Protocol
Före varje djur förfarande, måste den institutionella djurvård och användning kommittén (IACUC) godkänna protokollet. Detta protokoll godkändes av Michigan State University IACUC.
1. Pre-lab Framställning av FITC-inulin Lösning
- Varm 20 ml saltlösning till 70 ° C och långsamt rör i 100 mg av FITC-inulin (5 mg / ml FITC-inulin) tills allt inulin är upplöst.
- Kyla lösningen till rumstemperatur och tillsätt 800 mg bovint serumalbumin (40 mg / ml BSA, lyofiliserat pulver, väsentligen globulin fria, låg endotoxin, ≥98% renhet genom agarosgelelektrofores).
- Filtrera inulin-BSA lösning med filterpapper (klass 1). Placera filtrerade lösningen i en 20 ml spruta med en spruta-tip filter (0,2 pm) och täck med folie för att skydda mot ljus.
2. Anestesi och kirurgi
- Placera råttan i en induktionskammare fylld med 5% isofluran för att inducera anestesi. Spela body vikt (250-350 g) och placera råttan på en uppvärmd kirurgisk plattform som syftar till att bibehålla 37 ° C kroppstemperatur genom hela experimentet. Försiktigt fast råttan till plattformen med laboratorie tejp över tassarna. Upprätthålla anestesi med 1-2% isofluran med medicinsk kvalitet 100% O2 vid luftflödeshastighet av 0,8-1,0 l / min.
- Sätt i ett avsmalnande kateter (intravaskulärt spets OD, 2.7F) i lårbensartären för blodtryck och pulsmätning och blodprovstagning.
- Sätt en kateter (PE-50) i femoralvenen för inulin infusion. Säkra katetern till omgivande vävnad med 5-O flätad silke Surgical Suture 6.
- Fäst arteriell kateter till en töjningsgivare tryckomvandlare. Spela blodtryck och hjärtfrekvens med hjälp av datainsamling programvara och visning på en datorskärm i realtid. Denna teknik visas i detalj på video 6.
- Exponera blåsan via en suprapubisk snitt. Skär ett litethål i spetsen av blåsan och för in en kanyl (PE-190) med ett värme utsvängd spets inuti bälgen för urinuppsamling. Fäst kanylen till urinblåsan med en handväska sträng sutur.
3. urin och blod Collection
- Placera sprutan av FITC-inulin i en sprutpump med flödeshastigheten satt av en ml / h per 100 g kroppsvikt (3 ml / h för en råtta som vägde 300 g). Fäst sprutan på lårbens venkateter. Starta inulinet infusion och tillåta en 1-2 h jämviktsperiod. Håll sprutan täckt med folie för att skydda mot ljus.
- Bestäm om urinflödeshastigheten är stabil och lämplig för provanalys (20 ul / min) genom uppsamling av ett urinprov i en förvägd flaska samling under en period av 10 minuter. Bestäm urinvolym gravimetriskt med en digital skala. En adekvat urinvolym för en 10 min insamlingsperioden är 0,2 ml. Fortsätta att samla in urinprover tills två på varandra följande samlingar indikerar en urinflödeshastighet av 20 | j, l / mi eller mer.
- Pre-Läkemedelsprover
- Samla ett urinprov under en 20-minutersperiod. Samla ett blodprov (0,5 ml) från den arteriella katetern vid mittpunkten av urinuppsamlingsperioden. Var noga med att helt klart arteriell kateter saltlösning innan uppsamling av ett blodprov i ett uppsamlingskärl innehållande 1 U heparin. Använd insamlingsflaskor med volymmarkeringar för att underlätta insamlingen av 0,5 ml artärblod.
- Spola arteriell kateter med heparin-saltlösning (20 U / ml) för att rensa katetern i blodet (ung. 0,1 ml). Längden på arteriell kateter bör vara så kort som möjligt för att begränsa omfattningen av heparin-saltlösning som krävs för att spola.
Obs: Utspädda blodprov ge felaktiga beräkningar av GFR och fraktions utsöndringen av Na och K. - Vänta 10 minuter och upprepa insamlingen av en andra Pre-drog urin och blodprov.
- Efter samling av två före drogprover, administrera ett diuretikum drug, furosemid (10 mg / kg) via den arteriella katetern. Spola arteriella katetern med hepariniserad koksaltlösning för att rensa katetern av läkemedlet. Var noga med att undvika injektion av luft genom arteriell kateter. Anteckna tiden för furosemid injektion.
- Post-drog Prov: Vid var och en av de tre tidpunkterna nedan, samla ett urinprov under en 10 min uppsamlingsperiod, och ett blodprov (0,5 ml) vid mittpunkten av urinuppsamlingsperioden.
- För efter drog Prov 1 - samla fem minuter efter furosemid.
- För efter drog Prov 2 - samla tio minuter efter furosemid.
- För efter drog Prov 3 - samla femton minuter efter furosemid.
- Efter har samlat alla prover, euthanize råttan i enlighet med institutionella förfaranden efter torakotomi och borttagning av hjärtat. Ta bort båda njurarna. Decapsulate (ta bort den omgivande membran) och blot njurarna för att avlägsna överskott blod. Väg njurarna.
- Mät alla urin provvolymer gravimetriskt med en digital skala och rekordvikt.
- Centrifugera helblodsprover med bordscentrifug (1800 xg) för att separera plasma. Överför plasmaprover till små märkta ampuller.
- Analysera Na och K koncentrationer i urin och plasmaprover med en natrium / kalium analysator.
- Mätning av FITC-inulin i plasma och urin
- Späd före läkemedlet urin (från 1: 200 till 1: 400), och post-drog urin (01:10) med HEPES-buffert (500 mM, pH 7,4).
- Lägg 40 | il av standard eller prov och 60 | il av HEPES-buffert i en 96-brunnsplatta (ett prov per brunn) och låt blanda under 10 min medan täckt med aluminiumfolie.
- Generera en standardkurva för FITC-inulin för koncentrationer av 6,25, 12,5, 25, 50, 100, 200, 400 | ig / ml (Figur 1). Bestäm FITC-inulin fluorescens i prover och standarder med hjälp av en mikroplattläsare med excitation och emissionsvåglängder på 485 och 538 nm, respektive.
- Montera fluorescerande värden för standarder till en 4-parameter logistisk funktion regressionsanalys. Regressionsfunktionsparametrar som används för att beräkna FITC-inulin koncentration i plasma och urinprover (tabell 1).
5. Post-lab Analys av resultat: Beräkningar
- Beräkna Urin Flöde (UV, ml / min): [volym urin (ml)] ÷ [tidpunkten för insamlingen (min)]
- Beräkna glomerulär filtrationshastighet (GFR; ml / min): [Urin inulin koncentration (pg / ml) x UV (ml / min)] ÷ [Plasma inulin konc. (Pg / ml)]
- Beräkna Filtrerad Natrium Belastning (imol / min): Plasmanatriumkoncentration (| j, mol / ml) x GFR (ml / min)
- Beräkna Natrium utsöndringshastigheten (U Na V, j, mol / min): Urin natriumkoncentration (| j, mol / ml) x UV (ml / min)
- Beräkna Bråk utsöndring av natrium (FE Na,%)[U Na V (mol / min)] ÷ [filtrerad Natrium Load (mol / min)] x 100
- Beräkna Filtrerad Kalium Belastning (imol / min): Plasmakaliumkoncentration (| j, mol / ml) x GFR (ml / min)
- Beräkna Kalium utsöndringshastigheten (U K V, mol / min): urin kalium koncentration (mol / ml) x UV (ml / min)
- Beräkna Bråk utsöndring av kalium (FE K,%): [U K V (mol / min)] ÷ [filtrerad Kalium Load (mol / min)] x 100
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den diuretikum används i labbet demonstrationen var furosemid som mycket snabbt hämmar återupptag av Na och K filtreras av njurarna leder till ökad Na, K, och vatten utsöndring inom några minuter från läkemedelsadministrering. Genom sin primära mekanismen, bör furosemid ha minimala effekter på GFR och den filtrerade belastningen av Na och K, men kommer att öka urinflödet, och fraktions utsöndringen av Na och K.
De representativa resultaten i tabell 3 visar att i en bedövad råtta, genomsnittet av de för-läkemedelsvärden för GFR var 3,2 ml / min, Na utsöndring var 0,58 | imol / min (0,1% av den filtrerade belastning), och K-utsöndring var 4,4 imol / min (27% av den filtrerade belastning). Fem minuter efter furosemid (post-läkemedel 1), GFR och den filtrerade belastningen av Na och K var opåverkad. Emellertid, fraktionerad utsöndring av Na ökade till 11,5%, och fraktionerad utsöndring av K ökade till 63% av respektive filtrerade laster. Mätningarna av MAP och HR tyder på att furosemid hade minimala effekter på MAP och HR (tabell 2).
