Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Fizyoloji Laboratuvarı Gösteri: Bir Sıçan Glomerüler Filtrasyon Hızı

doi: 10.3791/52425 Published: July 26, 2015

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Önceden herhangi bir hayvan prosedürüne kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi (IACUC) protokolünü onaylaması gerekir. Bu protokol Michigan State Üniversitesi IACUC tarafından onaylanmıştır.

FITC inulin Çözüm 1. Ön-lab Hazırlık

  1. Tüm inülin çözünene kadar yavaş yavaş ısınmaya 20 ila 70 ° C ml tuzlu su ve FITC inulin (5 mg / ml FITC-inülin) 100 mg ilave edin.
  2. Soğuk, oda sıcaklığına kadar çözeltisi ve sığır serum albümini 800 mg ekleyin (40 mg / ml BSA, liyofilize toz, esas olarak, agaroz jel elektroforezi ile arındırılmış, endotoksin, ≥98% saflığa globulin).
  3. Filtre kağıdı (grade 1) ile inulin-BSA çözüm Filtre. Bir şırınga ucu filtre (0,2 um) olan bir 20 ml şırınga içinde çözelti filtre koyun ve ışıktan korumak için folyo ile kapatın.

2. Anestezi ve Cerrahi

  1. Anestezi sağlamak üzere,% 5 izofluran ile dolu bir indüksiyon odasında sıçan yerleştirin. Kayıt body ağırlığı (250-350 g) ve deney boyunca 37 ° C vücut ısısını korumak için tasarlanmış bir ısıtılmış ameliyat işlemine sıçan yerleştirin. Yavaşça pençeleri üzerinde laboratuvar bant ile platforma sıçan sabitleyin. 0.8-1.0 L / dk hava akımı hızında tıbbi sınıf% 100 O 2 ile% 1-2 izofluran ile anestezi koruyun.
  2. Kan basıncı ve kalp hızı izleme ve kan örneklemesi için femoral arter içine bir kateter konik (damar içi ucu OD, 2.7f) yerleştirin.
  3. Inülin infüzyon için femoral damara bir kateter (PE-50) yerleştirin. 5-O örgülü ipek cerrahi sütür 6 çevreleyen doku kateter sabitleyin.
  4. Bir gerinim ölçer basınç dönüştürücü arteriyel kateter takın. Tutanak kan basıncı ve gerçek zamanlı bir bilgisayar ekranında veri toplama yazılım ve ekranını kullanarak kalp hızı. Bu teknik, video, 6 ayrıntılı olarak gösterilmiştir.
  5. Suprapubik insizyon yoluyla mesaneye Açığa. Küçük bir kesMesanenin ucu delik ve bir ısı ile bir kanül (PE-190) takın idrar toplama mesane içine ucu alevlendi. Bir çanta-string sütür ile mesane kanül sabitleyin.

3. İdrar ve Kan Alma

  1. (300 g ağırlığındaki bir sıçan için 3 ml / saat) vücut ağırlığının her 100 g başına 1 mi / saat ayarlanmış akış oranı ile, bir şırınga pompası FITC inülin şırınga yerleştirin. Femoral ven kateter için şırınga takın. Inülin infüzyon başlatın ve 1-2 saat dengeleme dönemi izin verir. Işıktan korumak için folyo ile kaplı şırınga tutun.
  2. Idrar akışı oranı sabit ve 10 dakikalık bir süre için önceden tartılmış toplama şişe içinde, bir idrar örneği toplayarak örnek analizi (20 ul / dak) için yeterli olup olmadığını belirler. Dijital ölçek ile gravimetrik idrar hacmi belirlemek. 10 dakika toplama dönemi için yeterli bir idrar hacmi, 0.2 ml olmuştur. Iki ardışık koleksiyon 20 ul / m idrar akım hızını gösterir kadar idrar örnekleri toplamaya devamveya daha fazlası.
  3. Ön İlaç Örnekleri
    1. 20 dakikalık bir süre boyunca idrar örneği toplamak. Idrar toplama dönemi orta noktasında arteriyel kateter kan örneği (0.5 ml) toplayın. 1 U heparin içeren bir koleksiyon şişede bir kan örneği toplama önce tuzlu tamamen açık arteriyel kateter dikkatli olun. Arteriyel kan 0.5 ml toplanmasını kolaylaştırmak için ses işaretleri ile toplama şişeleri kullanın.
    2. Kan (yaklaşık. 0.1 mi) ve kateter temizlemek için heparin tuz çözeltisi (20 U / ml) ile arteriyel kateter yıkayın. temizlemek için gerekli olan heparin tuz hacmini sınırlamak için mümkün olduğu kadar arteriyel kateterin boyu kadar kısa olmalıdır.
      Not: Seyreltilmiş kan örnekleri GFR ve Na ve K fraksiyonel atılımının yanlış hesaplamalar üretmek
    3. 10 dakika bekleyin ve ikinci ön ilaç idrar ve kan örneği toplanmasını tekrarlayın.
  4. İki ilaç öncesi numune alındıktan sonra, bir diüretik dru tatbikg, furosemid (10 mg / kg), arteriyel kateter vasıtasıyla. İlacın kateter temizlemek için heparinli serum fizyolojik ile arteriyel kateter yıkayın. Arteriyel kateter yoluyla hava enjeksiyonu önlemek için özen gösterin. Furosemid enjeksiyonu zamanını kaydedin.
  5. Mesaj-ilaç örnekleri: Aşağıda 3 zaman noktalarının her birinde, 10 dakika toplama süresi boyunca idrar numunesi, ve idrar toplama süresi arasında orta nokta yakınında bir kan örneği (0.5 mi) toplanır.
    1. Post-İlaç Örnek 1 için - daha sonra furosemid beş dakika toplamak.
    2. Post-İlaç Örnek 2 için - sonra furosemid on dakika toplamak.
    3. Post-İlaç Örnek 3 - sonra furosemid onbeş dakika toplamak.
  6. Tüm numuneler toplanmıştır sonra, torakotomi ve kalp çıkarılmasıyla kurumsal prosedürlerine uygun olarak sıçan euthanize. Her iki böbreği çıkarın. Açarlar (çevreleyen membran kaldırmak) ve aşırı kan çıkarmak için böbrekleri kurulayın. Böbrekler tartılır.

  1. Tüm gravimetrik bir dijital ölçekli idrar örneği hacimleri ve kayıt ağırlıkları ölçün.
  2. Bir masa üstü santrifüj (1.800 xg) ile Santrifüj tam kan numuneleri plazma ayırmak için. Küçük etiketli şişelere plazma örnekleri aktarın.
  3. Bir sodyum / potasyum analizörü ile idrar ve plazma örneklerinde Na ve K konsantrasyonları analiz edin.
  4. Plazma ve idrar FITC inulin ölçümü
    1. Ilaç öncesi idrar ile seyreltilir ve HEPES tampon maddesi (500 mM, pH 7.4) ile birlikte, son ilaç idrar (1:10) (1: 400: 200-1).
    2. 96 oyuklu bir plakanın (oyuk başına bir örnekte) 'de HEPES tamponu standart veya numune ve 60 ul 40 ul ekle ve alüminyum folyo ile kaplı ise, 10 dakika boyunca karıştırın izin verir.
    3. Konsantrasyonlarda FITC-inulin bir standart eğri oluşturmak 6.25, 12.5, 25, 50, 100, 200, 400 ug / ml (Şekil 1). Ex bir mikroplaka okuyucu kullanılarak numuneler ve standartlar FITC-inülin floresan belirlemesırasıyla 485 ve 538 nm atıf ve emisyon dalga boylarında.
    4. 4 menü noktası lojistik fonksiyon regresyon analizine standartlar için floresan değerleri takınız. regresyon işlev parametreleri plazma ve idrar örneklerinde (Tablo 1) FITC-inülin konsantrasyonunu hesaplamak için kullanılır.

Sonuçların 5. Post-lab Analizi: Hesaplamalar

  1. (UV; ml / dak) İdrar Akış Hızı hesaplayın: [idrar hacmi toplanan (ml)] ÷ [toplama süresi (dak)]
  2. Glomerüler Filtrasyon Hızı hesaplayın (GFH; ml / dak): ÷ [Plazma inulin konsantre [İdrar inulin konsantrasyonu (ug / ml) UV (ml / dk) x]. (Ug / ml)]
  3. Serum sodyum konsantrasyonu (umol / ml) x GFR (ml / dak): Filtrelenmiş sodyum Yük (umol / dakika) hesaplamak
  4. Sodyum atılım hızı (U Na V; umol / dakika) hesaplayın: İdrar sodyum konsantrasyonu (umol / ml) (ml / dk) UV x
  5. Hesaplayın Sodyum Fraksiyonel Atılım (FE Na;%): [U Na V (ľmol / dk)] ÷ [Filtreli Sodyum Yükü (ľmol / dk)] x 100
  6. Filtreli Potasyum Load (ľmol / dak) hesaplayın: Plazma potasyum konsantrasyonu (mol / ml) GFR x (ml / dak)
  7. Potasyum atılım hızı (U K V, umol / dakika) hesaplayın: İdrar potasyum konsantrasyonu (umol / ml) (ml / dk) UV x
  8. Hesaplayın Potasyum Fraksiyonel Atılım (FE K;%): [U K V (ľmol / dk)] ÷ [Filtreli Potasyum Yükü (ľmol / dk)] x 100

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

laboratuvar gösteride kullanılan diüretik çok hızlı ilaç uygulama birkaç dakika içinde artmış Na, K sonuçlanan böbrek ve su atılımı tarafından filtre Na ve K emilimini inhibe furosemid oldu. Birincil mekanizma ile, furosemid GFH ve Na ve K filtrelenmiş yük üzerinde minimal etkisi olmalı, ama Na ve K idrar akışını ve fraksiyonel atılımını artacak

Bir anestezi uygulanmış sıçanlarda, GFR ilaç öncesi değerlerin ortalaması / dakika, Na atılımı 0.58 umol / dakika (süzüldü yükün% 0.1) 3.2 ml oldu ve K atılımı olduğu Tablo l'de temsili sonuçlar 3 göster 4.4 umol / dakika (süzüldü yükün% 27). Furosemid (post-ilaç 1), GFR ve Na ve K filtrelenmiş yük sonra beş dakika etkilenmemiştir. Ancak fraksiyonel Na atılımı% 11.5 yükseldi, ve K fraksiyonel atılımı ilgili filtrelenmiş yüklerin% 63 yükselmiştir. MA ölçümleriP ve İK furosemid MAP ve HR (Tablo 2) üzerinde minimal etkisi vardı olduğunu göstermektedir.

Laboratuar gösteri değerlendirilen renal fonksiyon indeksleri plazma böbrek yolu ile filtre edildiği oranı olarak tanımlanır GFR edildi; süzüldü, Na, K, Na ve K böbrek yolu ile filtre edilir hangi oranı olarak tanımlandığı gibidir; Na ve K böbreklerden atılır hangi oran olarak tanımlanır Na ve K Boşaltım Hızı; ve böbrek yoluyla atılmaktadır süzüldü Na ve K yüzdesi olarak tanımlanır Na ve K fraksiyonel boşaltım

Figür 1
Şekil 1:. İnülin standart eğri FITC floresan değerleri 6.25, 12.5, 25, 50, 100, 200 ve 400 ug / ml inülin ihtiva eden standartlar için gösterilmiştir. A 4-menü noktası lojistik fonksiyon regresyon analizi en uygun eğri oluşturur. Bu eğriden regresyon fonksiyonu parametreleri FI hesaplamak için kullanıldıPlazma ve idrar örneklerinde TC-inulin konsantrasyonu.

HT "> 1208,9
FITC İnulin floresans Konsantrasyon Sonuç
Standart 1 çoğaltmak 2. çoğaltmak Ortalama ug / ml Seyreltme ug / ml
Boş 63.9 64.8 64.4 0,4 1 0,4
6.25 253,2 264,1 258,7 5.9 1 5.9
12.5 474,0 </ Td> 491,3 482,7 12.5 1 12.5
25 854,8 881,3 868,1 24.4 1 24.4
50 1617,1 1618,0 1617,6 50.3 1 50.3
100 2813,1 2846,1 2829,6 101.3 1 101.3
200 4367,3 4588,7 4478,0 198,2 1 198,2
400 6258,0 6650,0 6454,0 401,6 1 401,6
İdrar Numune
Ön-ilaç 1 2443,9 2062,3 2253,1 88.5 200 17700
Ön-ilaç 2 2266,5 1707,0 1986,8 76.3 200 15250
Post-ilaç 1 1391,2 1300,1 44.7 10 447
Post-ilaç 2 2753,4 2120,5 2437,0 97.0 10 970
Post-ilaç 3 2888,3 3178,0 3033,2 124.4 10 1244

Tablo 1:. İnülin Deneyi FITC İnulin floresans değerlerinin örnek Sonuçlar boş bir reaktif, 7 standartları ve 5 idrar örnekleri için gösterilmiştir. Standartlar ve numuneler, iki kopya halinde test edildi ve gerektiği şekilde seyreltilmiştir. Her numune için ortalama floresans inulin konsantrasyonunu hesaplamak için kullanıldı. Bu idrar örneklerinde inülin konsantrasyonu ölçümleri (Tablo 2) tabloya dahil edilmiştir.

Tablo 2
Tablo 2: Böbrek Fonksiyon Laboratuvarı Gösteri sırasında Kaydedilen ölçümler beş kez dönemlerinde kaydedilen değişkenler renal fonksiyon laboratuvar gösteri (iki Öncesi ilaç ve üç Post-ilaç) arter basıncı (OAB), sağ ve sol böbrek ağırlığı vardır. kalp atım hızı (KAH), örnek zaman, idrar hacmi, plazma ve idrar sodyum (Na), potasyum (K) ve inulin konsantrasyonları. İdrar inülin konsantrasyonları, Tablo 1 'de gösterilen inülin değerlendirilmesi ile tespit edilmiştir.

25table3.jpg "/>
Tablo 3:. Protokol Bölüm 5'te gösterilen formüller kullanılarak Kaydedilen Ölçümler hesaplanır Böbrek Fonksiyon Parametreleri, kaydedilen değişkenler (Tablo 2) idrar akım hızını, glomerüler filtrasyon hızı (GFH), GFH / g böbrek ağırlığı, atılım oranını hesaplamak için kullanılır İki ilaç öncesi ve sonrası kullanılan üç-ilaç dönemlerde, süzüldü yükü, ve sodyum fraksiyonel atılımı (Na) ve potasyum (K).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Dört kriterleri karşılaması gerekir GFH ölçümünde uygun bir işaretleyici: glomerülden serbestçe süzülür edilmesi, plazma proteinlerine bağlanmamış olması ve ne emilir ne nefron salgılandığı. İnülin bu ölçütlerini karşılayan bir fruktoz polimerdir. Sonuç olarak, inulin renal klirensi GFH 7 ölçmek için altın standart olarak kabul edilir. gösterdi tekniği inulin 8,9 sabit bir infüzyon sırasında Zamanlı idrar koleksiyonları kullanılarak inulin renal klerensini belirlenmesi geleneksel yaklaşımı temsil etmektedir. Geleneksel inülin ölçümleri spektrofotometre 10,11 ile ölçülen inulin kantitatif kolorimetrik tespitinin oluşturulması antron yöntemi kullanılarak yapılmıştır. Bununla birlikte, idrarın ve plazma küçük hacimlerde inulin ölçümünü kolaylaştırmak için bir girişimde, inülin, 12-14, radyoaktif, floresan etiketler 15-17 ile etiketlenmiş edilmiştir. Bu videoyu u sunulan laboratuvar gösterised FITC nedeniyle insan radyasyona maruz kalma riski olmaması ve FITC floresan 15 ölçüm kolaylığı böbrek fonksiyon ölçümü için inulin etiketli.

Bu laboratuvar gösteri asgari laboratuvar becerileri öğrencilere böbrek fonksiyonu ölçmek için nasıl bir kavramsal anlayış sağlamak için tasarlanmıştır. Bu nedenle, FITC inulin solüsyonu ve hayvanların cerrahi hazırlık öncesi laboratuvar hazırlık gösteri başlamadan önce deneyimli teknisyenler tarafından yapılmaktadır. Öğrenciler 1-2 saat inulin dengeleme dönemi sonunda gösteri için geliyor. Şu anda, öğrenciler Öncesi laboratuar genel mevcuttur ve hayvanlar üzerinde yapılmıştır prosedürlerin bilgilendirdi. İki öğrenci, bir hayvan deneyinde atanan, öncesi ve idrar söktürücü ilaç verildikten sonra kan ve idrar örnekleri toplamak için nasıl talimat. Kan ve idrar örnekleri analiz experie tarafından yürütülenAdvanced teknisyenleri ve sonuçlar böbrek fonksiyon hesaplamalar için öğrencilere teslim edilir. Sonuçlar gösteriden sonra planlanmış olabilir Post-lab tartışma sırasında sunulmuştur.

Geçerli yanıtları sigorta protokolü kapsamında birçok kritik adımlar vardır. İlk olarak, FITC inülin tamamen çözülene ve hayvan uygulamadan önce süzülmesi gerekir. İdeal olarak, FITC inülin bakiye bağlanmamış FITC çıkarmak için oda sıcaklığında 48 saat süre ile, su içinde diyaliz gerekir. İkinci olarak, plazma numuneleri tuz serbest olması gerekir. Öğrenciler arteriyel kateter tuzlu tüm kovdu edildikten sonra bir kan örneği toplamak için talimat ve sadece kan kateter dışarı akıyor. Tuzlu su ile seyreltilir kan örnekleri plazma inülin, sodyum ve potasyum için doğru değerleri sağlayacaktır. Üçüncü olarak, idrar akışı analizi için yeterli numunenin üretilmesi için sürekli ve yeterli olmalıdır. Bunun bir göstergesidir çünkü başlangıçta bir sabit idrar akış hızı kritikstabil bir deney hazırlanması. Idrar akışı çok düşük ise, inulin infüzyon hızı koleksiyonları örnek önce arttırılabilir. Bununla birlikte, inulin enfüzyon deney sırasında sabit olmalıdır, yani, inülin infüzyon hızı deney sırasında ayarlanması gerekir. Son olarak, mikro levha okuyucusu ile plazma ve idrar örneklerinde inülin floresan ölçümü başarılı bir deney için kritik öneme sahiptir. Numuneler dilüsyonlarını gerekiyorsa belirleyecek mikroplaka okuyucunun özelliklerine yana, bu inulin testinin test çalıştırmak mikroplaka okuyucu özelliklerini optimize etmek ve bu örnek floresan değerleri sağlamak amacıyla laboratuar gösteri öncesinde yürütülen önerilir Standart eğrinin orta aralığında.

Kabul edilir altın standart inulin böbrek klerensi dayalı böbrek fonksiyonunu değerlendirmek iken, bu tekniğin hayvanlar anestezi gerekir çünkü sınırlamaları vardır, vevasküler ve mesane kateteri ile Enstrümante. Anesthethetic ajanlar böbrek hemodinamik ve GFR 18,19 etkilediği gösterilmiştir; Ancak izofluran ve Inactin tipik olarak böbrek 19,20 üzerindeki minimal etkileri böbrek fonksiyon deneylerde kullanılır. inülin açıklık tekniği, aynı zamanda, fare gibi küçük hayvanlarda engelleyici olabilir inülin ve çoklu kan ve plazma örneklerinin sürekli infüzyon gerektirir. Bu tekniğin değişiklikler bilinçli hayvanlar 21 inulin tek bir enjeksiyon plazma klirensi ölçümünü sağlamak için geliştirilmiştir. Bu modifikasyonlar ayrıca analiz için kan örnekleri arasında küçük miktarlar gerektiren ve farelerde böbrek fonksiyonunu değerlendirmek için alternatif bir yöntem sağlar.

renal fonksiyon ölçümü fizyolojisi, patoloji, toksikoloji, farmakoloji ve hastalık durumlarının çalışmaları için de geçerlidir. Böbrek Fonksiyon gösteriye katılan öğrenciler t öğreneceksinizinulin böbrek klerensi o altın standart yöntem böbrek fonksiyonlarını değerlendirmek için. Bu tekniği mastering, öğrenciler böbrek fonksiyon ilkelerini anlamak ve onlara kendi araştırma tekniğini uygulamak ve tekniğine değişiklikler kendi çalışmaları için uygun olup olmadığını belirlemek için izin verecektir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını olduğunu beyan ederim. görüş veya burada yer alan iddiaların yazarın özel görünümleri vardır ve resmi ya da Ordu Bölümü veya Savunma Bakanlığı görüşlerini yansıtan şeklinde olması değildir.

Acknowledgments

laboratuvar gösteri için fon kaynağı NIGMS hibe oldu: GM077119. Biz Bütünleştirici ve Organ Sistemleri Farmakoloji Kısa Couse onların desteği için Dr. Joseph R. Haywood ve Dr. Peter Cobbett teşekkür ederim. Biz de laboratuvar gösteri onu teknik destek için Sayın Hannah Garver teşekkür ederiz.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
5-0 Braided Silk Surgical Suture Surgical Specialties Corp SP1033
Assay Plate, 96-Well Costar  3922
Bovine Serum Albumin Sigma Chemical Co A2934-25G
Centrifuge Beckman Coulter MicroFuge 18, 357160
Conical Sample Tubes Dot Scientific Inc.  #711-FTG
Cotton Tipped Applicators Solon Manufacturing Co 56200
Data Acquisition Software ADInstruments LabChart Pro 7.0
Digital Scale  Denver Instrument APX-4001
FITC-Inulin Sigma Chemical Co F3272-1G
Gauze Sponges Covidien 2146
Heated Surgical Bed EZ-Anesthesia EZ-212
Heparin Sagnet NDC 25021-402-10
HEPES Sigma Chemical Co H3375
Isoflurane Abbott Animal Health IsoFlo, 5260-04-05
Isoflurane Vaporizer EZ-Anesthesia EZ-190F
Micro Dissecting Forceps Biomedical Research Instruments Inc. 70-1020
Microplate Reader - Fluoroskan ThermoScientific Ascent FL, 5210460
NOVA 5+ Sodium/Potassium Analyzer NOVA BioMedical 14156
Olsen-Hegar Needle Holders with Scissors Fine Science Tools 12002-12
PE-190 (for bladder catheter) BD Medical 427435
Pressure Transducer  ADInstruments MLT1199
Pyrex Culture Tubes Corning Inc. 99445-12
Rat Femoral Tapered Artery Catheter Strategic Applications Inc. RFA-01
Salix Furosemide 5% Intervet #34-478
Strabismus Scissors Fine Science Tools 14075-11
Student Surgical Scissors Fine Science Tools 91402-12
Surgical Gloves Kimberly-Clark Sterling Nitrile Gloves
Syringe pump Razel Scientific R99-E
Tissue Forceps Fine Science Tools 91121-12
Tissue Scissors George Tiemann  Co 105-420

5-0 Braided Silk Surgical Suture Surgical Specialties Corp SP1033 Assay Plate, 96-Well Costar  3922 Bovine Serum Albumin Sigma Chemical Co A2934-25G Centrifuge Beckman Coulter MicroFuge 18, 357160 Conical Sample Tubes Dot Scientific Inc.  #711-FTG Cotton Tipped Applicators Solon Manufacturing Co 56200 Data Acquisition Software ADInstruments LabChart Pro 7.0 Digital Scale  Denver Instrument APX-4001 FITC-Inulin Sigma Chemical Co F3272-1G Gauze Sponges Covidien 2146 Heated Surgical Bed EZ-Anesthesia EZ-212 Heparin Sagnet NDC 25021-402-10 HEPES Sigma Chemical Co H3375 Isoflurane Abbott Animal Health IsoFlo, 5260-04-05 Isoflurane Vaporizer EZ-Anesthesia EZ-190F Micro Dissecting Forceps Biomedical Research Instruments Inc. 70-1020 Microplate Reader - Fluoroskan ThermoScientific Ascent FL, 5210460 NOVA 5+ Sodium/Potassium Analyzer NOVA BioMedical 14156 Olsen-Hegar Needle Holders with Scissors Fine Science Tools 12002-12 PE-190 (for bladder catheter) BD Medical 427435 Pressure Transducer  ADInstruments MLT1199 Pyrex Culture Tubes Corning Inc. 99445-12 Rat Femoral Tapered Artery Catheter Strategic Applications Inc. RFA-01 Salix Furosemide 5% Intervet #34-478 Strabismus Scissors Fine Science Tools 14075-11 Student Surgical Scissors Fine Science Tools 91402-12 Surgical Gloves Kimberly-Clark Sterling Nitrile Gloves Syringe pump Razel Scientific R99-E Tissue Forceps Fine Science Tools 91121-12 Tissue Scissors George Tiemann  Co 105-420

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Silverthorn, D. U. Human Physiology: An integrated approach. Pearson. (2012).
  2. Hall, J. E. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. 303-344 (2011).
  3. Levey, A. S. Measurement of renal function in chronic renal disease. Kidney International. 38, (1), 167-184 (1990).
  4. Thurau, K., Valtin, H., Schnermann, J. Kidney. Annual Review of Physiology. 30, 441-524 (1968).
  5. Shannon, J. A., Smith, H. W. The excretion of inulin, xylose, and urea by normal and phoriziniaed man. Journal of Clinical Investigation. 14, 393-401 (1935).
  6. Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements. Journal of Visualized Experiments. (59), (2012).
  7. Sterner, G., et al. Determining 'true' glomerular filtration rate in healthy adults using infusion of inulin and comparing it with values obtained using other clearance techniques or predictive equations. Scandinavian Journal of Urology and Nephrology. 42, 278-285 (2008).
  8. Toto, R. D. Conventional measurement of renal function utilizing serum creatinine, creatinine clearance, inulin and para-aminohippuric acid clearance. Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 4, (6), 505-509 (1995).
  9. Matavelli, L. C., Kadowitz, P. J., Navar, L. G., Majid, D. S. Renal hemodynamic and excretory responses to intra-arterial infusion of peroxynitrite in anesthetized rats. Americam Journal of Physiology. 296, F170-F176 (2009).
  10. Davidson, W. D., Sackner, M. A. Simplification of the anthrone method for the determination of inulin in clearance studies. Journal of Laboratory, & Clinical Medicine. 62, 351-356 (1963).
  11. Symes, A. L., Gault, M. H. Assay of inulin in tissues using anthrone. Clinical Biochemistry. 8, (1), 67-70 (1975).
  12. Shalmi, M., Lunau, H. E., Petersen, J. S., Bak, M., Christensen, S. Suitability of tritiated inulin for determination of glomerular filtration rate. Americam Journal of Physiology. 260, (2 Pt 2), F283-F289 (1991).
  13. Denton, K. M., Anderson, W. P. Glomerular untrafiltration in rabbits with superficial glomeruli. EUropean Journal of Physiology. 419, (3-4), 235-242 (1991).
  14. Jobin, J., Bonjour, J. -P. Measurement of glomerular filtration rate in conscious unrestrained rats with inulin infused by implanted osmotic pumps. Americam Journal of Physiology. 248, (5 Pt 2), F734-F738 (1985).
  15. Lorenz, J. N., Gruenstein, E. A simple, nonradioactive method for evaluating single-nephron filtration rate using FITC-inulin. Americam Journal of Physiology. 276, (1 Pt 2), F172-F177 (1999).
  16. Qi, Z., et al. Serial determination of glomerular filtration rate in conscious mice using FITC-inulin clearance. Americam Journal of Physiology. 286, (3), F590-F596 (2004).
  17. Bivona, B. J., Park, S., Harrison-Bernard, L. M. Glomerular filtration rate determinations in conscious type II diabetic mice. Americam Journal of Physiology. 300, (3), F618-F625 (2011).
  18. Rosen, S. M. Effects of anaesthesia and surgery on renal hemodynamics. British Journal of Anesthesiology. 44, 252-258 (1972).
  19. Cousins, M. J. Anesthesia and the kidney. Anaesthesia and intensive care. 11, (4), 292-320 (1983).
  20. Walter, S. J., Zewde, T., Shirley, D. G. The effect of anaesthesia and standard clearance procedures on renal function in the rat. Quarterly Journal of Experimental Physiology. 74, 805-812 (1989).
  21. Rieg, T. A. A high-throughput method for measurement of glomerular filtration rate in conscious mice. Journal of Visualized Experiments. (75), (2013).
Fizyoloji Laboratuvarı Gösteri: Bir Sıçan Glomerüler Filtrasyon Hızı
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Hinojosa-Laborde, C., Jespersen, B., Shade, R. Physiology Lab Demonstration: Glomerular Filtration Rate in a Rat. J. Vis. Exp. (101), e52425, doi:10.3791/52425 (2015).More

Hinojosa-Laborde, C., Jespersen, B., Shade, R. Physiology Lab Demonstration: Glomerular Filtration Rate in a Rat. J. Vis. Exp. (101), e52425, doi:10.3791/52425 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter