Protocol
До любой процедуры животных, уход за животными институциональная и использование комитет (IACUC) должен утвердить протокол. Этот протокол был одобрен Университет штата Мичиган IACUC.
1. Предварительная подготовка лаборатории FITC-инулин решения
- Теплые 20 мл физиологического раствора до 70 ° С и медленно перемешивают в 100 мг FITC-инулин (5 мг / мл FITC-инулин), пока все инулин не растворится.
- Холодный раствор до комнатной температуры и добавить 800 мг бычьего сывороточного альбумина (40 мг / мл БСА, лиофилизированный порошок, по существу, глобулина, низкое эндотоксин, ≥98% чистоты электрофорезом в агарозном геле).
- Фильтр инулин-BSA решение с фильтровальной бумаги (сорт 1). Поместите отфильтрованного раствора в 20 мл шприц с шприц-фильтр наконечника (0,2 мкм) и накрыть фольгой, чтобы защитить от света.
2. Анестезия и хирургия
- Поместите крысу в индукционной камере, заполненной 5% изофлуран для индукции анестезии. Запись Совет директорову вес (250-350 г) и поместить крысу на платформе хирургической нагретого предназначена для поддержания 37 ° С температуру тела в течение всего эксперимента. Аккуратно закрепите крысу на платформу с лабораторным ленты на лапах. Поддержание анестезии с 1-2% изофлуран с медицинской ранга 100% O 2 при скорости воздушного потока 0,8-1,0 л / мин.
- Вставьте коническую катетер (внутрисосудистого наконечник OD, 2.7F) в бедренную артерию для кровяного давления и сердечного ритма мониторинга и отбора проб крови.
- Вставьте катетер (РЕ-50) в бедренную вену для инулина инфузии. Закрепите катетер окружающие ткани с 5-О плетеные шелковой хирургической нити 6.
- Прикрепите артериальный катетер с тензометрическим избыточного давления. Запись кровяное давление и частоту сердечных сокращений с помощью программного обеспечения сбора данных и отображение на экране компьютера в режиме реального времени. Этот метод показал подробно на видео 6.
- Expose мочевого пузыря с помощью надлобковой разрез. Вырезать небольшойотверстие в кончике мочевого пузыря и вставить канюлю (РЕ-190) с тепловой вспыхнул наконечник внутри мочевого пузыря для сбора мочи. Закрепите канюли мочевого пузыря с кошелька струн шва.
3. Моча и забор крови
- Поместите шприц FITC-инулин в шприцевой насос с расходом набор 1 мл / ч на 100 г массы тела (3 мл / ч для крысы весом 300 г). Прикрепите шприц к бедренной вены катетер. Начните инулина настой и позволяют период уравновешивания 1-2 ч. Держите шприц покрытый фольгой, чтобы защитить от света.
- Определить, если скорость потока мочи является стабильным и достаточно для анализа образца (20 мкл / мин) путем сбора мочи в предварительно взвешенную пробирку для сбора в течение 10 мин. Определить объем мочи гравиметрическим с цифровой шкалой. Адекватный объем мочи в течение 10 мин сбора составляет 0,2 мл. Продолжайте собирать образцы мочи до двух последовательных коллекции не указать скорость потока мочи от 20 мкл / мили более.
- Образцы предварительно наркотиков
- Соберите образец мочи в течение периода 20 мин. Собирают пробы крови (0,5 мл) с артериальным катетером в середине периода сбора мочи. Будьте осторожны, чтобы полностью очистить артериального катетера физиологического раствора перед сбором образца крови в пробирку, содержащую сбора 1 U гепарина. Используйте сбора флаконов с маркировкой объема для облегчения сбора 0,5 мл артериальной крови.
- Флеш артериальный катетер с гепарин-физиологический раствор (20 ед / мл), чтобы удалить катетер крови (прибл. 0,1 мл). Длина артериальный катетер должен быть как можно короче, чтобы ограничить объем физиологического раствора гепарин-необходимого для очистки.
Примечание: Разведенные образцы крови производят неточные расчеты СКФ и фракционной экскреции Na и К. - Подождите 10 мин, и повторить сбор мочи второго предварительного наркотиков и пробы крови.
- После сбора двух образцов Предварительная наркотиков, администрировать мочегонным Дрюг, фуросемид (10 мг / кг), через артериальный катетер. Промойте артериальный катетер с гепарином физиологического раствора, чтобы очистить катетер препарата. Позаботьтесь, чтобы предотвратить инъекции воздуха через артериальный катетер. Запишите время на фуросемид инъекции.
