Abstract
सबसे रीढ़ में, जिगर अवशोषित वसा, रासायनिक पायसी और बिलीरुबिन और अन्य चयापचय उत्पादों उगलना करने के साथ ही छोटी आंत में लिपिड के पाचन सक्षम करने के लिए आवश्यक है कि पित्त पैदा करता है। जिगर में, extrahepatic पित्त प्रणाली की प्रयोगात्मक रुकावट पित्तस्थिरता और सूजन periportal क्षेत्रों से होने वाले एक मजबूत तंतुमय प्रतिक्रिया में जिसके परिणामस्वरूप की ओर जाता है कि रोग की घटनाओं की एक जटिल झरना शुरू की। इसलिए, आम पित्त नली की शल्य बंधाव कृन्तकों में प्रतिरोधी पित्तरुद्ध चोट प्रेरित करने के लिए और अनुचित पित्त प्रवाह से प्रेरित इन pathophysiological तंत्र कायम करना है कि आणविक और सेलुलर घटनाओं का अध्ययन करने के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किया मॉडल बन गया है। हाल के वर्षों में विभिन्न शल्य चिकित्सा तकनीक विशिष्ट अनुसंधान प्रश्नों के लिए पुनः कनेक्शन या reanastomosis पित्त नली बंधाव (बीडीएल) के बाद, उदाहरण के लिए, आंशिक बीडीएल, या अन्य microsurgical विधियों की अनुमति देते हैं कि या तो वर्णित किया गया है। हालांकि, सबसे अक्सर इस्तेमाल किया मॉडल 21-28 दिनों के बाद एक मजबूत तंतुमय प्रतिक्रिया लाती है कि आम पित्त नली का पूरा बाधा है। मृत्यु दर की वजह से संक्रामक जटिलताओं या तकनीकी अशुद्धियों को उच्च किया जा सकता है। यहाँ हम 1959 में रसेल और Burch द्वारा माने पशु कल्याण के लिए 3R नियम के अनुसार एक अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तंतुमय प्रतिक्रिया प्रेरित है कि चूहों में बीडीएल मॉडल के लिए एक विस्तृत शल्य प्रक्रिया प्रदान करते हैं।
Introduction
लिवर फाइब्रोसिस मैट्रिक्स उत्पादक यकृत तारामय कोशिकाओं की बातचीत का एक जटिल नेटवर्क और जिगर-निवासी और घुसपैठ कोशिकाओं को रक्त कोशिकाओं 1,2 की एक विस्तृत विविधता से निकलती है कि अत्यधिक उत्पादन और बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) के संचय के रूप में परिभाषित किया गया है। यकृत फाइब्रोसिस विभिन्न उत्तेजनाओं की एक भीड़ की वजह से हो सकता है फाइब्रोसिस अंतर्निहित आणविक तंत्र आम तौर पर बहुत समान हैं। यकृत क्षति के बाद, आणविक और सेलुलर परिवर्तन का एक अत्यधिक करवाया कार्यक्रम शुरू की है। इस कार्यक्रम में सूजन का संकेत है, monocytes / मैक्रोफेज और यकृत तारामय कोशिकाओं के बीच एक घनिष्ठ संपर्क होता है कि myofibroblasts, ईसीएम बयान और जिगर ऊतक अखंडता 3 की लगातार संरचनात्मक और कार्यात्मक परिवर्तन के लिए तारामय सेल सक्रियण और transdifferentiation में अंत परिणाम पर। यकृत तारामय कोशिकाओं की सक्रियता विशेष रूप से जिगर के साथ भड़काऊ संकेतों और बातचीत के द्वारा संचालित है(Kupffer कोशिकाओं यानी) residental मैक्रोफेज। पैथोजन जुड़े आणविक पैटर्न ऐसे टोल की तरह रिसेप्टर्स के रूप में विशिष्ट पैटर्न मान्यता रिसेप्टर्स द्वारा मान्यता प्राप्त हैं कि भड़काऊ प्रक्रिया तीन ड्राइव कि भड़काऊ साइटोकिन्स और chemokines की एक भीड़ की अभिव्यक्ति और स्राव को ट्रिगर है कि अलग अलग रास्ते में से एक जटिल नेटवर्क के माध्यम से संकेत जब सक्रिय। रोग-उत्पादन कारक हटा दिया जाता है जब भड़काऊ प्रतिक्रिया और गठन यकृत अपमान केवल अस्थायी है। चोट बनी रहती है इसके विपरीत, यदि, जीर्ण सूजन जिगर और निशान ऊतक गठन के द्वारा सामान्य जिगर पैरेन्काइमा के प्रगतिशील प्रतिस्थापन में जिसके परिणामस्वरूप अग्रभूमि में अभिव्यक्ति और ईसीएम भीड़ के संचय के भीतर विकसित।
मानव में यकृत fibrogenesis एक दुनिया भर में नैदानिक समस्या है, तीव्र और जीर्ण यकृत विफलता के कई प्रयोगात्मक कृंतक मॉडल पिछले दशकों के दौरान स्थापित किया गया है। म्यू मेंrine प्रणाली उदाहरण के लिए, आम मॉडल महत्वपूर्ण है कि प्रभावित विभिन्न hepatotoxins की एक किस्म के प्रशासन, आम पित्त नली के बंधाव, प्रतिरक्षा की मध्यस्थता जिगर चोट की प्रेरण, और जीन दोष के लक्षित परिचय या transgenes की ठीक इसके विपरीत overexpression हैं जिगर फाइब्रोसिस 4 के रोगजनन में शामिल रास्ते संकेतन।
कृन्तकों में आम पित्त नली के ligation कई वर्षों से 5-8 के लिए अनुसंधान के क्षेत्र में एक प्रायोगिक प्रक्रिया के रूप में बाहर किया गया है। कृन्तकों में लंबे समय तक पित्त नली बंधाव (बीडीएल) के लिए एक पहले अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रोटोकॉल पहले से ही अधिक से अधिक तीन दशक पहले 9 अब प्रस्तुत किया गया था। इस प्रोटोकॉल में केन्युलेशन / रुकावट और बंधाव दोनों मानव पित्त सिरोसिस 9 में मनाया उन लोगों के बराबर थे कि रूपात्मक बदलाव के साथ चूहों में सिरोसिस की एक उच्च उपज प्रेरित किया। संबंधित प्रोटोकॉल शल्य प्रक्रिया अपेक्षाकृत तेजी से लागू है, सरल है, और जानवरों के जीवित रहने की दरों में 95% से अधिक के साथ उच्च रहे हैं। शास्त्रीय चूहे केन्युलेशन / बाधा प्रोटोकॉल में, 2 सेमी की एक छोटी चीरा सिर्फ असिरूप प्रक्रिया नीचे किया जाता है। इसके बाद, एक प्रवेशनी पित्त नली के समीपस्थ भाग में डाला और रेशम sutures के साथ अपनी स्थिति में तय हो गई है। एक अगले चरण में, प्रवेशनी के बाहर का भाग सही कम वृत्त का चतुर्थ भाग 9 में subcutaneously midline चीरा के निचले अंत के माध्यम से रखा और दफन, तीन समुद्री मील के साथ बाधित है। अंत में, पेट बंद हो गया है और जानवरों को ठीक करने के लिए अनुमति दी जाती है। बंधाव प्रोटोकॉल में, चूहों के साथ या संयुक्ताक्षर 9 के बीच पित्त नली के विच्छेदन के बिना या तो आम पित्त नली के दोहरे बंधाव के अधीन हैं।
इस प्रयोगात्मक मॉडल अच्छी तरह से स्वीकार कर लिया और जिगर पित्तस्थिरता और फाइब्रोसिस प्रेरित करने के लिए प्रयोगशालाओं के सैकड़ों की संख्या में दुनिया भर में प्रयोग किया जाता है। यह intrahepatic पित्त उपकला सेल प्रसार, myofibroblastic differentiatio लाती हैपोर्टल fibroblasts की एन के आसपास ईसीएम 10,11 के एक बेहद प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य, बड़े पैमाने पर अभिव्यक्ति और बयान में जिसके परिणामस्वरूप, पित्त उपकला कोशिकाओं proliferating। इसलिए, चूहों और चूहों में इस मॉडल के आवेदन के यकृत में सूजन और फाइब्रोसिस के रोगजनन को समझने के लिए कि लक्ष्य वैज्ञानिकों के बीच लोकप्रिय किया जा रहा है।
हमारी प्रयोगशाला में, हम बड़े पैमाने पर यकृत fibrogenesis की विशेष आणविक और सेलुलर पहलुओं की जांच के लिए और उपन्यास antifibrotic अवधारणाओं और दवाओं 12-15 का परीक्षण करने के लिए लक्ष्य कई प्रयोगात्मक अध्ययन में चूहों में अतीत में इस प्रोटोकॉल का इस्तेमाल किया है।
हाल ही में, हम murine व्यवस्था करने के लिए इस पद्धति अनुकूलित और पित्त नली बंधाव सर्जरी भी चूहों 16-18 में कम भिन्नता और मृत्यु दर के साथ समय पर निर्भर फाइब्रोसिस की स्थापना के लिए एक आकर्षक मतलब है कि पाया। जानवरों के छोटे आकार के, हालांकि, संज्ञाहरण के संबंध में कुछ महत्वपूर्ण संशोधन, शल्य interv कारणention के और बाद के उपचार अवलोकन इस मॉडल में विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्राप्त करने के लिए आवश्यक हैं। पूर्ण अनुकूलन निम्नलिखित प्रोटोकॉल में और साथ वीडियो दस्तावेज में संक्षेप।
Protocol
नोट: सभी प्रयोगों अधिकारी राज्य पशु की देखभाल और उपयोग समिति (LANUV, Recklinghausen, जर्मनी) द्वारा अनुमोदित किया गया। चूहों प्रयोगशाला पशु विज्ञान संघों के लिए फेडरेशन (FELASA) के दिशा निर्देशों के अनुसार विशिष्ट रोगज़नक़ मुक्त परिस्थितियों के तहत आते हैं। सभी प्रयोगों (स्वास्थ्य प्रकाशन 8 वें संस्करण के राष्ट्रीय संस्थानों, 2011) 'प्रयोगशाला पशुओं की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड' जानवरों के संरक्षण के संबंध में जर्मन संघीय कानून के अनुसार आयोजित की गई।
1. Presurgical तैयारी
नोट: स्वच्छ लेकिन गैर बाँझ शर्तों के तहत सभी प्रक्रियाओं को पूरा। सर्जरी प्रदर्शन करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं कि इस तरह की शल्य चिकित्सा संदंश, कैंची, और Colibri प्रतिकर्षक के रूप में सभी उपकरणों और अन्य पुन: प्रयोज्य उपकरण पशुओं में सर्जरी प्रदर्शन करने के लिए संस्थागत दिशा निर्देशों के साथ कड़ाई से अनुपालन में हैं कि प्रोटोकॉल के अनुसार उपयोग करने से पहले निष्फल होना चाहिए।; आवश्यक अभिकर्मकों, सामग्री और उपकरणों की एक विस्तृत सूची के लिए, विशिष्ट सामग्री / उपकरण की सूची को देखें।
- पूरा प्रयोग के दौरान, तरल पदार्थ से अभेद्य, स्वयं चिपकने वाला पर्दे के साथ समग्र कवर परिचालन क्षेत्र स्थायी रूप से एक संज्ञाहरण प्रणाली से जुड़े 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक वार्मिंग की थाली पर पशु रखने के लिए, और। ठीक से सभी instrumentations और सर्जरी से पहले प्रयोग के दौरान इस्तेमाल कर रहे हैं कि समाधान (चित्रा 1) की व्यवस्था।
- संज्ञाहरण की प्रेरण के लिए 4 एल / मिनट की एक प्रवाह दर पर 100% ऑक्सीजन में 4 वॉल्यूम isoflurane% की साँस लेना के साथ माउस anesthetize। निम्नलिखित महत्वपूर्ण मापदंड पहुँच रहे हैं जब anesthetization की गहराई पर्याप्त है: नियमित रूप से सहज श्वास, पैर की उंगलियों के बीच दर्द उत्तेजनाओं की स्थापना के बाद कोई पलटा, और दर्द को कोई जवाब नहीं।
- एक बिजली फर शेवर के साथ माउस के पेट फर दाढ़ी और आंख और एन के उपयोग से बाहर सुखाने से आंखों की रक्षाose के मरहम।
- एक 37 डिग्री सेल्सियस गर्म गर्म थाली पर माउस रखें Fluovac संज्ञाहरण प्रणाली के Fluovac नकाब में माउस थूथन डालें, और रेशम टेप की धारियों के साथ जानवर के पैरों को ठीक।
- 1 एल / मिनट की एक प्रवाह दर पर 100% ऑक्सीजन में 1.5-3 वॉल्यूम isoflurane% की साँस लेना द्वारा माउस के संज्ञाहरण बनाए रखें और buprenorphine समाधान (0.1 मिलीग्राम / किग्रा BW के 0.9% NaCl समाधान में भंग) के intraperitoneal इंजेक्शन के माध्यम से PeriOperative एनलजेसिया प्रतिष्ठापित ।
- त्वचा की पूर्व ऑपरेटिव उपचार के लिए शराबी समाधान का उपयोग करने के लिए तैयार एंटीसेप्टिक एक मानक, साथ सिक्त है कि एक धुंध झाड़ू के साथ मुंडा पेट की त्वचा जीवाणुरहित। नोट: हमारी प्रोटोकॉल में हम एक पाली शराब त्वचा antisepticum का उपयोग करें। यह जानवरों के संरक्षण और प्रयोगशाला पशु विज्ञान संघों के लिए संघ के दिशा-निर्देशों के बारे में जर्मन संघीय कानून के साथ पूर्ण अनुसार है। यह एंटीसेप्टिक 70% शामिल हैं (वी / वी) 2-propanol, Butan-1,3.diol और पीले क्विनोलिन के निशान, और perfumई।
2. सर्जिकल प्रक्रियाएं
- एक 11.5 सेमी शल्य कैंची के साथ एक ही समय में चर्म प्लस प्रावरणी काटने से लगभग 2 सेमी की लंबाई के एक midline laparotomy के साथ पेट खोलें।
- एक स्प्रेडर के रूप में कैंची का उपयोग करके पेरिटोनियम के शीर्ष पर संयोजी ऊतक काटना।
- पेरिटोनियल गुहा को खोलने के लिए LINEA अल्बा के साथ पेरिटोनियम काटें।
- , उरोस्थि में एक होल्डिंग सीवन डालने सीवन के फिलामेंट को ऊपर उठाने, और Fluovac मुखौटा के शीर्ष पर यह तय करने से गुहा बढ़ाना है।
- पेरिटोनियल गुहा में एक Colibri प्रतिकर्षक (चित्रा 2) डालने से आपरेशन क्षेत्र बिखरा हुआ है।
- इसके बारे में उदर पक्ष डायाफ्राम से चिपक और वृक्कनाभि स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहा है तो यह है कि एक moisturized (0.9% NaCl समाधान) कपास झाड़ू के साथ जिगर उठा।
- पेट (चित्रा 3) की दुम आंदोलन से पित्त नली बेनकाब।
- से सावधानी से पित्त नली अलग करेंएक माइक्रो serrations संदंश (चित्रा -4 ए) का उपयोग पोर्टल शिरा और यकृत धमनी flanking।
- पित्त नली के आसपास 5-0 सीवन प्लेस और दो शल्य समुद्री मील के साथ सुरक्षित। बांधने जब समुद्री मील पित्त नली (4B चित्रा) विच्छेद के बिना प्रभावी बाधा सुनिश्चित करने के लिए लगातार आकर्षक बल में वृद्धि।
- एक ही तरीके से एक दूसरे कपाल बंधाव जोड़ सकते हैं लेकिन (चित्रा 4C) के बीच में पित्त नली काटना नहीं है। अन्यथा पित्त लीक एक गाँठ सुरक्षित नहीं है, तो और जानवरों कोई पित्तस्थिरता अनुभव है लेकिन गंभीर पेरिटोनिटिस है कि विकास काफी जोखिम है।
- , टांके (चित्रा 4D) के सिरों कट उरोस्थि के निचले हिस्से, और प्रतिकर्षक हटा दें।
- 0.9% सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ पेरिटोनियल गुहा कुल्ला और शारीरिक पदों के लिए पेट अंगों की जगह।
- बंद दोनों पेट की परतों 6-0 Mersilk के साथ अलग से चल रहा है sutures के साथ (पेरिटोनियम और चर्म प्लस तख़्ती)।
- फबsutures के एनडीएस और एंटीसेप्टिक समाधान के साथ सिक्त एक धुंध झाड़ू के साथ आपरेशन क्षेत्र बाँझ।
नोट: पहली बार के लिए सर्जरी प्रदर्शन करते हैं, 16X-20X के एक बढ़ाई पर एक सर्जिकल माइक्रोस्कोप के तहत सभी प्रक्रियाओं का प्रदर्शन। यह पित्त नली के बेहतर मान्यता देता है और स्पष्ट रूप से पोर्टल शिरा और यकृत धमनी (आंकड़े 5 और 6) से अलग। कुछ प्रयोगशालाओं दो संयुक्ताक्षर के बीच में पित्त नली के विच्छेदन की सलाह देते हैं। पित्त नली विच्छेदित है जब समुद्री मील की एक में संभावित लीक गंभीर तीव्र पेरिटोनिटिस, जलोदर, और प्रणालीगत endotoxemia में परिणाम होगा क्योंकि बरकरार पित्त नली छोड़ दें।
3. पश्चात उपचार और अनुवर्ती
- माउस पूरी तरह से जाग और सक्रिय है जब तक माउस एक अवरक्त दीपक से गरम एक पिंजरे में ठीक करने के लिए अनुमति दें।
- बाद में, एक सामान्य पिंजरे में माउस ले जाने और पानी और भोजन करने के लिए यथेच्छ पहुँच प्रदान करते हैं।
- एकfter सर्जरी, नियमित अंतराल पर जानवरों की निगरानी और आंतरिक जानवरों की देखभाल के स्थानीय सिफारिश के बाद उपयुक्त एनलजेसिया (जैसे, buprenorphine समाधान) के साथ अनुवर्ती पश्चात इलाज के लिए बाहर ले और समितियों का उपयोग करें।
नोट: 3 दिनों के लिए एनाल्जेसिक चिकित्सा प्रदर्शन। किसी भी असामान्य व्यवहार ऐसे पेरिटोनिटिस, पूति या आंतरिक रक्तस्राव के रूप में दुर्लभ जटिलताओं का संकेत हो सकता है और प्रयोग समाप्त करने के लिए मानव समापन बिंदु के रूप में नियंत्रित किया जाना चाहिए। - पशु प्रयोग के अंत तक भोजन और पानी यथेच्छ करने के लिए स्वतंत्र पहुँच के साथ रखा जाता है। चल रहे fibrogenesis पीलिया ने संकेत दिया है के बाद से रक्त ड्राइंग के लिए कोई जरूरत नहीं है।
- जानवरों का बलिदान कर रहे हैं, रक्त नैदानिक रसायन मापदंडों (एएसटी, एएलटी, बिलीरुबिन आदि) और जिगर histochemical और जैव रासायनिक विश्लेषण के लिए लिया गया है की माप के लिए एकत्र किया जाता है।
Representative Results
एक ठेठ प्रयोग में बीडीएल के बारे में 18-20 ग्राम भार 40 पुरुष C57BL 6 / जंगली प्रकार चूहों में प्रदर्शन किया गया था। इस प्रयोग प्रगति (10, 14, और 20 दिन) के दौरान दीक्षा चरण (3 और 7 दिन) में यकृत fibrogenesis, जांच करने के लिए किया है, और लंबी अवधि (30 और 60 दिन) 16 के दौरान किया गया था। स्थायी रूप से प्रयोग के अंत तक बढ़ाया कि periportal फाइब्रोसिस पूरी तरह से 20 दिनों के बाद विकसित किया गया था, जबकि इस मॉडल में, persinusoidal फाइब्रोसिस पहले से ही सर्जरी के बाद 10 दिन पर विकसित किया गया है। उल्लेख प्रयोग में, एक सरल नकली आपरेशन प्राप्त किया है कि सभी जानवरों बच गया है, और केवल बीडीएल प्राप्त किया है कि 40 चूहों (5%) के दो एक गरीब सामान्य हालत विकसित की है और इसलिए समय से पहले प्रयोग की योजना बनाई अंत बिंदु से पहले बलिदान किया गया। बीडीएल के अधीन पशुओं के सबसे पहले तीन दिनों के दौरान कम गतिविधि से पता चला है, जबकि दिखावा संचालित जानवरों की गतिविधि, बिना किसी अपवाद के laparotomy के बाद पहले से ही सामान्य से एक दिन था। जम्मूaundiced त्वचा बीडीएल 16 की स्थापना के बाद सभी बीडीएल जानवरों के लिए एक या दो दिन में पहले से ही स्पष्ट हो गया था।
यकृत की चोट की अच्छी तरह से स्थापित सीरम मार्कर का प्रतिनिधित्व करते हैं कि दोनों alanine aminotransferase (एएलटी) और aspartate ट्रांसअमाइनेज (एएसटी) के मूल्यों में तेजी से वृद्धि हुई है और बीडीएल (तालिका 1) के बाद 7 दिन और दिन के 20 के दौरान नुकीला। इसके बाद, ALT और AST दिन 30 तक तेजी से कमी आई है और 60 दिनों सर्जरी के बाद जब तक स्थिर बने रहे। पित्तरुद्ध चोट के साथ लाइन में, कुल बिलीरुबिन के सीरम सांद्रता लगातार बुलंद थे और 7 दिनों में 16 के बाद एक पठार पर पहुंच गया। ALT और AST सीरम गतिविधियों के समान समय पाठ्यक्रम भी बीडीएल कराना पड़ा कि चूहों के लिए सूचित किया गया है। हाल के एक अध्ययन में यह बीडीएल सर्जरी के बाद पहले सप्ताह में सामान्य से 5 या 10 गुना तक बढ़ाया और दो सप्ताह 19 के बाद कमी आई कि सीरम AST और एएलटी के स्तर का प्रदर्शन किया गया था।
आमतौर पर, दिखावा संचालित पशुओं के यकृत अभी Smoot देखोप्रयोग के अंत में एच, बीडीएल प्राप्त है कि पशुओं के यकृत मुख्य रूप से यकृत और की एक बड़ी मात्रा से भर जाता है कि पित्ताशय की hydrops इसी की सतह पर शोफ और fibrotic पिंड के गठन की विशेषता है कि वास्तु परिवर्तन दिखाने जबकि पित्त (चित्रा 7)। बीडीएल सर्जरी द्वारा प्रेरित कर रहे हैं कि जिगर की विशेषता रूपात्मक परिवर्तन भी मानक ऊतकीय विश्लेषण (चित्रा 8) में प्रत्यक्ष कर रहे हैं।
प्रयोगों के एक ही सेट में, जिगर फाइब्रोसिस के विकास के एक अधिकतम दे रही है, अर्द्ध मात्रात्मक आकलन किया periportal फाइब्रोसिस 0-2 0-4 और perisinusoidal फाइब्रोसिस से मंचन किया गया, जिसमें एक स्कोरिंग प्रणाली का उपयोग करते हुए एक अंधे रोगविज्ञानी द्वारा मूल्यांकन जिगर ऊतक विज्ञान पर आधारित था जैसी कि उम्मीद थी 6. की सिरोसिस के बराबर था कि मूल्य, दिखावा संचालित जानवरों के समूह में मतलब फाइब्रोसिस स्कोर 0.00 ± 0.00 था। टी पशुओं के समूह में इसके विपरीत, मेंटोपी बीडीएल, स्कोर 4.83 ± 0.17 के एक मूल्य के दिन 60 तक तेजी से वृद्धि हुई प्राप्त किया। periportal फाइब्रोसिस के लिए 3 की अधिकतम विश्लेषण किया सभी जानवरों में दिन 20. पर पहुँच गया था, perisinusoidal फाइब्रोसिस प्रयोग के पहले 10 दिनों के दौरान अनुपस्थित था और दो सप्ताह के बाद सबसे पहले ध्यान देने योग्य था। इसके बाद, यह 1.8 ± 0.17 (तालिका 1) के मूल्यों के प्रयोग के अंत तक का समय तेजी से वृद्धि हुई है।
इसके अलावा प्रदर्शन किया गया है कि कई अन्य स्वतंत्र पशु प्रयोगों में, यह फाइब्रोसिस के गठन के लिए चल रहे fibrogenesis (9 चित्रा) का एक परिणाम के रूप में intrahepatic कोलेजन अभिव्यक्ति और बयान की अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य दिखा समय पर निर्भर वृद्धि हुई थी कि मनाया गया। इसी तरह, चल रहे fibrogenesis की प्रक्रिया α-चिकनी पेशी actin तंतुप्रसू संबंधी कोशिकाओं के एक मार्कर का प्रतिनिधित्व करता है कि (α-SMA) के के बुलंद अभिव्यक्ति में ध्यान देने योग्य है, यानी, तारामय कोशिकाओं और पोर्टल myofibroblasts यकृत सक्रियऔर यकृत हाइड्रॉक्सीप्रोलाइन, बहुतायत से कोलेजन में पाया एक एमिनो एसिड 18 (9 चित्रा) matrices। इसके अलावा, myofibroblasts या fibroblasts की मात्रा में वृद्धि का संकेत है कि vimentin की अभिव्यक्ति बीडीएल सर्जरी 20 से सेट करने के बाद बढ़ जाती है। घायल यकृत में सूजन के साथ चालना आगे दृढ़ता से तीव्र और जीर्ण जिगर चोट के दौरान प्रेरित किया और तीव्र जिगर चोट 21,22 दौरान hepato सुरक्षात्मक प्रभाव विकसित कर रहा है कि Lipocalin 2 (LCN2) की वृद्धि की अभिव्यक्ति से परिलक्षित होते हैं।
बीडीएल प्राप्त है कि पशुओं के यकृत घुसपैठ कि भड़काऊ कोशिकाओं CD45 (चित्रा 10) के लिए विशिष्ट है कि एक एंटीबॉडी के साथ विशिष्ट धुंधला से पता लगाया जा सकता है। यह भी PTPRC (प्रोटीन टाइरोसीन फॉस्फेट, रिसेप्टर टाइप) के रूप में जाना जाता है कि इस सेलुलर सतह मार्कर विशेष रूप से एरिथ्रोसाइट्स और प्लाज्मा कोशिकाओं को छोड़कर सभी विभेदित hematopoietic कोशिकाओं में व्यक्त किया है।
| पित्त नली बंधाव के बाद समय (दिन) | कुल बिलीरुबिन | AST (यू / एल) | एएलटी (यू / एल) | पोर्टल फाइब्रोसिस | Perisinusoidal फाइब्रोसिस | कुल स्कोर |
| (एमजी / डीएल) | ||||||
| 0 (एन = 3) | 0.17 ± 0.06 | 192.67 ± 30.50 | 50.33 ± 6.03 | 0.0 ± 0.0 | 0.0 ± 0.0 | 0.0 ± 0.0 |
| 3 (एन = 5) | 6.85 ± 2.21 | 1159.25 ± 319.27 | 566.50 ± 335.25 | 0.0 ± 0.0 | 0.0 ± 0.0 | 0.0 ± 0.0 |
| 7 (एन = 5) | <टीडी> 14.38 ± 2.14 ±976.60 ± 477.16 | 448.20 ± 259.47 | 0.60 ± 0.25 | 0.0 ± 0.0 | 0.60 ± 0.25 | |
| 10 (एन = 5) | 15.92 ± 2.60 | 1916.60 ± 868.25 | 560.40 ± 80.88 | 1.40 ± 0.25 | 0.25 ± 0.25 | 1.67 ± 0.25 |
| 14 (एन = 5) | 17.90 ± 3.84 | 1088.60 ± 276.32 | 505.00 ± 96.15 ± | 2.4 ± 0.25 | 1.0 ± 0.0 | 3.40 ± 0.24 |
| 20 (एन = 4) | 18.00 ± 2.12 | 1072.67 ± 364.27 | 404.00 ± 195.48 | 3.0 ± 0.0 | 1.0 ± 0.0 | 4.0 ± 0.0 |
| 30 (एन = 5) | 16.04 ± 4.79 | 446.40 ± 169.75 | 260.20 ± 126.97 | 2.8 ±; 0.2 | 1.4 ± 0.25 | 4.20 ± 0.20 |
| 60 (एन = 6) | 16.02 ± 1.19 | 484.67 ± 117.79 | 257.17 ± 50.97 | 3.0 ± 0.0 | 1.8 ± 0.17 | 4.83 ± 0.17 |
इस्तेमाल किया संकेताक्षर हैं: एएलटी, alanine aminotransferase; AST, aspartate aminotransferase।
तालिका 1: फाइब्रोसिस एक प्रतिनिधि प्रयोग में स्कोरिंग इस तालिका के डेटा जिगर फाइब्रोसिस C57BL / 6 चूहों 16 में पित्त नली बंधाव द्वारा प्रेरित किया गया था जिसमें एक अध्ययन से reproduced किया गया था।। इस अध्ययन में, बीडीएल सर्जरी के बाद मृत्यु दर 5% थी (2 40 के जानवरों के समय से पहले ही गरीब पशु शर्तों विकसित क्योंकि बलिदान किया गया)।
चित्रा 1: एक पित्त प्रदर्शन के लिए प्रायोगिक स्थापनावाहिनी बंधाव। जानवरों की 37 ओ सी के तापमान पर एक वार्मिंग की थाली पर रखा जाता है और परिचालन क्षेत्र द्रव-अभेद्य, स्वयं चिपकने वाला पर्दे के साथ समग्र कवर किया जाता है। पूरा शल्य चिकित्सा के दौरान, पशु स्थायी रूप से एक संज्ञाहरण प्रणाली से जुड़ा है। सभी इंस्ट्रुमेन्टेशन्स और समाधान (दर्दनाशक दवाओं, एनेस्थेटिक्स, एंटीसेप्टिक समाधान, 0.9% सोडियम क्लोराइड) स्पष्ट रूप से व्यवस्था कर रहे हैं।
चित्रा 2:। शल्य चिकित्सा क्षेत्र की तैयारी पेरिटोनियल गुहा के पहले उद्घाटन, पेट की त्वचा एक बिजली फर शेवर के साथ मुंडा और एक एंटीसेप्टिक धुंध झाड़ू के साथ कीटाणुरहित किया जाना चाहिए। सर्जरी के बाद तरल पदार्थ-अभेद्य, स्वयं चिपकने वाला पर्दे के साथ कवर किया जाता है। पेट एक midline laparotomy (~ लंबाई में 2 सेमी) के साथ खोला जाता है। गुहा उरोस्थि में एक होल्डिंग सिवनी और से फैल आपरेशन क्षेत्र डालने से बढ़ा हैसर्जरी के दौरान निर्बाध प्रयोग की अनुमति Colibri प्रतिकर्षक डालने।
चित्रा 3: पित्त नली का एक्सपोजर। यह डायाफ्राम के लिए छड़ी कर सकते हैं और यकृत hilus स्पष्ट रूप से दिखाई हो जाता है इतना है कि पित्त नली बंधाव आयोजित करने के लिए (ए), जिगर के उदर पक्ष उठाया है। (बी) के बेहतर पित्त नली का पर्दाफाश करने के लिए, पेट दुमदारी साथ ले जाया जाता है एक humidified कपास झाड़ू। पित्त नली एक तीर के साथ चिह्नित है।
चित्रा 4: पित्त नली Ligating। (ए) के पहले कदम में, पित्त नली एक माइक्रो दाँता संदंश का उपयोग पोर्टल शिरा और यकृत धमनी flanking से ध्यान से अलग किया जाता है। (बी) इसके बाद, एक सीवन के आसपास रखा हैपित्त नली और एक शल्य गाँठ के साथ सुरक्षित। (सी) इसके बाद, एक दूसरे सिवनी पहले सिवनी के पास रखा जाता है और पित्त नली के आसपास knotted है। (डी) सिवनी छोटा है, गुहा 0.9% सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ rinsed , और सभी अंगों उनकी शारीरिक स्थिति को बदल दिया।
चित्रा 5:।। साथ पित्त नली का बाँध रही का सही प्रतिनिधित्व टांके की नियुक्ति और पित्त प्रवाह को रोकने कि दो समुद्री मील की सेटिंग दस्तावेज़ करने के लिए, चित्रा 4 में उल्लिखित उसी प्रक्रिया का एक दूरबीन के तहत प्रलेखित किया गया था (ए) बन्दिश पहले सिवनी। पहले सिवनी (बी) बाँध रही है। दूसरी सीवन के साथ पित्त नली (सी) बन्दिश। (डी) दूसरे सीवन के बाँध रही है। (ई) पित्त डी डबल-ligateduct अतिरिक्त टांके का छोटा करने के बाद। (ई ') इस पैनल (ई) का एक स्केच दर्शाया गया है। बाएँ से दाएँ (आर एल), (टू) और मंझला (माले) पालियों जिगर के रूप में अच्छी तरह से पित्त नली, पेट, और ग्रहणी के पदों पर लिखित रहे हैं। स्केच में पित्त नली डबल दो टांके द्वारा ligated है।
चित्रा 6:। पित्त नली, पोर्टल शिरा और चूहों में यकृत धमनी के एनाटॉमी आम पित्त नली के बेहतर शारीरिक स्थान के लिए, पोर्टल शिरा और यकृत धमनी की एक योजना के रूप में चित्रित कर रहे हैं। के रूप में चिह्नित भी सही (आर एल) के पदों पर रहे हैं, छोड़ दिया (टू) मंझला (एमएल) और जिगर की पूंछवाला (सीएल) पालियों।
चित्रा 7: प्रतिनिधि appeara2 सप्ताह दिखावा संचालन और बीडीएल के बाद यकृत की nce। C57BL / 6 चूहों ऑपरेशन या बीडीएल सर्जरी दिखावा के अधीन थे। दो सप्ताह के बाद आंत गुहा खोला गया था। दिखावा संचालित पशुओं के यकृत फाइब्रोसिस के कोई संकेत नहीं दिखाया जबकि, पित्त नली के बंधाव प्राप्त पशुओं के यकृत इसी यकृत की सतह पर शोफ के गठन और fibrotic पिंड के साथ एक अनियमित सतह की संरचना की थी।
चित्रा 8:। Hematoxylin और eosin दाग जिगर वर्गों (ए) दिखावा संचालित थे या तीन सप्ताह (बी) के लिए बीडीएल प्राप्त कि C57BL 6 / जंगली प्रकार के पशुओं से तैयार थे। वर्गों hematoxylin और eosin निम्न मानक प्रक्रियाओं के साथ दाग रहे थे। सूजन के लक्षण (घुसपैठ कोशिकाओं), parenchymal (hepato शामिल है कि बीडीएल जिगर के भीतर विशिष्ट परिवर्तन कृपया ध्यान देंcyte) गल जाना, और पित्त नलिकाओं का प्रसार। प्रत्येक आंकड़ा पैनल में बड़े पैमाने बार 50 माइक्रोन का प्रतिनिधित्व करता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 9: यकृत fibrogenesis के लिए histological और जैव रासायनिक readouts। (ए) जिगर वर्गों 2 सप्ताह के लिए दिखावा ऑपरेशन या बीडीएल प्राप्त है कि जानवरों से तैयार है और सीरियस लाल (ऊपरी पैनल, लाल रंग में कोलेजन तंतुओं) के साथ दाग या α-चिकनी पेशी actin की अभिव्यक्ति (α-SMA) के (कम पैनल के लिए विश्लेषण किया गया immunohistochemistry द्वारा भूरे रंग में, α-SMA के सकारात्मक कोशिकाओं)। प्रत्येक आंकड़ा पैनल में बड़े पैमाने बार 100 माइक्रोन का प्रतिनिधित्व करता है। (बी) यकृत से प्रोटीन के अर्क पश्चिमी धब्बा के अधीन और Expre के लिए विश्लेषण किया गयाकोलेजन प्रकार मैं, α-SMA, और अच्छी तरह से यकृत fibrogenesis की मार्करों स्थापित कर रहे हैं कि vimentin की ssion। Lipocalin -2 (LCN2) की अभिव्यक्ति के लिए चल रहे fibrogenesis साथ जुड़ा हुआ है कि भड़काऊ प्रतिक्रिया इंगित करता है। इस विश्लेषण में, बराबर प्रोटीन लोड हो रहा है β-actin के लिए विशिष्ट एक एंटीबॉडी के साथ दाग की जांच कर रही द्वारा प्रदर्शन किया गया। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 10:। भड़काऊ कोशिकाओं घुसपैठ की रोग प्रतिरक्षण धुंधला सीरियल जिगर वर्गों 3 सप्ताह के लिए पित्त नली बंधाव प्राप्त है कि एक जानवर की एक जिगर से तैयार थे। वर्गों hematoxylin और eosin (ए) के साथ या CD45 (बी) के लिए विशिष्ट है कि एक एंटीबॉडी के साथ दाग रहे थे। कृपया ध्यान दें,पित्त नलिकाओं आसपास के CD45 सकारात्मक कोशिकाओं की उच्च संख्या। सूजन से संकेत मिलता है कि इन विशाल पैठ दिखावा संचालित जानवरों से व्युत्पन्न जिगर वर्गों में दिखाई नहीं देते हैं () नहीं दिखाया। प्रत्येक आंकड़ा पैनल में बड़े पैमाने बार 500 माइक्रोन का प्रतिनिधित्व करता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
Discussion
पित्तरुद्ध जिगर चोट जीर्ण जिगर की बीमारी के साथ रोगियों में यकृत फाइब्रोसिस और सिरोसिस के विकास के लिए प्रमुख प्रेरणा कारकों में से एक है। इन रोगों हलका स्वास्थ्य देखभाल की लागत का उत्पादन है कि इस तथ्य पर आधारित है, यह कई शोधकर्ताओं चल रही यकृत फाइब्रोसिस की रोगजनक तंत्र को समझने की कोशिश कर रहे हैं कि सुबोध है। इसलिए, प्रयोगात्मक मॉडल यकृत में सूजन, फाइब्रोसिस और सिरोसिस एक करने के लिए नेतृत्व कि जटिल तंत्र के विभिन्न पहलुओं की नकल है कि उत्पन्न किया गया है।
सर्जिकल बीडीएल चूहों और चूहों 4,23,24 में प्रतिरोधी पित्तरुद्ध चोट प्रेरित करने के लिए प्रयोग किया जाता है कि सबसे व्यापक प्रयोगात्मक मॉडलों में से एक है। प्रोटोकॉल के अधिकांश में, जानवरों anesthetized हैं और एक midsection laparotomy किया जाता है। इसके बाद, पित्त नली उदर गुहा से खुला है और शल्य चिकित्सा सुतली का उपयोग करते हुए दो बार ligated। एक परिणाम के रूप में, चूहों और चूहों इस सर्जरी डी प्राप्त है किevelop पहली बार में periportal क्षेत्रों में 25 से उत्पन्न कि एक मजबूत तंतुमय प्रतिक्रिया। वर्षों के दौरान कई अलग अलग सर्जिकल तकनीक और संशोधनों का वर्णन किया गया है। विशेष प्रक्रियाओं भी बीडीएल 23 के बाद पुनः कनेक्शन या reanastomosis अनुमति देते हैं। अन्य तकनीक काफी कम नेक्रोसिस गठन और फलस्वरूप hepatocyte प्रसार 24 में जिसके परिणामस्वरूप आंशिक बीडीएल पर आधारित हैं। Cholecystitis के गठन से बचाता है कि पित्ताशय की थैली (पित्ताशय-उच्छेदन) के बाद हटाने के साथ संयोजन में आंशिक बीडीएल भी तीव्र पित्तस्थिरता के लिए एक उत्कृष्ट प्रयोगात्मक मॉडल का प्रतिनिधित्व करता है। यह मानव की स्थिति में 24 के करीब है कि एक मॉडल होने के लिए प्रस्तावित किया गया था। और वास्तव में, इस मॉडल की स्थापना के दौरान, यह पहले से ही यह reproducibly केवल न्यूनतम ऊतकीय ऊतक चोट के साथ पित्तस्थिरता कारण बनता है और पुरानी पित्तस्थिरता 25 के लिए आगे बढ़ना नहीं है कि प्रदर्शन किया गया। इसलिए, यह इस मॉडल अक्षां के अध्ययन के लिए आदर्श है कि सुझाव दिया गया थाउलट पित्तस्थिरता 24 की ई प्रभाव। इससे भी अधिक परिष्कृत तरीके microsurgery पर आधारित है और एक तेजी से और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य रास्ता ही जिगर 26 के चयनित भागों में पित्तरुद्ध जिगर चोट दण्ड करने की अनुमति कर रहे हैं।
मूल बीडीएल प्रोटोकॉल से इन परिष्कृत संशोधनों विशिष्ट अनुसंधान सवालों की जांच करने में बहुत मददगार साबित हो गया है हालांकि, कई प्रयोगशालाओं दुनिया भर में मूल रूप से पित्तरुद्ध जिगर फाइब्रोसिस के लिए एक अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और विश्वसनीय मॉडल के रूप में बीडीएल मॉडल को रोजगार का उद्देश्य। हालांकि, कई जटिलताओं को काफी हद तक तकनीकी अशुद्धियों से परहेज नहीं कर रहे हैं, तो इस मॉडल के आधार पर प्राप्त परिणामों के reproducibility और विश्वसनीयता को बदल सकता है कि हो सकता है। के दौरान या तेजी से सर्जरी के बाद हो सकता है - उदाहरण के लिए, पित्त नली के साथ रक्त वाहिकाओं की चोट से संबंधित जटिलताओं से खून बह रहा (4 3 आंकड़े देखें)। बाद में cardiodepression या आर के साथ संज्ञाहरण की overdosingespiratory विफलता भी प्रक्रिया का परिहार्य जटिलताओं हैं। टांके सही रूप पेरिटोनियल गुहा में प्रदर्शन किया और पित्त लीक नहीं कर रहे हैं पेरिटोनिटिस से पूति को लेकर गंभीर संक्रमण, प्रयोग की पूरी अवधि के दौरान हो सकता है। सर्जरी के दौरान आंत को आकस्मिक चोटों भी पेरिटोनिटिस करने के लिए ले जा सकता है। इसलिए, यह सख्त से निपटने के दिशा-निर्देशों के अनुपालन में हैं जो मानकीकृत प्रोटोकॉल दृढ़ता से अपेक्षा की जाती है कि स्पष्ट है। यह शर्त भी हाल ही में 2013 में 1 नया पशु कल्याण नियम लागू किया है, जो यूरोपीय संघ के देशों के भीतर की मांग की गई थी। इस विनियमन के साथ जुड़े रहे हैं कि संबंधित आवश्यकताओं को नए नहीं हैं और पहले से ही 1959 में प्रस्तावित किया गया था, रसेल और Burch एक नैतिक सुझाव दिया जब मुख्य रूप से एक प्रतिस्थापन, शोधन और कमी (3R) सिद्धांत 27 के आधार पर किया जाता है कि जानवरों के साथ वैज्ञानिक प्रयोगों का आयोजन के लिए रूपरेखा।
Outlin निम्नलिखित जबएड प्रोटोकॉल तकनीकी अशुद्धियों से उत्पन्न हो सकती है कि केवल कुछ उलझने हैं। तीन विशिष्ट मुद्दों के बजाय कम आवृत्ति में उत्पन्न हो सकती है।
सभी सर्जिकल प्रक्रियाओं के साथ के रूप में, संवेदनाहारी की अधिक मात्रा विशेष रूप से हाइपोथर्मिया के साथ संयोजन में पशुओं के लिए खतरे का एक संभावित स्रोत है। सर्जरी के दौरान हृदय जटिलताओं होते हैं, निश्चेतक की आपूर्ति तुरंत रोका जाना चाहिए और ऑपरेटर माउस के लिए संभव ऑक्सीजन के रूप में ज्यादा प्रदान करने के लिए प्रयास करना चाहिए। यह हवा से भरा है और बिगड़ा पशु के मुंह में पंप है कि एक छोटे से प्लास्टिक सिरिंज के माध्यम से किया जा सकता है। वैकल्पिक रूप से प्रभावित पशु की सुनवाई के लिए एक छोटा सा Peleusball के उपयोग के पुनरोद्धार की प्रक्रिया के लिए अक्सर मददगार है।
घाव भरने में समस्याएं
बीडीएल सर्जरी के बाद, चूहों अपने खुद के गले में तेजी या अन्य जानवरों के उन नुकसान पहुंचा सकते हैं। यदि ऐसा होता है, संबंधित चूहों को अलग-अलग होना चाहिएबंदी। खुले घावों के साथ जानवरों घाव के आसपास के क्षेत्र धीरे एक मानक एंटीसेप्टिक के साथ निष्फल और घाव फिर से सिलना किया जाना चाहिए, anesthetized किया जाना चाहिए। अगले तीन दिनों के दौरान, इन जानवरों के घाव नियमित रूप से (दो से तीन बार एक दिन) का निरीक्षण किया जाना चाहिए।
पेट या जलोदर के गठन की Distensions जीवाणु संक्रमण के लिए संकेत कर रहे हैं। ये कारण सर्जरी के दौरान गैर बाँझ काम करने के लिए हो सकता है। संक्रमण की सभी तरह की एक मानवीय समापन बिंदु के रूप में बिना किसी अपवाद के नियंत्रित किया जाना चाहिए और प्रभावित जानवरों का बलिदान किया जाना चाहिए।
हम एक आसान लागू करने के लिए सरल है और एक उच्च reproducibility के साथ संयुक्त केवल कम पशु मृत्यु दर उदाहरण भी देते हैं कि चूहों में बीडीएल के प्रदर्शन की अनुमति देता है कि प्रोटोकॉल का पालन करने के लिए प्रदान की है। शल्य प्रोटोकॉल के सभी जल्दी से कुशल वैज्ञानिकों द्वारा गिरफ्तार किया जा सकता है। पूरा प्रयोग के दौरान, जानवरों के 37 डिग्री सेल्सियस पर एक वार्मिंग की थाली पर रखा है और स्थायी रूप से जुड़े हुए हैंएक संज्ञाहरण व्यवस्था करने के लिए दर्द और संकट को कम करने। सर्जरी के लिए, पेट एक midline laparotomy और यह विदारक बिना डबल ligated पित्त नली के साथ खोला जाता है। यहाँ पर चर्चा कर रहे थे कि प्रतिनिधि परिणाम जिगर आकारिकी (सूजन, फाइब्रोसिस, सिरोसिस) के संबंध में प्ररूपी परिवर्तन अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य हैं और fibrogenesis के विभिन्न पहलुओं का अध्ययन करने के लिए अनुमति दिखाना है कि (उदाहरण के लिए।, दीक्षा, सूजन, प्रगति, अंतिम चरण की बीमारी) निर्धारित समय-बिंदुओं पर।
हम अपने प्रोटोकॉल का सारांश सफलतापूर्वक अन्य प्रयोगशालाओं में इस फाइब्रोसिस मॉडल स्थापित करने के लिए और विभिन्न स्थानों पर विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम की गारंटी करने के लिए आवश्यक है कि सीखने की अवस्था को छोटा करने में मदद मिलेगी कि उम्मीद है। इस प्रकार हम प्रस्तुत प्रोटोकॉल 1959 में रसेल और Burch से अपेक्षा की गई थी कि 3R सिद्धांत का समर्थन करता है और वर्तमान में कई देशों के वाई में लागू कर रहे हैं कि नए पशु कल्याण के नियमों के आधार का प्रतिनिधित्व करता है कि लगता हैपतली यूरोपीय फ्रेमवर्क।
Acknowledgments
लेखकों जर्मन रिसर्च फाउंडेशन (SFB / TRR57, Q3 और Q2) की वित्तीय सहायता को स्वीकार करना होगा। लेखकों तस्वीरों को तैयार करने में उनकी मदद के लिए Mareike Schulz, पास्कल Paschenda, और Klaudia Warzecha धन्यवाद।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane | Forene Abbott | B 506 | |
| Shaver Favorita II | Aeskulap | GT104 | |
| Cutter head | Aeskulap | GT730 | |
| Bepanthen eye and nose ointment | Bayer Vital GmbH | 6029009.00.00 | |
| Warming plate and controller | Labotect | HP 062 | |
| Fluovac anesthesia system | Harvard Apparatus | 34-1030 | |
| ISOFLO (Isoflurane Vapor) vaporiser | Eickemeyer | 4802885 | |
| Scotch Tape | commercially available | ||
| Tissue paper | commercially available | ||
| Durapore silk tape | 3M | 1538-1 | |
| Cotton Gauze swabs | Fuhrmann GmbH | 32014 | |
| Poly-Alcohol Haut…farblos Antisepticum | Antiseptica GmbH | 72PAH200 | |
| Raucodrape OR adhesive drapes | Lohmann & Rauscher GmbH | 33013 | |
| Scissor | Fine Science Tools Inc. | 14074-11 | |
| Graefe forceps straight | Fine Science Tools Inc. | 11050-10 | |
| 6-0 Mersilk suture | Ethicon | K889H | Silk, non-absorbable/Abdominal closure |
| Needle holder Mathieu | Fine Science Tools Inc. | 12010-14 | |
| Colibri retractor | Fine Science Tools Inc. | 17000-03 | |
| Cotton swabs | Noba Verbandmittel | 974202 | |
| Cotton swabs | Heinz Herenz Medizinalbedarf GmbH | 1032238 | |
| 25mL beaker | Schott Duran | 50-1150 | |
| Isotonic (0.9%) NaCl solution | DeltaSelect GmbH | PZN 00765145 | |
| Micro-serrations forceps Moria MC31 | Fine Science Tools Inc. | 11370-31 | Bile duct separation |
| 5-0 Mersilene suture | Ethicon | EH6731H | Polyester, non-absorbable/Bile duct ligation |
| 5mL syringe | BD Discardit II | 300296 | |
| 1mL syringe | BD Plastipak | 300013 | |
| Sterican needle 26 G x 1 | B. Braun | 4657683 | |
| Buprenorphine | Essex Pharma | 997.00.00 | Analgeticum, 0.1 mg/kg |
| Infrared lamp | Petra Electric | IR 11 |
References
- Liedtke, C., et al. Experimental liver fibrosis research: update on animal models, legal issues and translational aspects. Fibrogenesis Tissue Repair. 6 (1), 19 (2013).
- Aller, M. A., Arias, J. L., García-Domínguez, J., Arias, J. I., Durán, M., Arias, J. Experimental obstructive cholestasis: the wound-like inflammatory liver response. Fibrogenesis Tissue Repair. 1 (1), 6 (2008).
- Tacke, F., Weiskirchen, R. Update on hepatic stellate cells: pathogenic role in liver fibrosis and novel isolation techniques. Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 6 (1), 67-80 (2012).
- Weiler-Normann, C., Herkel, J., Lohse, A. W. Mouse models of liver fibrosis. Z. Gastroenterol. 45 (1), 43-50 (2007).
- Cameron, G. R., Oakley, C. L. Ligation of the common bile duct. J. Pathol. 35 (5), 769-798 (1932).
- Cameron, G. R., Hasan, S. M. Disturbances of structure and function in the liver as the result of biliary obstruction. J. Pathol. 75 (2), 333-349 (1958).
- Accatino, L., Contreras, A., Fernańdez, S., Quintana, C. The effect of complete biliary obstruction on bile flow and bile acid excretion: postcholestatic choleresis in the rat. J Lab Clin Med. 93 (5), 706-717 (1979).
- Accatino, L., Contreras, A., Berdichevsky, E., Quintana, C. The effect of complete biliary obstruction on bile secretion. Studies on the mechanisms of postcholestatic choleresis in the rat. J Lab Clin Med. 97 (4), 525-534 (1981).
- Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J. Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat. Br J Exp Pathol. 65 (3), 305-311 (1984).
- Tuchweber, B., Desmoulière, A., Bochaton-Piallat, M. L., Rubbia-Brandt, L., Gabbiani, G. Proliferation and phenotypic modulation of portal fibroblasts in the early stages of cholestatic fibrosis in the rat. Lab Invest. 74 (1), 265-278 (1996).
- Desmoulière, A., et al. Extracellular matrix deposition, lysyl oxidase expression, and myofibroblastic differentiation during the initial stages of cholestatic fibrosis in the rat. Lab Invest. 76 (6), 765-778 (1997).
- Arias, M., et al. Adenoviral expression of a transforming growth factor-β1 antisense mRNA is effective in preventing liver fibrosis in bile-duct ligated rats. BMC Gastroenterol. 3 (29), (2003).
- Borkham-Kamphorst, E., et al. Dominant-negative soluble PDGF-β receptor inhibits hepatic stellate cell activation and attenuates liver fibrosis. Lab. Invest. 84 (6), 766-777 (2004).
- Borkham-Kamphorst, E., Huss, S., Van de Leur, E., Haas, U., Weiskirchen, R. Adenoviral CCN3/NOV gene transfer fails to mitigate liver fibrosis in an experimental bile duct ligation model because of hepatocyte apoptosis. Liver Int. 32 (9), 1342-1353 (2012).
- Borkham-Kamphorst, E., et al. The anti-fibrotic effects of CCN1/CYR61 in primary portal myofibroblasts are mediated through induction of reactive oxygen species resulting in cellular senescence, apoptosis and attenuated TGF-β signaling. Biochim. Biophys. Acta. 1843 (5), 902-914 (2014).
- Huss, S., et al. Development and evaluation of an open source Delphi-based software for morphometric quantification of liver fibrosis. Fibrogenesis Tissue Repair. 3 (1), 10 (2010).
- Borkham-Kamphorst, E., Drews, F., Weiskirchen, R. Induction of lipocalin-2 expression in acute and chronic experimental liver injury moderated by pro-inflammatory cytokines interleukin-1β through nuclear factor-κB activation. Liver Int. 31 (5), 656-665 (2011).
- Karlmark, K. R., et al. The fractalkine receptor CX3CR1 protects against liver fibrosis by controlling differentiation and survival of infiltrating hepatic monocytes. Hepatology. 52 (5), 1769-1782 (2010).
- Tarcin, O., et al. Time course of collagen peak in bile duct-ligated rats. BMC Gastroenterol. 11, 45 (2011).
- Takase, S., Leo, M. A., Nouchi, T., Lieber, C. S. Desmin distinguishes cultured fat-storing cells from myofibroblasts, smooth muscle cells and fibroblasts in the rat. J. Hepatol. 6 (3), 267-276 (1988).
- Borkham-Kamphorst, E., et al. Protective effects of lipocalin-2 (LCN2) in acute liver injury suggest a novel function in liver homeostasis. Biochim. Biophys. Acta. 1832 (5), 660-673 (2013).
- Labbus, K., et al. Proteomic profiling in Lipocalin 2 deficient mice under normal and inflammatory conditions. J Proteomics. 78, 188-196 (2013).
- Kirkland, J. G., et al. Reversible surgical model of biliary inflammation and obstructive jaundice in mice. J. Surg. Res. 164 (2), 221-227 (2010).
- Heinrich, S., et al. Partial bile duct ligation in mice: a novel model of acute cholestasis. Surgery. 149 (3), 445-451 (2011).
- Scholten, D., et al. Genetic labeling does not detect epithelial-to-mesenchymal transition of cholangiocytes in liver fibrosis in mice. Gastroenterology. 139 (3), 987-998 (2010).
- Aller, M. A., et al. A half century (1961-2011) of applying microsurgery to experimental liver research. World J Hepatol. 4 (7), 199-208 (2012).
- Russell, W. M. S., Burch, R. The Principles of Humane Experimental Technique. , London, Methuen. (1959).
