Protocol
1. रोपण
- प्लग ट्रे भरें (128 सेल, 3 सेमी वर्ग कोशिकाओं के साथ 28 एक्स 54 सेमी और 5 सेमी गहरी) प्लग मिट्टी के मिश्रण के साथ। कोशिकाओं की वर्दी भरने में सहायता करने के लिए एक खाली प्लग ट्रे का उपयोग करते हुए प्रत्येक ट्रे में मिट्टी सेक।
- प्लांट सलाद बीज ¼ गहराई सेल प्रति 2-3 बीज में इंच। प्लांट दोहराया ट्रे में सभी प्रयोगात्मक लाइनों एक सूखा दोनों पर बल दिया और सूखा परीक्षण के लिए नियंत्रण ट्रे प्रदान करने के लिए।
- छेद के बिना एक आधार ट्रे में प्लग ट्रे रखें।
- उल्टे ट्रे या प्लास्टिक गुंबद के साथ पानी की ट्रे और कवर। अंकुरण सामान्य रूप से 48-72 घंटा में होता है। अंकुरण के बाद कवर को हटाने और ग्रीन हाउस में ट्रे चाल है।
नोट: इस प्रोटोकॉल भी विकास कक्षों में प्रदर्शन किया जा सकता है।
2. ग्रोथ और संयंत्र की देखभाल
- अंकुरण के बाद 1-4 सप्ताह से जरूरत के रूप में पानी की ट्रे, सामान्य रूप से इस मिट्टी कम ट्रे भरने और अनुमति देकर, 2-3 बार साप्ताहिक है विस्तारित अवधि के लिए बैठने के लिए (~ 1 घंटा) किरणों संतृप्त हो लिएइस रूप में पानी में नकारात्मक संयंत्र स्वास्थ्य और जड़ विकास को प्रभावित कर सकता है और सूखे की स्क्रीन को प्रभावित कर सकता है।
- 1.5 चम्मच / लड़की की दर से मिलाया एक वाणिज्यिक घुलनशील 20-20-20 उर्वरक के साथ साप्ताहिक एक बार ट्रे खाद।
- सेल 1-2 सप्ताह के प्रति एक संयंत्र के लिए पतला ट्रे अंकुरण के बाद।
3. शुरुआत सूखा तनाव
- पौधों दो समूहों में चार सप्ताह पुराना अलग ट्रे रहे हैं। गंभीर पानी तनाव के अधीन रहते हुए एक समूह। के रूप में अच्छी तरह से नियंत्रण पानी पिलाया अन्य ट्रे का प्रयोग करें। प्रयोग के दौरान 2.1 कदम के रूप में नियंत्रण समूह पानी। सूखा तनाव की दीक्षा में प्रयोग के शेष के लिए सभी ट्रे fertilizing निलंबित।
- प्रयोगात्मक सूखे की अवधि एक सप्ताह से अधिक होता है। सूखा तनाव परीक्षण (0 दिन) के प्रारंभिक दिन पर पानी के साथ सभी कम ट्रे भरने और प्लग ट्रे में मिट्टी तो पूरी तरह से संतृप्त हो ट्रे से पानी के निकास के लिए अनुमति देते हैं। टी की दीक्षा से पहले तुरंत मिट्टी saturatingवह तनाव अवधि प्लग ट्रे में व्यक्ति की कोशिकाओं के बीच मिट्टी की नमी में किसी भी बदलाव को कम करने में मदद मिलेगी।
पैरामीटर के साथ बेसिक सूखा तनाव स्क्रीन का आयोजन 4. मापा जाना
नोट: निम्न चरणों 1 टेबल सूखा तनाव परीक्षण अवधि के प्रत्येक दिन पर लिया माप के एक कार्यक्रम प्रदान करता है, जबकि सूखे की स्क्रीन के पाठ्यक्रम पर दर्ज किया जाएगा कि तीन शारीरिक माप इकट्ठा करने के लिए रूपरेखा कैसे।
- 0 दिन, 2, परीक्षण के 4 पर पत्ता सापेक्ष जल सामग्री (RWC½) को मापने।
- ट्रे से एक सलाद संयंत्र क्लिप और दो पत्ते हटा दें।
- एक # 9 काग छिद्रक (~ 1.6 सेमी व्यास) का उपयोग करते हुए प्रत्येक पत्ती से तीन डिस्क पंच। एक नमूने के रूप में पत्ती घूंसे जुडा है।
- पत्ता डिस्क वजन, इस RWC गणना के लिए इस्तेमाल किया ताजा वजन (परिवार कल्याण) मान है, तो एक पेट्री थाली में डिस्क जगह है।