- Образцы после наркотиков: На каждом из 3 временных точках ниже, собирают мочу в течение периода сбора 10 мин, и пробы крови (0,5 мл) в середине периода сбора мочи.
- Для пост-наркотическими образца 1 - собрать пять минут после фуросемида.
- Для пост-наркотическими Пример 2 - собрать десять минут после фуросемида.
- Для образца Сообщение с наркотиками 3 - собрать пятнадцать минут после фуросемида.
- После того как все образцы были собраны, усыпить крысу в соответствии с институциональными процедурами по торакотомии и удаления сердца. Снимите обе почки. Decapsulate (удалить окружающий мембрану) и промокните почки, чтобы удалить лишнюю кровь. Взвесьте почки.
- Измерьте все объемы проб мочи гравиметрически с цифровой шкале, и записывать вес.
- Центрифуга образцы цельной крови с настольной центрифуге (1800 XG), чтобы отделить плазму. Перевести образцы плазмы малых маркированных флаконах.
- Анализ концентрации Na и К в моче и плазме образцов с помощью анализатора натрия / калия.
- Измерение FITC-инулина в плазме и моче
- Развести мочу до наркотиков (от 1: 200 до 1: 400) и моче после лекарственной (1:10) с HEPES буфера (500 мМ, рН 7,4).
- Добавить 40 мкл стандарта или пробы и 60 мкл HEPES буфера в 96-луночный планшет (один образец на лунку) и позволяют смешиваться в течение 10 мин, а покрытые алюминиевой фольгой.
- Создание стандартной кривой для FITC-инулин для концентрации 6,25, 12,5, 25, 50, 100, 200, 400 мкг / мл (рис 1). Определить FITC-инулин флуоресценции в образцах и стандартам с использованием планшетного с эксцитата и выбросов длины волн 485 и 538 нм, соответственно.
- Установите флуоресцентные значения стандартов в 4-параметра Я логистической функции регрессионного анализа. Параметры функции регрессии используются для вычисления концентрации ФИТЦ-инулин в плазме и моче образцов (таблица 1).
5. После лабораторного анализа результатов: Расчеты
- Рассчитать скорость потока мочи (UV; мл / мин): [объем собранной мочи (мл)] ÷ [время сбора (мин)]
- Рассчитать клубочковой фильтрации (СКФ; мл / мин): [Моча концентрация инулина (мкг / мл) х UV (мл / мин)] ÷ [плазменным инулин конц. (Мкг / мл)]
- Рассчитать Filtered нагрузки натрия (мкмоль / мин): концентрация натрия плазмы (мкмоль / мл) х СКФ (мл / мин)
- Рассчитать натрия экскреции Оценить (U Na V; мкмоль / мин): Моча концентрация натрия (мкмоль / мл) х UV (мл / мин)
- Рассчитать фракционная экскреция натрия (Na FE;%): [U Na V (мкмоль / мин)] ÷ [Отфильтрованный нагрузки натрия (мкмоль / мин)] х 100
- Рассчитать Отфильтровано калия Load (мкмоль / мин): концентрация калия в плазме (мкмоль / мл) х СКФ (мл / мин)
- Рассчитать калия экскреции Оценить (U K V; мкмоль / мин): Моча концентрация калия (мкмоль / мл) х UV (мл / мин)
- Рассчитать фракционная экскреция калия (K FE;%): [U К V (мкмоль / мин)] ÷ [с фильтром калия нагрузки (мкмоль / мин)] х 100
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Мочегонное используется в лабораторной демонстрации был фуросемид, который очень быстро ингибирует реабсорбцию Na и K фильтруется почками, что приводит к увеличению Na, К и воды экскреции в течение нескольких минут введения препарата. По его основного механизма, фуросемид должна иметь минимальное воздействие на СКФ и отфильтрованного нагрузки Na и К, но увеличит поток мочи, и фракционная экскреция Na и К.
Представительные результаты в таблице 3, показывают, что в анестезированных крыс, среднее значение предварительно лекарственных средств для СКФ была 3,2 мл / мин, Na экскреции 0,58 мкмоль / мин (0,1% отфильтрованного нагрузки), и К 4,4 экскреции мкмоль / мин (27% отфильтрованного нагрузки). Пять минут после фуросемида (пост-препарата 1), СКФ и отфильтрованного нагрузки Na и К были затронуты. Тем не менее, фракционной экскреции Na увеличилась до 11,5%, а фракционная экскреция К увеличена до 63% соответствующих отфильтрованных нагрузок. Измерения MAР и HR показывают, что фуросемид был минимальное воздействие на карте и HR (таблица 2).
Индексы функции почек оценивали в лабораторной демонстрации были СКФ, определяется как скорость, с которой плазма фильтруется через почки; отфильтрованный Na и К, определяется как скорость, с которой Na и К отфильтрованной через почки; На и К Выведение Оценить, определяется как скорость, с которой Na и К выводится почками; и фракционной экскреции натрия и калия, определяется как процент отфильтрованного Na и K, который выводится через почки
Рисунок 1: Инулин. Стандартная кривая флуоресценции FITC значения приведены для стандартов, содержащих 6,25, 12,5, 25, 50, 100, 200 и 400 мкг / мл инулин. 4-параметра Я логистический анализ функция регрессии формирует оптимальную кривую. Параметры функции регрессии этой кривой были использованы для расчета FIКонцентрация ТК-инулин в образцах плазмы и мочи.
| Флуоресценции FITC-инулин | Концентрация | Результат | ||||
| Стандарт | повторить 1 | повторить 2 | Имею в виду | мкг / мл | Разведение | мкг / мл |
| Пустой | 63,9 | 64,8 | 64,4 | 0,4 | 1 | 0,4 |
| 6.25 | 253,2 | 264,1 | 258,7 | 5.9 | 1 | 5.9 |
| 12,5 | 474,0 </ TD> | 491,3 | 482.7 | 12,5 | 1 | 12,5 |
| 25 | 854,8 | 881,3 | 868,1 | 24,4 | 1 | 24,4 |
| 50 | 1617,1 | 1618,0 | 1617,6 | 50,3 | 1 | 50,3 |
| 100 | 2813,1 | 2846,1 | 2829,6 | 101,3 | 1 | 101,3 |
| 200 | 4367,3 | 4588,7 | 4478,0 | 198,2 | 1 | 198,2 |
| 400 | 6258,0 | 6650,0 | 6454,0 | 401,6 | 1 | 401,6 |
| Моча Образец | ||||||
| Предварительно препарат 1 | 2443,9 | 2062,3 | 2253,1 | 88,5 | 200 | 17700 |
| Предварительно препарат 2 | 2266,5 | 1707,0 | 1986,8 | 76,3 | 200 | 15250 |
| Сообщение наркотиков 1 | HT "> 1208,91391,2 | 1300,1 | 44,7 | 10 | 447 | |
| Сообщение наркотиков 2 | 2753,4 | 2120,5 | 2437,0 | 97,0 | 10 | 970 |
| Сообщение наркотиков 3 | 2888,3 | 3178,0 | 3033,2 | 124,4 | 10 | 1244 |
Таблица 1:. Примеры Результаты значений флуоресценции Инулин Анализ FITC-инулин показаны для реагента бланка, стандартов 7 и 5 образцах мочи. Стандарты и образцы анализировали в двух экземплярах и разбавляют по мере необходимости. Средняя флуоресценции для каждого образца использовали для расчета концентрации инулина. Концентрации инулин в этих образцах мочи, включены в таблицу измерений (таблица 2).
Таблица 2: Измерения Записанные в почечной функции Лаборатории Демонстрация Переменные, записанные в течение пяти периодов (два Предварительно препарат и три после наркотиков) почечной функции лаборатории демонстрации правый и левый вес почек, среднее артериальное давление (САД),. сердечных сокращений (ЧСС), образец раз, объем мочи, плазмы и мочи натрия (Na), калий (К), а концентрации инулина. Концентрации инулин мочи были определены из инулина анализе, показанном в таблице 1.
25table3.jpg "/>
Таблица 3:. Почечная Функциональные параметры, рассчитанные из записанных измерений с использованием формулы, приведенные в разделе 5 Протокола, записанные переменные (таблица 2) используются для расчета скорости потока мочи, скорости клубочковой фильтрации (СКФ), вес СКФ / г почек, скорость экскреции , фильтруют нагрузки и фракционной экскреции натрия (Na) и калия (K), в течение двух предварительного препарата и три после наркотиков периодов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Соответствующий маркер для измерения СКФ должны соответствовать четырем критериям: быть свободно фильтруется в клубочках, несвязанного быть с белками плазмы, и ни поглощается ни секретируется в нефрона. Инулин фруктозы полимер, который удовлетворяет этим критериям. В результате, почечный клиренс инулина считается золотым стандартом для измерения СКФ 7. Продемонстрировали технику представляет традиционный подход определения почечного клиренса инулина, используя приурочен сбора мочи во время постоянной инфузии инулина 8,9. Традиционные измерения инулин были сделаны с использованием метода антроновых для получения количественного колориметрического определения инулина, измеренного спектрофотометрически 10,11. Тем не менее, в попытке облегчить измерение инулина в меньших объемах мочи и плазмы, инулин был помечен радиоактивным 12-14 и 15-17 флуоресцентных меток. Лаборатория демонстрация представлены в этом видео USed FITC помечены инулин для измерения функции почек из-за отсутствия риска воздействия на человека излучения и легкости измерения FITC флуоресценции 15.
Эта лаборатория демонстрация призвана обеспечить концептуальное понимание о том, как измерить функцию почек для студентов с минимальными лабораторных навыков. Таким образом, препарат предварительно лаборатория FITC-инулин раствора и хирургического подготовки животных выполняются опытных специалистов до начала демонстрации. Студенты приезжают на демонстрации в конце 1-2 ч период инулин уравновешивания. В это время, студенты представлены в обзоре Предварительно лаборатории и информацию о процедурах, которые были проведены на животных. Два студента назначается одном эксперименте животных, и проинструктированы о том, чтобы собрать образцы крови и мочи до и после введения мочегонного препарата. Анализ крови и мочи проводится experienced техники и результаты доставляются студентов для расчетов функции почек. Результаты будут представлены в ходе пост-обсуждения лаборатории, которые могут быть запланированной после демонстрации.
Есть несколько важных шагов в рамках протокола застраховать действительные ответы. Во-первых, FITC инулин должен быть полностью растворен и фильтруют перед введением животным. В идеале, FITC инулин должен быть диализу в воде в течение 48 ч при комнатной температуре, чтобы удалить остатки несвязанного FITC. Во-вторых, образцы плазмы должны быть свободны от физиологического раствора. Студенты проинструктированы собирать пробы крови только после того, как все физиологическом растворе в артериальный катетер был исключен, и только кровь течет из катетера. Образцы крови, которые разводили физиологическим раствором обеспечит неточные значения для плазмы инулина, натрия и калия. В-третьих, поток мочи должен быть устойчивым и достаточно, чтобы производить достаточное количество образца для анализа. Постоянная скорость потока мочи в начале исследования важно, потому что это признакстабильная экспериментальная подготовка. Если поток мочи является слишком низкой, скорость инфузии инулина может быть увеличена до образец коллекции. Однако вливание инулина должно быть постоянным в течение всего эксперимента, т.е. скорость инфузии инулин не должны быть скорректированы в ходе эксперимента. И, наконец, измерение инулина флуоресценции в образцах плазмы и мочи с помощью микропланшет-ридера имеет решающее значение для успешного эксперимента. С характеристиками микропланшетного будут определять, если образцы требуют разведения, рекомендуется пробный пуск инулина анализа проводиться до лаборатории демонстрации в целях оптимизации спецификации микропланшетного и убедитесь, что значения флуоресценции образца в середине диапазона стандартной кривой.
При оценке функции почек на основе почечного клиренса инулина считается золотым стандартом, этот метод имеет ограничения, потому что животные должны быть под наркозом, иинструментальной с сосудистыми и мочевого пузыря катетеров. Anesthethetic агенты было показано, влияют почечной гемодинамики и СКФ 18,19; Однако изофлуран и Инактин обычно используются в экспериментах функции почек в связи с их минимальным воздействием на функцию почек 19,20. Техника инулин оформление также требует постоянного вливания инулина и несколько крови и плазмы образцов, которые могут быть непомерно в небольших животных, таких как мыши. Модификации этой методики были разработаны, чтобы позволить измерение плазменной очистки от одной инъекции инулина в сознании животных 21. Эти модификации также требуют меньших объемов образцов крови для анализа, и обеспечивают альтернативный способ оценки функции почек у мышей.
Измерение функции почек применяется к изучению физиологии, патологии, токсикологии, фармакологии и болезненных состояний. Студенты, которые участвуют в почечной функции демонстрации узнаете тон золотой стандарт техника почечного клиренса инулина оценить функцию почек. Освоив эту технику, студенты будут понимать принципы функции почек и позволяют им применять технику, чтобы их собственные исследования и определить, если изменения в технике являются подходящими для их исследований.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов. В мнения или утверждения, содержащиеся в данном документе, являются частные мнения автора и не должны быть истолкованы в качестве официальной или как отражающие взгляды Департамента армии или министерства обороны.
Acknowledgments
Источник финансирования для лабораторной демонстрации был NIGMS грант: GM077119. Мы благодарим д-р Джозеф Р. Хейвуд и д-ра Питера Коббет за их поддержку в коротких Couse в интегративной и органов системы фармакологии. Мы также благодарим г-жу Ханна Гарвер за техническую поддержку лаборатории демонстрации.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 5-0 Braided Silk Surgical Suture | Surgical Specialties Corp | SP1033 | |
| Assay Plate, 96-Well | Costar | 3922 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma Chemical Co | A2934-25G | |
| Centrifuge | Beckman Coulter | MicroFuge 18, 357160 | |
| Conical Sample Tubes | Dot Scientific Inc. | #711-FTG | |
| Cotton Tipped Applicators | Solon Manufacturing Co | 56200 | |
| Data Acquisition Software | ADInstruments | LabChart Pro 7.0 | |
| Digital Scale | Denver Instrument | APX-4001 | |
| FITC-Inulin | Sigma Chemical Co | F3272-1G | |
| Gauze Sponges | Covidien | 2146 | |
| Heated Surgical Bed | EZ-Anesthesia | EZ-212 | |
| Heparin | Sagnet | NDC 25021-402-10 | |
| HEPES | Sigma Chemical Co | H3375 | |
| Isoflurane | Abbott Animal Health | IsoFlo, 5260-04-05 | |
| Isoflurane Vaporizer | EZ-Anesthesia | EZ-190F | |
| Micro Dissecting Forceps | Biomedical Research Instruments Inc. | 70-1020 | |
| Microplate Reader - Fluoroskan | ThermoScientific | Ascent FL, 5210460 | |
| NOVA 5+ Sodium/Potassium Analyzer | NOVA BioMedical | 14156 | |
| Olsen-Hegar Needle Holders with Scissors | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| PE-190 (for bladder catheter) | BD Medical | 427435 | |
| Pressure Transducer | ADInstruments | MLT1199 | |
| Pyrex Culture Tubes | Corning Inc. | 99445-12 | |
| Rat Femoral Tapered Artery Catheter | Strategic Applications Inc. | RFA-01 | |
| Salix Furosemide 5% | Intervet | #34-478 | |
| Strabismus Scissors | Fine Science Tools | 14075-11 | |
| Student Surgical Scissors | Fine Science Tools | 91402-12 | |
| Surgical Gloves | Kimberly-Clark | Sterling Nitrile Gloves | |
| Syringe pump | Razel Scientific | R99-E | |
| Tissue Forceps | Fine Science Tools | 91121-12 | |
| Tissue Scissors | George Tiemann Co | 105-420 | |
5-0 Braided Silk Surgical Suture Surgical Specialties Corp SP1033 Assay Plate, 96-Well Costar 3922 Bovine Serum Albumin Sigma Chemical Co A2934-25G Centrifuge Beckman Coulter MicroFuge 18, 357160 Conical Sample Tubes Dot Scientific Inc. #711-FTG Cotton Tipped Applicators Solon Manufacturing Co 56200 Data Acquisition Software ADInstruments LabChart Pro 7.0 Digital Scale Denver Instrument APX-4001 FITC-Inulin Sigma Chemical Co F3272-1G Gauze Sponges Covidien 2146 Heated Surgical Bed EZ-Anesthesia EZ-212 Heparin Sagnet NDC 25021-402-10 HEPES Sigma Chemical Co H3375 Isoflurane Abbott Animal Health IsoFlo, 5260-04-05 Isoflurane Vaporizer EZ-Anesthesia EZ-190F Micro Dissecting Forceps Biomedical Research Instruments Inc. 70-1020 Microplate Reader - Fluoroskan ThermoScientific Ascent FL, 5210460 NOVA 5+ Sodium/Potassium Analyzer NOVA BioMedical 14156 Olsen-Hegar Needle Holders with Scissors Fine Science Tools 12002-12 PE-190 (for bladder catheter) BD Medical 427435 Pressure Transducer ADInstruments MLT1199 Pyrex Culture Tubes Corning Inc. 99445-12 Rat Femoral Tapered Artery Catheter Strategic Applications Inc. RFA-01 Salix Furosemide 5% Intervet #34-478 Strabismus Scissors Fine Science Tools 14075-11 Student Surgical Scissors Fine Science Tools 91402-12 Surgical Gloves Kimberly-Clark Sterling Nitrile Gloves Syringe pump Razel Scientific R99-E Tissue Forceps Fine Science Tools 91121-12 Tissue Scissors George Tiemann Co 105-420 |
|||
References
- Silverthorn, D. U. Human Physiology: An integrated approach. , Pearson. (2012).
