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Neuroscience

Usando fluorescência celular ativado Classificando a Examine-Cell-tipo específico Expressão Gênica em Tissue cérebro de um rato

Published: May 28, 2015 doi: 10.3791/52537

Abstract

O cérebro é composta de quatro tipos de células primárias, incluindo neurónios, astrócitos, microglia e oligodendrócitos. Embora eles não são o tipo celular mais abundante no cérebro, os neurônios são as mais amplamente estudado estes tipos de células, dado o seu papel directo na impactando comportamentos. Outros tipos de células no cérebro também influenciam o comportamento e função neuronal através das moléculas de sinalização que produzem. Os neurocientistas devem entender as interações entre os tipos de células no cérebro para entender melhor como essas interações impactar função neural ea doença. Até à data, o método mais comum de analisar a expressão de proteínas ou genes utiliza a homogeneização de amostras de tecido inteiro, geralmente com sangue, e sem ter em conta para o tipo de célula. Esta abordagem é uma abordagem informativa para examinar mudanças gerais no gene ou expressão de proteínas que podem influenciar a função e comportamento neural; no entanto, este método de análise não se presta a uma maior compreensão da célula-tipo-expressão do gene específico e do efeito da comunicação célula-a-célula em função neural. Análise da epigenética comportamentais tem sido uma área de foco em crescimento, que examina como modificações do ácido desoxirribonucléico (DNA) a expressão do gene longo prazo impacto estrutura e comportamento; No entanto, estas informações só podem ser relevantes se analisado de uma maneira específica do tipo de células-determinado da linhagem diferencial e assim epigenética marcadores que podem estar presentes em determinados genes de tipos de células neuronais individuais. A fluorescência de células activadas (FACS) técnica descrita a seguir proporciona um modo simples e eficaz para isolar células individuais neural para a análise posterior da expressão de genes, a expressão da proteína, ou modificações de ADN epigenética. Esta técnica também pode ser modificada para isolar tipos de células neurais mais específicos no cérebro para análise de células específicas do tipo subsequente.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Neural Dissociation Kit (P) Miltenyi Biotec 130-092-628
Myelin Removal Beads II Miltenyi Biotec 130-096-733
LS Columns Miltenyi Biotec 130-042-401
QuadroMACS Separator Miltenyi Biotec 130-090-976
MACS MultiStand Miltenyi Biotec 130-042-303
Nylon Mesh Sheet Amazon CMN-0074-10YD 40 inch width, 80 micron size mesh
Fc Block / anti-CD32 BD Biosciences BDB550270 reactivity for rat
APC-conjugated CD11b antibody Biolegend 201809 reactivity for rat
Rabbit anti-GLT1 Novus Biologicals NBP1-20136 reactivity for rat or human
PE-conjugated anti-rabbit secondary antibody eBioscience 1037259 secondary antibody for anti-GLT1
FITC-conjugated anti-rat CD90 (Thy1) mouse antibody Biolegend 202504 reactivity for rat

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References

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Schwarz, J. M. Using FluorescenceMore

Schwarz, J. M. Using Fluorescence Activated Cell Sorting to Examine Cell-Type-Specific Gene Expression in Rat Brain Tissue. J. Vis. Exp. (99), e52537, doi:10.3791/52537 (2015).

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