודעה 5. תוצאות: חישובים
- לחשב את שיעור זרימת שתן (UV; מיליליטר / דקה): [נפח השתן שנאסף (מיליליטר)] ÷ [זמן של אוסף (דקות)]
- לחשב גלומרולרי סינון שיעור (GFR; מיליליטר / דקה): [ריכוז שתן אינולין (מיקרוגרם / מיליליטר) x UV (מיליליטר / דקה)] ÷ [קונצרט כלשהו אינולין פלזמה. (מיקרוגרם / מיליליטר)]
- לחשב טען נתרן מסונן (μmol / min): ריכוז נתרן פלזמה GFR (μmol / מיליליטר) x (מיליליטר / דקה)
- לחשב נתרן הפרשה שיעור (U Na V; μmol / min): ריכוז נתרן שתן (μmol / מיליליטר) x UV (מיליליטר / דקה)
- לחשב שברי הפרשה של נתרן (Na FE;%): [U Na V (μmol / min)] ÷ [טען נתרן מסונן (μmol / min)] x 100
- לחשב טען מסונן אשלגן (μmol / min): ריכוז אשלגן פלזמה (μmol / מיליליטר) x GFR (מיליליטר / דקה)
- לחשב אשלגן הפרשה שיעור (U K V; μmol / min): ריכוז אשלגן שתן (μmol / מיליליטר) x UV (מיליליטר / דקה)
- לחשב שברי הפרשה של אשלגן (FE K;%): [U K V (μmol / min)] ÷ [טען אשלגן מסונן (μmol / min)] x 100
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
משתן משמש בהפגנת המעבדה היה פורוסמיד אשר מעכב את הספיגה של של Na ו- K המסוננת על ידי הכליות וכתוצאה מכך גדל Na, K, והפרשת מים בתוך דקות של מתן תרופה מהר מאוד. על ידי המנגנון העיקרי שלה, פורוסמיד צריך להיות השפעות מינימליות על GFR והעומס המסונן של Na ו- K, אבל יגביר את זרימת שתן, והפרשה חלקית של Na וק
תוצאות הנציג בטבלה 3 מראות כי בעכברוש הרדים, הממוצע של הערכים מראש התרופה לGFR היה 3.2 מיליליטר / דקה, הפרשת Na הייתה 0.58 μmol / דקה (0.1% מהעומס המסונן), והפרשת K היה 4.4 μmol / דקה (27% מהעומס המסונן). חמש דקות לאחר פורוסמיד (פוסט-סמים 1), GFR והעומס המסונן של Na ו- K לא הושפעו. עם זאת, ההפרשה החלקית של Na עלתה ל -11.5%, וההפרשה החלקית של K עלתה ל 63% מהעומסים המסוננים בהתאמה. המדידות של תואר שניP ומשאבי אנוש מצביעים על כך שהיה לי פורוסמיד לוואי מינימאלי על מפה ומשאבי אנוש (טבלה 2).
המדדים של תפקוד כליות הוערכו בהפגנת המעבדה היו GFR, מוגדר כשיעור שבי הפלזמה מסוננת על ידי הכליות; Na המסונן וK, מוגדר כשיעור שבו Na ו- K מסונן על ידי הכליות; Na ו- K הפרשה דרג, מוגדר כשיעור שבו Na ו- K מופרשים על ידי הכליות; וההפרשה החלקית של Na ו- K, מוגדרת כאחוז Na המסונן וK שמופרש על ידי הכליות
איור 1:. אינולין התקן Curve ערכי הקרינה FITC מוצגים לסטנדרטים המכילים 6.25, 12.5, 25, 50, 100, 200 ו- 400 מיקרוגרם / מיליליטר אינולין. ניתוח רגרסיה פונקציה לוגיסטי 4 paramter-יוצר העקום ביותר בכושר. הפרמטרים פונקצית רגרסיה מעקומה זו ששמשו בחישוב FIריכוז TC-אינולין בדגימות פלזמה ובשתן.
| הקרינה FITC-אינולין | ריכוז | תוצאה | ||||
| סטנדרטי | לשכפל 1 | לשכפל 2 | אומר | מיקרוגרם / מיליליטר | דילול | מיקרוגרם / מיליליטר |
| בלנק | 63.9 | 64.8 | 64.4 | 0.4 | 1 | 0.4 |
| 6.25 | 253.2 | 264.1 | 258.7 | 5.9 | 1 | 5.9 |
| 12.5 | 474.0 </ Td> | 491.3 | 482.7 | 12.5 | 1 | 12.5 |
| 25 | 854.8 | 881.3 | 868.1 | 24.4 | 1 | 24.4 |
| 50 | 1,617.1 | 1,618.0 | 1,617.6 | 50.3 | 1 | 50.3 |
| 100 | 2,813.1 | 2,846.1 | 2,829.6 | 101.3 | 1 | 101.3 |
| 200 | 4,367.3 | 4,588.7 | 4,478.0 | 198.2 | 1 | 198.2 |
| 400 | 6,258.0 | 6,650.0 | 6,454.0 | 401.6 | 1 | 401.6 |
| דגימת שתן | ||||||
| טרום תרופה 1 | 2,443.9 | 2,062.3 | 2,253.1 | 88.5 | 200 | 17700 |
| טרום תרופה 2 | 2,266.5 | 1,707.0 | 1,986.8 | 76.3 | 200 | 15250 |
| הודעה סמים 1 | HT "> 1,208.91,391.2 | 1,300.1 | 44.7 | 10 | 447 | |
| הודעה סמים 2 | 2,753.4 | 2,120.5 | 2,437.0 | 97.0 | 10 | 970 |
| הודעה סמים 3 | 2,888.3 | 3,178.0 | 3,033.2 | 124.4 | 10 | 1,244 |
טבלת 1:. תוצאות מדגם של ערכי הקרינה אינולין Assay FITC-אינולין מוצגות למגיב ריק, 7 סטנדרטים, ו5 דגימות שתן. תקנים ודגימות היו assayed בשני עותקים ובדילול מלאים לפי צורך. הקרינה הממוצעת לכל מדגם המשמשת לחישוב הריכוז של אינולין. ריכוזי אינולין בדגימות שתן אלה כלולים בטבלה של מדידות (טבלה 2).
טבלה 2: מדידות הקלטות במהלך הפגנת המעבדה תפקוד הכלייתי המשתנים שנרשמו במהלך חמש תקופות זמן (שתי טרום-תרופה ושלושה פוסט-סמים) של הפגנת המעבדה תפקוד הכלייתי הם משקל כליה ימין ושמאל, אומר לחץ דם (MAP),. קצב לב (HR), זמן דגימה, נפח שתן, פלזמה ונתרן שתן (Na), אשלגן (K), וריכוזי אינולין. ריכוזי אינולין השתן נקבעו מassay אינולין מוצג בטבלה 1.
25table3.jpg "/>
טבלה 3:. פרמטרי כליות פונקציה מחושבים ממדידות הקלטות שימוש בנוסחאות שמוצגים בסעיף 5 לפרוטוקול, המשתנים שנרשמו (טבלה 2) משמשים לחישוב קצב זרימת שתן, קצב סינון גלומרולרי (GFR), משקל GFR / כליות גרם, שיעור הפרשה עומס, מסונן, והפרשה חלקית של נתרן (Na) ואשלגן (K) במהלך שתי טרום-התרופה ושלוש תקופות פוסט-סמים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
סמן מתאים למדידת GFR לעמוד בארבעה קריטריונים: להיות מסונן באופן חופשי בglomerulus, להיות מאוגד לחלבוני פלזמה, ולא ייקלט ולא מופרש בנפרון. אינולין הוא פולימר פרוקטוז אשר עונה על קריטריונים אלה. כתוצאה מכך, הפינוי כלייתי של אינולין נחשב תקן הזהב למדידת GFR 7. הטכניקה הפגינה מייצגת את הגישה המסורתית של קביעת הפינוי כלייתי של אינולין באמצעות אוספי שתן מתוזמן במהלך עירוי קבוע של אינולין 8,9. מדידות אינולין מסורתיות נעשו שימוש בשיטת anthrone לייצר נחישות colorimetric הכמותי של אינולין שנמדדה על ידי ספקטרופוטומטר 10,11. עם זאת, בניסיון להקל על המדידה של אינולין בכמויות קטנות יותר של שתן ופלזמה, אינולין כבר תויג עם תוויות רדיואקטיבי 12-14, וניאון 15-17. הפגנת המעבדה שהוצגה בu וידאו זהSED FITC שכותרת אינולין למדידת תפקוד הכלייתי בגלל חוסר הסיכון של חשיפה לקרינה אנושית ואת הקלות של מדידת הקרינה FITC 15.
הפגנת מעבדה זה נועדה לספק הבנה רעיונית של איך למדוד תפקוד הכלייתי לתלמידים עם מיומנויות מעבדה מינימליות. לכן, הכנת המעבדה מראש של פתרון FITC-אינולין, והכנה כירורגית של בעלי החיים מבוצעת על ידי טכנאים מנוסים לפני תחילת ההפגנה. התלמידים מגיעים להפגנה בסוף תקופת איזון אינולין 1-2 שעות. בשלב זה, התלמידים מוצגים עם סקירת מעבדה-טרום ומידע על הנהלים שנערכו על בעלי החיים. שני סטודנטים שהוקצו לניסוי בבעלי חיים אחד, והורו על איך לאסוף דגימות דם ושתן לפני ואחרי מתן התרופה משתנת. הניתוח של דגימות דם ושתן שנערך על ידי experieטכנאי nced ותוצאות מועברים לתלמידים לחישובים של תפקוד הכלייתי. תוצאות מוצגות בדיון מעבדה הודעה אשר יכול להיות מתוכנן לאחר ההפגנה.
ישנם מספר צעדים קריטיים בפרוטוקול כדי להבטיח תגובות תקפות. ראשית, אינולין FITC חייב להיות נמס לגמרי ומסונן לפני ממשל בעלי חיים. באופן אידיאלי, אינולין FITC יש dialyzed במים במשך 48 שעות על RT כדי להסיר FITC מאוגד שייר. שנית, דגימות פלזמה חייבת להיות חופשיות של תמיסת מלח. הם הורו לתלמידים לאסוף דגימת דם רק לאחר שכל של מי מלח בצנתר העורקים כבר גורשו ורק דם זורם מקטטר. דגימות דם שדילול עם מי מלח תספק ערכים מדויקים לאינולין פלזמה, נתרן ואשלגן. שלישית, זרימת שתן חייבת להיות יציבה ומספיק כדי לייצר מספיק מדגם לניתוח. קצב זרימת שתן יציב בתחילת המחקר הוא קריטי כי זה אינדיקציה להכנת ניסוי יציבה. אם זרימת שתן היא נמוכה מדי, קצב העירוי של אינולין יכול להיות מוגבר לפני לטעום אוספים. עם זאת, העירוי של אינולין חייב להיות קבוע במהלך הניסוי, כלומר, קצב עירוי אינולין לא צריך להיות מותאם במהלך הניסוי. לבסוף, המדידה של הקרינה אינולין בדגימות פלזמה ובשתן על ידי microplate קורא היא קריטית לניסוי מוצלח. מאז את המפרטים של קורא microplate יקבע אם דגימות דורשות דילולים, מומלצת שריצת מבחן של assay אינולין להתנהל לפני הפגנת המעבדה במאמץ כדי לייעל את המפרטים של קורא microplate ולהבטיח שערכי הקרינה מדגם הם בתוך אמצע הטווח של העקומה סטנדרטית.
תוך הערכת תפקוד הכלייתי מבוסס על הפינוי כלייתי של אינולין נחשב תקן הזהב, טכניקה זו יש מגבלות, כי בעלי החיים חייבים להיות מורדמים, וinstrumented עם צנתרים כלי דם ושלפוחית שתן. סוכני Anesthethetic הוכחו להשפיע פרמטרים המודינמיים כליות וGFR 18,19; עם זאת isoflurane וinactin משמשים בדרך כלל בניסויים בתפקוד הכלייתי בשל ההשפעות מינימליות עליהם הכליה 19,20. טכניקת פינוי אינולין גם דורשת עירוי קבוע של דגימות אינולין ודם מרובה ופלזמה אשר יכול להיות מונע בבעלי חיים קטנים יותר כגון עכברים. שינויים של טכניקה זו פותחו כדי לאפשר המדידה של אישור פלזמה מזריקה אחת של אינולין בבעלי חיים מודעים 21. שינויים אלה גם דורשים כמויות קטנות יותר של דגימות דם לצורך הניתוח, ולספק שיטה חלופית להערכת תפקוד הכלייתי בעכברים.
המדידה של תפקוד הכלייתי היא ישימה למחקרים של מדינות פיזיולוגיה, פתולוגיה, טוקסיקולוגיה, פרמקולוגיה ומחלה. סטודנטים המשתתפים בהפגנה בתפקוד הכלייתי ילמדו לאהוא טכניקה סטנדרטית זהב של פינוי כלייתי של אינולין כדי להעריך את תפקוד כליות. על ידי שליטה בטכניקה זו, תלמידים יבינו את העקרונות של תפקוד כליות ולאפשר להם ליישם את הטכניקה למחקר שלהם ולקבוע אם שינויים בטכניקה מתאימים ללימודיהם.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים כלכליים מתחרים. הדעות או הטענות הכלולות במסמך זה הן את הדעות פרטיות של המחבר ואינם להתפרש רשמי או כמשקפים את הדעות של המחלקה לצבא או משרד ביטחון.
Acknowledgments
מקור המימון להפגנת המעבדה היה מענק NIGMS: GM077119. אנו מודים לד"ר יוסף ר 'הייווד וד"ר פיטר קובט על תמיכתם של couse הקצר באינטגרטיבית ואיברי מערכות פרמקולוגיה. כמו כן, אנו מודים לגב 'חנה Garver לתמיכה הטכנית שלה הפגנת המעבדה.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 5-0 Braided Silk Surgical Suture | Surgical Specialties Corp | SP1033 | |
| Assay Plate, 96-Well | Costar | 3922 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma Chemical Co | A2934-25G | |
| Centrifuge | Beckman Coulter | MicroFuge 18, 357160 | |
| Conical Sample Tubes | Dot Scientific Inc. | #711-FTG | |
| Cotton Tipped Applicators | Solon Manufacturing Co | 56200 | |
| Data Acquisition Software | ADInstruments | LabChart Pro 7.0 | |
| Digital Scale | Denver Instrument | APX-4001 | |
| FITC-Inulin | Sigma Chemical Co | F3272-1G | |
| Gauze Sponges | Covidien | 2146 | |
| Heated Surgical Bed | EZ-Anesthesia | EZ-212 | |
| Heparin | Sagnet | NDC 25021-402-10 | |
| HEPES | Sigma Chemical Co | H3375 | |
| Isoflurane | Abbott Animal Health | IsoFlo, 5260-04-05 | |
| Isoflurane Vaporizer | EZ-Anesthesia | EZ-190F | |
| Micro Dissecting Forceps | Biomedical Research Instruments Inc. | 70-1020 | |
| Microplate Reader - Fluoroskan | ThermoScientific | Ascent FL, 5210460 | |
| NOVA 5+ Sodium/Potassium Analyzer | NOVA BioMedical | 14156 | |
| Olsen-Hegar Needle Holders with Scissors | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| PE-190 (for bladder catheter) | BD Medical | 427435 | |
| Pressure Transducer | ADInstruments | MLT1199 | |
| Pyrex Culture Tubes | Corning Inc. | 99445-12 | |
| Rat Femoral Tapered Artery Catheter | Strategic Applications Inc. | RFA-01 | |
| Salix Furosemide 5% | Intervet | #34-478 | |
| Strabismus Scissors | Fine Science Tools | 14075-11 | |
| Student Surgical Scissors | Fine Science Tools | 91402-12 | |
| Surgical Gloves | Kimberly-Clark | Sterling Nitrile Gloves | |
| Syringe pump | Razel Scientific | R99-E | |
| Tissue Forceps | Fine Science Tools | 91121-12 | |
| Tissue Scissors | George Tiemann Co | 105-420 | |
5-0 Braided Silk Surgical Suture Surgical Specialties Corp SP1033 Assay Plate, 96-Well Costar 3922 Bovine Serum Albumin Sigma Chemical Co A2934-25G Centrifuge Beckman Coulter MicroFuge 18, 357160 Conical Sample Tubes Dot Scientific Inc. #711-FTG Cotton Tipped Applicators Solon Manufacturing Co 56200 Data Acquisition Software ADInstruments LabChart Pro 7.0 Digital Scale Denver Instrument APX-4001 FITC-Inulin Sigma Chemical Co F3272-1G Gauze Sponges Covidien 2146 Heated Surgical Bed EZ-Anesthesia EZ-212 Heparin Sagnet NDC 25021-402-10 HEPES Sigma Chemical Co H3375 Isoflurane Abbott Animal Health IsoFlo, 5260-04-05 Isoflurane Vaporizer EZ-Anesthesia EZ-190F Micro Dissecting Forceps Biomedical Research Instruments Inc. 70-1020 Microplate Reader - Fluoroskan ThermoScientific Ascent FL, 5210460 NOVA 5+ Sodium/Potassium Analyzer NOVA BioMedical 14156 Olsen-Hegar Needle Holders with Scissors Fine Science Tools 12002-12 PE-190 (for bladder catheter) BD Medical 427435 Pressure Transducer ADInstruments MLT1199 Pyrex Culture Tubes Corning Inc. 99445-12 Rat Femoral Tapered Artery Catheter Strategic Applications Inc. RFA-01 Salix Furosemide 5% Intervet #34-478 Strabismus Scissors Fine Science Tools 14075-11 Student Surgical Scissors Fine Science Tools 91402-12 Surgical Gloves Kimberly-Clark Sterling Nitrile Gloves Syringe pump Razel Scientific R99-E Tissue Forceps Fine Science Tools 91121-12 Tissue Scissors George Tiemann Co 105-420 |
|||
References
- Silverthorn, D. U. Human Physiology: An integrated approach. , Pearson. (2012).
