Protocol
Før eventuell dyr prosedyre, må den institusjonelle dyr omsorg og bruk komité (IACUC) godkjenne protokollen. Denne protokollen ble godkjent av Michigan State University IACUC.
1. Pre-lab Utarbeidelse av FITC- inulin Solution
- Varm 20 ml saltvann til 70 ° C og langsomt rør inn 100 mg av FITC-inulin (5 mg / ml FITC-inulin) inntil alt inulin er oppløst.
- Avkjøl løsningen til romtemperatur og tilsett 800 mg bovint serumalbumin (40 mg / ml BSA, lyofilisert pulver, i det vesentlige fri globulin, lav endotoksin, ≥98% renhet ved agarosegel-elektroforese).
- Filtrer inulin-BSA-oppløsning med filterpapir (grad 1). Plasser den filtrerte løsning i en 20 ml sprøyte med en sprøytespiss filter (0,2 um) og dekk med folie for å beskytte mot lys.
2. Anestesi og kirurgi
- Plasser rotte i en induksjons kammer fylt med 5% isofluran for å indusere anestesi. Record body vekt (250-350 g) og plassere rotten på et oppvarmet operasjons plattform konstruert for å opprettholde 37 ° C kroppstemperatur gjennom hele eksperimentet. Forsiktig sikre rotte til plattformen med laboratorie tape over potene. Opprettholde anestesi med 1-2% isofluran med medisinsk karakter 100% O 2 ved lufthastighet på 0,8-1,0 l / min.
- Sett inn en konisk kateter (intra tips OD, 2.7F) inn lårarterie for blodtrykk og puls, og blodprøvetaking.
- Sette inn et kateter (PE-50) i lårvenen for inulin infusjon. Fest kateteret til omkringliggende vev med 5-O flettet silke kirurgisk sutur 6.
- Fest arteriekateter til en strekkmåler trykktransduser. Posten blodtrykk og hjertefrekvens ved hjelp datainnsamling programvare og skjerm på en dataskjerm i sanntid. Denne teknikk er vist i detalj på video 6.
- Expose blæren via et suprapubisk snitt. Skjær et litehull i spissen av blæren og sette inn en kanyle (PE-190) med et varme blusset spiss inne i blæren for urinoppsamling. Fest kanylen til blæren med en veske-streng sutur.
3. urin og blod Collection
- Plasser sprøyten av FITC-inulin i en sprøytepumpe med strømningsrate på 1 ml / time pr 100 g kroppsvekt (3 ml / time for en rotte som veier 300 g). Fest sprøyten til lårvenen kateteret. Start inulin infusjon og tillate en 1-2 timers ekvilibreringsperiode. Hold sprøyten dekket med folie for å beskytte mot lys.
- Avgjøre om urinstrømningshastighet er stabil og tilstrekkelig for analyse av prøver (20 ul / min) ved å samle en urinprøve i et på forhånd veiede oppsamlingsbeger i en periode på 10 min. Bestem urinvolum gravimetrisk med en digital skala. En tilstrekkelig urinvolum for en 10 min periode samling er 0,2 ml. Fortsette å samle inn urinprøver inntil to påfølgende samlinger indikere en urin flow rate på 20 ul / mi eller mer.
- Pre-Drug Samples
- Samle en urinprøve i løpet av en 20 minutters periode. Samle en blodprøve (0,5 ml) fra det arterielle kateter ved midtpunktet av urinoppsamlingsperiode. Vær nøye med å tømme arteriekateter av saltvann før samle en blodprøve i en samling hetteglass med 1 U heparin. Bruk oppsamlingshetteglass med volum markeringer for å legge til rette for innsamling av 0,5 ml av arteriell blod.
- Skyll arteriekateter med heparin-saltløsning (20 U / ml) for å fjerne kateteret blod (ca. 0,1 ml). Lengden av arteriekateter bør være så kort som mulig for å begrense volumet av heparin-saltløsning som kreves for å tømme.
Merk: Utvannet blodprøver gi unøyaktige beregninger av GFR og brøk utskillelse av Na og K. - Vent i 10 min, og gjenta samling av en andre pre-medikament urin og blodprøven.
- Etter samlingen av to Pre-stoff prøvene, administrere en vanndrivende drug, furosemid (10 mg / kg), via det arterielle kateter. Skyll arteriekateter med heparinisert saltvann for å fjerne kateteret av stoffet. Vær nøye med å unngå injeksjon av luft gjennom arteriekateter. Spill tidspunktet for furosemid injeksjon.
- Post-medikament Samples: Ved hver av de tre tidspunkter nedenfor, samler en urinprøve i løpet av en 10 min innsamlingsperiode, og en blodprøve (0,5 ml) ved midtpunktet av urinoppsamlingsperiode.
- For Post-Drug Sample 1 - samle fem minutter etter furosemid.
- For Post-Drug Prøve 2 - samle ti minutter etter furosemid.
- For Post-Drug Prøve 3 - samle femten minutter etter furosemid.
- Etter at alle prøvene har blitt samlet inn, avlive rotten i overensstemmelse med institusjonelle prosedyrer ved toraktomi og fjerning av hjertet. Fjern begge nyrer. Decapsulate (fjern den omkringliggende membran) og blot nyrene å fjerne overflødig blod. Vei nyrene.
- Måle alle urin prøvevolumer gravimetrisk med en digital skala og plate vekter.
- Sentrifuger helblodprøver med en table-top sentrifuge (1800 xg) for å skille plasma. Overfør plasmaprøver til små merkede beholdere.
- Analyser Na og K-konsentrasjonene i urin- og plasmaprøver med en natrium / kalium-analysator.
- Måling av FITC-inulin i plasma og urin
- Fortynn pre-medikament urin (fra 1: 200 til 1: 400), og post-legemiddel urin (01:10) med HEPES buffer (500 mM, pH 7,4).
- Legg 40 ul av standard eller prøve, og 60 pl av HEPES-buffer i en 96 brønners plate (en prøve per brønn) og tillate å blande seg i 10 minutter mens dekket med aluminiumsfolie.
- Generere en standardkurve for FITC-inulin for konsentrasjoner på 6,25, 12,5, 25, 50, 100, 200, 400 ug / ml (figur 1). Bestem FITC- inulin fluorescens i prøver og standarder ved hjelp av en mikroplateleser med exsiterings og emisjonsbølgelengder av 485 og 538 nm, henholdsvis.
- Monter fluorescerende verdier for standardene til en 4-paramter logis funksjon regresjonsanalyse. Parametrene regresjonsfunksjon benyttes for å beregne FITC-inulin-konsentrasjonen i plasma og urinprøver (tabell 1).
5. Post-lab analyse av resultater: Beregninger
- Beregn Urin Flow Rate (UV; ml / min): [volum av urin samlet (ml)] ÷ [tidspunktet for samlingen (min)]
- Beregn glomerulusfiltrasjon (GFR; ml / min): [Urin inulin konsentrasjon (mg / ml) x UV (ml / min)] ÷ [Plasma inulin kons. (Ug / ml)]
- Beregn Filtrert Natrium Belastning (pmol / min): Plasma natrium konsentrasjon (umol / ml) x GFR (ml / min)
- Beregn Natrium utskillelseshastighet (U Na V; umol / min): Urin natrium konsentrasjon (umol / ml) x UV (ml / min)
- Beregn Delvis utskillelsen av natrium (FE Na;%): [U Na V (mikromol / min)] ÷ [Filtrert Sodium Load (mikromol / min)] x 100
- Beregn filtrert Kalium Belastning (pmol / min): Plasma kalium konsentrasjon (umol / ml) x GFR (ml / min)
- Beregn Kalium utskillelseshastighet (U K V; umol / min): Urin kalium konsentrasjon (umol / ml) x UV (ml / min)
- Beregn Delvis Utskillelse av Kalium (FE K;%): [U K V (mikromol / min)] ÷ [Filtrert Kalium Load (mikromol / min)] x 100
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den vanndrivende brukt i laboratoriet demonstrasjonen var furosemid som svært raskt hemmer reabsorpsjon av Na og K filtrert gjennom nyrene resulterer i økt Na, K, og vannutskillelse bare minutter etter Drug Administration. Ved sin primære mekanismen, bør furosemid har minimal effekt på GFR og filtrert belastningen av Na og K, men vil øke urin flyt, og brøk utskillelse av Na og K.
De representative Resultatene i Tabell 3 viser at i en bedøvet rotte, gjennomsnittet av de pre-legemiddel verdier for GFR var 3,2 ml / min, Na utskillelsen var 0,58 umol / min (0,1% av den filtrerte belastning), og K-utskillelse ble 4,4 umol / min (27% av den filtrerte belastning). Fem minutter etter furosemid (post-medikament 1), GFR og filtrert belastningen av Na og K var upåvirket. Imidlertid fraksjonert utskillelse av Na øket til 11,5%, og den fraksjonelle utskillelsen av K økt til 63% av de respektive filtrerte belastninger. Målingene av MAP og HR viser at furosemid hadde minimal effekt på MAP og HR (tabell 2).
Indeksene av nyrefunksjonen vurderes i laboratoriet demonstrasjonen var GFR, definert som den renten som plasma filtreres gjennom nyrene; filtrert Na og K, definert som den renten som Na og K blir filtrert gjennom nyrene; Na og K Utskillelse Rate, definert som den renten som Na og K utskilles via nyrene; og brøk Utskillelse av Na og K, definert som andelen av filtrert Na og K som utskilles via nyrene
Fig. 1: Inulin standardkurve FITC fluorescens-verdier er vist for standarder inneholdende 6,25, 12,5, 25, 50, 100, 200 og 400 ug / ml inulin. En 4-paramter logis funksjon regresjonsanalyse genererer den optimale kurven. Parametrene regresjonsfunksjon fra denne kurve ble anvendt for å beregne FITC-inulin-konsentrasjonen i plasma og urinprøver.
| FITC- Inulin fluorescens | Konsentrasjon | Resultat | ||||
| Standard | replikere 1 | replikere 2 | Mean | ug / ml | Fortynning | ug / ml |
| Blank | 63.9 | 64.8 | 64.4 | 0.4 | 1 | 0.4 |
| 6,25 | 253,2 | 264,1 | 258,7 | 5.9 | 1 | 5.9 |
| 12.5 | 474,0 </ Td> | 491,3 | 482,7 | 12.5 | 1 | 12.5 |
| 25 | 854,8 | 881,3 | 868,1 | 24.4 | 1 | 24.4 |
| 50 | 1617,1 | 1618,0 | 1617,6 | 50.3 | 1 | 50.3 |
| 100 | 2813,1 | 2846,1 | 2829,6 | 101,3 | 1 | 101,3 |
| 200 | 4367,3 | 4588,7 | 4478,0 | 198,2 | 1 | 198,2 |
| 400 | 6258,0 | 6650,0 | 6454,0 | 401,6 | 1 | 401,6 |
| Urinprøve | ||||||
| Pre-stoff 1 | 2443,9 | 2062,3 | 2253,1 | 88.5 | 200 | 17700 |
| Pre-stoff 2 | 2266,5 | 1707,0 | 1986,8 | 76.3 | 200 | 15250 |
| Post-stoff 1 | ht "> 1208,91391,2 | 1300,1 | 44.7 | 10 | 447 | |
| Post-stoff 2 | 2753,4 | 2120,5 | 2437,0 | 97.0 | 10 | 970 |
| Post-medikament 3 | 2888,3 | 3178,0 | 3033,2 | 124,4 | 10 | 1244 |
Tabell 1:. Prøveresultatene inulin Assay FITC-inulin fluorescens-verdier er vist for reagens-blind, 7-standarder, og 5 urinprøver. Standarder og prøver ble analysert i duplikat og fortynnet etter behov. Den gjennomsnittlige fluorescens for hver prøve ble anvendt for å beregne konsentrasjonen av inulin. Inulinet konsentrasjoner i disse urinprøver er tatt med i tabellen for målingene (tabell 2).
Tabell 2: Målinger registrert i løpet av nyrefunksjon Lab demonstrasjon Variablene som er tatt under fem tidsperioder (to Pre-stoff og tre Post-drug) av nyrefunksjonen lab demonstrasjonen er høyre og venstre nyre vekt, gjennomsnittlig arterietrykk (MAP),. hjertefrekvens (HR), samplingstid, urinvolum, plasma og urin natrium (Na), kalium (K), og inulin konsentrasjoner. Urin inulin Konsentrasjoner ble bestemt fra inulin analysen er vist i tabell 1.
25table3.jpg "/>
Tabell 3:. Nyrefunksjon Parametere Beregnede fra registrerte målinger ved hjelp av formlene vist i protokoll § 5, de registrerte variablene (tabell 2) brukes til å beregne urin flow rate, glomerulusfiltrasjon (GFR), GFR / g nyrevekt, utskillelse rente , filtrert belastning, og brøk utskillelse av natrium (Na) og kalium (K) i løpet av to Pre-stoff og tre Post-narkotika perioder.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
En passende markør for GFR måling må oppfylle fire kriterier: fritt filtrert ved glomerulus, være ubundet til plasmaproteiner, og heller ikke absorberes eller utskilt i nevronet. Inulin er en fruktose polymer som tilfredsstiller disse kriteriene. Som et resultat er renal utskillelse av inulin regnet som gullstandarden for måling av GFR 7. Den viste teknikk representerer den tradisjonelle tilnærmingen for å bestemme renal clearance av inulin hjelp styrte urinsamlinger under en konstant tilførsel av inulin 8,9. Tradisjonelle inulin målinger er foretatt ved hjelp av antron-metoden for å frembringe en kvantitativ kolorimetrisk bestemmelse av inulin målt med spektrofotometer 10,11. Imidlertid, i et forsøk på å lette målingen av inulin i mindre mengder urin og plasma, inulin er blitt merket med radioaktive 12-14, 15-17 og fluorescerende markører. Laboratoriet demonstrasjonen presenteres i denne videoen used FITC-merket inulin for måling av nyrefunksjonen på grunn av manglende fare for human stråling og enkel måling av FITC fluorescens 15.
Dette lab demonstrasjonen er ment å gi en konseptuell forståelse av hvordan man kan måle nyrefunksjonen til studenter med minimal laboratorieferdigheter. Derfor er den pre-lab fremstilling av FITC-inulin-løsning, og kirurgiske forberedelse av dyrene utføres av erfarne teknikere før starten av demonstrasjonen. Studentene ankommer til demonstrasjon på enden av 1-2 timer inulin utjevningsperiode. På denne tiden, blir elevene presentert med en Pre-lab oversikt og informert om de prosedyrer som er utført på dyr. To studenter er tildelt ett dyr eksperiment, og instruksjoner om hvordan å samle blod og urinprøver før og etter administrasjon av vanndrivende stoffet. Analysen av blod- og urinprøver er utført av erfaring og produkternced teknikere og resultatene er levert til studentene for beregninger av nyrefunksjonen. Resultatene er presentert i løpet av en Post-lab diskusjon som kan planlegges etter demonstrasjonen.
Det er flere viktige skritt i protokollen for å sørge for gyldige svar. For det første må FITC inulin være fullstendig oppløst og filtrert før dyret administrering. Ideelt sett bør FITC inulin dialyseres i vann i 48 timer ved romtemperatur for å fjerne resterende ubundet FITC. For det andre må plasmaprøver være fri for saltvann. Elevene er instruert til å samle inn en blodprøve bare etter at alt saltvann i den arterielle kateter har blitt drevet ut, og bare blod strømmer ut av kateteret. Blodprøver som er fortynnet med saltvann vil gi unøyaktige plasmaverdier inulin, natrium og kalium. For det tredje må diurese være jevn og tilstrekkelig til å produsere nok prøve for analyse. En jevn urinstrømningshastighet ved start er viktig, fordi det er en indikasjonen stabil eksperimentell forberedelse. Hvis urin flyt er for lav, kan infusjonshastigheten av inulin økes før prøvesamlinger. Imidlertid må infusjon av inulin er konstant i løpet av eksperimentet, dvs. inulin infusjonshastighet må ikke justeres under forsøket. Til slutt, er måling av inulin fluorescens i plasma-og urinprøver ved mikroplateleser avgjørende for en vellykket eksperiment. Siden spesifikasjonene til -mikroplateleser vil avgjøre om prøvene krever fortynninger, anbefales det at en testkjøring av inulin analysen gjennomføres før laboratoriet demonstrasjon i et forsøk på å optimalisere spesifikasjonene av mikroplateleser og sikre at prøven fluorescens verdier innen mid-range av standardkurven.
Mens vurdere nyrefunksjonen basert på clearance av inulin er regnet som gullstandarden, har denne teknikken begrensninger fordi dyrene må bedøves, oginstrumentert med vaskulære og blære kateter. Anesthethetic midler har vist seg å påvirke renal hemodynamikk og GFR 18,19; men isofluran og inactin brukes vanligvis i nyrefunksjonen eksperimenter på grunn av deres minimale virkninger på nyrene 19,20. Den inulin klaring teknikken krever også en konstant infusjon av inulin og multiple blod- og plasmaprøver som kan være prohibitive i mindre dyr som mus. Modifikasjoner av denne teknikk er blitt utviklet for å tillate måling av plasma-clearance fra en enkelt injeksjon av inulin i bevisste dyr 21. Disse modifikasjonene også kreve mindre mengder av blodprøver for analyse, og tilveiebringe en alternativ metode for vurdering av nyrefunksjonen hos mus.
Måling av nyrefunksjon gjelder for studier av fysiologi, patologi, toksikologi, farmakologi og sykdomstilstander. Studenter som deltar i nyrefunksjon demonstrasjon vil lære than gullstandarden teknikken av renal utskillelse av inulin å vurdere nyrefunksjonen. Ved å mestre denne teknikken, skal studentene forstå prinsippene i nyrefunksjon og tillate dem å bruke teknikken til sin egen forskning og finne ut om endringer i teknikken som er aktuelle for sine studier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne hevder at de ikke har noen konkurrerende økonomiske interesser. Meningene eller påstander som finnes her, er de private visninger av forfatteren og er ikke tolkes som offisiell eller som gjenspeiler synspunktene til Department of the Army eller Department of Defense.
Acknowledgments
Finansieringskilde for lab demonstrasjonen var NIGMS stipend: GM077119. Vi takker Dr. Joseph R. Haywood og Dr. Peter Cobbett for sin støtte til Short Couse i Integrative og organsystemer Pharmacology. Vi takker også Ms. Hannah Garver for henne teknisk support av laboratoriet demonstrasjon.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 5-0 Braided Silk Surgical Suture | Surgical Specialties Corp | SP1033 | |
| Assay Plate, 96-Well | Costar | 3922 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma Chemical Co | A2934-25G | |
| Centrifuge | Beckman Coulter | MicroFuge 18, 357160 | |
| Conical Sample Tubes | Dot Scientific Inc. | #711-FTG | |
| Cotton Tipped Applicators | Solon Manufacturing Co | 56200 | |
| Data Acquisition Software | ADInstruments | LabChart Pro 7.0 | |
| Digital Scale | Denver Instrument | APX-4001 | |
| FITC-Inulin | Sigma Chemical Co | F3272-1G | |
| Gauze Sponges | Covidien | 2146 | |
| Heated Surgical Bed | EZ-Anesthesia | EZ-212 | |
| Heparin | Sagnet | NDC 25021-402-10 | |
| HEPES | Sigma Chemical Co | H3375 | |
| Isoflurane | Abbott Animal Health | IsoFlo, 5260-04-05 | |
| Isoflurane Vaporizer | EZ-Anesthesia | EZ-190F | |
| Micro Dissecting Forceps | Biomedical Research Instruments Inc. | 70-1020 | |
| Microplate Reader - Fluoroskan | ThermoScientific | Ascent FL, 5210460 | |
| NOVA 5+ Sodium/Potassium Analyzer | NOVA BioMedical | 14156 | |
| Olsen-Hegar Needle Holders with Scissors | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| PE-190 (for bladder catheter) | BD Medical | 427435 | |
| Pressure Transducer | ADInstruments | MLT1199 | |
| Pyrex Culture Tubes | Corning Inc. | 99445-12 | |
| Rat Femoral Tapered Artery Catheter | Strategic Applications Inc. | RFA-01 | |
| Salix Furosemide 5% | Intervet | #34-478 | |
| Strabismus Scissors | Fine Science Tools | 14075-11 | |
| Student Surgical Scissors | Fine Science Tools | 91402-12 | |
| Surgical Gloves | Kimberly-Clark | Sterling Nitrile Gloves | |
| Syringe pump | Razel Scientific | R99-E | |
| Tissue Forceps | Fine Science Tools | 91121-12 | |
| Tissue Scissors | George Tiemann Co | 105-420 | |
5-0 Braided Silk Surgical Suture Surgical Specialties Corp SP1033 Assay Plate, 96-Well Costar 3922 Bovine Serum Albumin Sigma Chemical Co A2934-25G Centrifuge Beckman Coulter MicroFuge 18, 357160 Conical Sample Tubes Dot Scientific Inc. #711-FTG Cotton Tipped Applicators Solon Manufacturing Co 56200 Data Acquisition Software ADInstruments LabChart Pro 7.0 Digital Scale Denver Instrument APX-4001 FITC-Inulin Sigma Chemical Co F3272-1G Gauze Sponges Covidien 2146 Heated Surgical Bed EZ-Anesthesia EZ-212 Heparin Sagnet NDC 25021-402-10 HEPES Sigma Chemical Co H3375 Isoflurane Abbott Animal Health IsoFlo, 5260-04-05 Isoflurane Vaporizer EZ-Anesthesia EZ-190F Micro Dissecting Forceps Biomedical Research Instruments Inc. 70-1020 Microplate Reader - Fluoroskan ThermoScientific Ascent FL, 5210460 NOVA 5+ Sodium/Potassium Analyzer NOVA BioMedical 14156 Olsen-Hegar Needle Holders with Scissors Fine Science Tools 12002-12 PE-190 (for bladder catheter) BD Medical 427435 Pressure Transducer ADInstruments MLT1199 Pyrex Culture Tubes Corning Inc. 99445-12 Rat Femoral Tapered Artery Catheter Strategic Applications Inc. RFA-01 Salix Furosemide 5% Intervet #34-478 Strabismus Scissors Fine Science Tools 14075-11 Student Surgical Scissors Fine Science Tools 91402-12 Surgical Gloves Kimberly-Clark Sterling Nitrile Gloves Syringe pump Razel Scientific R99-E Tissue Forceps Fine Science Tools 91121-12 Tissue Scissors George Tiemann Co 105-420 |
|||
References
- Silverthorn, D. U. Human Physiology: An integrated approach. , Pearson. (2012).
- Hall, J. E. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 303-344 (2011).
- Levey, A. S. Measurement of renal function in chronic renal disease. Kidney International. 38 (1), 167-184 (1990).
- Thurau, K., Valtin, H., Schnermann, J. Kidney. Annual Review of Physiology. 30, 441-524 (1968).
- Shannon, J. A., Smith, H. W. The excretion of inulin, xylose, and urea by normal and phoriziniaed man. Journal of Clinical Investigation. 14, 393-401 (1935).
- Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements. Journal of Visualized Experiments. (59), (2012).
- Sterner, G., et al. Determining 'true' glomerular filtration rate in healthy adults using infusion of inulin and comparing it with values obtained using other clearance techniques or predictive equations. Scandinavian Journal of Urology and Nephrology. 42, 278-285 (2008).
- Toto, R. D. Conventional measurement of renal function utilizing serum creatinine, creatinine clearance, inulin and para-aminohippuric acid clearance. Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 4 (6), 505-509 (1995).
- Matavelli, L. C., Kadowitz, P. J., Navar, L. G., Majid, D. S. Renal hemodynamic and excretory responses to intra-arterial infusion of peroxynitrite in anesthetized rats. Americam Journal of Physiology. 296, F170-F176 (2009).
- Davidson, W. D., Sackner, M. A. Simplification of the anthrone method for the determination of inulin in clearance studies. Journal of Laboratory, & Clinical Medicine. 62, 351-356 (1963).
- Symes, A. L., Gault, M. H. Assay of inulin in tissues using anthrone. Clinical Biochemistry. 8 (1), 67-70 (1975).
- Shalmi, M., Lunau, H. E., Petersen, J. S., Bak, M., Christensen, S. Suitability of tritiated inulin for determination of glomerular filtration rate. Americam Journal of Physiology. 260 (2 Pt 2), F283-F289 (1991).
- Denton, K. M., Anderson, W. P. Glomerular untrafiltration in rabbits with superficial glomeruli. EUropean Journal of Physiology. 419 (3-4), 235-242 (1991).
- Jobin, J., Bonjour, J. -P. Measurement of glomerular filtration rate in conscious unrestrained rats with inulin infused by implanted osmotic pumps. Americam Journal of Physiology. 248 (5 Pt 2), F734-F738 (1985).
- Lorenz, J. N., Gruenstein, E. A simple, nonradioactive method for evaluating single-nephron filtration rate using FITC-inulin. Americam Journal of Physiology. 276 (1 Pt 2), F172-F177 (1999).
- Qi, Z., et al. Serial determination of glomerular filtration rate in conscious mice using FITC-inulin clearance. Americam Journal of Physiology. 286 (3), F590-F596 (2004).
- Bivona, B. J., Park, S., Harrison-Bernard, L. M. Glomerular filtration rate determinations in conscious type II diabetic mice. Americam Journal of Physiology. 300 (3), F618-F625 (2011).
- Rosen, S. M. Effects of anaesthesia and surgery on renal hemodynamics. British Journal of Anesthesiology. 44, 252-258 (1972).
- Cousins, M. J. Anesthesia and the kidney. Anaesthesia and intensive care. 11 (4), 292-320 (1983).
- Walter, S. J., Zewde, T., Shirley, D. G. The effect of anaesthesia and standard clearance procedures on renal function in the rat. Quarterly Journal of Experimental Physiology. 74, 805-812 (1989).
- Rieg, T. A. A high-throughput method for measurement of glomerular filtration rate in conscious mice. Journal of Visualized Experiments. (75), (2013).