- सभी के लिए थाली करने के लिए अभी काफी आसुत जल जोड़ेंओउ सभी पत्ता डिस्क फ्लोट करने के लिए। यह पूरी तरह से RWC विश्लेषण के लिए सूजा हुआ वजन इकट्ठा करने के लिए पत्ता डिस्क हाइड्रेट करने के लिए है। पत्ता डिस्क आरटी पर 24 घंटे के लिए फ्लोट करने की अनुमति दें।
- प्लेटों से अब पूरी तरह से हाइड्रेटेड पत्ता डिस्क निकालें और धीरे डिस्क वजन से पहले कागज तौलिये के साथ पत्ता डिस्क के बाहरी सूखी। RWC गणना के लिए सूजा हुआ वजन (ताइवान) के रूप में इन भार रिकॉर्ड है।
- एक कागज प्रयोगशाला पर प्लेस पत्ता डिस्क 24 घंटे के लिए 55 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेटर में मिटा या एक खुला पेट्री डिश में फिल्टर पेपर डिस्क और सूखी।
नोट: कागज सुखाने के दौरान पेट्री डिश का पालन करने से पत्ता डिस्क को रोकता है। - सूखी पत्ती डिस्क और RWC गणना के लिए रिकॉर्ड के रूप में सूखी वजन (DW) वजन।
- स्मार्ट और बिंघम 11,12 द्वारा वर्णित के रूप RWC Weatherley के सूत्र का उपयोग कर की गणना।
RWC = (परिवार कल्याण-DW / TW-DW) * 100
परिवार कल्याण ताजा वजन, TW = सूजा हुआ वजन, DW के = सूखी वजन = - परीक्षण में प्रत्येक जर्मप्लाज्म और उपचार के लिए दोहराएँ कदम 4.1।
- रिकॉर्ड संयंत्र wilt सूखा तनाव परीक्षण के दिन एक और पौधों की 100% सामान्य रूप से दिन 4 या 5, wilted हैं जब समाप्त होने पर एक बार दैनिक शुरुआत।
- वसूली चरण और विकास के अंतर
- 6 दिन, सूखा तनाव अवधि निष्कर्ष है और जोर दिया पौधों परीक्षण की वसूली चरण में प्रवेश। नियंत्रण ट्रे के रूप में, 2.1 कदम, पानी के साथ कम ट्रे भरें और सूखा पर बल दिया ट्रे मानक पानी अनुसूची शुरू करने से पहले 24 घंटे के लिए सोख करने के लिए अनुमति देते हैं।
- सभी पौधों में 10 दिनों के लिए ठीक करने के लिए अनुमति दें।
- 10 दिनों के बाद में सूखा तनाव प्रत्येक संयंत्र की जमीन भाग के ऊपर पूरी फसल और ताजा वजन रिकॉर्ड है।
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Representative Results
इस प्रोटोकॉल सूखा तनाव की प्रतिक्रिया के मामले में वांछित प्रयोगात्मक विशेषता द्वारा एक बड़ी आबादी के अलग करने के क्रम में एक बड़ी स्क्रीन प्रदर्शन, तदनुसार बहुत से अलग किया जाएगा डेटा उत्पन्न होने की संभावना सूखा सहिष्णु और बीच में सभी बिंदुओं के लिए अतिसंवेदनशील तनाव। चित्रा 1 इस प्रोटोकॉल से उम्मीद की जा सकती है कि परिणाम के प्रकार का प्रतिनिधित्व रेखांकन शामिल हैं। तीन अलग अलग सलाद प्रकार (ROMAINE (क्योंकि), crisphead, और butterhead) के प्रतिनिधि खेती दिखाया गया डेटा में शामिल किए गए हैं। केवल तीन सलाद प्रकार का प्रतिनिधित्व डेटा यहाँ दिखाए जाते हैं जबकि इस प्रोटोकॉल सबसे प्रकार भर में सलाद और पालक जर्मप्लाज्म के हजारों की स्क्रीनिंग के दौरान विकसित किया गया था। सलाद के तीन प्रकार के अलावा पहले से इस प्रोटोकॉल सफलतापूर्वक Le असंबंधित के रूप में के रूप में अच्छी तरह से निकट से संबंधित Lactuca serriola प्रजातियों से जर्मप्लाज्म के साथ प्रकार सलाद पत्ता, लाल और हरे पत्ते स्क्रीन और स्टेम करने के लिए उपयोग किया गया था उल्लेख कियाafy हरी सब्जी पालक। लेखकों क्षेत्र परीक्षण के लिए 200 सलाद किस्मों के एक उम्मीदवार पूल के लिए 4,000 से अधिक की एक सलाद पत्ता संग्रह संकीर्ण करने के लिए इस प्रोटोकॉल का उपयोग उत्पन्न डेटा का इस्तेमाल किया।
दिखाया चित्रा 1. प्रतिनिधि परिणाम डाटा तीन शारीरिक माप के प्रतिनिधि ROMAINE (क्योंकि, रोम), crisphead (CRSP), और butterhead (लेकिन) सहित तीन सलाद प्रकार, के लिए इस प्रोटोकॉल में शामिल है। (ए) के पौधों का प्रतिशत है कि सभी पौधों 100% wilted तक दिन 1 पर शुरू होने वाले परीक्षण के सूखे से तनाव की अवधि के प्रत्येक दिन पर wilted हैं, (बी) का पत्ता सापेक्ष पानी की मात्रा दिनों 0, 2 पर मापा जाता है। दर्ज की गई है, और 4 डी : सूखे से तनाव, सी। के कारण विकास के अंतर दिखा सूखे से तनाव की अवधि के बाद पौधों और 10 दिन वसूली के नियंत्रण (सी) वजनसूखे से तनाव। त्रुटि सलाखों के मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करते हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2. प्रतिनिधि ट्रे और उदाहरण रोपण चित्र (ए और बी) उदाहरण ट्रे नियंत्रण ट्रे की तुलना में इस प्रोटोकॉल का उपयोग एक परीक्षण के 3 दिन सूखा तनाव प्रतिक्रिया दिखाते हैं। (सी और डी) ये ट्रे चित्र इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल दो रोपण के तरीकों दिखा इस्तेमाल किया 128 प्लग ट्रे का प्रतिनिधित्व करते हैं। ट्रे (छायांकित कोशिकाओं ग्रे) के बाहरी किनारों लगाए, लेकिन और अधिक तेजी से आंतरिक कोशिकाओं की तुलना में शुष्क करने की वजह से बढ़त कोशिकाओं की प्रवृत्ति के लिए, प्रयोगात्मक नमूने के लिए उपयोग नहीं किया जाना चाहिए।
| दिन | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| RWC-परिवार कल्याण | एक्स | एक्स | एक्स | ||||
| Wilt | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स | (एक्स) | (एक्स) | |
| पानी रोक | एक्स | ||||||
| पानी को फिर से शुरू | एक्स |
सूखे से तनाव की अवधि की तालिका 1. समय सारिणी। प्रयोगात्मक से रोका जाता है पानीपत्ती सापेक्ष पानी की मात्रा माप के लिए 6. ताजा नमूनों को परीक्षण के दिन शून्य पर शुरुआत और दिन को फिर पानी की ट्रे दिनों 0, 2, 4 पर ले रहे हैं, और पौधों का प्रतिशत दिन एक पर दैनिक शुरुआत दर्ज की गई और 100 तक जारी रखे हुए हैं Wilted पौधों की% सामान्य रूप से दिन 4, wilted हैं, लेकिन दिन 5 या 6 तक का हो सकता।
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Discussion
स्क्रीन के लिए नमूना संख्या की बातें।
जरूरत नमूनों की संख्या इस स्क्रीन से डेटा के वांछित उपयोग के आधार पर किया जाना चाहिए। प्रकाशन गुणवत्ता परिणाम वांछित हैं, तो यह प्रत्येक पंक्ति से तीन अलग-अलग पौधों (3 जैविक प्रतिकृति) फसल और गुणवत्ता के सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए पर्याप्त अंक देने के लिए दो प्रयोगात्मक प्रतिकृति की एक न्यूनतम प्रदर्शन करने के लिए सिफारिश की है। वांछित परिणाम है, तो बस जल्दी से और अधिक कड़े या जटिल पानी तनाव प्रयोगों, कम नमूने प्रदर्शन करने के क्रम में उम्मीदवार जर्मप्लाज्म का एक बड़ा पूल संकीर्ण करने के लिए और या प्रतिकृति आवश्यक हो सकता है। आवश्यक नमूनों की संख्या रोपण के समय पर निर्णय लिया जाना चाहिए।
रोपण लेआउट और ट्रे में मिट्टी सुखाने के विचार।
एक बहुत ही महत्वपूर्ण विचार प्लग ट्रे के किनारे पर कोशिकाओं में मिट्टी आंतरिक कोशिकाओं और देखभाल की तुलना में अधिक तेजी से सूख जाएगा कि हैकेवल ट्रे इंटीरियर (चित्रा 2) से पौधों की कटाई से परिणामों में पूर्वाग्रह से बचने के लिए लिया जाना चाहिए। केवल संभावना ट्रे के रोपण लेआउट को प्रभावित करती है आंतरिक कोशिकाओं से पौधों की कटाई। 3 और 6 अद्वितीय जर्मप्लाज्म एक नियंत्रण सलाद फसल के साथ साथ प्लग ट्रे प्रति लगाया गया था के बीच इस प्रोटोकॉल विकसित किया गया था, जिसमें परदे के दौरान। एक विशेषता फसल में सूखा सहिष्णुता के लिए स्क्रीनिंग की चुनौतियों में से एक के रूप में अक्सर सकारात्मक या नकारात्मक नियंत्रण का उपयोग करने के लिए कोई पता है कि तनाव सहिष्णु या अतिसंवेदनशील जर्मप्लाज्म वहां मौजूद है। कोई सकारात्मक या नकारात्मक नियंत्रण इस प्रोटोकॉल के विकास के रूप में उपलब्ध है जब सभी परीक्षणों के दौरान एक मानक जर्मप्लाज्म के उपयोग के प्रत्येक स्क्रीन भर में स्थितियों की परिवर्तनशीलता के लिए आंतरिक नियंत्रण की एक बुनियादी स्तर के लिए अनुमति देता है। सीधे एक जर्मप्लाज्म संग्रह जांच की जा सकती है, जिस पर गति के लिए योगदान देगा लगाया जा सकता है, लेकिन पूर्वी वायु कमान के लिए आवश्यक पौधों की संख्या से सीमित है कि विभिन्न जर्मप्लाज्म की संख्याएच माप परीक्षण के दौरान लिया। सभी सलाद के बीच 3 और 6 के लिए प्रत्येक ट्रे में अद्वितीय जर्मप्लाज्म की संख्या सीमित करके कोई सलाद केवल बाहरी कोशिकाओं में बोया जाता है आश्वस्त है कि प्रत्येक ट्रे के भीतर दो स्थानों में लगाया जा सकता है। एक और विचार जर्मप्लाज्म के बीच विकास दर और संयंत्र के आकार में परिवर्तनशीलता छोटे किस्मों युक्त कोशिकाओं में मिट्टी सूखने की दरों में कमी करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं। इस सकता है संभवतः इस स्क्रीन से निकाला संभावित सूखा सहिष्णु जर्मप्लाज्म के बीच का प्रतिनिधित्व किया है, लेकिन इस मनाया परिणामों के आधार पर मामला प्रतीत नहीं किया था पर जा रहा है छोटे किस्मों की दिशा में पूर्वाग्रह का परिणाम है। इसके अलावा, इस प्रोटोकॉल से उम्मीदवार जर्मप्लाज्म अध्ययन करने के लिए कड़े माध्यमिक तरीके के इस्तेमाल की पुष्टि करने या इन परिणामों का खंडन करना चाहिए या तो।
विल्ट के अवलोकन पर संगति का महत्व।
विल्ट के लिए पौधों की निगरानी उसी में प्रदर्शन किया जाना चाहिएसंयंत्र तनाव की उपस्थिति में छोटे उतार चढ़ाव से बचने के लिए दैनिक समय, के रूप में विल्ट संभावना एक ग्रीन हाउस के साथ ही रंध्र के circadian विनियमन में मौजूद तापमान और आर्द्रता के उतार-चढ़ाव की वजह से मनाया। इसके अलावा, wilted या नहीं के रूप में पौधों स्कोरिंग जब अनुरूप होना सुनिश्चित करें। कई व्यक्तियों के अनुरूप परिणाम आश्वस्त करने के लिए स्क्रीन प्रदर्शन किया जाएगा यदि स्कोरिंग विल्ट में दिशा निर्देशों का एक सेट की स्थापना विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। इस प्रोटोकॉल के लिए इस्तेमाल किया दहलीज संयंत्र के सभी पत्ते wilted किया जा रहा है के रूप में संयंत्र स्कोर करने के लिए wilted किया जाना चाहिए है।
मापदंडों के चुनाव में मापा जाता है।
इस प्रोटोकॉल में मापा मापदंडों न्यूनतम उपलब्ध श्रम के उपयोग के एक अर्द्ध उच्च throughput प्रणाली के लिए माप की अनुकूलन क्षमता के साथ पानी तनाव की पहचान करने में उनकी उपयोगिता के आधार पर चुने गए हैं। कई अन्य माप (सूखा तनाव की पहचान करने जैसे।, संश्लेषक गतिविधि में बहुत सहायक हो सकता है, जड़ विकास, रंध्र संबंधी प्रवाहकत्त्व ...), और प्रदर्शन किया जाएगा कि स्क्रीन की प्रकृति के आधार पर (यानी, जर्मप्लाज्म की संख्या अन्य मानकों को आसानी से इस स्क्रीन में शामिल किया जा सकता है), प्रतिकृति की संख्या, वांछित throughput के दर ... का इस्तेमाल किया।
प्रोटोकॉल परिणामों के उपयोग पर टिप्पणियाँ।
यूएसडीए संग्रह सभी जर्मप्लाज्म अव्यावहारिक शामिल क्षेत्र परीक्षण करता है कि एक संख्या है, जो 4000 व्यक्तिगत सलाद जर्मप्लाज्म से अधिक होता है। इस प्रोटोकॉल संभावित सूखा सहिष्णुता के लिए यूएसडीए संग्रह स्क्रीन करने के लिए शोधकर्ताओं की एक बहुत छोटी संख्या (1-2 व्यक्तियों) की इजाजत देने का अकेला उद्देश्य के साथ विकसित किया गया था। इन तरीकों के उपयोग के माध्यम से यूएसडीए संग्रह तो और अधिक बारीकी से सूखे से तनाव की स्थिति को दोहराने कर सकते हैं कि क्षेत्र परीक्षण में इस्तेमाल किया गया है, जो 200 किस्मों को संकुचित किया गया था। इस प्रोटोकॉल भी क्षेत्र TRIA में उपयोग के लिए 40 से 400 से अधिक पालक जर्मप्लाज्म की आबादी संकीर्ण करने के लिए इस्तेमाल किया गया थारास। अकेले इस प्रोटोकॉल क्षेत्र पानी तनाव की शर्तों के तहत टिकाऊ सूखा सहिष्णुता होता है कि निश्चितता के जर्मप्लाज्म के एक उच्च डिग्री के साथ की पहचान करने के लिए पर्याप्त नहीं माना जाना चाहिए, लेकिन बस तेजी से एक में पानी की कमी की शर्तों के तहत संभावित तनाव सहिष्णुता के लिए स्क्रीन के लिए एक उपकरण के रूप में सेवा कर सकते हैं जर्मप्लाज्म की बड़ी संख्या का उपयोग तेजी से और कुशल स्क्रीन।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| plug tray 128 | T.O. Plastics Hummert International |
11-8595-1 | Any brand plug tray will work, but use the same style of trays for all trials. |
| lower tray (Display tray) | T.O. Plastics Hummert International |
11-3305-1 | |
| plug/planting mix (Sunshine Mix #5) | Sunshine Hummert International |
10-0467-1 | A different mix may need to be substituted if adapting this protocol to a different crop. Sunshine mix #4 was used in spinach trials. |
| fertilizer (20-20-20) | Jack's: Professional water-soluble fertilizer Hummert International |
07-5915-1 | Any fertilizer can be used, adjust type as needed for adapting this protocol to specific crop needs. |
References
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