Indexen för njurfunktionen bedömas i laboratoriet demonstrationen var GFR, definierat som den hastighet med vilken plasma filtreras genom njurarna; den filtrerade Na och K, som definieras som den hastighet med vilken Na och K filtreras av njuren; Na och K utsöndringshastigheten, definierad som den hastighet med vilken Na och K utsöndras av njuren; och fraktionerad Utsöndring av Na och K, definierad som den procentuella andelen filtrerades Na och K som utsöndras via njurarna
Figur 1:. Inulin standardkurva FITC fluorescensvärdena visas för standarder som innehåller 6,25, 12,5, 25, 50, 100, 200 och 400 mikrogram / ml inulin. En 4-parameter logistisk funktion regressionsanalys genererar bäst anpassade kurvan. De regressionsfunktionsparametrar från denna kurva användes för att beräkna FITC-inulin koncentration i plasma och urinprover.
| FITC-inulin fluorescens | Koncentration | Resultat | ||||
| Standard | replikera en | replikera 2 | Medelvärde | ^ g / ml | Utspädning | ^ g / ml |
| Blank | 63,9 | 64,8 | 64,4 | 0,4 | 1 | 0,4 |
| 6,25 | 253,2 | 264,1 | 258,7 | 5,9 | 1 | 5,9 |
| 12,5 | 474,0 </ Td> | 491,3 | 482,7 | 12,5 | 1 | 12,5 |
| 25 | 854,8 | 881,3 | 868,1 | 24,4 | 1 | 24,4 |
| 50 | 1617,1 | 1618,0 | 1617,6 | 50,3 | 1 | 50,3 |
| 100 | 2813,1 | 2846,1 | 2829,6 | 101,3 | 1 | 101,3 |
| 200 | 4367,3 | 4588,7 | 4478,0 | 198,2 | 1 | 198,2 |
| 400 | 6258,0 | 6650,0 | 6454,0 | 401,6 | 1 | 401,6 |
| Urin Prov | ||||||
| Pre-läkemedel 1 | 2443,9 | 2062,3 | 2253,1 | 88,5 | 200 | 17700 |
| Pre-läkemedel 2 | 2266,5 | 1707,0 | 1986,8 | 76,3 | 200 | 15250 |
| Post-läkemedel 1 | ht "> 1208,91391,2 | 1300,1 | 44,7 | 10 | 447 | |
| Post-läkemedel 2 | 2753,4 | 2120,5 | 2437,0 | 97,0 | 10 | 970 |
| Post-läkemedel 3 | 2888,3 | 3178,0 | 3033,2 | 124,4 | 10 | 1244 |
Tabell 1:. Exempelresultat Inulin Assay FITC-Inulin fluorescensvärdena visas för reagensämnes, 7 standarder, och 5 urinprover. Standarder och prover analyserades i duplikat och späddes efter behov. Den genomsnittliga fluorescens för varje prov användes för att beräkna koncentrationen av inulin. Inulinet koncentrationerna i dessa urinprover är inkluderade i tabellen över mätningar (Tabell 2).
Tabell 2: Mätningar Inspelade under njurfunktionen Lab Demonstration Variablerna registrerats under fem tidsperioder (två Pre-läkemedel och tre efter läkemedel) av njurfunktionen labbet demonstration är höger och vänster njure vikt, medelartärtryck (MAP),. hjärtfrekvens (HR), provtid, urinvolym, plasma och urin natrium (Na), kalium (K), och inulin koncentrationer. Urin inulin koncentrationer bestämdes från inulinet analysen visas i Tabell 1.
25table3.jpg "/>
Tabell 3:. Njurfunktionsparametrar Beräknade från Inspelade mätningar med formler som visas i protokollet avsnitt 5, inspelade variablerna (tabell 2) används för att beräkna urinflödet, glomerulusfiltration (GFR), GFR / g njurvikt, utsöndringshastighet , filtrerades last, och fraktions utsöndring av natrium (Na) och kalium (K) under de två före-läkemedel och tre efter drog perioder.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
En lämplig markör för GFR mätning måste uppfylla fyra kriterier: fritt filtreras vid glomerulus, vara obundet till plasmaproteiner, och varken absorberas eller utsöndras i nephron. Inulin är en fruktospolymer som uppfyller dessa kriterier. Som en följd av detta njurclearance av inulin ansett guldnormen för att mäta GFR 7. Den visade tekniken representerar den traditionella tillvägagångssättet för att fastställa renal utsöndring av inulin med hjälp av tidsurinsamlingar under en konstant infusion av inulin 8,9. Traditionella mätningar inulin har gjorts med hjälp av antron förfarande för att framställa en kvantitativ kolorimetrisk bestämning av inulin mätt med spektrofotometer 10,11. Men i ett försök att underlätta mätning av inulin i mindre volymer av urin och plasma, inulin har taggats med radioaktiva 12-14, och fluorescerande markörer 15-17. Labbet demonstration som presenteras i denna video used FITC märkt inulin för mätning av njurfunktionen på grund av bristen på risken för exponering mänskliga strålning och enkel mätning av FITC fluorescens 15.
Denna labb demonstration är avsedd att ge en begreppsmässig förståelse av hur man mäter njurfunktion till studenter med minimala laborativa färdigheter. Därför är pre-lab beredning av FITC-inulin lösning, och kirurgisk förberedelse av djuren utförs av erfarna tekniker före början av demonstrationen. Studenterna anländer till demonstrationen i slutet av 1-2 timmar inulin jämviktsperioden. Vid denna tidpunkt, är studenterna presenteras med en Pre-lab överblick och informeras om de förfaranden som har genomförts på djur. Två studenter tilldelas en djurförsök, och instruktioner om hur man samlar blod- och urinprov före och efter administrering av diuretika läkemedlet. Analysen av blod- och urinprover utförs genom experieNCED tekniker och resultaten levereras till studenterna för beräkningar av njurfunktionen. Resultaten presenteras under en Post-lab diskussion som kan schemaläggas efter demonstrationen.
Det finns flera viktiga steg i protokollet att försäkra giltiga svar. För det första måste FITC inulin vara helt upplöst och filtreras före djur administration. Helst bör FITC inulin dialyseras i vatten under 48 h vid RT för att avlägsna kvarvarande obundet FITC. För det andra måste plasmaprov vara fria från saltlösning. Studenter instrueras att samla in ett blodprov först efter alla av saltlösning i artärkatetern har utvisats och endast blod flödar ut ur katetern. Blodprov som är utspädda med saltlösning ger felaktiga värden för plasma inulin, natrium och kalium. För det tredje måste urinflödet vara stadig och tillräcklig för att producera tillräckligt med prov för analys. En stadig urinflödeshastighet vid baslinjen är kritisk, eftersom det är en indikation påen stabil experimentella preparat. Om urinflödet är alltför låg, kan ökas infusionshastigheten av inulin före provsamlingar. Emellertid måste infusion av inulin vara konstant under loppet av experimentet, dvs inulin Infusionshastigheten skall inte justeras under experimentet. Slutligen är mätningen av inulin fluorescens i plasma- och urinprover genom mikroplattläsare kritisk för ett lyckat experiment. Eftersom specifikationerna för mikro läsaren kommer att avgöra om prover kräver utspädningar rekommenderas att en testkörning av inulin analysen utföras före labbet demonstrationen i ett försök att optimera specifikationerna för mikroplattläsare och se till att provfluorescensvärdena är inom mid-range av standardkurvan.
Även bedömningen av njurfunktionen baserat på njurclearance av inulin anses guldmyntfoten, har denna teknik begränsningar eftersom djuren måste bedövas, ochinstrumenterade med vaskulära och blåskatetrar. Anesthethetic medel har visat sig påverka njur hemodynamik och GFR 18,19; men isofluran och inaktin används vanligen i njurfunktions experiment på grund av deras minimala effekter på njurarna 19,20. Den inulinclearance tekniken kräver också en ständig infusion av inulin och flera blod- och plasmaprover som kan vara oöverkomliga i mindre djur, såsom möss. Ändringar av denna teknik har utvecklats för att möjliggöra mätning av plasmaclearance från en enda injektion av inulin i medvetna djur 21. Dessa modifieringar kräver också mindre volymer av blodprover för analys, och ger en alternativ metod för att bedöma njurfunktion hos möss.