- Hall, J. E. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 303-344 (2011).
- Levey, A. S. Measurement of renal function in chronic renal disease. Kidney International. 38 (1), 167-184 (1990).
- Thurau, K., Valtin, H., Schnermann, J. Kidney. Annual Review of Physiology. 30, 441-524 (1968).
- Shannon, J. A., Smith, H. W. The excretion of inulin, xylose, and urea by normal and phoriziniaed man. Journal of Clinical Investigation. 14, 393-401 (1935).
- Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements. Journal of Visualized Experiments. (59), (2012).
- Sterner, G., et al. Determining 'true' glomerular filtration rate in healthy adults using infusion of inulin and comparing it with values obtained using other clearance techniques or predictive equations. Scandinavian Journal of Urology and Nephrology. 42, 278-285 (2008).
- Toto, R. D. Conventional measurement of renal function utilizing serum creatinine, creatinine clearance, inulin and para-aminohippuric acid clearance. Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 4 (6), 505-509 (1995).
- Matavelli, L. C., Kadowitz, P. J., Navar, L. G., Majid, D. S. Renal hemodynamic and excretory responses to intra-arterial infusion of peroxynitrite in anesthetized rats. Americam Journal of Physiology. 296, F170-F176 (2009).
- Davidson, W. D., Sackner, M. A. Simplification of the anthrone method for the determination of inulin in clearance studies. Journal of Laboratory, & Clinical Medicine. 62, 351-356 (1963).
- Symes, A. L., Gault, M. H. Assay of inulin in tissues using anthrone. Clinical Biochemistry. 8 (1), 67-70 (1975).
- Shalmi, M., Lunau, H. E., Petersen, J. S., Bak, M., Christensen, S. Suitability of tritiated inulin for determination of glomerular filtration rate. Americam Journal of Physiology. 260 (2 Pt 2), F283-F289 (1991).
- Denton, K. M., Anderson, W. P. Glomerular untrafiltration in rabbits with superficial glomeruli. EUropean Journal of Physiology. 419 (3-4), 235-242 (1991).
- Jobin, J., Bonjour, J. -P. Measurement of glomerular filtration rate in conscious unrestrained rats with inulin infused by implanted osmotic pumps. Americam Journal of Physiology. 248 (5 Pt 2), F734-F738 (1985).
- Lorenz, J. N., Gruenstein, E. A simple, nonradioactive method for evaluating single-nephron filtration rate using FITC-inulin. Americam Journal of Physiology. 276 (1 Pt 2), F172-F177 (1999).
- Qi, Z., et al. Serial determination of glomerular filtration rate in conscious mice using FITC-inulin clearance. Americam Journal of Physiology. 286 (3), F590-F596 (2004).
- Bivona, B. J., Park, S., Harrison-Bernard, L. M. Glomerular filtration rate determinations in conscious type II diabetic mice. Americam Journal of Physiology. 300 (3), F618-F625 (2011).
- Rosen, S. M. Effects of anaesthesia and surgery on renal hemodynamics. British Journal of Anesthesiology. 44, 252-258 (1972).
- Cousins, M. J. Anesthesia and the kidney. Anaesthesia and intensive care. 11 (4), 292-320 (1983).
- Walter, S. J., Zewde, T., Shirley, D. G. The effect of anaesthesia and standard clearance procedures on renal function in the rat. Quarterly Journal of Experimental Physiology. 74, 805-812 (1989).
- Rieg, T. A. A high-throughput method for measurement of glomerular filtration rate in conscious mice. Journal of Visualized Experiments. (75), (2013).
