Protocol
NOTA: Todos os procedimentos aqui realizados foram submetidos e aprovados pelo IACUC (Office of Compliance Research) e foram realizadas seguindo as diretrizes do NIH. Ratos usado no paradigma testes comportamentais eram ingênuas e não utilizados para outros testes. O C57BL / 6 selvagem Tipo e bater para fora ratos utilizados no presente protocolo têm sido descritos anteriormente 9 e os dados aqui apresentados são de que manuscrito.
1. Preparação da sala de teste e campo aberto Apparatus
- Usar um campo aberto labirinto unidade múltipla (OFM) que consiste em quatro câmaras de actividade foi usado para esta análise (Figura 1). Cada câmara medido 50 cm (comprimento) x 50 cm (largura) x 38 cm (altura) e foi feita a partir de alta densidade branco e plástico não-porosa.
- Textura os andares do labirinto para a tração durante a deambulação, enquanto as paredes do labirinto eram lisas. Maze quadrantes foram completamente vazio para o objectivo do presente ensaio. Tendo em consideração o resto deste protocol, um único quadrante do labirinto acima descrito, irá ser utilizada para demonstrar a OFM.
- Limpe a câmara com um 95% de etanol antes do uso e antes dos testes subsequentes para remover quaisquer indícios de cheiro deixados pelo mouse assunto anterior.
- Permitir que o etanol se evaporar completamente antes de testar ratinhos. Isso pode levar 5-10 min entre cada sessão de testes.
- Para esta análise, use o software SMART Video Rastreamento de Panlab / Harvard Apparatus para registrar e avaliar o movimento do mouse.
NOTA: Qualquer câmera de monitoramento de vídeo comercial e software pode ser usado para rastrear o assunto de teste e avaliar os resultados do labirinto campo aberto. É muito importante para o usuário final para entender como calibrar e executar o software usado para cada análise individual. Independentemente da câmera de vídeo e software de rastreamento usado, os melhores resultados são obtidos quando a câmera e software estão corretamente calibrados de acordo com as instruções do fabricante. - Realize o teste ipadrão na iluminada sala capaz de conter o aparelho labirinto eo computador necessário para executar o software. Suspender a câmera de vídeo acima do labirinto ou anexando-o para o teto ou usando qualquer sistema de apoio elevada que permite que a lente da câmera para ver toda a área do labirinto (Figura 2).
- Como administrador humano do teste, certifique-se de ter espaço suficiente no quarto para ser completamente não-observável pelos assuntos de teste no labirinto de modo a não influenciar o comportamento dos camundongos.
2. Preparar o Software para medir a atividade
- Abra o software de vídeo Rastreamento.
- Uma vez que o software é aberto, mova o cursor até a opção "rastreamento individual de cada disciplina", localizada na aba "Aquisição de Dados" e único clique para abrir esta opção.
- Escolha a opção "Antecedentes estático", localizado na parte inferior do ecrã.
- Depois de escolher o "fundo Static" é escolhidon, que é necessário para usar o software para tomar uma imagem do labirinto antes da adição dos sujeitos de teste. Para fazer isso, mova o cursor para o botão "Photo" localizado na parte inferior da tela e único clique.
NOTA: O software irá tirar uma foto do cenário sem o assunto de teste que será subtraído da imagem tomada durante o processo de acompanhamento. Isto resulta em apenas o movimento do sujeito a ser analisada pelo software. - Confirmar que a imagem de fundo tomada de cima é completamente removida pelo software de seguimento movendo o cursor para o botão de "teste", localizado na parte inferior da tela e clicar uma vez. Um campo sólido branco será mostrado se a imagem de fundo é completamente removido a partir da imagem de rastreamento. Se as condições de iluminação ou mudar o labirinto é acidentalmente movido, você vai ver negros "sombras" neste domínio, indicando as duas imagens não se adequam perfeitamente coincidentes. Para remediar esta situação, basta repetir step 2.4 supra.
- Depois de confirmar as configurações de fundo, use a opção Tempo 'para configurar o modo como o tempo é controlado durante a aquisição. Para fazer isso, mova o cursor para a aba "Configuração" e clique uma vez sobre o título "intervalos". Use a nova janela aberta para inserir os parâmetros experimentais.
- Para este protocolo, escolheu a opção "tempo programado" como período de acompanhamento de 10 min. Definir o "período de latência" a 5 segundos para permitir que o utilizador coloque o rato no centro do labirinto e afastar-se antes do início do acompanhamento. Introduzir o "tempo de aquisição" de 10 min durante a duração do teste. Defina o "Pare de controle" definida como "Quando o tempo programado (10 min) é longo", que desliga-se automaticamente a câmera e a função de acompanhamento do software.
- Mova o cursor para o botão "Fechar" depois de todos os tempos foram definidos para fechar a janela. Agora você está pronto para iniciar o testeing procedimento.
3. Administração do Aberto Campo de Provas
NOTA: O pacote de software usado neste protocolo permite o rastreamento de até 16 ratos individuais ao mesmo tempo. Para facilidade de realização e, como mencionado acima, o protocolo discutidos aqui é para um único rato usando um único quadrante da OFM. Para o equipamento em uso para este protocolo, um máximo de 4 ratos individuais poderiam ser rastreados usando cada quadrante do labirinto. Se utilizando um labirinto multi-gabinete, depois de colocar o primeiro mouse assunto no quadrante definido, coloque os ratos restantes em seu respectivo quadrante labirinto para análise de rastreamento. Para efeitos do presente protocolo, mais instrução será específica para um único quadrante do labirinto.
- Traga os ratos em suas gaiolas de sua sala que abriga a sala de ensaios. Permitir que a ratinhos para se aclimatarem ao ambiente do processo durante um período mínimo de 30 minutos antes de se iniciar o teste.
- Retirar um único mOuse desde a gaiola, segurando gentilmente sua cauda e coloque o mouse no meio do labirinto campo aberto ao mesmo tempo em ativar o software SMART simplesmente clicando no botão Iniciar para começar a acompanhar o movimento do mouse. É normal que o mouse para mover imediatamente para as paredes periféricas do labirinto e do calendário de liberação e captura do mouse rastreamento deverá coincidir para gravar este movimento.
- Permitir livre e ininterrupto movimento do mouse assunto durante o respectivo quadrante do labirinto para um único período de 10 minutos durante os quais, o software de rastreamento irá gravar o movimento (Figura 3).
- No final do período de teste, pegar o mouse assunto suavemente, removendo-o do labirinto e devolvê-lo à sua gaiola.
- Antes da limpeza do labirinto, contar visualmente os peletes boli fecais presentes no labirinto e gravar os números manualmente para análise posterior.
- Remova todas as pelotas fecais e limpe todas as manchas de urina. Pulverizar o chão e as paredes do quadrante labirinto com 95% de etanol e limpe com uma toalha de papel. Permitir que a solução de etanol para secar completamente antes de testar outros ratinhos.
- Repita o procedimento com o próximo mouse.
4. Medição e Análise do Comportamento Durante procedimentos de teste
NOTA: Para a medição, três aspectos do comportamento campo aberto são facilmente caracterizados utilizando este protocolo (ver discussão). Uma breve instrução sobre como acessar essas medições no software de monitoramento de vídeo segue.
- Na tela principal do software SMART, mova o cursor para a "Zones" tab e único clique "Definition" para abrir o Editor Zone.
- Siga as instruções detalhadas no Manual do Usuário do software SMART que definir as zonas ou grades para sobrepor sobre os caminhos de rastreamento. Aqui, o software foi utilizado para definir uma grade 5 x 5 de 10 centímetros quadrados cobrindo o chão do labirinto (
- Na tela principal do software SMART, mova o cursor para a aba "Análise" e único clique para abrir a janela de Análise de Dados.
- Mova o cursor até a guia "Arquivo" e abra o arquivo Zona criado acima.
- Mova o cursor para a aba "Configuração" e abra a opção "Track Analysis". Isso abrirá a janela "configuração análise Single-assunto".
- Mova o cursor para a aba "Standard" e mova o parâmetro "Distância Percorrida" na caixa de parâmetros disponíveis, (lado esquerdo) para a caixa de parâmetros incluídos (lado direito).
- Mova o cursor para a aba "zonas Transitions" e mover todos os parâmetros apropriados para a caixa de parâmetros incluídos como acima.
- Verifique se a caixa "Track Full" é verificada na parte inferior da janela.
- Move o cursor para o botão OK e feche a janela de configuração de análise individual de cada disciplina.
NOTA: Dependendo da análise que deseja realizar, muitas outras opções podem ser escolhidos nesta janela de explorar dados de análise. Leia o manual do seu programa específico do Usuário detalhado de parâmetros para determinar o que são os mais importantes para a análise de seus dados.
- Sob a guia Arquivo no canto superior esquerdo da janela do programa, abra a janela pista sujeito único e coloque uma marca de seleção ao lado de todas as faixas que está sendo analisado. Mova o cursor para o botão Check Mark, na parte superior da janela e clique para fechar a janela de Pista Explorer.
- Mova o cursor para o botão "Go" na janela de Análise de Dados e único clique para iniciar a análise dos dados da faixa.
- Análise de dados pode ser a saída tanto como arquivos de texto ASCII, ou pode ser exportado diretamente em uma planilha do Excel. Use as ferramentas de saída do programa de software que você está usando para a saída do data para seu próprio uso.
NOTA: A distância total percorrida e do tempo passado nas zonas indicadas será a saída seguindo as etapas de análise de dados descritos acima. Mais uma vez, salienta-se que os passos para chegar a estas medições representados aqui serão diferentes dependendo do software do usuário utilizado. Mas os dados em si e à interpretação dos resultados deve ser independente semelhante do programa de software usado. Também é importante notar que o viés administrador do teste é removido este protocolo como todos os dados coletados é quantificado dados medidos pelo software e não o administrador. Assim, não há nenhum elemento qualificável com os dados coletados, como descrito.
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Representative Results
O número médio de indivíduos por estirpe de ratinhos testados, na maioria dos casos é de aproximadamente 20 para gerar relevância estatística suficiente. No entanto, este número pode estar na gama de 8-30, dependendo da disponibilidade do rato. Dependendo da medida ou comparações necessário, também é favorável utilizar pareados por idade.
O primeiro e talvez o mais importante parâmetro específico para medir no campo aberto Maze é a distância ambulatorial total. Enquanto a unidade de medida é irrelevante para fins de comparação, é mais frequentemente expressos como uma medida métrica (cm). Nos dados experimentais aqui (Figura 5) apresentaram, tipo selvagem (WT) ou normais camundongos C57BL / 6 mostrar capacidade ambulatorial semelhante a um C57BL / 6 do mouse estirpe knock-out específico (KO). Quando a distância total percorrida é semelhante entre as linhagens ou tratamentos, uma análise mais aprofundada de comportamentos emocionais é simplificada porque a atividade locomotora é efetivamente removido do equação. Se existem diferenças significativas na capacidade locomotora dos ratos testados, análises suplementares, tais como entradas de zona ou tempo gasto em determinadas zonas designadas do labirinto pode ser distorcida devido à inatividade, em vez de efeitos de tensão ou de tratamento. Existem técnicas para explicar a atividade locomotora desigual, mas estas são mais frequentemente específica para a questão de pesquisa.
Como distância ambulatorial total entre as duas linhagens de camundongos foi semelhante, fomos capazes de analisar tigmotatismo, ou a tendência de um indivíduo a manter-se próximo às paredes, no WT contra camundongos KO (Figura 6). O grau de tigmotatismo tenha sido validada como uma medida do comportamento ansiogénico em ratos 10. Tigmotatismo aumenta à medida que os níveis de ansiedade subir. Utilizando o software SMART, zonas individuais foram sobrepostos sobre os caminhos percorridos pelo ratinhos (Figura 3) e o tempo passado nas zonas interiores contra as zonas exteriores calculados e apresentados como uma função do tempo total de (10 min) em tele labirinto. Neste caso, os ratinhos KO exibiram comportamento ansiogénico significativamente maior do que os seus homólogos WT. Um caminho de viagens representante pode ser visto na Figura 4, onde o caminho WT rato atravessa as áreas do meio do labirinto em uma freqüência muito maior do que o do rato KO que permanece perto das paredes do labirinto, mesmo que a distância percorrida de ambos os ratos é semelhante. Podemos concluir que os camundongos KO exibem ansiedade mais elevado associado comportamento do que os ratinhos WT.
Para apoio adicional aumentou os níveis de ansiedade nos ratinhos KO, boli fecais deixado no labirinto após o período de teste de 10 min foram contadas pelo observador uma vez que o sujeito de teste foi removido (Figura 13). Após a visão popular de que animais altamente emocionais apresentam aumento da defecação, KO apresentam aumentos significativos na presente boli fecal quando comparado com animais WT. Isto correlaciona-se com os níveis de tigmotatismo medidos nos ratinhos KO e indica tha t os camundongos knock-out utilizados neste estudo mostrou aumento da emotividade e ansiedade quando comparados com os seus homólogos WT.
Figura 1. Exemplo de um OFM de quatro quadrantes. A OFM retratado foi obtido a partir de San Diego Instruments e foi utilizado em todos os procedimentos de ensaio descritos. Dimensões de um quadrante do labirinto em centímetros e são cada quadrante é identificado (Q1-Q4).
Figura 2. Exemplo de visão da câmera em cima de um OFM quatro quadrantes. A imagem apresentada é representativa da vista da câmara reconhecido pelo software SMART antes de procedimentos de rastreio. Cada quadrante é rotulado (Q1) até (Q4) e deverá conter um único rato para rastreamento.
Figura 3. Comparação de caminhos de trilha para camundongos WT e KO. Faixas representativos para tanto WT ou KO camundongos são mostrados. Cada pista representa a distância total percorrida pelo sujeito durante o período do ensaio de tempo de 10 min. É indicado o ponto de início (B) e o ponto final (E) do rastreamento. O exemplo pista WT cruza na porção centro do labirinto em intervalos regulares enquanto a faixa KO permanece estreitamente na proximidade das paredes do labirinto apontaram maior tigmotatismo ou comportamentos relacionados à ansiedade.
Figura 4. Zona de sobreposição usado para interpretar dados de seguimento para tigmotatismo da OFM. Usando o pacote de análise de software SMART, uma série de 10 x 10 cm zonas foram identifiéd e utilizado para avaliar sujeitos faixas. A zona exterior composto por 16 blocos, conforme identificado enquanto a zona interna composta por 9 blocos e é sombreada. Maior tempo de permanência nas zonas exteriores do labirinto é registada como o aumento tigmotatismo e é indicativo do comportamento de ansiedade relacionada amplificado.
Figura 5. A distância total percorrida no OFM. WT (n = 24) e KO (n = 27) os ratinhos foram submetidos a OFM ea distância total em centímetros das respectivas faixas foram combinados e analisados estatisticamente para visualizar quaisquer diferenças na deambulação. Camundongos WT e KO apresentaram um comportamento semelhante na OFM quando distância total foi medido. Os resultados para os dados foram expressos como a média +/- SEM Análise estatística (-Provas t) foram realizados utilizando o Excel 2010 (Microsoft, Redmond, WA) e SAS 9.2 (SAS Institute, Cary NC). [Data é modified de Ramesh Babu, et.al., 2008.]
Figura 6. Tempo passado nas zonas interior e exterior da OFM. WT (n = 24) e KO (n = 27) os ratinhos foram submetidos a OFM e tempo nas zonas interior e exterior do labirinto analisados estatisticamente para diferenças de rato estirpes. O tempo gasto nas zonas exteriores do labirinto identificados na Figura 7 medidas tigmotatismo ou comportamento de parede que abraça e é indicativo de comportamento relacionada com ansiedade. KO apresentaram medidas de ansiedade mais elevados do que a WT baseados em tigmotatismo. Os resultados para os dados foram expressos como a média +/- SEM Análise estatística (-Provas t) foram realizados utilizando o Excel 2010 (Microsoft, Redmond, WA) e SAS 9.2 (SAS Institute, Cary NC). P <0,05. [Os dados são modificados a partir Ramesh Babu, et.al., 2008.]
Figura 7. depósitos boli fecais em OFM. WT (n = 24) e KO (n = 27) os ratinhos foram permitidos para completar um teste de 10 min no OFM antes de ser removido do labirinto de volta às suas gaiolas. Após os ratinhos foram removidos, o número de evacuações ou depósitos de boli fecais foi contada manualmente pelo observador. Aumentado o número de bolos podem ser indicativos de maior ansiedade e emotividade do animal sujeita. KO exibiram um aumento de boli fecais quando comparada com WT. Os resultados para os dados foram expressos como a média +/- SEM Análise estatística (-Provas t) foram realizados utilizando o Excel 2010 (Microsoft, Redmond, WA) e SAS 9.2 (SAS Institute, Cary NC). P <0,05. [Data originalmente publicado em Ramesh Babu, et.al., 2008.]
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Discussion
O campo aberto Maze é uma das plataformas mais utilizadas em estudos de comportamento dos animais. Uma série de importantes parâmetros convencionais e etológicas 2,4 podem ser coletadas e analisadas durante a execução da OFM. Estes dados permitem que o pesquisador para medir comportamentos que variam de actividade global locomotor a comportamentos emocionais relacionados à ansiedade 8. No entanto, o uso de OFM não é sem suas deficiências. Uma questão de confusão é a ampla gama de variáveis estáticas que podem ser manipulados durante uma sessão de testes. Exemplos incluem o tempo, as condições de iluminação e novela objeto inclusão. A variabilidade na configuração do protocolo experimental e design, que são essenciais para apoiar um amplo espectro de aplicações, pode tornar difícil a comparação entre os estudos. Quando variabilidade assunto, como diferente do fundo ou transgênicos mouse linhas e tratamentos de drogas estão incluídos, a dificuldade em comparações de teste pode aumentar ainda mais. Apesar destas questões, a OFM continua a ser uma das técnicas mais amplamente aplicados em pesquisa comportamental roedor. Aqui, nós discutir os resultados obtidos a partir da OFM e sua análise no que se refere à ansiedade rato e emotividade.
Aqui, três aspectos do comportamento campo aberto são facilmente caracterizados utilizando este protocolo: 1) A distância total percorrida (em cm) durante toda a parte cronometrada da prova; 2) tigmotatismo ou uma medida da percentagem do tempo total do teste de 10 minutos que o sujeito mantém-se adjacente à parede externa do labirinto, que é indicativo do comportamento de ansiedade semelhantes; 3) O número de pelotas fecais (bolo) deixados no quadrante após o assunto é removido é contado. Defecação é uma medida relacionada negativamente de emotividade em roedores 5 e pode ser usado para indicar os níveis de ansiedade no assunto mouse. Uma breve instrução sobre como acessar essas medições no software SMART segue.
A actividade locomotora dos sujeitos de teste é importantediscernir antes da análise dos dados OFM ou para essa matéria, qualquer animal labirinto comportamental. Ao comparar diferentes cepas de camundongos ou diferentes efeitos dos tratamentos com medicamentos, a capacidade ambulatorial do mouse é primordial. Se a capacidade locomotora está comprometida devido a efeitos de tratamento, em seguida as actividades que dependem da capacidade do sujeito para mover é confundida medição. Portanto, o primeiro passo neste experimento foi comparar o movimento total entre as duas cepas de assunto. Usando o recurso de acompanhamento do tema do software SMART, medimos a distância total percorrida ambulatorial no labirinto durante a duração do teste por dois diferentes cepas de camundongos C57BL / 6 (Figura 4). Ambos tipo selvagem (WT) e camundongos knock-out genéticos (KO) exibido capacidade ambulatorial similar. Não houve diferença estatística na distância total (em cm) percorrida por qualquer uma das linhas do rato em todo o quadro da experiência de tempo de 10 min. Teve uma cepa mostrado uma diferença significativa na comparação deambulaçãopara o outro, uma investigação mais especializada, possivelmente usando outros paradigmas comportamentais, seria necessário para caracterizar a diferença. No entanto, neste caso, a deambulação das cepas sujeitos era permitindo o uso direto igual de dados derivados de OFM não ajustados para investigar parâmetros ansiolíticos. Deve-se notar aqui que alguns pesquisadores interpretaram alta atividade ou aumentar o comportamento exploratório como um índice de baixa emotividade enquanto outros conceber comportamento exploratório ser independente de emotividade 11. Tem-se que reconhecer que as diferenças na atividade locomotora pode confundir medidas emocionais 12. No entanto, como a distância ambulatório total foi semelhante entre as estirpes de ratinho utilizados aqui, os níveis de actividade ratinhos foram separadas a partir de factores de emocionalidade.
Elevando o comportamento consiste de animais a pé sobre as duas patas traseiras em uma posição ereta vertical. Considera-se um comportamento exploratório e tem sido utilizado comouma medida da ansiedade em ambos OFM e o Labirinto em Cruz Elevado 13. No entanto, não há nenhuma indicação clara de que a criação comportamento é ou ansiolítico ou ansiogênico. Alguns estudos indicam aumento da criação está em concordância com o aumento dos níveis de ansiedade em ratos 14, enquanto outros postulam diminuição da criação de comportamento é um indicativo de aumento da ansiedade 15. Assim, enquanto a criação não foi analisado aqui, dependendo do protocolo experimental e os parâmetros examinados etológicas, de criação pode ser utilizada para discriminar comportamentos ligados à ansiedade de comportamento ambulatório simples.
Tem sido proposto que a medição da ansiedade em modelos de roedores é muito mais complicada do que a utilização de um único parâmetro num ambiente labirinto 16. Portanto, o uso de vários testes ou várias medidas em um único teste pode fortalecer a avaliação dos resultados. Tigmotatismo ou parede-abraçando comportamento é observado na maioria das espécies de roedores e está ligada à ansiedade relacionada serhaviors. É mais provável ligada à propensão subjacente de um roedor, para evitar grandes áreas abertas ou áreas de perigo percebido 17,18. Independentemente da causa subjacente, tigmotatismo é um importante comportamento ligados a ansiedade que muitas vezes é considerado o ponto de partida para testes relacionados ainda mais ansiedade específica 19.
Tigmotatismo no OFM é usado para avaliar tratamentos ansiolítico, anxiogénicos e até mesmo não-farmacológicas. Drogas relacionadas com a ansiedade tais como diazepam e clordiazepóxido demonstraram efeitos significativos sobre o comportamento do rato no OFM 4, enquanto os agonistas de dopamina têm demonstrado que os receptores da dopamina D1 e D2 estão envolvidos em efeitos ansiogénicos semelhante devido ao aumento das transmissões dopaminérgicas 20. Também há distinções claras de tensão em resposta ao comportamento de ansiedade-like mouse na OFM 21. Por exemplo, os camundongos BALB / c, uma cepa de laboratório albino raça do rato de casa comum, apresentam maior resposta comportamentalao estresse agudo do que os camundongos C57BL / 6 22. Portanto, a variação da linha de base nas respostas entre os sujeitos devem ser levados em conta na criação de parâmetros associados a paradigmas de teste e escolha de quais espécies a serem usadas para uma questão de pesquisa particular.
É também a visão popular de que animais altamente emocionais apresentam aumento da defecação. Este ponto de vista foi corroborado por alguns, mas a validade de defecação como medida distinta da ansiedade tem sido questionada 23. No entanto, desde que tratado original de Hall (1934) correlacionando eventos defecação com emotividade em roedores, uma grande quantidade de literatura sobre o assunto afirmou esta relação 2. Achados mais recentes têm indicado que defecações pode de fato ser um indicador útil de comportamentos relacionados à ansiedade emocionais em períodos relativamente curtos de teste como foi executado aqui em oposição às observações longas (30 min), onde as diferenças nas respostas são menos claras 21
É importante notar que o comportamento de ratos no OFM é dependente suas sensações tácteis. Assim, qualquer dano ou falta de bigodes para os ratos podem causar uma diminuição no comportamento ligado a ansiedade medido como os ratos perdem o contato tátil com as paredes do labirinto e entrar nas porções centrais mais facilmente 3. Labirinto exploração pode também ser dependente de alimentos ou de privação de água, iluminação durante o procedimento de verificação ou mesmo sobre a cor do chão do labirinto 24. É importante verificar essas variáveis, bem como quaisquer fatores de tratamento induzido, antes de interpretar resultados OFM para comportamentos relacionados à ansiedade. Relatórios detalhados de todas as condições de teste em manuscritos também é fundamental para facilitar as comparações entre estudos apropriados.
Além disso, embora aqui se discuta a utilização de OFM no que se refere ao motor de locomoção e emocionalidade dos ratinhos investigados, OFM pode também ser usado para testar outros comportamentos such como novo reconhecimento de objetos e memória 25. Dependendo do tipo de memória a ser analisada, em vez do labirinto com um novo objecto pode variar de 5 minutos a 24 horas. A facilidade e flexibilidade do labirinto no teste de reconhecimento de objectos nova permite o teste de memória a curto ou a longo prazo, e pode ser utilizado para analisar selectivamente os efeitos do tratamento agudo de fármaco numa fase específica de formação da memória. Em conclusão, a OFM é um teste de desempenho apical 26. Os comportamentos relacionados à ansiedade medidos são a acumulação de vários processos subjacentes comportamentais. Assim, uma vez que uma resposta é medido de forma detectável, é por vezes necessário para investigar a resposta que mais se identificar um defeito específico.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Multi Unit Open Field Test | San Diego Instruments, Inc. | White 7001-0354 | Any single or multi unit open field maze can be used |
| SMART DT Tracking Software | PanLab/Harvard Apparatus | 76-0695 | Any tracking software can be utilized with this protocol |
| Sony 990x Video Camera Recorder | Sony | CCD-TRV328 | Any suitable video camera can be attached to computer for recording tracking profiles. |
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