Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Metoder til Sammenligning Næringsstoffer i Beebread Lavet af Africanized og europæiske honningbier og virkningerne på hæmolymfe Protein Titere

Published: March 17, 2015 doi: 10.3791/52448
Automatic Translation
1, 2, 3
1Carl Hayden Bee Research Center, USDA-ARS, 2Coupeville, WA, USA, 3Ecotoxicology Division, Eurofins Agroscience Services, Inc.

Abstract

Honningbier få næringsstoffer fra pollen de indsamler og butik i bikuben som beebread. Vi udviklede metoder til at kontrollere pollenkilden at bier indsamle og konvertere til beebread ved at placere kolonier i et specielt konstrueret lukket flyvning område. Metoder blev udviklet til at analysere protein og aminosyresammensætningen af ​​pollen og beebread. Vi beskriver også, hvordan forbruget af beebread blev målt og metoder til at bestemme voksen arbejdstager bi hæmolymfe protein titre efter fodring på beebread for 4, 7 og 11 dage efter fremkomsten. Metoder blev anvendt for at bestemme om genotype påvirker omdannelsen af ​​pollen til beebread og satsen, at bier forbruge og købe protein fra det. To underarter (europæiske og Africanized honningbier, EHB og AHB henholdsvis) blev leveret med det samme pollen kilde. Baseret på de udviklede metoder, beebread fra begge underarter havde lavere proteinkoncentrationer og pH-værdier end pollen. Generelt aminosyre contrationer i beebread foretages af parterne EHB eller AHB var ens og forekom ved højere niveauer i beebread end i pollen. Både AHB og EHB forbruges betydeligt mere af beebread fra AHB end EHB. Selvom EHB og AHB forbruges tilsvarende mængder af hver type beebread, hæmolymfe protein koncentrationer i AHB var højere end i EHB. Forskelle i protein erhvervelse mellem AHB og EHB kan afspejle miljømæssige tilpasninger, der vedrører det geografiske område, hvor hver underart udviklet sig. Disse forskelle kan bidrage til en vellykket etablering af AHB populationer i den nye verden på grund af virkningerne på yngel opdræt og koloni vækst.

Introduction

Ernæring spiller en fundamental rolle for sundhed og livskraft honningbien kolonier og i deres virksomhed som befolkninger. Næringsstoffer fra mad giver energi og de biokemiske komponenter, der kræves for yngel opdræt, termoregulering, fouragere og immunrespons. For honningbikolonier, de næringsstoffer er nødvendige for at vokse koloni befolkninger og bevare deres helbred kommer fra nektar og pollen. Nectar giver kulhydrater og pollen leverer de resterende kostbehov såsom protein, lipider, vitaminer og mineraler 1.

Underart af honningbier kan variere i ernæringsmæssigt baseret koloni-level parametre som arbejdstager levetid, yngel opdræt, og mekanismer for social immunitet 2-6. Disse forskelle kan være knyttet til hvordan fødevarer, især pollen behandles af koloni og fordøjes i individer. Pollen er lagret i kam celler og gennem mikrobielt medierede mælkesyrefermentering er kemisk ændret 11-14.

Her beskriver vi metoder anvendt til at sammenligne sammensætning og forbrug af beebread fra forskellige underarter af honningbier. Metoder til at måle de resulterende hæmolymfe protein titre i bier også er beskrevet. Tidligere undersøgelser om den ernæringsmæssige sammensætning beebread blev gjort med europæiske honningbier (EHB) 10,15,16. Dog kan der være forskelle i beebread fremstillet af bier af forskellige underarter, selv når de lever på samme pollen. EHB og AHB blev sammenlignet fordi disse subspecies har forskellige adfærdsmæssige og fysiologiske forskelle, der kunne relateres til køb 17 forarbejdning og næringsstof mad. Nogle af de mest bemærkelsesværdige forskelle er, at AHB indsamle og forbruge mere pollen end EHB og synes at omdanne det lettere i kuld 18. AHB kolonier har højere myldrende satser end EHB og forsvinde når fødevareressourcer bliver begrænset 19-23. Forsvinder er sjælden i EHB. AHB har også en højere stofskifte end EHB 24. Den ernæringsmæssige grundlag for forskellene koloni plan mellem EHB og AHB kan være relateret til hastigheden af pollen indsamling og også dens næringsindholdet (f.eks, aminosyrer og protein), efter at det er konverteret til beebread. Beebread forbrug og det resulterende protein købet også kan spille en rolle i forskellene koloni plan mellem EHB og AHB. Brug de udviklede metoder, EHB og AHB gjort beebread fra samme pollen kilde. Den beebread blev derefter føres tilbage til bierne i each underarter og kunne afgøre, om bier erhverve protein fra beebread på en måde karakteristisk for deres underart eller kilden til beebread.

