Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Medicine

ثلاثي الأبعاد نموذج المشارك الثقافة ل-ورم انسجة التفاعل

doi: 10.3791/52469 Published: February 2, 2015

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

ملاحظة: تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجان أخلاقيات المناسبة.

1. الثقافة الابتدائية من الخلايا الليفية الرئة الإنسان

  1. مجموعة من أنسجة الرئة:
    1. الحصول على عينات أنسجة الرئة البشرية من غرفة العمليات الجراحية مباشرة. جمع حوالي 1 سم 3 كتل من أنسجة الرئة السرطانية وغير السرطانية، مع عينة غير سرطانية جمعها بعيدة عن الورم ممكن.
    2. تعليق العينات في المتوسط ​​تعديل النسر Dulbecco لفي (DMEM) تستكمل مع 100 وحدة / مل البنسلين، 100 ميكروغرام / الستربتومايسين مل و 0.25 ميكروغرام / مل الأمفوتريسين B (المصل خالية متوسطة). الحفاظ على عينات معلقة في العقيمة 50 مل الأنابيب ونقلها إلى المختبر.
      ملاحظة: الخلايا الليفية هي الارتحال والتكاثري مقارنة مع أنواع الخلايا الأخرى، مثل طلائي، البطانية وخلايا العضلات الملساء. طريقة ثمرة يستفيد من هذه الميزات من الخلايا الليفية، وoutgroخلايا الجناح من أقسام الأنسجة وفيرة في الخلايا الليفية. بعد العديد من المقاطع خلية، تفشل أنواع الخلايا الأخرى من أجل البقاء ونشر في DMEM مع 10٪ مصل بقري جنيني (FBS)، مما أدى إلى تنقية الثقافات الخلايا الليفية. ويمكن استخدام الخلايا 3-7 المقاطع التالية الثقافة الابتدائية.
  2. ثقافة يزدرع وتكييف للنمو الخلية:
    1. أداء ثقافة الأولية من الخلايا الليفية باستخدام بروتوكول ذكرت سابقا مع تعديلات 5.
    2. في المختبر، ضع عينة الأنسجة على طبق 10 سم زراعة الأنسجة دون مستنبت ومقطعة إلى أجزاء صغيرة ~ 2-3 ملم في حجم باستخدام ملقط معقم ومشرط. وخلال هذه العملية، تجنب الوقوع في قسم الجافة، وإلا قد انخفضت قيمتها كفاءة ثمرة الخلية.
  3. فصل طبقة الخلايا الظهارية والنسيج الضام:
    1. نقع الأقسام قطع الأنسجة في الثقافة المتوسطة التي تحتوي على 2،000 PU / مل dispase أنا والثقافة لمدة 16 ساعة في 4 درجات مئوية. </ لى>
    2. نقل أقسام الأنسجة إلى الطبق، وفصل طبقة الخلايا الظهارية من النسيج الضام المجاورة. معالجة المقاطع في مقاعد البدلاء نظيفة لتجنب التلوث من الكائنات الحية الدقيقة.
      ملاحظة: إذا كانت هناك حاجة ثقافة الأولية من الخلايا الظهارية، تنفيذ الخطوة 1.3. إذا الليفية الوحيدة هي أن تكون معزولة، حذف خطوة 1.3 لأن ثقافة يزدرع وخلية المقاطع اللاحقة غير مواتية للخلايا الظهارية، والتي تسفر عن السكان الخلايا الليفية.
  4. الحجز على أقسام الأنسجة:
    1. تخطر على الأنسجة إلى 1 مم قطع باستخدام اثنين من المشارط. إذا كان القطع ليست صغيرة بما فيه الكفاية، وأنها فصل بسهولة أكثر من الطبق، والخلايا سوف تفشل لتتفوق على سطح الطبق.
    2. ضع أقسام أنسجة الرئة صغيرة بعيدا عن بعضها البعض للحفاظ على منطقة فارغة المحيطة كل قطعة. جعل خدوش على سطح الطبق زراعة الأنسجة باستخدام شفرة مشرط لتسهيل الحجز على أقسام الأنسجة.
      ملاحظة: الخدشيبدو أيضا لتسهيل نمو الخلايا، وتوفير المسارات على طول الخلايا التي يمكن أن يهاجر.
      1. بدلا من ذلك، ضع قطعة نسيج مفروم بشكل فردي في كل بئر من لوحة 6 جيدا، وغطاء لهم مع انزلاق الغطاء. إرفاق زلة غطاء على سطح لوحة باستخدام السيليكون الشحوم.
      2. وضع سيليكون الشحوم عند نقطتين 1.5 سم بعيدا في كل بئر باستخدام دبوس معقم. تغطية قطعة نسيج من شأنه أن يعزز فعالية ثمرة الخلايا وانتشار الخلايا بعد عدة فقرات.
  5. اللاحقة ثقافة يزدرع:
    1. بلطف إضافة مستنبت إلى الطبق قبل أقسام الأنسجة تجف، ويتم فقدان كفاءة ثمرة خلية بالنسبة للجزء الأكبر إذا كانت العينات تجف. لا صب المتوسط ​​بسرعة كبيرة كما المقاطع الأنسجة أن فصل.
    2. خلايا الثقافة في DMEM مع 10٪ FBS. استخدام ما يكفي لتغطية المتوسطة فقط الأنسجة، ولكن ليس كثيرا أن يسمح العائمة، كما الطفو إضافي يعزز مفرزة منالطبق.
  6. مرور الخلية:
    1. التعامل مع الثقافة المتوسطة مع الرعاية في جميع الأوقات كما الحركات المتكررة من الطبق الثقافة يمكن أن يؤدي إلى مفرزة من أقسام الأنسجة.
    2. ضع الأطباق الثقافة في حاضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 5-7 أيام. تحديث المتوسطة كل يوم، والتعامل مع الأطباق ثقافة الحد الأدنى من خلال التغييرات المتوسطة. الليفية يتخلصون من حافة أقسام الأنسجة خلال الأسابيع القليلة المقبلة.
      ملاحظة: بعد ~ 2-3 أسابيع، الخلايا الليفية تعدى تصل إلى ما يقرب التقاء، وهذا يتوقف على مقدار مساحة السطح.
    3. غسل الخلايا مع 1X PBS، وإضافة 1 مل من التربسين أنا إلى اللوحة.
    4. بعد trypsinization، فصل الخلايا باستخدام 9 مل من DMEM تستكمل مع 10٪ FBS. جمع الخلايا العالقة في المتوسط ​​في أنبوب 10 مل، جنبا إلى جنب مع أقسام الأنسجة. بعد الطرد المركزي لتشكيل الكريات خلية، resuspend والكريات مما أدى إلى الوسيلة الجديدة.
    5. البذور الخلايا والأنسجة أقسام الصعود إلى طريق مسدود الجديدطبق تلح، وعند هذه النقطة تفشل الأنسجة لنعلق على الطبق في حين أن الخلايا تلتزم وتنمو. في اليوم التالي، وإزالة قطعة نسيج عائمة بواسطة الشفط، وتغيير المتوسطة. الليفية المرفقة تنتشر مع الثقافات اللاحقة.

2. ثلاثة الأبعاد المشارك ثقافة الخلايا الليفية الرئة الإنسان وخلايا سرطان

  1. إعداد الخلايا والكواشف:
    1. ما يقرب من استخدام 2 × 10 5 خلايا الظهارية و 2.5 × 10 5 الخلايا الليفية لكل بئر. إعداد نوع الكولاجين IA (3 ملغ / مل، ودرجة الحموضة 3)، FBS (100٪)، عازلة إعادة (50 ملي هيدروكسيد الصوديوم، 260 ملي NaHCO 200 ملي HEPES)، 5X DMEM، DMEM تستكمل مع 10٪ FBS للثقافة الخلايا الليفية، والمتوسطة 3D شارك في ثقافة (1: 1 خليط من ثقافة الخلايا الليفية المتوسطة ومستنبت لخلايا السرطان).
    2. ثقافة A549 خلايا السرطان الرئوي، والخلايا الليفية وA549 3D شارك في ثقافة في DMEM تستكمل مع 10٪ FBS.
  2. الكولاجين جل وormation الوقود النووي:
    1. غسل الخلايا الليفية مثقف في 10 سم الطبق مع 1X PBS، وإضافة 1 مل من التربسين أنا إلى اللوحة. بعد trypsinization ل~ 5 دقائق عند 37 درجة مئوية، وفصل الخلايا باستخدام 9 مل DMEM تستكمل مع 10٪ FBS. جمع الخلايا العالقة في المتوسط ​​في أنبوب 10 مل، ولهم في أجهزة الطرد المركزي 200-300 x ج لتشكيل الكريات الخلية.
    2. Resuspend وكريات مما أدى إلى 100٪ FBS في كثافة 5 × 10 5 / مل.
    3. تحضير هلام الكولاجين على الجليد. تبريد الكواشف، الماصات وأنابيب في الثلاجة قبل الإجراء التالي. حتى على الجليد، وخليط يتصلب إلى حد ما، والحجم الإجمالي هو أقل من مجموع كل المكونات.
    4. في كل بئر، وإعداد جل الكولاجين عن طريق خلط 0.5 مل من تعليق الخلايا الليفية (2.5 × 10 5 خلايا) في FBS، 2.3 مل نوع IA الكولاجين، 670 ميكرولتر 5X DMEM، و 330 عازلة إعادة ميكرولتر. السماح المواد الهلامية لضبط بسهولة في درجة حرارة الغرفة.
      1. ماصة بقوة لضمان وجود ميل متجانسةxture. تجنب خلق فقاعات أثناء عملية pipetting ل.
    5. يضاف خليط (3 مل) إلى كل بئر من لوحة 6 جيدا والسماح ليهلم في الحاضنة عند 37 درجة مئوية دون اضطراب لمدة 30-60 دقيقة.
  3. ثقافة الخلايا السرطانية على هلام الكولاجين:
    1. أداء ثلاثية الأبعاد شارك في الثقافة باستخدام بروتوكول ذكرت سابقا مع تعديلات 6.
    2. الخلايا السرطانية resuspend في المتوسط ​​3D شارك في ثقافة (أو في DMEM مع 10٪ FBS في حالة الخلايا A549) في مناطق ذات كثافة من 1 × 10 5 / مل.
    3. صب 2 مل من محلول خلية معلق (2 × 10 5 خلايا) على سطح كل هلام. تعديل عدد الخلايا من الخلايا السرطانية أو الخلايا الليفية في ثقافة مشتركة اعتمادا على الظروف التجريبية.
  4. جل انكماش:
    1. احتضان المواد الهلامية بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية حتى الخلايا السرطانية يمكن أن تنضم إلى هلام الكولاجين. فصل كل هلام، وتوليد "ثقافة العائم 'في كل بئر سو لوحة 6 جيدا.
      ملاحظة: باستخدام ثقافة العائمة، وبفعل التغيرات المختلفة في الحجم جل من التوتر الميكانيكية وتدهور الكولاجين، والتي يتم بوساطة التفاعل الخلوي بين الخلايا السرطانية المشارك مثقف والخلايا الليفية.
    2. استخدام الزاوية 21 G إبرة أو ملعقة صغيرة لفصل كل هلام من على حافة البئر. كل 2-3 أيام، تحديث الآبار مع 2 مل من 3D شارك في ثقافة المتوسط. قياس حجم كل هلام كل يوم لمدة 5 أيام.
  5. تحليل المواد الهلامية الكولاجين:
    1. قياس محتوى الكولاجين من كل هلام باستخدام أساليب الكميات الكولاجين، مثل فحص Sircol. لتحليل transcriptomic أو الكمي RT-PCR RNA بعد جمع من المواد الهلامية 5.

3. الهواء السائل واجهة الثقافة والغزو الفحص

  1. بعد زراعة المواد الهلامية الكولاجين عند 37 درجة مئوية لمدة 5 أيام، وتعريض المواد الهلامية تعاقدت على الهواء عن طريق وضعها على شبكة (70 ميكرون حجم المسام) في نيو 6-لوحات جيدة. جعل شبكة من مصافى خلية المتاحة تجاريا المستخدمة في التدفق الخلوي.
  2. بلطف ملء كل جيدا مع 11 مل من 3D شارك في ثقافة المتوسط.
  3. ضع المواد الهلامية على شبكة باستخدام ملعقة العقيمة، وإزالة أي وسيط المتبقية من المواد الهلامية. على هذا الشرط، غمر المواد الهلامية في المتوسط ​​في حين فضح السطح العلوي من هلام للهواء. تحديد هذا الشرط الثقافة باعتبارها واجهة الهواء السائل.
    ملاحظة: بعد 5-7 أيام من الحفاظ على ثقافة واجهة الهواء السائل عند 37 درجة مئوية في الحاضنة، وسرطان الخلايا الغازية تهاجر إلى هلام. اعتمادا على نوع من الخلايا ونتيجة التفاعلات الخلوية، وبفعل درجات متفاوتة من الخلايا التغيير الصرفي في خلايا السرطان عن طريق ثقافة واجهة الهواء السائل.
  4. لتقييم النسيجي، إصلاح هلام في حل الفورمالين بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة وتضمين في البارافين. وصمة عار أقسام العمودية (4 ميكرومتر) مع الهيماتوكسيلين ويوزين (H & E). لتحليل المناعى سن القسمين 4.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

هذه الطريقة المشارك الثقافة، ومحاكاة المكروية الورم، هو أداة مفيدة لتحقيق التفاعل بين الخلايا السرطانية والخلايا الليفية جزءا لا يتجزأ من المواد الهلامية الكولاجين. في دراسة سابقة، تم تقييم ثلاثة المعلمات في هذا النموذج التجريبي: انكماش الكولاجين هلام، غزو الخلايا السرطانية والتغيير الصرفي. ويقدر انتشار الخلايا السرطانية أيضا باستخدام Ki67 المناعية 4. تم جمع عينات أنسجة الرئة من أقسام السرطانية وغير السرطانية من الفص الرئة مقطوعة (الشكل 1A). كانت مفروم عينات الى قطع صغيرة والمثقف في DMEM تستكمل مع 10٪ FBS (الشكل 1B). وقد لوحظت الخلايا الليفية المتزايد من قسم الأنسجة تحت المجهر (الشكل 1C). وجزءا لا يتجزأ من الخلايا الليفية الرئة مثقف الأولية إلى هلام الكولاجين (الشكل 2A، أ) وكانت الخلايا السرطانية A549 الرئة شارك في تربيتها على هلام (الشكل 2A، ب). بعد العائمة جulture في المتوسط ​​(الشكل 2A، ج)، وكان جل مزيد من مثقف في ظل حالة من واجهة الهواء السائل (الشكل 2A، د). تم إصلاح هلام في الفورمالين واستخدامها لتحليلات المناعى (الشكل 2A، ه). للثقافة واجهة الهواء السائل، وضعت جل على شبكة في بئر من لوحة 6 جيدا (الشكل 2B). وكشفت التحليلات النسيجية من هلام غزو خلايا A549 في هلام الكولاجين جزءا لا يتجزأ من الخلايا الليفية مع سرطان الرئة المصاحب (الشكل 3).

الشكل (1)
الشكل 1: ثمرة من الخلايا الليفية من مقطوعة جراحيا أنسجة الرئة الإنسان. تم جمع (A) عينات من أقسام السرطانية وغير السرطانية من الفص الرئة مقطوعة. ومفروم (B) عينات الى قطع صغيرة والمثقف في DMEM تستكمل مع 10٪ FBS.نمت (C) الخلايا الليفية من قسم الأنسجة (السهم). لاحظ أن الخلايا هاجر على طول الخدوش التي أدلى بها شفرات المشرط على طبق الثقافة. شريط الحجم، 200 ميكرون.

الشكل 2
كانت ثقافة واجهة الهواء السائل من هلام الكولاجين خلايا A549 المشارك مثقف على هلام الكولاجين جزءا لا يتجزأ مع الخلايا الليفية، وتعرضت طبقة من خلايا A549 إلى الهواء عن طريق وضع الجل على شبكة في المتوسط ​​(A: الرقم 2. ) الإجراءات التجريبية ثلاثي الأبعاد شارك في ثقافة واجهة الهواء السائل. (أ) الكولاجين هلام جزءا لا يتجزأ مع الخلايا الليفية الرئة. (ب) خلايا A549 شارك في تربيتها على هلام الكولاجين. (ج) الثقافة العائمة. (د) الجوي واجهة السائلة (ALI). (ه) التثبيت من هلام في الفورمالين. (B) الصورة التمثيلية للعشرهلام ه وضعت على شبكة في بئر من لوحة 6 جيدا. O / N: بين عشية وضحاها.

الشكل (3)
الشكل 3. الهيماتوكسيلين ويوزين تلطيخ المقاطع العرضية من هلام ثلاثة الأبعاد مثقف يتألف من خلايا A549 والخلايا الليفية رئة الإنسان. لاحظ أن الخلايا A549 مثقف على هلام الكولاجين غزا هلام جزءا لا يتجزأ مع الخلايا الليفية (السهام). شريط الحجم، 200 ميكرون. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

تشكيل مقاهي عنصرا رئيسيا من ECM المحيطة الخلايا السرطانية وليس فقط توفير سقالة للورم، ولكن أيضا المشاركة بنشاط في تطوير ورم 7. تراكم الأدلة في كشف النقاب عن تأثير CAFS أو الجزيئات المرتبطة بها على أحوال الطقس في نهاية المطاف، وتسليط الضوء على الأدوار الحاسمة من CAF بوساطة تطور الورم 8.

في الدراسة السابقة، قمنا بتوظيف طريقة ثمرة لعزل سي أي إف إس 4 الرئة. في هذه التجربة، والحفاظ على قسم الأنسجة التصاق على سطح الطبق أمر بالغ الأهمية. الخلايا غير قادرة على الهجرة خارج من أقسام الأنسجة عائمة في مستنبت، ومرة ​​واحدة تصبح أقسام الأنسجة بعيدة عن السطح، وأنها لم تعد قادرة على أن تستخدم لثمرة خلية على طبق ثقافة نفسه. قطع من النسيج غلة الإفرازات، والتي تكون بمثابة الغراء لمرفق على سطح الطبق. عند تحديد قسم الأنسجة مع انزلاق الغطاء، ومقدار الشحوم المستخدمة هو أيضا critiكال. فشلت كميات صغيرة من الشحوم للحفاظ على زلة غطاء المرفقة، في حين الشحوم المفرط يحجب منطقة ثقافة الخلية. الحجز على أقسام الأنسجة باستخدام زلة تغطية والضغط المناسب هو أيضا المفتاح لتسهيل نمو الخلية.

نماذج تجريبية لتكاثر الخلايا السرطانية والغزو قد اعتمدت في الغالب على ثنائية الأبعاد مزارع الأنسجة أحادي الطبقة أو بويدن المقايسات الغرفة. من أجل فهم أفضل الاتصالات بين الخلايا والتي تعتمد على ECM تعديل السلوك الخلايا السرطانية، ثلاثية الأبعاد المشارك الثقافات هي أدوات قوية. الثقافات عضوي النمط مفيدة أيضا للتحقيق في التفاعلات متعددة الخلايا، على الرغم من أنها بحاجة إلى مهارات فنية عالية وظروف تجريبية محدودة.

يخدم لدينا نموذج التعاون الثقافة باعتبارها منصة لتقييم التفاعلات للورم انسجة تحت ظروف محاكاة المكروية الورم. الخلايا مع overexpression جين معين أو ضربة قاضية قابلة للتطبيق بسهولة في cultu لديناإعادة النظام، والتي هي ميزة على ثقافة عضوي النمط. والجدير بالذكر، اقترحت الملاحظات السابقة في أن الخلايا الليفية المشارك مثقف تعدل بنشاط السرطان تمايز الخلايا والغزو 4. وسيكون من مصلحة لاختبار التفاعلات المتعددة الخلايا الممكنة في وضع تجريبي لدينا، مثل الخلايا البطانية، الخلايا الالتهابية والخلايا الظهارية غير سرطانية.

وقد أظهرت خصائص متميزة من سي أي إف إس في الدراسات شارك في ثقافة أو عن طريق التعبير الجيني التنميط، وذلك باستخدام الثقافات CAF الأولية ونظرائهم العادية 9. من ناحية أخرى، أظهرت هذه الدراسات أيضا عدم التجانس داخل ورمي أو بين الأفراد من CAFS 10، جزء منها قد تنسب إلى مستويات مختلفة من عامل النمو يشير إلى 11 أو عامل النسخ التنشيط 12. وبالتالي، فمن الضروري لمواصلة تميز CAFS غير متجانسة المستمدة من مرضى السرطان 13. التالية الممرات خلية المتكررة،يجوز تعديل خصائص مقاهي مثقف الأولية. ولذلك، سيكون من الأفضل لتوصيف سي أي إف إس في الممرات في وقت مبكر.

تساهم CAFS إلى ترسب ECM وإعادة عرض، وهذا بدوره، قد تفعيل سي أي إف إس من خلال أثار التوتر إشارات الخلية. وقد اقترح مثل هذه التغذية إلى الأمام حلقة بوساطة mechanotransduction تفعيل CAF 14، ويمكن أن توفر لدينا جل الكولاجين نموذج انكماش سبر أغوار هذه الآليات. آليات الكولاجين هلام انكماش تشمل انكماش الخلية، والانتشار، والهجرة، والتمايز، والكولاجين إعادة عرض 15. الدراسات والتجارب النسيجية مفصلة باستخدام بروابط، مثبطات، أو رني قد تكون مفيدة لاكتساب نظرة الميكانيكية في التفاعلات للورم انسجة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM Sigma-Aldrich D5796
FBS GIBCO 10437
Collagen type IA Nitta gelatin Inc. CELL-1A
Reconstitution buffer Nitta gelatin Inc.
Cover slip NUNC 174934
Silicone grease Dow Corning Toray High vacuum grease
Dispase I WAKO 386-02271
6-well plate BD Falcon 353046
Cell strainer (70 μm) BD Falcon 352350

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Strell, C., Rundqvist, H., Ostman, A. Fibroblasts-a key host cell type in tumor initiation, progression, and metastasis. Ups. J. Med. Sci. 117, (2), 187-195 (2012).
  2. Augsten, M., Hägglöf, C., Peña, C., Ostman, A. A digest on the role of the tumor microenvironment in gastrointestinal cancers. Cancer Microenviron. 3, (1), 167-176 (2010).
  3. Augsten, M. Cancer-Associated Fibroblasts as Another Polarized Cell Type of the Tumor Microenvironment. Front. Oncol. 4, 62 (2014).
  4. Horie, M., et al. Characterization of human lung cancer-associated fibroblasts in three-dimensional in vitro co-culture model. Biochem. Biophys. Res. Commun. 423, (1), 158-163 (2012).
  5. Ohshima, M., et al. TGF-β signaling in gingival fibroblast-epithelial interaction. J. Dent. Res. 89, (11), 1315-1321 (2010).
  6. Ikebe, D., Wang, B., Suzuki, H., Kato, M. Suppression of keratinocyte stratification by a dominant negative JunB mutant without blocking cell proliferation. Genes Cells. 12, (2), 197-207 (2007).
  7. Orimo, A., Weinberg, R. A. Stromal fibroblasts in cancer: a novel tumor-promoting cell type. Cell Cycle. 5, (15), 1597-1601 (2006).
  8. Paulsson, J., Micke, P. Prognostic relevance of cancer-associated fibroblasts in human cancer. Semin. Cancer Biol. 25, 61-68 (2014).
  9. Navab, R., et al. Prognostic gene-expression signature of carcinoma-associated fibroblasts in non-small cell lung cancer. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 108, (17), 7160-7165 (2011).
  10. Herrera, M., et al. Functional heterogeneity of cancer-associated fibroblasts from human colon tumors shows specific prognostic gene expression signature. Clin. Cancer Res. 19, (21), 5914-5926 (2013).
  11. Hägglöf, C., et al. Stromal PDGFRbeta expression in prostate tumors and non-malignant prostate tissue predicts prostate cancer survival. PLoS One. 5, (5), e10747 (2010).
  12. Saito, R. A., et al. Forkhead box F1 regulates tumor-promoting properties of cancer-associated fibroblasts in lung cancer. Cancer Res. 70, (7), 2644-2654 (2010).
  13. Kalluri, R., Zeisberg, M. Fibroblasts in cancer. Nat. Rev. Cancer. 6, (5), 392-401 (2006).
  14. Calvo, F., et al. Mechanotransduction and YAP-dependent matrix remodelling is required for the generation and maintenance of cancer-associated fibroblasts. Nat. Cell Biol. 15, (6), 637-646 (2013).
  15. Horie, M., et al. Histamine induces human lung fibroblast-mediated collagen gel contraction via histamine H1 receptor. Exp. Lung Res. 40, (5), 222-236 (2014).
ثلاثي الأبعاد نموذج المشارك الثقافة ل-ورم انسجة التفاعل
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Horie, M., Saito, A., Yamaguchi, Y., Ohshima, M., Nagase, T. Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction. J. Vis. Exp. (96), e52469, doi:10.3791/52469 (2015).More

Horie, M., Saito, A., Yamaguchi, Y., Ohshima, M., Nagase, T. Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction. J. Vis. Exp. (96), e52469, doi:10.3791/52469 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter