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Biology

Africanized और यूरोपीय हनी मधुमक्खियों द्वारा बनाया गया Beebread में पोषक तत्वों की तुलना के लिए तरीके और Hemolymph प्रोटीन titers पर प्रभाव

Published: March 17, 2015 doi: 10.3791/52448
Automatic Translation
1, 2, 3
1Carl Hayden Bee Research Center, USDA-ARS, 2Coupeville, WA, USA, 3Ecotoxicology Division, Eurofins Agroscience Services, Inc.

Abstract

मधुमक्खियां beebread रूप छत्ते में वे इकट्ठा पराग और दुकान से पोषक तत्वों को प्राप्त करते हैं। हम मधुमक्खियों को इकट्ठा करने और एक विशेष रूप से निर्मित संलग्न उड़ान क्षेत्र में कालोनियों रखकर beebread कन्वर्ट करने के लिए है कि पराग स्रोत को नियंत्रित करने के तरीकों को विकसित किया है। तरीके पराग और beebread के प्रोटीन और एमिनो एसिड संरचना का विश्लेषण करने के लिए विकसित किए गए। हम यह भी beebread की खपत मापा और तरीकों के उद्भव के बाद 4, 7 और 11 दिनों के लिए beebread पर खिलाने के बाद वयस्क कार्यकर्ता मधुमक्खी hemolymph प्रोटीन titers निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था कि कैसे का वर्णन। तरीके जीनोटाइप beebread को पराग के रूपांतरण और मधुमक्खियों का उपभोग और इसे से प्रोटीन के अधिग्रहण उस दर को प्रभावित करता है, तो यह निर्धारित करने के लिए लागू किया गया। दो उप (यूरोपीय और Africanized मधु मक्खियों; क्रमशः EHB और AHB) एक ही पराग स्रोत के साथ प्रदान किया गया। विकसित तरीकों के आधार पर, दोनों उप-प्रजाति द्वारा किए गए beebread पराग की तुलना में कम प्रोटीन सांद्रता और पीएच मान था। सामान्य में, एसिड चोर अमीनोया तो EHB या AHB द्वारा किए गए beebread में centrations समान थे और पराग में से beebread में उच्च स्तर पर हुई। AHB और EHB दोनों EHB द्वारा की तुलना में AHB द्वारा किए गए beebread की काफी अधिक सेवन किया। EHB और AHB beebread के प्रत्येक प्रकार की समान मात्रा में सेवन हालांकि, AHB में hemolymph प्रोटीन सांद्रता EHB की तुलना में अधिक थे। AHB और EHB के बीच प्रोटीन अधिग्रहण में मतभेद प्रत्येक उप-प्रजाति विकसित जहां भौगोलिक क्षेत्र से संबंधित पर्यावरण रूपांतरों प्रतिबिंबित हो सकता है। इन मतभेदों की वजह से बच्चे के पालन और कॉलोनी के विकास पर प्रभाव की नई दुनिया में AHB आबादी की सफल स्थापना के लिए योगदान कर सकता है।

Introduction

पोषण शहद मधुमक्खी कालोनियों के स्वास्थ्य और शक्ति में और आबादी के रूप में उनके प्रतिष्ठान में एक मौलिक भूमिका निभाता है। भोजन से पोषक तत्वों को ऊर्जा और बच्चे के पालन, तापमान के लिए आवश्यक जैव रासायनिक घटकों, foraging और प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया प्रदान करते हैं। शहद मधुमक्खी कालोनियों के लिए, पोषक तत्वों कॉलोनी आबादी बढ़ने और उनके स्वास्थ्य अमृत और पराग से आते हैं बनाए रखने की जरूरत है। अमृत ​​कार्बोहाइड्रेट प्रदान करता है और पराग ऐसे प्रोटीन, लिपिड, विटामिन और खनिज 1 के रूप में शेष आहार आवश्यकताओं की आपूर्ति।

मधुमक्खियों के उप-प्रजाति ऐसी कार्यकर्ता दीर्घायु, बच्चे के पालन, और सामाजिक उन्मुक्ति 2-6 के तंत्र के रूप में पोषण आधारित कॉलोनी स्तर के मानकों में अलग कर सकते हैं। इन मतभेदों को भोजन, विशेष रूप से पराग कॉलोनी द्वारा संसाधित और व्यक्तियों में पच जाता है कैसे करने के लिए जोड़ा जा सकता है। पराग रासायनिक बदल गया है कंघी कोशिकाओं में और microbially मध्यस्थता लैक्टिक एसिड किण्वन के माध्यम से संग्रहीत किया जाता है 11-14 जबकि खपत कुछ व्यक्तियों दूसरों की तुलना में अधिक पोषक तत्वों और कैलोरी प्राप्त करने के कारण अन्य जीवों में दर्ज़ किया गया है।