Protocol

1. Indhentning Beebread fra AHB og Ehb Colonies

  1. Placer pollenfælder på honningbi kolonier og indsamle pollen. Grind pollen til et fint pulver (svarende til pollen kaste fra støvknapper) under anvendelse af en kaffemølle.
  2. Etablere 5 kolonier hver af AHB og EHB i et lukket flyvning område (EFA), så bier fouragerer kun på pollen forudsat. For at forhindre arbejdstagere glider mellem EHB og AHB kolonier, opdele EFA i adskilte sektioner, så bierne ikke kan krydse mellem dem. Placer individuel EHB eller AHB kolonier med 3,500-4,000 bier, voks kam med nektar, honning, umodne yngel og tom kam i hver sektion af EFA.
    BEMÆRK: Kolonierne ikke har gemt pollen når etableret. Satsen, at pollen er gemt kan øges ved ikke at medtage en æglæggende dronning i kolonierne.
  3. Feed jorden pollen til kolonier ved at placere en bakke med pollen i hver sektion af EFA. Spredning omkring 60 g pollen på hver bakke, så foraging bier kan samle det som corbicular belastninger og opbevare pollen i deres kolonier som beebread. Fortsæt levere frisk pollen på hver bakke dagligt i 3 uger.
  4. Se beebread fra de europæiske kolonier som europæisk beebread (EBB), og fra Africanized kolonier som Africanized beebread (ABB).

2. Fodring Bier i bure

  1. Placer rammer af forseglede arbejdstager yngel fra AHB og EHB kolonier i separate fremspiring bure i en miljømæssig rum indstillet til 32-34 ° C og 40% relativ fugtighed ..
  2. Når arbejderne opstår og er omkring 24 timer gamle, oprette 12 plexiglas bioassay bure (dimensioner = 11,5 x 7,5 x 16,5 cm 3), og tilføje enten 100 nyopstået EHB eller 100 nyligt opstået AHB bier til hvert bur. Placer en sektion af kam med et kendt antal enten EBB eller ABB-celler (24-30 celler pr bur) i hvert bur til at generere følgende behandlingskombinationer: AHB Fed ABB, EHB Fed ABB, AHB Fed ebbe og EHB Fed EBB. (4 behandlinger; 6bure per behandling; 24 bure i alt).
  3. Tilføj hætteglas med vand og en 50% honning og vand løsning formuleret af volumen til hvert bur. Fyld honning og vand hætteglas dagligt for de 11 dages undersøgelse periode.

3. Sampling bier og Beebread og anslå forbruget

  1. Prøve 10 nyopstået EHB og AHB arbejdere forud for at placere dem i bure. Se disse som dag 0 bier og få dem tjene som et grundlag for hæmolymfe protein koncentrationer.
  2. Fjern 10 bier fra hvert bur, efter at de fodres med EBB eller ABB for 4, 7 og 11 dage.
  3. Placer levende bier i individuelle mikrocentrifugerør og indstillet på isposer. Vælg en delprøve af fire bier til analyse af hæmolymfe proteinkoncentration.
  4. Efter prøveudtagning bier på Dag 11, tælle antallet af kammen celler, der stadig indeholder beebread. Dette er et relativt mål for beebread forbrug.
  5. Fjern de resterende beebread fra cellerne i hvert bur og opbevares i separspiste mikrocentrifugerør efter bur. Hold beebread prøver ved -80 ° C indtil analyseret for pH, opløselige proteinkoncentration og amino syreindhold.

4. Estimering pH Pollen og Beebread

  1. Tag seks tilfældige 0,3 g prøver af pollen føres til bier i EFA og opløse det i 300 pi destilleret vand. PH måles ved hjælp af en vandtæt dobbelt junction pH spyd med en nøjagtighed på 0,01.
  2. Tag 0,3 g prøve af beebread der forblev efter 11 dages fodring periode i hvert bur. Opløs beebread i 300 pi destilleret vand og måle pH som beskrevet for pollen (4.1).