- Hall, J. E. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 303-344 (2011).
- Levey, A. S. Measurement of renal function in chronic renal disease. Kidney International. 38 (1), 167-184 (1990).
- Thurau, K., Valtin, H., Schnermann, J. Kidney. Annual Review of Physiology. 30, 441-524 (1968).
- Shannon, J. A., Smith, H. W. The excretion of inulin, xylose, and urea by normal and phoriziniaed man. Journal of Clinical Investigation. 14, 393-401 (1935).
- Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements. Journal of Visualized Experiments. (59), (2012).
- Sterner, G., et al. Determining 'true' glomerular filtration rate in healthy adults using infusion of inulin and comparing it with values obtained using other clearance techniques or predictive equations. Scandinavian Journal of Urology and Nephrology. 42, 278-285 (2008).
- Toto, R. D. Conventional measurement of renal function utilizing serum creatinine, creatinine clearance, inulin and para-aminohippuric acid clearance. Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 4 (6), 505-509 (1995).
- Matavelli, L. C., Kadowitz, P. J., Navar, L. G., Majid, D. S. Renal hemodynamic and excretory responses to intra-arterial infusion of peroxynitrite in anesthetized rats. Americam Journal of Physiology. 296, F170-F176 (2009).
- Davidson, W. D., Sackner, M. A. Simplification of the anthrone method for the determination of inulin in clearance studies. Journal of Laboratory, & Clinical Medicine. 62, 351-356 (1963).
- Symes, A. L., Gault, M. H. Assay of inulin in tissues using anthrone. Clinical Biochemistry. 8 (1), 67-70 (1975).
- Shalmi, M., Lunau, H. E., Petersen, J. S., Bak, M., Christensen, S. Suitability of tritiated inulin for determination of glomerular filtration rate. Americam Journal of Physiology. 260 (2 Pt 2), F283-F289 (1991).
- Denton, K. M., Anderson, W. P. Glomerular untrafiltration in rabbits with superficial glomeruli. EUropean Journal of Physiology. 419 (3-4), 235-242 (1991).
- Jobin, J., Bonjour, J. -P. Measurement of glomerular filtration rate in conscious unrestrained rats with inulin infused by implanted osmotic pumps. Americam Journal of Physiology. 248 (5 Pt 2), F734-F738 (1985).
- Lorenz, J. N., Gruenstein, E. A simple, nonradioactive method for evaluating single-nephron filtration rate using FITC-inulin. Americam Journal of Physiology. 276 (1 Pt 2), F172-F177 (1999).
- Qi, Z., et al. Serial determination of glomerular filtration rate in conscious mice using FITC-inulin clearance. Americam Journal of Physiology. 286 (3), F590-F596 (2004).
- Bivona, B. J., Park, S., Harrison-Bernard, L. M. Glomerular filtration rate determinations in conscious type II diabetic mice. Americam Journal of Physiology. 300 (3), F618-F625 (2011).
- Rosen, S. M. Effects of anaesthesia and surgery on renal hemodynamics. British Journal of Anesthesiology. 44, 252-258 (1972).
- Cousins, M. J. Anesthesia and the kidney. Anaesthesia and intensive care. 11 (4), 292-320 (1983).
- Walter, S. J., Zewde, T., Shirley, D. G. The effect of anaesthesia and standard clearance procedures on renal function in the rat. Quarterly Journal of Experimental Physiology. 74, 805-812 (1989).
- Rieg, T. A. A high-throughput method for measurement of glomerular filtration rate in conscious mice. Journal of Visualized Experiments. (75), (2013).