यहाँ हम मधु मक्खियों के विभिन्न उप-प्रजाति द्वारा की गई रचना और beebread की खपत की तुलना करने के तरीकों का इस्तेमाल किया वर्णन। तरीके कार्यकर्ता मक्खियों में जिसके परिणामस्वरूप hemolymph प्रोटीन titers भी वर्णित हैं मापने के लिए। Beebread में पोषक तत्वों की संरचना पर पिछले अध्ययनों यूरोपीय मधु मक्खियों (EHB) 10,15,16 के साथ किया गया। हालांकि, वे एक ही पराग पर खिलाने के भी जब विभिन्न उप-प्रजाति की मधुमक्खियों द्वारा किए गए beebread में मतभेद हो सकता है। EHB और AHB तुलना की गई इन बाद के चरणों की वजह सेPECIES खाद्य प्रसंस्करण और पोषक तत्व अधिग्रहण 17 से संबंधित हो सकता है कि अलग व्यवहार और शारीरिक मतभेद हैं। सबसे उल्लेखनीय मतभेद के कुछ AHB इकट्ठा करने और EHB की तुलना में अधिक पराग की खपत और बच्चे 18 में और अधिक आसानी से इसे बदलने के लिए लगता है कि कर रहे हैं। AHB कालोनियों EHB की तुलना में अधिक रेंगनेवाले दर है और खाद्य संसाधन सीमित 19-23 बन जब फरार। फरार EHB में दुर्लभ है। AHB भी EHB 24 से अधिक उच्च चयापचय दर है। EHB और AHB के बीच कॉलोनी स्तरीय मतभेद के लिए पोषण का आधार है और यह भी अपने पोषक तत्व सामग्री यह beebread में बदल जाती है के बाद (उदाहरण के लिए, एमिनो एसिड और प्रोटीन) को पराग संग्रह की दर से संबंधित हो सकता है। Beebread खपत और जिसके परिणामस्वरूप प्रोटीन अधिग्रहण भी EHB और AHB के बीच कॉलोनी स्तरीय मतभेद में एक भूमिका निभा सकता है। विकसित विधियों का प्रयोग, EHB और AHB एक ही पराग स्रोत से beebread बनाया है। beebread तो पूर्वी वायु कमान के मधुमक्खियों को वापस तंग आ गया थाएच उप प्रजातियों और मधुमक्खियों उनके उप-प्रजाति के लिए या beebread के स्रोत के लिए विशिष्ट एक तरीके से beebread से प्रोटीन का अधिग्रहण अगर निर्धारित सकता है।

Protocol

1. AHB और EHB कालोनियों से Beebread प्राप्त

  1. शहद मधुमक्खी कालोनियों पर पराग जाल प्लेस और पराग इकट्ठा। एक कॉफी बनाने की मशीन का उपयोग कर (परागकोष से शेड पराग के समान) एक ठीक पाउडर में पराग पीस लें।
  2. मधुमक्खियों ही प्रदान की पराग पर चारा इतना है कि एक संलग्न उड़ान क्षेत्र (ईएफए) में 5 कालोनियों AHB और EHB के प्रत्येक स्थापित करना। मधुमक्खियों उन दोनों के बीच पार नहीं कर सकते हैं ताकि EHB और AHB कालोनियों के बीच बहती से कार्यकर्ताओं को रोकने के लिए अलग अलग वर्गों में ईएफए विभाजित करते हैं। 3,500-4,000 कार्यकर्ता मक्खियों, ईएफए के प्रत्येक अनुभाग में अमृत, शहद, अपरिपक्व बच्चे और खाली कंघी के साथ मोम कंघी के साथ अलग-अलग EHB या AHB कालोनियों रखें।
    नोट: स्थापित जब कालोनियों पराग संग्रहीत नहीं है। कि पराग संग्रहीत किया जाता है दर कालोनियों में एक बिछाने रानी सहित नहीं की वृद्धि हुई किया जा सकता है।
  3. ईएफए के प्रत्येक अनुभाग में पराग के साथ एक ट्रे रखकर कालोनियों के लिए जमीन पराग फ़ीड। कि foragin इसलिए प्रत्येक ट्रे पर पराग के बारे में 60 ग्राम फैलजी मधुमक्खियों के रूप में यह corbicular भार को इकट्ठा करने और beebread के रूप में उनकी कालोनियों में पराग स्टोर कर सकते हैं। 3 सप्ताह के लिए दैनिक प्रत्येक ट्रे पर ताजा पराग को उपलब्ध कराने के लिए आगे बढ़ें।
  4. यूरोपीय beebread (ईबीबी) के रूप में, और Africanized beebread (एबीबी) के रूप में Africanized कालोनियों से यूरोपीय कालोनियों से beebread का संदर्भ लें।

पिंजरों में 2. दूध पिलाने मधुमक्खियों

  1. एक पर्यावरण कमरे में अलग उद्भव पिंजरों में AHB और EHB कालोनियों से सील कार्यकर्ता चिंता की जगह फ्रेम 32-34 डिग्री सेल्सियस और 40% सापेक्ष आर्द्रता पर सेट ..
  2. श्रमिकों के उभरने और के बारे में 24 घंटा पुराने हैं, तो 12 Plexiglas bioassay पिंजरों (आयाम = 11.5 एक्स 7.5 एक्स 16.5 सेमी 3) की स्थापना और 100 नव उभरा EHB या प्रत्येक पिंजरे में 100 नव उभरा AHB कार्यकर्ता मक्खियों या तो जोड़ें। AHB फेड एबीबी, EHB फेड एबीबी, AHB फेड भाटा और EHB फेड ईबीबी: निम्न उपचार संयोजनों उत्पन्न करने के लिए प्रत्येक पिंजरे में ईबीबी या एबीबी या तो कोशिकाओं का एक ज्ञात संख्या (पिंजरे प्रति 24-30 कोशिकाओं) के साथ कंघी के एक वर्ग रखें। (4 उपचार, 6इलाज के प्रति पिंजरों; कुल में 24 पिंजरों)।
  3. प्रत्येक पिंजरे में मात्रा द्वारा तैयार की पानी की शीशियों और एक 50% शहद और पानी के घोल में जोड़ें। 11 दिन अध्ययन की अवधि के लिए दैनिक शहद और पानी शीशियों फिर से भरना।

3. सैम्पलिंग कार्यकर्ता मक्खियों और Beebread और आकलन की खपत

  1. नमूना 10 नव पूर्व पिंजरों में उन्हें रखने के लिए EHB और AHB कार्यकर्ताओं उभरा। 0 दिन मधुमक्खियों के रूप में इन का संदर्भ लें और उन्हें hemolymph प्रोटीन सांद्रता के लिए एक आधार रेखा के रूप में काम किया है।
  2. वे 4, 7, और 11 दिनों के लिए ईबीबी या एबीबी पर खिलाया बाद प्रत्येक पिंजरे से 10 मधुमक्खियों निकालें।
  3. व्यक्तिगत microcentrifuge ट्यूब में रहते मधुमक्खियों प्लेस और आइस पैक पर निर्धारित किया है। Hemolymph प्रोटीन एकाग्रता के विश्लेषण के लिए चार मधुमक्खियों के एक subsample का चयन करें।
  4. डे-11 पर मधुमक्खियों नमूने के बाद, अब भी beebread होते हैं कि कंघी कोशिकाओं की संख्या गिनती। इस beebread खपत के एक रिश्तेदार उपाय है।
  5. प्रत्येक पिंजरे में कोशिकाओं से शेष beebread निकालें और separ में स्टोरपिंजरे के अनुसार microcentrifuge ट्यूब खा लिया। पीएच, घुलनशील प्रोटीन एकाग्रता, और एमिनो एसिड सामग्री के लिए विश्लेषण जब तक -80 डिग्री सेल्सियस पर beebread नमूने रखें।

4. पराग और Beebread के पीएच का आकलन

  1. ईएफए में मधुमक्खियों को खिलाया पराग के छह यादृच्छिक 0.3 जी नमूने ले लो और आसुत जल के 300 μl में इसे भंग। 0.01 की सटीकता के साथ एक निविड़ अंधकार डबल जंक्शन पीएच भाला का उपयोग कर पीएच उपाय।
  2. प्रत्येक पिंजरे में 11 दिन खिला अवधि के बाद बने रहे कि beebread के 0.3 जी नमूना ले लो। पराग (4.1) के लिए के रूप में वर्णित आसुत जल और उपाय पीएच के 300 μl में beebread भंग।

5. प्रोटीन विश्लेषण

  1. छह पराग के नमूने और प्रत्येक पिंजरे से भाटा और एबीबी का एक नमूना ले लो। -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर नमूनों घुलनशील प्रोटीन एकाग्रता के लिए विश्लेषण किया जब तक।
  2. 0.1 एम फॉस्फेट बफर समाधान (पीबीएस) के 1,000 μl साथ पराग या beebread या तो 20 मिलीग्राम मिलाएं।
  3. VOएक मिनट के लिए 571.2 XG पर 10 सेकंड और अपकेंद्रित्र के लिए मिश्रण rtex।
  4. एक 96 अच्छी तरह से फ्लैट नीचे ईआईए / रिया polystyrene के थाली के कुओं में सतह पर तैरनेवाला और जगह की एक 10 μl नमूना निकालें। तीन कुओं में प्रत्येक नमूना पेश करता है।
  5. (गर्म और एक सुई तेज बात करने के लिए निकाला गया था कि) पंखों की कुर्की के बिंदु के पास छाती के दाहिने पार्श्व भाग में एक 20 μl केशिका ट्यूब डालने से प्रत्येक पिंजरे से एकत्र मधुमक्खियों से hemolymph ड्रा। पेट tergites के बीच झिल्ली में एक ही ट्यूब डालने से, अगर जरूरत है, अतिरिक्त hemolymph लीजिए।
  6. 0.1 एम पीबीएस के 9 μl के लिए hemolymph के एक μl जोड़ें। घुलनशील प्रोटीन के लिए विश्लेषण जब तक -20 डिग्री सेल्सियस पर hemolymph समाधान स्टोर।
  7. एक वाणिज्यिक ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख किट का उपयोग कर कुल पराग, beebread में घुलनशील प्रोटीन सांद्रता, और hemolymph नमूने निर्धारित करते हैं। निर्माता के निर्देशों का पालन करें।
  8. घुलनशील प्रोटीन सी अनुमान लगाने के लिए एक मानक वक्र की स्थापनाoncentration गोजातीय सीरम albumin (बीएसए) में जाना जाता प्रोटीन सांद्रता के साथ प्रोटीन absorbance के मापने के द्वारा नमूनों में। एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग कर 595 एनएम पर प्रोटीन absorbance के उपाय।

6. एमिनो एसिड विश्लेषण

  1. प्रत्येक कॉलोनी की कंघी कोशिकाओं से पूल व्यक्ति के नमूनों के विश्लेषण के लिए भाटा और एबीबी के एक प्रतिनिधि नमूना बनाने के लिए।
  2. एक 50 मिलीग्राम पराग लो या beebread नमूना autosampler शीशियों में तौला, और डी 4 -alanine से मिलकर एक 50 एनजी / μl आंतरिक मानक समाधान के 100 μl के साथ साथ, शीशी आसुत जल के 1 मिलीलीटर जोड़ने, डी 23 -lauric एसिड, 13 सी 6 -glucose और डी 39 -arachidiac एसिड।
  3. 5 मिनट के लिए नमूना और sonicate टोपी।
  4. मेथनॉल के 1 मिलीलीटर जोड़कर एक HLB कारतूस हालत, beebread या पराग नमूना के 1 मिलीलीटर के अलावा द्वारा पीछा आसुत जल के 1 मिलीलीटर जोड़कर equilibrated। 5.0% MeOH / एच 2 ओ और ELU के 1 मिलीलीटर के साथ कारतूस धोएं80% MeOH / एच 2 ओ के 1 मिलीलीटर के साथ ते
  5. नाइट्रोजन की एक धारा के तहत सूखापन के लिए नमूना लुप्त हो जाना। Pyridine के 50 μl और एन, ओ-भारतीय मानक ब्यूरो (trimethylsilyl) trifluoroacetamide + Trimethylchlorosilane (BSTFA + TMCS) के 100 μl के साथ नमूना पुनर्गठित।
  6. कैप 30 मिनट के लिए 70 डिग्री सेल्सियस पर नमूना सेते हैं और।
  7. नमूना शांत और एक साफ autosampler शीशी को हस्तांतरण करने की अनुमति दें।
  8. एक मास चयनात्मक पकड़ में कैप और नमूना जगह अस्थिर यौगिकों और कार्बनिक अम्ल के लिए दोनों के नमूनों का विश्लेषण करने के लिए एक गैस chromatograph को interfaced। BSTFA + TMCS एक 1.0 माइक्रोन मोटाई फिल्म के साथ एक कॉलम (30 एमएक्स 0.25 मिमी आईडी) का उपयोग कर के साथ टीएमएस derivatization निम्नलिखित चीनी और कार्बनिक अम्ल अलग करें।
  9. 2 मिनट के लिए 50 सी में स्तंभ ओवन सेट तो 5 सी / मिनट में 290 डिग्री सेल्सियस के लिए रैखिक तापमान में वृद्धि। और सात मिनट के लिए पकड़। क्रमश: 250 डिग्री सेल्सियस और 290 डिग्री सेल्सियस के लिए जीसी इंजेक्टर और जीसी / एमएस इंटरफ़ेस सेट करें।
    1. एक फ़्लो में एक कैरियर के रूप में हीलियम का प्रयोग करें1.0 मिलीग्राम / मिनट के डब्ल्यू दर। 230 डिग्री सेल्सियस के लिए एमएस स्रोत तापमान सेट करें।
  10. धुन और Perfluorotributylamine (PFTBA) के साथ दैनिक मास स्पेक्ट्रोमीटर जांचना। उपस्थिति पर डेटा और एमिनो एसिड की सांद्रता प्राप्त करने के लिए पूर्ण स्कैन (35-700 एएमयू) सकारात्मक आयन मोड में PFTBA के एक μl इंजेक्शन का प्रयोग करें।

Representative Results

Beebread पीएच और प्रोटीन एकाग्रता के लिए विश्लेषण किया जा रहा से पहले कम से कम एक महीने के लिए -80 डिग्री सेल्सियस में संग्रहीत है, और एमिनो एसिड विश्लेषण के बारे में पहले चार महीनों के लिए किया गया था। Beebread पीएच और प्रोटीन एकाग्रता (चित्रा 1) में पराग से मतभेद। प्रोटीन एकाग्रता के रूप में था beebread का पीएच पराग की तुलना में कम था। EHB और AHB दोनों ईबीबी (चित्रा 2) की तुलना में अधिक एबीबी का सेवन किया।

AHB की hemolymph में घुलनशील प्रोटीन के स्तर की परवाह किए बिना वे भस्म beebread के प्रकार (चित्रा 3) के EHB की तुलना में काफी अधिक थे। EHB और AHB beebread के प्रत्येक प्रकार के समान मात्रा में सेवन किया, भले ही hemolymph प्रोटीन के स्तर में इन मतभेदों को हुई। नमूने के समय में मधुमक्खियों की उम्र काफी hemolymph में घुलनशील प्रोटीन सांद्रता को प्रभावित किया। प्रोटीन सांद्रता अलग नहीं किया था, जो दिन-7 या 11 के साथ तुलना में दिन-4 मधुमक्खियों में काफी कम थे।

मधु मक्खियों के लिए आवश्यक हैं कि 10 एमिनो एसिड की _content ">, हिस्टडीन लेकिन सभी पराग में पाया गया। ज्यादातर मामलों में, beebread में मापा अमीनो एसिड सांद्रता (चित्रा 4)। उदाहरण के लिए, सांद्रता के पराग की तुलना में अधिक थे leucine और threonine पराग के साथ तुलना में beebread में 60% के बारे में अधिक थे, और वेलिन सांद्रता के बारे में 25% अधिक थे। alanine, Aspartic एसिड, Glutamine, और methionine का स्तर भी पराग में से beebread में अधिक थे। एमिनो एसिड सांद्रता के बीच बहुत अलग नहीं किया था फेनिलएलनिन और सिस्टीन के अपवाद के साथ एबीबी और ईबीबी। फेनिलएलनिन स्तरों ईबीबी या पराग या तो साथ तुलना में एबीबी के बारे में दो बार के रूप में उच्च थे। Cysteine ​​सांद्रता एबीबी या पराग के साथ तुलना में ईबीबी में कम थे। tryptophan में उच्च सांद्रता में केवल अमीनो एसिड उपस्थित थे ईबीबी या पराग और एबीबी में प्रोलाइन की एबीबी। सांद्रता में से पराग ईबीबी की तुलना में अधिक थे।


चित्रा 1: पीएच (ए) और पराग में घुलनशील प्रोटीन सांद्रता (बी) और यूरोपीय (EHB) या Africanized (AHB) मधु मक्खियों द्वारा किए गए beebread की तुलना। पराग का पीएच विचरण के विश्लेषण द्वारा निर्धारित beebread की तुलना में काफी अधिक था (एफ 2,12 = 3725, पी <.0001) एक Tukeys डब्ल्यू एकाधिक तुलना परीक्षण द्वारा पीछा किया। पराग में प्रोटीन एकाग्रता EHB (ईबीबी) या AHB (एबीबी) द्वारा किए गए beebread की तुलना में काफी अधिक था (एफ 2,27 = 16.49, पी <.0001)। इसी पत्र के द्वारा पीछा मतलब 0.05 के स्तर पर काफी अलग नहीं हैं।

चित्र 2
चित्रा 2: सेल का औसत प्रतिशतपूरी तरह से बंदी मधुमक्खियों द्वारा एक 11 दिन के अंतराल पर भस्म थे कि beebread युक्त LS। beebread एक ही पराग स्रोत का उपयोग कर या तो यूरोपीय (EHB) या Africanized (AHB) मधुमक्खियों द्वारा बनाया गया था। मतलब प्रत्येक उपचार के पांच पिंजरों से अनुमान लगाया गया था; एक विचरण करने का एक तरीका विश्लेषण (एफ 3,16 = 7.3, पी = 0.003) और Tukey के डब्ल्यू परीक्षण द्वारा निर्धारित रूप में एक ही पत्र के साथ उन लोगों के 0.05 के स्तर पर काफी अलग नहीं हैं। यह आंकड़ा 25 से संशोधित किया गया है।

चित्र तीन
चित्रा 3: 4, 7, और 11 दिनों के लिए यूरोपीय (ईबीबी) या Africanized (एबीबी) मधुमक्खियों द्वारा किए गए यूरोपीय (EHB) या Africanized से hemolymph में प्रोटीन की औसत एकाग्रता (AHB) मधु मक्खियों तंग आ beebread का एक दोहराया उपायों विश्लेषण। विचरण 4 trea के बीच महत्वपूर्ण अंतर संकेत दियाtment समूहों (एफ 3,20 = 19.7, पी <0.001)। AHB फेड एबीबी में घुलनशील प्रोटीन का स्तर EHB फेड एबीबी (पी = .008) या ईबीबी (पी = 0.018) की तुलना में काफी अधिक थे। नमूने के समय में मधुमक्खियों की उम्र काफी hemolymph में घुलनशील प्रोटीन सांद्रता को प्रभावित किया। स्तर दिन-7 (पी <.0001) या 11 (पी = 0.001) के साथ तुलना में दिन-4 मधुमक्खियों में काफी कम थे। 7 दिन और day11 मधुमक्खियों (पी = .149) अलग नहीं किया था। यह आंकड़ा 25 से संशोधित किया गया है।

चित्रा 4
चित्रा 4:। एमिनो एसिड की सांद्रता (पराग के ग्राम प्रति माइक्रोग्राम प्रति या beebread) पराग में या यह ईबीबी से बनाया beebread यूरोपीय मधुमक्खियों द्वारा किए गए beebread है और एबीबी Africanized मधुमक्खियों द्वारा बनाया गया था। Tryptophan, सिस्टीन, फेनिलएलनिन और प्रोलाइन पूर्व में स्पष्टता के प्रयोजनों के लिए अलग से साजिश रची गयाउनकी मात्रा senting। यह आंकड़ा 25 से संशोधित किया गया है।

Discussion

ऊपर वर्णित विधि का प्रयोग, हम AHB द्वारा किए गए beebread AHB और EHB दोनों के द्वारा अधिक से अधिक मात्रा में सेवन किया था कि पाया। EHB और AHB beebread के प्रत्येक प्रकार की समान मात्रा में सेवन हालांकि, AHB उच्च hemolymph प्रोटीन titers के लिए किया था। AHB में hemolymph प्रोटीन का स्तर दोनों एक ही आहार 26 खिलाया गया, हालांकि EHB की तुलना में अधिक थे, जहां हमारे तरीकों के आधार पर निष्कर्ष पिछली रिपोर्टों के समान थे। दोनों EHB और AHB से अलग दरों पर भस्म थे जो भाटा और एबीबी की खपत को मापने के द्वारा, यह प्रत्येक उप प्रजातियों में hemolymph प्रोटीन एकाग्रता बढ़ाने के भोजन की खपत से नहीं उठाया जा सकता है कि निर्धारित किया गया था। नर्स मधुमक्खी उम्र के कार्यकर्ताओं में hemolymph प्रोटीन एकाग्रता के लिए और पठार के लिए सेट बिंदु EHB से AHB में अधिक है कि एक पठार हो रहा है।

पराग भंडारण की दर अनुकूलन होगा कि beebread उत्पादन के लिए कालोनियों की स्थापना के लिए कई महत्वपूर्ण शर्तों रहे हैं। सबसे पहले, सहlonies खुला चिंता के साथ फ्रेम की जरूरत है। खिलाने के लिए खुला चिंता के बिना, कार्यकर्ताओं ज्यादा पराग इकट्ठा नहीं किया जाएगा। कोई अतिरिक्त चिंता का उत्पादन किया जाता है, ताकि दूसरे, कॉलोनी queenless होना चाहिए। चिंता पालन पराग की बड़ी मात्रा की आवश्यकता है, और केवल अतिरिक्त पराग संग्रहीत किया जाता है। ईएफए में स्थापित छोटे कालोनियों में, कालोनियों queenless होने की जरूरत है, ताकि बच्चे क्षेत्रों का विस्तार किया गया beebread रूप में जमा होने के लिए थोड़ा पराग होगा। Beebread किए जाने के लिए के लिए अंत में, पराग corbicular भार के रूप में एकत्र और कंघी कोशिकाओं में संग्रहित किया जाना चाहिए। पराग पराग जाल में एकत्र किया जाता है, तो यह है कि वे corbicular भार के रूप में इसे जमा कर सकते हैं ताकि मधुमक्खियों के लिए इसे पेश करने से पहले एक ठीक पाउडर के लिए जमीन की जानी चाहिए।

विधियों beebread की खपत नहीं बल्कि पूर्ण अनुमानों की तुलना में गुणात्मक उत्पन्न करने के लिए उपाय। कोशिकाओं को पूरी तरह मधुमक्खी रोटी की खाली थे जब गिना गया है कि केवल खपत था। कुल मधुमक्खी रोटी की खपत का एक अधिक सटीक अनुमान मधुमक्खी बीआर हटाने के द्वारा प्राप्त किया जा सकता हैकोशिकाओं से EAD और पहले और अध्ययन की अवधि के बाद तौला जा सकता है कि एक पैटी में इसे बनाने। हालांकि, हम वे एक कॉलोनी में होगा और शायद अध्ययन की अवधि के दौरान यह प्रक्रिया जारी रखने के रूप में मधुमक्खियों उस पर खिला सकता है इतना है कि कोशिकाओं में मधुमक्खी रोटी रखना चाहता था। वजन में वृद्धि हुई है हो सकता है क्योंकि मधुमक्खियों कुछ कोशिकाओं में उन्हें तंग आ पतला शहद डाल दिया क्योंकि पहले और अध्ययन के बाद कंघी वर्गों के वजन में अंतर की खपत के एक अनुमान के रूप में इस्तेमाल नहीं किया गया था।

कार्यकर्ता भी मधुमक्खी रोटी के लिए पतला शहद की कुछ जोड़ा है हो सकता है। इन कारणों के लिए, खिला अवधि से पहले और बाद में मधुमक्खी रोटी के लगभग बराबर मात्रा युक्त कोशिकाओं की गिनती और एक गुणात्मक माप उत्पन्न किया गया। फिर भी, 11 दिनों के बाद ईबीबी के साथ तुलना में गिना खाली एबीबी कोशिकाओं की संख्या में beebread के दो प्रकार के बीच एक हड़ताली अंतर था।

संग्रहीत पराग beebread हो जाता है जब निर्धारण किया जा सकता है डिमधुमक्खियों लगातार कोशिकाओं को पराग जोड़ने क्योंकि fficult। मधुमक्खियों पराग इकट्ठा करेंगे ताकि उत्पादन beebread के लिए इस्तेमाल कालोनियों खुला चिंता के फ्रेम के साथ स्थापित किए गए थे। कॉलोनी स्थापित किया गया था के बाद लार्वा के बारे में केवल 9 दिनों के लिए फ़ीड करने के लिए वहाँ थे ताकि हालांकि, कालोनियों queenless थे। तीन सप्ताह की अवधि के शेष के लिए कालोनियों ईएफए, एकत्र मधुमक्खियों जमा हो गया था और beebread करने के लिए परिवर्तित किया जा रहा है कि पराग में थे। पिंजरों में मधुमक्खियों को खिलाने जब एक अतिरिक्त 11 दिनों के लिए कंघी कोशिकाओं में संग्रहित पराग रखते हुए भी beebread को पराग के प्रसंस्करण के लिए जारी किया है हो सकता है। मधुमक्खी रोटी के लिए पराग के रूपांतरण के बारे में 7 दिन 8 लेता है। EHB और AHB को खिलाया beebread कम पीएच और पराग फेड के साथ तुलना में कम प्रोटीन सांद्रता था। रूपांतरण beebread के बाद पराग में परिवर्तन के इसी तरह के निष्कर्ष दूसरों 7,10,27 द्वारा सूचित किया गया है। हमारे परिणाम हालांकि पिछली रिपोर्टों से मतभेद, उस में सांद्रता में मतभेद ओ वहाँ थेbeebread और पराग के बीच एफ कुछ अमीनो एसिड होता है। दोनों प्रोटीन और एमिनो एसिड की सांद्रता में परिवर्तन एंजाइमों की गतिविधि के कारण हो सकता है, स्रोत, जिनमें से मधुमक्खियों को खुद या beebread 7,8,28,29 में स्थापित माइक्रोबियल समुदायों हो सकता है।

प्रोटीन एकाग्रता को मापने के लिए इस्तेमाल किया तरीकों पहले से Africanized पर आहार प्रोटीन और यूरोपीय मधुमक्खियों 26 के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए वर्णित उन लोगों के लिए इसी तरह के थे। विधियों का एक विस्तार के रूप में, हम पराग और beebread में घुलनशील प्रोटीन का अनुमान करने में सक्षम थे। उन तरीकों पिछली रिपोर्टों 7,10,27 करने के लिए इसी तरह के निष्कर्ष उत्पन्न। हमारा निष्कर्ष AHB और अधिक कुशलता से EHB से आहार प्रोटीन आत्मसात कि, और यह बात आकर बसा और 30-32 स्थापित हो गया है, जहां अधिकांश क्षेत्रों में AHB की पारिस्थितिकी प्रभुत्व में एक महत्वपूर्ण कारक हो सकता है कि अतिरिक्त सबूत प्रदान करते हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
waterproof double junction pH spear  Thermo Fisher
Coffee Grinder Mr. Coffee  model 1DS77
Dulbecco's phosphate buffer solution Emd-millipore BSS-1005-B
EIA/RIA polystyrene plate Sigma-Aldrich-Corning CLS3590-100EA
microcapillary pipets Kimble Glass Inc.
Quick Start Bradford Protein Assay Kit 2  Bio-Rad #500-0202
Spectrophotometer Biotek Synergy HT 
Mass Selective Detector  Agilent 5973N
HLB cartridge
gas chromatograph  Agilent 6930
 gas chromatography column  A J&W Scientific  DB-1701
d4-alanine  Sigma-Aldrich 488917
d23-lauric acid Sigma-Aldrich 451401
13C6-glucose Sigma-Aldrich 389374
Pyridine  Sigma-Aldrich 270970
N,O-Bis (trimethylsilyl)trifluoroacetamide +  
Trimethylchlorosilane (BSTFA + TMCS) Sigma-Aldrich 33148
Perfluorotributylamine (PFTBA) Sigma-Aldrich 442747-U
d39-arachidiac acid Cambridge Isotope 

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References

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आण्विक जीवविज्ञान अंक 97 पराग पोषण रोगाणुओं प्रोटीन अमीनो एसिड Africanized मधुमक्खियों जीनोटाइप,
Africanized और यूरोपीय हनी मधुमक्खियों द्वारा बनाया गया Beebread में पोषक तत्वों की तुलना के लिए तरीके और Hemolymph प्रोटीन titers पर प्रभाव
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Degrandi-Hoffman, G., Eckholm, B.,… More

Degrandi-Hoffman, G., Eckholm, B., Huang, M. Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers. J. Vis. Exp. (97), e52448, doi:10.3791/52448 (2015).

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