5. Protein Analyse

  1. Tag seks prøver af pollen og en stikprøve af ebbe og ABB fra hvert bur. Opbevar prøver ved -20 ° C indtil analyseret for opløseligt protein koncentration.
  2. Bland 20 mg af enten pollen eller beebread med 1.000 pi 0,1 M phosphatpufferopløsning (PBS).
  3. Vortex blandingen i 10 sek og centrifugeres ved 571,2 xg i 1 min.
  4. Fjern en 10 pi prøve af supernatanten og sted i brønde i en 96 brønds fladbundet EIA / RIA polystyrenplade. Repliker hver prøve i tre brønde.
  5. Tegn hæmolymfe fra bier indsamlet fra hvert bur ved at indsætte en 20 pi kapillarrør (som var blevet opvarmet og trukket til en nål-spids) i den højre laterale del af thorax nær punktet for fastgørelse af fløjene. Saml ekstra hæmolymfe, hvis det er nødvendigt, ved at indsætte det samme rør i membranen mellem de abdominale tergites.
  6. Tilsæt 1 pi hæmolymfe til 9 pi 0,1 M PBS. Opbevar hæmolymfe opløsning ved -20 ° C indtil analyse for opløseligt protein.
  7. Bestem totalt opløseligt protein koncentrationer i pollen, beebread og hæmolymfe prøver ved hjælp af en kommerciel Bradford protein assay kit. Følg producentens anvisninger.
  8. Etablere en standardkurve at estimere opløseligt protein Concentration i prøverne ved måling protein absorbans med kendte proteinkoncentrationer i bovint serumalbumin (BSA). Mål protein absorbans ved 595 nm ved anvendelse af et spektrofotometer.

6. Aminosyreanalyse

  1. Pool individuelle prøver fra kam celler af hver koloni til at skabe et repræsentativt udvalg af EBB og ABB til analyse.
  2. Læs 50 mg pollen eller beebread prøve afvejet i autosampler, og der tilsættes 1 ml destilleret vand til beholderen, sammen med 100 pi af en 50 ng / pi intern standard opløsning bestående af d4-alanin, d 23 -lauric syre, 13C 6 Glucose og d 39 -arachidiac syre.
  3. Cap prøven og sonikeres i 5 minutter.
  4. Betingelse en HLB patronen ved at tilsætte 1 ml methanol, ækvilibreret ved tilsætning af 1 ml destilleret vand efterfulgt af tilsætning af 1 ml af beebread eller pollen prøve. Patronen vaskes med 1 ml 5,0% MeOH / H2O og elute med 1 ml 80% methanol / H 2 O.
  5. Inddampes prøven til tørhed under en strøm af nitrogen. Opløs prøven med 50 pi pyridin og 100 pi N, O-bis (trimethylsilyl) acetamid + trimethylchlorsilan (BSTFA + TMCS).
  6. Cap og inkubere prøven ved 70 ° C i 30 min.
  7. Lad prøven køle og overføre det til en ren autoprøveudtagningshætteglas.
  8. Cap og prøven anbringes i en Mass Selective Detector forbundet med en gaskromatograf til at analysere prøverne, både for flygtige forbindelser og organiske syrer. Adskil sukker og organiske syrer efter TMS derivatisering med BSTFA + TMCS anvendelse af en søjle (30 mx 0,25 mm id) med en 1,0 um filmtykkelse.
  9. Indstil kolonnen ovn ved 50 ° C i 2 min, derefter øge temperaturen lineært til 290 ° C ved 5 ° C / min. og hold i 7 min. Indstil GC injektor og GC / MS interface til 250 ° C og 290 ° C.
    1. Brug Helium som bærer på en flow på 1,0 ml / min. Indstil MS kilde temperatur til 230 ° C.
  10. Tune og kalibrere massespektrometer dagligt med perfluortributylamin (PFTBA). Brug en 1 pi injektion af PFTBA i fuld scanning (35-700 amu) positiv ion-mode for at få oplysninger om forekomsten og koncentrationer af aminosyrer.

Representative Results

Beebread blev opbevaret i -80 ° C i mindre end en måned, før de analyseres for pH og proteinkoncentration, og omkring 4 måneder før aminosyreanalyse. Beebread afveg fra pollen i pH og proteinkoncentration (figur 1). PH beebread var lavere end pollen, som var proteinkoncentrationen. Både EHB og AHB forbrugt mere ABB end EBB (figur 2).

Niveauer af opløseligt protein i hæmolymfe af AHB var betydeligt højere end EHB uanset typen af beebread de forbruges (figur 3). Disse forskelle i hæmolymfe protein niveauer forekom selvom EHB og AHB forbruges tilsvarende mængder af hver type beebread. Alderen på bierne på tidspunktet for prøveudtagningen væsentligt påvirket opløseligt protein koncentrationer i hæmolymfe. Proteinkoncentrationer var signifikant lavere i dag-4 bier sammenlignet med dag-7 eller 11, som adskilte sig ikke.

_content "> Af de 10 aminosyrer, der er essentielle for honningbier, blev alle men histidin detekteret i pollen. I de fleste tilfælde aminosyre koncentrationer målt i beebread var højere end i pollen (figur 4). For eksempel koncentrationer af leucin og threonin var omkring 60% højere i beebread sammenlignet med pollen og valin koncentrationer var omkring 25% højere. alanin, asparaginsyre, glutamin og methionin niveauer var også højere i beebread end i pollen. Aminosyrer koncentrationer ikke afviger meget mellem ABB og EBB med undtagelse af phenylalanin og cystein. fenylalaninniveau var omkring dobbelt så høj hos ABB i forhold til enten EBB eller pollen. cysteinkoncentrationer var lavere i EBB forhold til ABB eller pollen. tryptophan var den eneste aminosyre til stede i højere koncentrationer i pollen end i EBB eller ABB. Koncentrationer af prolin i pollen og ABB var højere end i EBB.


Figur 1: Sammenligning af pH (A) og opløseligt protein-koncentrationer (B) i pollen og beebread fra europæiske (EHB) eller Africanized (AHB) honningbier. PH af pollen var signifikant højere end beebread som bestemt ved variansanalyse (F 2,12 = 3725, p <0,0001), efterfulgt af en Tukeys W- multiple sammenligningstest. Proteinkoncentrationen i pollen var signifikant højere end i beebread fra EHB (EBB) eller AHB (ABB) (F 2,27 = 16.49; p <0,0001). Midler efterfulgt af det samme bogstav er ikke signifikant forskellige på 0,05 niveau.

Figur 2
Figur 2: Den gennemsnitlige andel af celEr der indeholder beebread der var helt forbruges over en 11 dages interval af bur bier. Den beebread blev foretaget af enten europæiske (EHB) eller Africanized (AHB) bier anvender samme pollen kilde. Midler blev estimeret fra fem bure af hver behandling; dem med det samme bogstav er ikke signifikant forskellige på 0,05 niveauet som bestemt ved en envejs variansanalyse (F 3,16 = 7,3, p = 0,003) og Tukeys W test. Denne figur er blevet ændret fra 25.

Figur 3
Figur 3: Den gennemsnitlige koncentration af protein i hæmolymfe fra europæiske (EHB) eller Africanized (AHB) honningbier fodret beebread foretaget af europæiske (EBB) eller Africanized (ABB) bier til 4, 7, og 11 dage Et analyse gentagne foranstaltninger af. varians angivet signifikante forskelle mellem 4 skatment grupper (F 3,20 = 19,7, p <0,001). Niveauer af opløseligt protein i AHB Fed ABB var betydeligt højere end EHB Fed ABB (p = 0,008) eller EBB (p = 0,018). Alderen på bierne på tidspunktet for prøveudtagningen væsentligt påvirket opløseligt protein koncentrationer i hæmolymfe. Niveauer var signifikant lavere i dag 4 bier sammenlignet med dag-7 (p <0,0001) eller 11 (p = 0,001). Dag 7 og day11 bier adskilte sig ikke (p = 0,149). Dette tal er blevet ændret fra 25.

Figur 4
Figur 4:. Koncentrationer af aminosyrer (ug per gram pollen eller beebread) i pollen eller beebread lavet af det EBB er beebread foretaget af de europæiske bier og ABB blev lavet af Africanized bier. Tryptophan, cystein, phenylalanin og prolin blev afbildet separat med henblik på klarhed i præsenterer deres beløb. Dette tal er blevet ændret fra 25.

Discussion

Ved hjælp af de ovenfor beskrevne metoder, fandt vi, at beebread fra AHB blev indtaget i større mængder af både AHB og EHB. Selvom EHB og AHB forbruges tilsvarende mængder af hver type beebread, AHB havde højere hæmolymfe protein titre. Resultaterne er baseret på vores metoder lignede tidligere rapporter, hvor hæmolymfe protein niveauer i AHB var højere end i EHB selvom begge blev fodret de samme kost 26. Ved at måle forbruget af ebbe og ABB, som blev forbrugt ved forskellige satser med både EHB og AHB blev det bestemt, at hæmolymfe protein koncentrationen i hver underart ikke kunne hæves ved at øge fødevareforbrug. Der synes at være et plateau for hæmolymfe proteinkoncentration i arbejdstagere sygeplejerske bi alder, og at setpunktet for plateauet er højere i AHB end EHB.

Der er flere vigtige forudsætninger for oprettelse af kolonier for beebread produktion, der vil optimere hastigheden af ​​pollen opbevaring. Først colonies brug rammer med åben yngel. Uden åben yngel at fodre, vil arbejderne ikke indsamle meget pollen. For det andet skal koloni være queenless så ingen ekstra kuld produceres. Brood opdræt kræver store mængder pollen, og kun overskydende pollen er gemt. I de små kolonier, der er etableret i EFA, ville der være lidt pollen skal lagres som beebread hvis yngel områder blev ekspanderende så kolonier skal være queenless. Endelig for beebread skal foretages, pollen skal indsamles som corbicular belastninger og opbevares i kam celler. Hvis pollen opsamles i pollenfælder, skal det slibes til et fint pulver, inden han forelægger det for bierne, så de kan indsamle det som corbicular belastninger.

Metoderne til at måle forbruget af beebread genereret kvalitative snarere end absolutte skøn. Den eneste forbrug, der blev talt var, da celler blev fuldstændig tømt for bi brød. Et mere nøjagtigt skøn over det samlede forbrug bi brød kan opnås ved at fjerne bi brEAD fra cellerne og gøre det til en patty, der kunne vejes før og efter forsøgsperioden. , Men vi ønskede at holde bi brød i cellerne, så bierne kan æde det som de ville i en koloni og måske fortsætte behandlingen det i løbet af undersøgelsen periode. Forskellen i vægt af kammen sektioner før og efter undersøgelsen blev ikke brugt som et skøn over forbruget, fordi vægten kunne have steget, fordi bierne sætte den fortyndede honning fodret med dem i nogle celler.

Arbejderne også kunne have tilføjet nogle af den fortyndede honning til bi brød. Af disse årsager blev celler indeholdende omtrent lige mængder af bi brød før og efter fodring periode talt og genererede en kvalitativ måling. Alligevel var der en slående forskel mellem de to typer af beebread i antallet af tomme ABB talte celler sammenlignet med EBB efter 11 dage.

Bestemmelse når de opbevares pollen bliver beebread kan være difficult fordi bierne tilføjer løbende pollen til celler. Kolonierne, der anvendes til fremstilling beebread blev etableret med rammer af åben kuld så bierne ville indsamle pollen. Men kolonierne var queenless så der var larver foder kun omkring 9 dage efter koloni blev etableret. For den resterende del af perioden 3. uge, da kolonier var i EFA, pollen, som bierne indsamlet blev opbevaret og bliver konverteret til beebread. Holde den lagrede pollen i kammen celler til yderligere 11 dage, hvor tilføre den til bier i bure kan også have fortsat behandling af pollen til beebread. Omdannelsen af pollen til bi brød tager omkring 7 dage 8. Den beebread tilføres EHB og AHB havde en lavere pH og reducerede proteinkoncentrationer sammenlignet med pollen fodres. Lignende fund af ændringer i pollen omregnet beebread er blevet rapporteret af andre 7,10,27. Vores resultater afveg fra tidligere rapporter dog i, at der var forskelle i koncentrationer of visse aminosyrer mellem beebread og pollen. Ændringerne i både protein og aminosyre koncentrationer kan skyldes aktiviteten af proteolytiske enzymer, kan den kilde, som er bierne selv eller mikrobielle samfund etableret i beebread 7,8,28,29.

De metoder, der anvendes til at måle proteinkoncentrationen lignede dem tidligere beskrevet for at bestemme virkningerne af protein i kosten på Africanized og europæiske bier 26. I forlængelse af de metoder, var vi i stand til at estimere opløseligt protein i pollen og beebread. Disse metoder genereret lignende resultater til tidligere rapporter 7,10,27. Vores resultater giver yderligere beviser for, at AHB mere effektivt assimilere kosten protein end EHB, og at dette kan være en afgørende faktor i den økologiske dominans AHB i de fleste regioner, hvor det er indvandret og etablere 30-32.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
waterproof double junction pH spear  Thermo Fisher
Coffee Grinder Mr. Coffee  model 1DS77
Dulbecco's phosphate buffer solution Emd-millipore BSS-1005-B
EIA/RIA polystyrene plate Sigma-Aldrich-Corning CLS3590-100EA
microcapillary pipets Kimble Glass Inc.
Quick Start Bradford Protein Assay Kit 2  Bio-Rad #500-0202
Spectrophotometer Biotek Synergy HT 
Mass Selective Detector  Agilent 5973N
HLB cartridge
gas chromatograph  Agilent 6930
 gas chromatography column  A J&W Scientific  DB-1701
d4-alanine  Sigma-Aldrich 488917
d23-lauric acid Sigma-Aldrich 451401
13C6-glucose Sigma-Aldrich 389374
Pyridine  Sigma-Aldrich 270970
N,O-Bis (trimethylsilyl)trifluoroacetamide +  
Trimethylchlorosilane (BSTFA + TMCS) Sigma-Aldrich 33148
Perfluorotributylamine (PFTBA) Sigma-Aldrich 442747-U
d39-arachidiac acid Cambridge Isotope 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Brodschneider, R., Crailsheim, K. Nutrition and health in honey bees. Apidologie. 41 (3), 278-294 (2010).
  2. Spivak, M. The relative success of Africanized and European honey-bees over a range of life-zones in Costa Rica. J. Appl. Ecol. 29 (1), 150-162 (1992).
  3. Schneider, S. S., McNally, L. C. Spatial foraging patterns and colony energy status in the African honey bee Apis mellifera scutellata. J. Insect Behav. 6 (2), 195-210 (1993).
  4. Becerra-Guzman, F., Guzman-Novoa, E., Correa-Benitez, A., Zozaya-Rubio, A. Length of life, age at first foraging and foraging life of Africanized and European honey bee (Apis mellifera) workers, during conditions of resource abundance. J. Api. Res. 44 (4), 151-156 (2005).
  5. Saltykova, E. S., Lvov, A. V., Ben’kovskaya, G. V., Poskryakov, A. V., Nikolenko, A. G. Interracial differences in expression of genes of antibacterial peptides, Abaecin, Hymenoptaecin, and Defensin, in bees Apis mellifera mellifera and Apis mellifera caucasica. J. Evol. Biochem. Phys. 41 (5), 506-510 (2005).
  6. Decanini, L. I., Collins, A. M., Evans, J. D. Variation and heritability in immune gene expression by diseased honeybees. J. Hered. 98 (3), 195-201 (2007).
  7. Gilliam, M. Microbiology of pollen and beebread: the genus Bacillus. Apidologie. 10 (3), 269-274 (1979).
  8. Gilliam, M. Microbiology of pollen and beebread: the yeasts. Apidologie. 10 (3), 43-53 (1979).
  9. Gilliam, M. Identification and roles of non-pathogenic microflora associated with honey bees. FEMS Microbiology Letters. 155 (1), 1-10 (1997).
  10. Loper, G. M., Standifer, L. N., Thompson, M. J., Gilliam, M. Biochemistry and microbiology of bee-collected almond (Prunus dulcis) pollen and beebread. I. Fatty acids, sterols, vitamins, and minerals. Apidologie. 11 (1), 63-73 (1980).
  11. Khachatryan, Z. A., et al. Predominant role of host genetics in controlling the composition of gut microbiota. PLoS ONE. 3 (8), e3064 (2008).
  12. Turnbaugh, P. J., Ley, R. E., Mahowald, M. A., Magrini, V., Mardis, E. R., Gordon, J. I. An obesity associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest. Nature. 444 (7122), 1027-1031 (2006).
  13. Ley, R. E., et al. Obesity alters gut microbial ecology. Proc. Natl. Acad. Sci. 102 (31), 11070-11075 (2005).
  14. Ley, R. E., Peterson, D. A., Gordon, J. I. Ecological and evolutionary forces shaping microbial diversity in the human intestine. Cell. 124 (4), 837-848 (2006).
  15. Standifer, L. N., McCaughey, W. F., Dixon, S. E., Gilliam, M., Loper, G. M. Biochemistry and microbiology of pollen collected by honey bees (Apis mellifera L.) from almond, Prunisdulcis. II. Protein, amino acids and enzymes. Apidologie. 11 (2), 163-171 (1980).
  16. Human, H., Nicolson, S. W. Nutritional content of fresh, bee-collected and stored pollen of Aloe greatheadii var davyana (Asphodelaceae). Phytochem. 67 (14), 1486-1492 (2006).
  17. Schneider, S. S., DeGrandi-Hoffman, G., Smith, D. The African honeybee: Factors contributing to a successful biological invasion. Ann. Rev. Entomol. 49, 351-376 (2004).
  18. Winston, M. The biology and management of Africanized honey bees. Annu. Rev. Entomol. 37, 173-193 (1992).
  19. Woyke, J. Brood-rearing efficiency and absconding in Indian honeybees. J. Apic. Res. 15 (3/4), 133-143 (1976).
  20. Fletcher, D. J. C. Brood rearing and absconding of tropical honey bees. African Bees. , Apimondia. Pretoria, South Africa. 96-102 (1977).
  21. Winston, M. L., Otis, G. W., Taylor, O. R. Absconding behavior of the Africanized honey bee in. South America. J. Api. Res. 18 (2), 85-94 (1979).
  22. Schneider, S. S., McNally, L. C. Factors influencing seasonal absconding in colonies of the African honey bee, Apis mellifera scutellata. Insectes Soc. 39 (4), 402-423 (1992).
  23. Hepburn, H. R., Reece, S. L., Neumann, P., Moritz, R. F. A., Radloff, S. E. Absconding in honeybees (Apis mellifera) in relation to queen status and mode of worker reproduction. Insectes Soc. 46 (4), 323-326 (1999).
  24. Harrison, J. F., Fewell, J. H., Anderson, K. E., Loper, G. M. Environmental physiology of the invasion of the Americas by Africanized honeybees. Integr. Comp. Biol. 46 (6), 1110-1122 (2006).
  25. DeGrandi-Hoffman, G., Eckholm, B. J., Huang, M. H. A comparison of bee bread made by Africaized and European honey bees (Apis mellifera) and its effects on hemolymph protein titers. Apidologie. 44 (1), 52-63 (2013).
  26. Cappelari, F. A., Turcatto, A. P., Morais, M. M., DeJong, D. Africanized honey bees more efficiently convert protein diets into hemolymph protein than do Carniolan bee (Apis melliferacarnica). Genet. Mol. Res. 8 (4), 1245-1249 (2009).
  27. Human, H., Nicolson, S. W. Nutritional content of fresh, bee-collected and stored pollen of Aloe greatheadii var davyana (Asphodelaceae). Phytochem. 67, 1486-1492 (2006).
  28. Bonvehi, J. S., Jorda, R. E. Nutrient composition and microbiological quality of honeybee-collected pollen in Spain. J. Agric. Food Chem. 45 (3), 725-732 (1997).
  29. Anderson, K. E., et al. Microbial ecology of the hive and pollination landscape: Bacterial associates from floral nectar, the alimentary tract and stored food of honey bees (Apismellifera). PLoS ONE. 8 (12), e83125 (2013).
  30. Southwick, E. E., Roubik, D. W., Williams, J. M. Comparative energy balance in groups of Africanized and European honey bees: ecological implications. Comp. Biochem. Physiol. A. 97 (1), 1-7 (1990).
  31. Spivak, M. The relative success of Africanized and European honey-bees over a range of life-zones in Costa Rica. J. Appl. Ecol. 29 (1), 150-162 (1992).
  32. Francoy, T. M., et al. Morphometric and genetic changes in a population of Apis mellifera after 34 years of Africanization. Genet. Mol. Res. 8 (2), 709-717 (2009).

Tags

Molecular Biology pollen ernæring mikrober protein aminosyrer Africanized bier genotype,
Metoder til Sammenligning Næringsstoffer i Beebread Lavet af Africanized og europæiske honningbier og virkningerne på hæmolymfe Protein Titere
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Degrandi-Hoffman, G., Eckholm, B.,… More

Degrandi-Hoffman, G., Eckholm, B., Huang, M. Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers. J. Vis. Exp. (97), e52448, doi:10.3791/52448 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter