Protocol
OBS: Alla procedurer utförs här överlämnades till och godkändes av IACUC (Office of Research efterlevnad) och genomfördes efter NIH riktlinjer. Möss som används i beteendetester paradigm var naiv och inte användas för andra tester. Den C57BL / 6 Vilda Typ och Knock Out möss används i detta protokoll har beskrivits tidigare 9 och de data som presenteras här kommer från den manuskript.
1. Beredning av Testing rummet och Open Field Apparatus
- Använd en motorvagn öppet fält labyrint (OFM) som består av fyra aktivitetskammare användes för denna analys (figur 1). Varje kammare mätte 50 cm (längd) x 50 cm (bredd) x 38 cm (höjd) och gjordes från vitt hög densitet och icke-porös plast.
- Textur golven i labyrinten för dragning under förflyttningar medan labyrint väggar var smidig. Maze kvadranter var helt tom för att detta test. Med hänsyn till resten av denna protocol kommer en enda kvadrant av labyrinten som beskrivs ovan utnyttjas för att demonstrera OFM.
- Torka kammaren med 95% etanol före användning och före efterföljande tester för att ta bort eventuella doft ledtrådar kvar av den tidigare motivet musen.
- Låt etanolen avdunsta helt innan testa möss. Detta kan ta 5-10 minuter mellan varje test session.
- För denna analys använder SMART Video Tracking programvara från PanLab / Harvard Apparatus att registrera och utvärdera musrörelser.
OBS: Alla kommersiella videospårnings kamera och programvara kan användas för att spåra testpersonen och utvärdera resultat från det öppna fältet labyrinten. Det är mycket viktigt för slutanvändaren att förstå hur man kan kalibrera och köra den programvara som används för varje enskild analys. Oberoende av videokamera och spårningsprogram användes, erhålles de bästa resultaten när kameran och programvara är korrekt kalibrerad i enlighet med tillverkarens instruktioner. - Utför tester ina standard upplyst rum kan innehålla labyrinten apparaten och datorn som krävs för att köra programmet. Häng videokameran ovanför labyrinten antingen genom att fästa den i taket eller genom att använda någon förhöjd stödsystem som möjliggör kameralinsen för att se hela labyrinten området (Figur 2).
- Som den mänskliga administratören av testet, se till att ha tillräckligt med utrymme i rummet att vara helt omärkbar av försökspersonerna i labyrinten för att inte påverka mössens beteende.
2. Förbereda programvaran för att mäta aktivitet
- Öppna Video Tracking programvara.
- När mjukvaran öppnas, flytta markören till "Fristående spårning" alternativet finns under "Data Acquisition" -fliken och enda klick för att öppna det här alternativet.
- Välj "Static Bakgrund" alternativet längst ned på skärmen.
- Efter att ha valt "Static Bakgrund" är valtn, är det nödvändigt att använda programvaran för att ta en bild av labyrinten före tillsats av försökspersonerna. För att göra detta, flytta markören till "Foto" -knappen längst ner på skärmen och enda klick.
OBS: Programvaran kommer att ta en bild av det scenario utan försökspersonen som ska subtraheras från bilden tas under spårningsprocessen. Detta resulterar i endast rörelse hos den patient som analyseras av programvaran. - Kontrollera att bakgrundsbilden tagen ovan är helt bort av mjukvara genom att flytta markören till "Test" knappen längst ned på skärmen och klicka en gång. En fast vita fältet visas om bakgrundsbilden är helt bort från spårnings bilden. Om ljusförhållandena förändras eller labyrinten oavsiktligt flyttas, kommer du att se svarta "skuggor" på detta område som indikerar de två bilderna inte helt sammanfaller. För att råda bot på denna situation, helt enkelt upprepa step 2.4 ovan.
- Efter bekräftelse bakgrundsinställningar, använder Timing alternativet för att konfigurera hur tiden styrs under förvärvet. För att göra detta, flytta markören till "Configuration" -fliken och klicka en gång på "Timings" rubrik. Använd den nyöppnade fönstret för att komma in experimentella parametrar.
- För detta protokoll, valde "Programmerad tid" alternativet som 10 min uppföljningsperioden. Ställ in "latensperioden" till 5 sek för att låta användaren tid att placera musen i mitten av labyrinten och flytta bort före initiering av spårning. Ange "Förvärv" som är 10 minuter under hela testet. Ställ "Stoppa kontroll" inställd på "När programmerad tid (10 min) är över", som automatiskt stänger av kameran och spårningsfunktion av programvaran.
- Flytta markören till "Stäng" knappen efter alla timings har fastställts för att stänga fönstret. Du är nu redo att börja testeting procedur.
3. Administration av Open Field Test
OBS: programpaket som används i detta protokoll möjliggör spårning av upp till 16 individuella möss vid en tid. För att underlätta fullbordande och som nämnts ovan, är för en enda mus med hjälp av en enda kvadrant av OFM protokollet diskuteras här. För den utrustning som används för detta protokoll, kan maximalt fyra individuella möss spåras med hjälp av varje kvadrant av labyrinten. Om att använda en multi-kapsling labyrint, efter placering av första ämnet musen i sin definierade kvadranten, placera de återstående mössen i sina respektive labyrint kvadranten för att spåra analys. Vid tillämpningen av detta protokoll kommer ytterligare instruktioner vara specifika för en enda kvadrant av labyrinten.
- Ta mössen i deras hem burar från deras bostäder rum in i provningsrummet. Låt mössen anpassa sig till förfarandet utrymme för minst 30 minuter före start av testet.
- Ta bort en enda mOuse från buren genom att försiktigt ta tag svansen och placera musen i mitten av det öppna fältet labyrinten medan samtidigt aktivera SMART programvaran genom att enkelklicka på Start-knappen för att börja spåra musrörelser. Det är normalt att musen för att flytta omedelbart till periferin väggarna i labyrinten och tidpunkten för övergång och spårning infångning av musen ska sammanfalla för att spela in denna rörelse.
- Tillåt fri och oavbruten rörelse av ämnet musen hela respektive kvadrant av labyrinten för en enda 10 min under vilken tid kommer spårningsprogram registrera rörelser (Figur 3).
- I slutet av testperioden, plocka upp föremål musen försiktigt, ta bort den från labyrinten och returnera den till sitt hem bur.
- Före rengöring av labyrinten, visuellt räkna fekal Boli pellets finns i labyrinten och manuellt registrera siffrorna för vidare analys.
- Ta bort alla fekal pellets och torka upp alla fläckar av urinering. Spraya golvet och väggarna i labyrinten kvadranten med 95% etanol och torka med en ren pappershandduk. Låt etanollösningen att helt torr före undersökning av andra möss.
- Upprepa proceduren med nästa musen.
4. Mätning och analys av Beteende Under testproceduren
OBS: För mätning, är tre aspekter av öppet fält beteende lätt karaktäriseras med hjälp av detta protokoll (se diskussion). En kort instruktion om hur man kommer åt dessa mätningar i videospårningsprogram följer.
- Från huvudskärmen i SMART programvara, flytta markören till "Zones" -fliken och enkelklick "Definition" för att öppna Zone Editor.
- Följ de detaljerade anvisningarna i SMART programvaru Bruksanvisning definierar zoner eller galler för att överlagra på spårningsvägarna. Här var den programvara som används för att definiera en 5 x 5 rutnät av 10 cm rutor som täcker golvet i labyrinten (
- Från huvudskärmen i SMART programvara, flytta markören till "Analys" -fliken och enda klick för att öppna dataanalys fönstret.
- Flytta markören till "File" fliken och öppna Zone fil som skapas ovan.
- Flytta markören till "Configuration" -fliken och öppna "Track Analysis" alternativet. Detta kommer att öppna "Fristående konfiguration analys" fönstret.
- Flytta markören till "Standard" fliken och flytta "Reste avståndet" parameter från tillgängliga parametrar rutan (vänster) till Inkluderade Parametrar rutan (höger sida).
- Flytta markören till fliken "Zoner Övergångar" och flytta alla lämpliga parametrar till Inkluderade Parametrar rutan enligt ovan.
- Se till att "Full Track" rutan är markerad längst ner i fönstret.
- Move markören till OK och stäng konfigurationsanalys fönstret Fristående.
OBS: Beroende på vilken analys du vill utföra, kan många andra alternativ väljas i det här fönstret för att utvinna information från analysen. Läs den detaljerade bruksanvisningen för din specifika program för att avgöra vilka parametrar som är viktigast för analys av data.
- Under fliken Arkiv uppe till vänster i programfönstret, öppnar ämnet spårfönstret Singel och placera en bock bredvid alla spår som analyseras. Flytta markören till bocken längst upp i fönstret och klicka för att stänga fönstret Track Explorer.
- Flytta markören till "Go" i dataanalys fönstret och enda klick för att initiera analys av data spår.
- Analys data kan matas ut som antingen ASCII textfiler eller kan exporteras direkt in i ett Excel-ark. Använd utgångs verktyg programmet du använder för att mata ut data för eget bruk.
OBS: Sträcka rest och tid i angivna zoner kommer att matas ut efter analysdata steg som beskrivs ovan. Återigen betonas att de åtgärder för att nå dessa mätningar representerade här varierar beroende på användarens programvara som används. Men själva uppgifterna och tolkningen av resultaten bör vara densamma oberoende av det program som används. Det är också värt att notera att testadministratör partiskhet tas bort från detta protokoll som alla insamlade data kvantifieras data som mäts av programvaran och inte administratören. Det finns alltså ingen qualifiable elementet till insamlade data som beskrivs.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Det genomsnittliga antalet individer per stam av möss som testades i de flesta fall är ungefär 20 att generera tillräckligt statistisk relevans. Emellertid kan detta antal vara i intervallet 8-30 beroende på mus tillgänglighet. Beroende på mätning eller jämförelser erfordras, är det också fördelaktigt att använda åldersmatchade individer.
Den första och kanske viktigaste specifika parameter att mäta i Open Field Maze är total ambulatorisk avstånd. Medan måttenheten är irrelevant för jämförelseändamål, är det oftast uttryckt metrisk mätning (cm). I de experimentella data som presenteras här (Figur 5), Wild typ (WT) eller normala C57BL / 6 möss visar liknande ambulatorisk förmåga till en specifik knock-out C57BL / 6 musstam (KO). När totala sträckan pass liknar mellan stammar eller behandlingar, är en ytterligare analys av emotionella beteenden förenklad eftersom rörelseaktivitet avlägsnas effektivt från EQUAtion. Om det finns betydande skillnader i rörelseförmåga av de testade mössen, ytterligare analyser såsom zon poster eller tid tillbringas i vissa utsedda zoner i labyrinten kan vara sned på grund av inaktivitet istället för belastnings eller behandlingseffekter. Tekniker finns för att redogöra för olika rörelseaktivitet men dessa är oftast specifika för forskningsfrågan.
Som total ambulatorisk avståndet mellan de två musstammar var liknande, kunde vi analysera thigmotaxis eller tendensen hos en individ att förbli nära väggar, i WT kontra KO möss (Figur 6). Graden av thigmotaxis har validerats som ett mått på ångestökande beteende hos möss 10. Thigmotaxis ökar när ångestnivåerna stiger. Med hjälp av SMART programvaran, var individuella zoner överlagras på de vägar rest med mössen (Figur 3) och tiden i inre zoner kontra yttre zonerna beräknas och redovisas som en funktion av den totala tiden (10 min) i than labyrint. I det här fallet, KO möss visade betydligt högre ångestökande beteende än deras WT motsvarigheter. En representativ resor bana kan ses i figur 4 där WT musen vägen korsar mitten områden i labyrinten vid en mycket högre frekvens än vad KO musen som förblir nära väggarna i labyrinten även om ryggalagd sträcka av både möss är liknande. Vi kan dra slutsatsen att de KO möss uppvisar högre ångest i samband beteende än gör WT möss.
För att ytterligare stödja ökad ångest nivåer i KO möss, fekal boli kvar i labyrinten efter 10 min testperiod räknades av observatören när testpersonen togs bort (Figur 13). Efter den populära uppfattningen att mycket emotionella djur uppvisar ökad avföring, KO möss uppvisar betydande ökningar av fekal boli närvarande jämfört med WT möss. Detta korrelerar med nivåerna av thigmotaxis uppmätta i KO möss och indikerar tha t knock-out-möss som används i denna studie visade ökad emotionalitet och ångest jämfört med deras WT motsvarigheter.
Figur 1. Exempel på en fyra kvadrant OFM. Den OFM Avbildad erhölls från San Diego Instruments och användes i alla provningsförfaranden som beskrivs. Mått på en kvadrant av labyrinten är i centimeter och varje kvadrant identifieras (Q1-Q4).
Figur 2. Exempel på overhead kameravyn av en fyra kvadrant OFM. Bilden som visas är representativ för kameravyn erkänts av SMART programvaran innan spårning förfaranden. Varje kvadrant är märkt (Q1) till (Q4) och skulle innehålla en enda mus för spårning.
Figur 3. Jämförelse av spårbanor för WT- och KO-möss. Representativa spår för antingen WT eller KO möss visas. Varje spår representerar den totala sträcka som ämnet under den 10 min period av testet. Början punkten (B) och slutpunkten (E) hos spårnings indikeras. WT exemplet spåret korsar in i mittdelen av labyrinten regelbundet medan KO banan förblir nära i närhet till väggarna i labyrinten indikerade ökade thigmotaxis eller ångestrelaterat beteende.
Figur 4. Zon overlay används för att tolka spårningsdata för thigmotaxis från OFM. Använda SMART programvaruanalyspaket, en serie av 10 x 10 cm zoner var identified och användes för att utvärdera ämnes spår. Den yttre zonen bestod av 16 block som identifierats medan den inre zonen bestod av nio block och är skuggad. Större tid tillbringas i de yttre zonerna av labyrinten registreras eftersom ökade thigmotaxis och är indikativ för amplifierad ångestrelaterade beteenden.
Figur 5. Total sträcka reste i OFM. WT (n = 24) och KO (n = 27) möss utsattes för OFM och totala avståndet i centimeter för sina respektive spår kombinerades och statist analyseras för att visualisera eventuella skillnader i förflyttningar. WT och KO möss utfördes på liknande sätt i OFM när totala sträckan mättes. Resultaten för de uppgifter uttrycktes som medelvärdet +/- SEM Statistiska analyser (t -tests) utfördes med Excel 2010 (Microsoft, Redmond WA) och SAS 9.2 (SAS Institute, Cary NC). [Data är Modified från Ramesh Babu, et.al., 2008]
Figur 6. Tid i inre och yttre zoner i OFM. WT (n = 24) och KO (n = 27) möss utsattes för OFM och tid i inre och yttre zonerna i labyrinten statist analyseras för skillnader i musen stammar. Tid i de yttre zonerna av labyrinten som identifierats i figur 7 åtgärder thigmotaxis eller vägg kramas beteende och är ett tecken på ångest relaterat beteende. KO möss uppvisade högre ångest åtgärder än att WT baserade på thigmotaxis. Resultaten för de uppgifter uttrycktes som medelvärdet +/- SEM Statistiska analyser (t -tests) utfördes med Excel 2010 (Microsoft, Redmond WA) och SAS 9.2 (SAS Institute, Cary NC). P <0,05. [Data modifierad från Ramesh Babu, et.al., 2008]
Figur 7. Avförings boli avlagringar i OFM. WT (n = 24) och KO (n = 27) möss fick fylla i ett 10 min test i OFM innan de tas bort från labyrinten tillbaka till sina hem burar. Efter möss avlägsnades, antalet defekationer eller fekal boli insättningar ades manuellt räknades av observatören. Ökat antal boli kan vara indikativ för ökad ångest och känslo av ämnet djuret. KO-möss uppvisade en ökning av fekal boli jämfört med WT. Resultaten för de uppgifter uttrycktes som medelvärdet +/- SEM Statistiska analyser (t -tests) utfördes med Excel 2010 (Microsoft, Redmond WA) och SAS 9.2 (SAS Institute, Cary NC). P <0,05. [Data ursprungligen publicerades i Ramesh Babu, et.al., 2008]
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Open Field Maze är en av de mest använda plattformarna i djurbeteendestudier. Ett antal viktiga konventionella och etologiska parametrar 2,4 kan samlas in och analyseras under utförandet av OFM. Dessa data gör det möjligt för forskaren att mäta beteenden allt från övergripande rörelseaktivitet till ångestrelaterade emotionella beteenden 8. Emellertid är användningen av OFM inte utan sina brister. En confounding fråga är det stora utbudet av statiska variabler som kan manipuleras under en testsession. Exempel inkluderar tid, ljusförhållanden och nya objekt integration. Variabilitet i försöksprotokoll installation och design, vilket är viktigt att stödja ett brett spektrum av tillämpningar, kan göra det svårt att jämföra studier. När ämnet variabilitet, såsom olika bakgrund eller transgen mus linjer och läkemedelsbehandlingar ingår, kan svårigheten att provjämförelser öka ännu mer. Trots dessa frågor, OFM är fortfarande en av de mest tillämpade tekniker inom gnagare beteendeforskning. Här diskuterar vi resultaten från den OFM och deras analys eftersom det gäller mus ångest och emotionalitet.
Här är tre aspekter av öppet fält beteende lätt karaktäriseras användning av detta protokoll: 1) Total sträcka som omfattas (i cm) under hela tidsinställda delen av testet; 2) Thigmotaxis eller ett mått på procent av det 10 minuter total provtid att ämnet förblir intill den yttre väggen av labyrinten som är indikativ för ångestliknande beteende; 3) Antalet fekal pellets (boli) kvar i kvadranten efter motivet avlägsnas räknas. Avföring är ett negativt relaterad mått av emotionalitet hos gnagare 5 och kan användas för att ange nivåer av ångest i musen ämnet. En kort instruktion om hur man kommer åt dessa mätningar i SMART programvaran följer.
Rörelseaktivitet av testämnena är viktigt atturskilja före analys av OFM uppgifter eller för den delen, alla djur beteende labyrint. När man jämför olika stammar av möss eller olika effekter av läkemedelsbehandlingar är ambulatorisk förmåga av musen av största vikt. Om rörelseförmåga är nedsatt på grund av behandlingseffekter, sedan mäta aktiviteter som är beroende av förmågan av motivet att flytta är skam. Därför är det första steget i detta experiment var att jämföra den totala rörelse mellan de två ämnes stammar. Använda ämnesspårning av SMART programvara, mätte vi den totala ambulatorisk avståndet täckt i labyrinten under hela testet med två olika stammar av C57BL / 6-möss (Figur 4). Både vildtyp (WT) och genetiska knock-out-möss (KO) visas liknande ambulatorisk förmåga. Det fanns ingen statistisk skillnad i totalt avstånd (i cm) rest med antingen mus linje genom hela 10 min tidsram av experimentet. Hade en stam visade en signifikant skillnad i ambulation jämförttill den andra, skulle en mer specialiserad utredning, eventuellt med hjälp av andra beteende paradigm, att krävas för att karakterisera skillnaden. Men i det här fallet, förflyttningar av ämnes stammarna var lika tillåter direkt användning av ojusterade OFM-härledda data för att ytterligare utreda ångestdämpande parametrar. Det bör påpekas att vissa forskare har tolkat hög aktivitet eller öka undersökande beteende som ett index på låga emotionalitet medan andra föreställa undersökande beteende är oberoende av emotionalitet 11. Man måste erkänna att skillnader i rörelseaktivitet kan förbrylla emotionella åtgärder 12. Men som total ambulatorisk avståndet var likartad mellan musstammar som används här, var aktivitetsnivåer mössen separerade från emotionalitet faktorer.
Uppfödning beteende består av ämnes djur som står på båda baktassarna i vertikalt upprätt läge. Det betraktas som en undersökande beteende och har använts somett mått på ångest i både OFM och den förhöjda plus labyrint 13. Det finns dock ingen tydlig indikation på att fostra beteende är antingen ångestdämpande eller ångestökande. Vissa studier visar på ökad uppfödning är i överensstämmelse med ökade ångestnivåer i möss 14 medan andra postulerar minskad uppfödning beteende är ett tecken på ökad ångest 15. Således, medan uppfödning analyserades inte här, beroende på försöksprotokoll och etologiska parametrar som undersöktes, uppfödning kunde användas för att diskriminera ångestbundna beteenden från enkla ambulatorisk beteende.
Det har föreslagits att mäta ångest i gnagarmodeller är mycket mer komplicerat än att använda en enda parameter i en enda labyrint miljö 16. Därför kan använda flera tester eller flera åtgärder i ett enda test stärka utvärderingen av resultaten. Thigmotaxis eller väggnära beteende observeras i de flesta gnagare och är kopplat till ångest relaterad varahaviors. Det är mest sannolikt knuten till en gnagare underliggande benägenhet att undvika stora öppna områden eller områden med upplevd fara 17,18. Oavsett den bakomliggande orsaken är thigmotaxis en viktig ångest bunden beteende som ofta anses vara utgångspunkten för ytterligare specifik ångestrelaterade tester 19.
Thigmotaxis i OFM används för att utvärdera anxiolytiska, anxiogena och även icke-farmakologisk behandling. Ångest relaterade läkemedel såsom diazepam och klordiazepoxid har visat signifikanta effekter på mus beteende i OFM 4 medan dopaminagonister har visat att D1 och D2 dopaminreceptorer är involverade i anxiogena liknande effekter på grund av ökade dopaminerga sändningar 20. Det finns också tydliga belastnings distinktioner som svar på mus ångest-liknande beteende i OFM 21. Till exempel, BALB / c-möss, en albino laboratorium uppfödd stam av den gemensamma huset mus, visar större beteendegensvarakut stress än do C57BL / 6-möss 22. Därför måste utgångs variation i svaren mellan ämnen beaktas när du installerar de parametrar som är förknippade med att testa paradigm och välja vilka arter som ska användas för en viss forskningsfråga.
Det är också den populära uppfattningen att mycket emotionella djur uppvisar ökad avföring. Denna uppfattning har bekräftats av vissa, men giltigheten av avföring som distinkt mått av ångest har ifråga 23. Eftersom Hall ursprungliga avhandling (1934) korrelerar avföring händelser med emotionalitet hos gnagare, har en stor mängd litteratur i ämnet bekräftade detta förhållande 2. Nyare rön har visat att defekationer faktiskt kan vara en användbar indikator på emotionella ångestrelaterade beteenden i relativt korta testperioder som utförs här i motsats till långa observationer (30 min) där skillnader i svaren är mindre klart 21
Det är viktigt att notera att beteendet hos möss i OFM är beroende på deras taktila sensationer. Alltså någon skada på eller brist på whiskers till mössen kan orsaka en minskning av uppmätt ångest bundna beteenden som mössen tappar taktil kontakt med väggarna i labyrinten och ange de centrala delarna lättare 3. Maze utforskning kan också vara beroende av mat eller vatten deprivation, belysning under testförfarandet eller ens på färgen på labyrinten golvet 24. Det är viktigt att kontrollera dessa variabler, samt eventuella behandlings inducerade faktorer, innan tolka OFM resultat för ångestrelaterade beteenden. Detaljerad rapportering av alla testförhållanden i manuskript är också kritisk till att underlätta lämpliga korsstudie jämförelser.
Också, medan vi här diskuterar användningen av OFM eftersom det gäller motor förflyttning och emotionalitet av mössen undersökta, den OFM kan också användas för att testa andra beteenden such som nya objektigenkänning och minne 25. Beroende på vilken typ av minne som analyseras, kan tid i labyrinten med en roman objekt varierar från 5 min till 24 tim. Den lätthet och flexibilitet av labyrinten i testet romanen objektigenkänning medger provning av kort- eller långtidsminne, och kan användas för att selektivt analysera effekterna av läkemedelsbehandling akut på ett bestämt minne bildning. Sammanfattningsvis är OFM en apikal test av prestanda 26. De ångestrelaterade beteenden som mäts är kumulering av flera beteende underliggande processer. Således, när ett svar är detekterbart mäts, är det ofta nödvändigt att utreda detta svar vidare att identifiera en specifik defekt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Multi Unit Open Field Test | San Diego Instruments, Inc. | White 7001-0354 | Any single or multi unit open field maze can be used |
| SMART DT Tracking Software | PanLab/Harvard Apparatus | 76-0695 | Any tracking software can be utilized with this protocol |
| Sony 990x Video Camera Recorder | Sony | CCD-TRV328 | Any suitable video camera can be attached to computer for recording tracking profiles. |
References
- Hall, C. S. Emotional behavior in the rat: defecation and urination as measures of individual differences in emotionality. J. Comp. Psychol. 18, 385-403 (1934).
- Walsh, R. N., Cummins, R. A. The open field test: a critical review. Psychol. Bull. 83, 482-504 (1976).
- Prut, L., Belzung, C. The open field as a paradigm to measure the effects of drugs on anxiety-like behaviors: a review. Eur. J. of Pharm. 463, 3-33 (2003).
- Choleris, E., Thomas, A. W., Kavaliers, M., Prato, F. S. A detailed ethological analysis of the mouse open field test: effects of diazepam, chlordiazpoxide and an extremely low frequency pulsed magnetic field. Neurosci. Biobehav. Rev. 25, 235-260 (2001).
- Ramos, A. Animal Models of anxiety: do I need multiple tests. TIPS. 29, 493-498 (2008).
- Archer, J. Tests for emotionality in rats and mice: a review. Anim. Behav. 21, 205-235 (1973).
- Gray, J. A. Emotionality in male and female rodents: a reply to Archer. Brit. J. Psych. 70, 425-440 (1979).
- Carola, V., D’Olimpio, F., Brunamonti, E., Mangia, F., Renzi, P. Evaluation of the elevated plus-maze and open-field tests for the assessment of anxiety-related behavior in inbred mice. Behav. Brain Res. 134, 49-57 (2002).
- Ramesh Babu, J., Seibenhener, M. L., Peng, J., Strom, A. L., Kemppainen, R., Cox, N., Zhu, H., Wooten, M. C., Diaz-Meco, M. T., Moscat, J., Wooten, M. W. Genetic inactivation of p62 leads to accumulation of hyperphosphorylated tau and neurodegeneration. J. Neurochem. 106, 107-120 (2008).
- Simon, P., Dupuis, R., Costentin, J. Thigmotaxis as an index of anxiety in mice: influence of dopaminergic transmissions. Behav. Brain Res. 61, 59-64 (1994).
- Denenberg, V. H. Open-field behavior in the rat: what does it mean. Ann. N.Y. Acad. Sci. 159, 852-859 (1969).
- Stanford, S. C. The open field test: reinventing the wheel. J. Psychopharm. 21, 134-135 (2007).
- Ennaceur, A. Tests of unconditional anxiety – pitfalls and disappointments. J. Phys. Behav. 135, 55-71 (2014).
- Borta, A., Schwarting, R. K. Inhibitory avoidance, pain reactivity, and plus-maze behavior in Wistar rats with high versus low rearing activity. J. Phys. Behav. 84, 387-396 (2005).
- Costall, B., Jones, B. J., Kelly, M. E., Naylor, R. J., Tomkins, D. M. Exploration of mice in a black and white test box: validation as a model of anxiety. Pharmacol. Biochem. Behav. 32, 777-785 (1989).
- Bouwknecht, J. A., Paylor, R. Pitfalls in the interpretation of genetic and pharmacological effects on anxiety-like behavior in rodents. Behav. Pharm. 19, 385-402 (2008).
- Webster, D. G., Baumgardner, D. J., Dewsbury, D. A. Open field behavior in eight taxa of muriod rodents. Bull. Psychonom. Soc. 13, 90-92 (1979).
- Wilson, R. C., Vacek, T., Lanier, D. L., Dewsbury, D. A. Open field behavior in muroid rodents. Behav. Biol. 17, 495-506 (1976).
- Crawley, J. N. Behavioral phenotyping of transgenic and knockout mice: experimental designs and evaluation of general health, sensory functions, motor abilities and specific behavioral tests. Brain Res. 835, 18-26 (1999).
- Simon, P., Dupuis, R., Costentin, J. Thigmotaxis as an index of anxiety in mice. influence of dopaminergic transmissions. Behav. Brain Res. 61, 59-64 (1994).
- Miller, B. H., Schultz, L. E., Gulati, A., Su, A. I., Pletcher, M. T. Phenotypic characterization of a genetically diverse panel of mice for behavioral despair and anxiety. PLoS One. 5, e14458 (2010).
- Tannenbaum, B., Anisman, H. Impact of chronic intermittent challenges in stressor-susceptible and resilient strains of mice. Biol. Psych. 53, 292-303 (2003).
- Lister, R. G. Ethologically-based animal models of anxiety disorders. Pharmacol. Ther. 46, 321-340 (1990).
- Kulesskaya, N., Voikar, V. Assessment of mouse anxiety-like behavior in the light-dark box and open-field arena: role of equipment and procedure. Phys. Behav. 133, 30-38 (2014).
- Han, H., Du, W., Zhou, B., Zhang, W., Xu, G., Niu, R., Sun, Z. Effects of chronic fluoride exposure on object recognition memory and mRNA expression of SNARE complex in hippocampus of male mice. Biol. Trace Elem. Res. 158, 58-64 (2014).
- Barrow, P., Leconte, I. The influence of body weight on open field and swimming maze performance during the post-weaning period in the rat. Lab. Animals. 30, 22-27 (1996).