Mätningen av njurfunktionen är tillämplig på studier av fysiologi, patologi, toxikologi, farmakologi och sjukdomstillstånd. Studenter som deltar i njurfunktionen demonstrationen kommer att lära than guldmyntfoten teknik för njurclearance av inulin att bedöma njurfunktionen. Genom att behärska denna teknik, kommer eleverna att förstå principerna för njurfunktion och ge dem möjlighet att tillämpa tekniken till sin egen forskning och avgöra om ändringar i tekniken är lämpliga för sina studier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar att de inte har några konkurrerande ekonomiska intressen. Yttrandena eller påståenden i detta dokument är de privata åsikter av författaren och inte tolkas som tjänsteman eller som avspeglar de synpunkter som avdelningen av armén eller försvarsdepartementet.
Acknowledgments
Den finansieringskälla för labbet demonstrationen var NIGMS bidrag: GM077119. Vi tackar Dr Joseph R. Haywood och Dr Peter Cobbett för deras stöd av Short Couse i integrativ och orgel Systems farmakologi. Vi vill också tacka Ms. Hannah Garver för henne tekniskt stöd från laboratorie demonstration.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 5-0 Braided Silk Surgical Suture | Surgical Specialties Corp | SP1033 | |
| Assay Plate, 96-Well | Costar | 3922 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma Chemical Co | A2934-25G | |
| Centrifuge | Beckman Coulter | MicroFuge 18, 357160 | |
| Conical Sample Tubes | Dot Scientific Inc. | #711-FTG | |
| Cotton Tipped Applicators | Solon Manufacturing Co | 56200 | |
| Data Acquisition Software | ADInstruments | LabChart Pro 7.0 | |
| Digital Scale | Denver Instrument | APX-4001 | |
| FITC-Inulin | Sigma Chemical Co | F3272-1G | |
| Gauze Sponges | Covidien | 2146 | |
| Heated Surgical Bed | EZ-Anesthesia | EZ-212 | |
| Heparin | Sagnet | NDC 25021-402-10 | |
| HEPES | Sigma Chemical Co | H3375 | |
| Isoflurane | Abbott Animal Health | IsoFlo, 5260-04-05 | |
| Isoflurane Vaporizer | EZ-Anesthesia | EZ-190F | |
| Micro Dissecting Forceps | Biomedical Research Instruments Inc. | 70-1020 | |
| Microplate Reader - Fluoroskan | ThermoScientific | Ascent FL, 5210460 | |
| NOVA 5+ Sodium/Potassium Analyzer | NOVA BioMedical | 14156 | |
| Olsen-Hegar Needle Holders with Scissors | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| PE-190 (for bladder catheter) | BD Medical | 427435 | |
| Pressure Transducer | ADInstruments | MLT1199 | |
| Pyrex Culture Tubes | Corning Inc. | 99445-12 | |
| Rat Femoral Tapered Artery Catheter | Strategic Applications Inc. | RFA-01 | |
| Salix Furosemide 5% | Intervet | #34-478 | |
| Strabismus Scissors | Fine Science Tools | 14075-11 | |
| Student Surgical Scissors | Fine Science Tools | 91402-12 | |
| Surgical Gloves | Kimberly-Clark | Sterling Nitrile Gloves | |
| Syringe pump | Razel Scientific | R99-E | |
| Tissue Forceps | Fine Science Tools | 91121-12 | |
| Tissue Scissors | George Tiemann Co | 105-420 | |
5-0 Braided Silk Surgical Suture Surgical Specialties Corp SP1033 Assay Plate, 96-Well Costar 3922 Bovine Serum Albumin Sigma Chemical Co A2934-25G Centrifuge Beckman Coulter MicroFuge 18, 357160 Conical Sample Tubes Dot Scientific Inc. #711-FTG Cotton Tipped Applicators Solon Manufacturing Co 56200 Data Acquisition Software ADInstruments LabChart Pro 7.0 Digital Scale Denver Instrument APX-4001 FITC-Inulin Sigma Chemical Co F3272-1G Gauze Sponges Covidien 2146 Heated Surgical Bed EZ-Anesthesia EZ-212 Heparin Sagnet NDC 25021-402-10 HEPES Sigma Chemical Co H3375 Isoflurane Abbott Animal Health IsoFlo, 5260-04-05 Isoflurane Vaporizer EZ-Anesthesia EZ-190F Micro Dissecting Forceps Biomedical Research Instruments Inc. 70-1020 Microplate Reader - Fluoroskan ThermoScientific Ascent FL, 5210460 NOVA 5+ Sodium/Potassium Analyzer NOVA BioMedical 14156 Olsen-Hegar Needle Holders with Scissors Fine Science Tools 12002-12 PE-190 (for bladder catheter) BD Medical 427435 Pressure Transducer ADInstruments MLT1199 Pyrex Culture Tubes Corning Inc. 99445-12 Rat Femoral Tapered Artery Catheter Strategic Applications Inc. RFA-01 Salix Furosemide 5% Intervet #34-478 Strabismus Scissors Fine Science Tools 14075-11 Student Surgical Scissors Fine Science Tools 91402-12 Surgical Gloves Kimberly-Clark Sterling Nitrile Gloves Syringe pump Razel Scientific R99-E Tissue Forceps Fine Science Tools 91121-12 Tissue Scissors George Tiemann Co 105-420 |
|||
References
- Silverthorn, D. U. Human Physiology: An integrated approach. , Pearson. (2012).
- Hall, J. E. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 303-344 (2011).
- Levey, A. S. Measurement of renal function in chronic renal disease. Kidney International. 38 (1), 167-184 (1990).
- Thurau, K., Valtin, H., Schnermann, J. Kidney. Annual Review of Physiology. 30, 441-524 (1968).
- Shannon, J. A., Smith, H. W. The excretion of inulin, xylose, and urea by normal and phoriziniaed man. Journal of Clinical Investigation. 14, 393-401 (1935).
- Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements. Journal of Visualized Experiments. (59), (2012).
- Sterner, G., et al. Determining 'true' glomerular filtration rate in healthy adults using infusion of inulin and comparing it with values obtained using other clearance techniques or predictive equations. Scandinavian Journal of Urology and Nephrology. 42, 278-285 (2008).
- Toto, R. D. Conventional measurement of renal function utilizing serum creatinine, creatinine clearance, inulin and para-aminohippuric acid clearance. Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 4 (6), 505-509 (1995).
- Matavelli, L. C., Kadowitz, P. J., Navar, L. G., Majid, D. S. Renal hemodynamic and excretory responses to intra-arterial infusion of peroxynitrite in anesthetized rats. Americam Journal of Physiology. 296, F170-F176 (2009).
- Davidson, W. D., Sackner, M. A. Simplification of the anthrone method for the determination of inulin in clearance studies. Journal of Laboratory, & Clinical Medicine. 62, 351-356 (1963).
- Symes, A. L., Gault, M. H. Assay of inulin in tissues using anthrone. Clinical Biochemistry. 8 (1), 67-70 (1975).
- Shalmi, M., Lunau, H. E., Petersen, J. S., Bak, M., Christensen, S. Suitability of tritiated inulin for determination of glomerular filtration rate. Americam Journal of Physiology. 260 (2 Pt 2), F283-F289 (1991).
- Denton, K. M., Anderson, W. P. Glomerular untrafiltration in rabbits with superficial glomeruli. EUropean Journal of Physiology. 419 (3-4), 235-242 (1991).
- Jobin, J., Bonjour, J. -P. Measurement of glomerular filtration rate in conscious unrestrained rats with inulin infused by implanted osmotic pumps. Americam Journal of Physiology. 248 (5 Pt 2), F734-F738 (1985).
- Lorenz, J. N., Gruenstein, E. A simple, nonradioactive method for evaluating single-nephron filtration rate using FITC-inulin. Americam Journal of Physiology. 276 (1 Pt 2), F172-F177 (1999).
- Qi, Z., et al. Serial determination of glomerular filtration rate in conscious mice using FITC-inulin clearance. Americam Journal of Physiology. 286 (3), F590-F596 (2004).
- Bivona, B. J., Park, S., Harrison-Bernard, L. M. Glomerular filtration rate determinations in conscious type II diabetic mice. Americam Journal of Physiology. 300 (3), F618-F625 (2011).
- Rosen, S. M. Effects of anaesthesia and surgery on renal hemodynamics. British Journal of Anesthesiology. 44, 252-258 (1972).
- Cousins, M. J. Anesthesia and the kidney. Anaesthesia and intensive care. 11 (4), 292-320 (1983).
- Walter, S. J., Zewde, T., Shirley, D. G. The effect of anaesthesia and standard clearance procedures on renal function in the rat. Quarterly Journal of Experimental Physiology. 74, 805-812 (1989).
- Rieg, T. A. A high-throughput method for measurement of glomerular filtration rate in conscious mice. Journal of Visualized Experiments. (75), (2013).
