Abstract
O cérebro é composta de quatro tipos de células primárias, incluindo neurónios, astrócitos, microglia e oligodendrócitos. Embora eles não são o tipo celular mais abundante no cérebro, os neurônios são as mais amplamente estudado estes tipos de células, dado o seu papel directo na impactando comportamentos. Outros tipos de células no cérebro também influenciam o comportamento e função neuronal através das moléculas de sinalização que produzem. Os neurocientistas devem entender as interações entre os tipos de células no cérebro para entender melhor como essas interações impactar função neural ea doença. Até à data, o método mais comum de analisar a expressão de proteínas ou genes utiliza a homogeneização de amostras de tecido inteiro, geralmente com sangue, e sem ter em conta para o tipo de célula. Esta abordagem é uma abordagem informativa para examinar mudanças gerais no gene ou expressão de proteínas que podem influenciar a função e comportamento neural; no entanto, este método de análise não se presta a uma maior compreensão da célula-tipo-expressão do gene específico e do efeito da comunicação célula-a-célula em função neural. Análise da epigenética comportamentais tem sido uma área de foco em crescimento, que examina como modificações do ácido desoxirribonucléico (DNA) a expressão do gene longo prazo impacto estrutura e comportamento; No entanto, estas informações só podem ser relevantes se analisado de uma maneira específica do tipo de células-determinado da linhagem diferencial e assim epigenética marcadores que podem estar presentes em determinados genes de tipos de células neuronais individuais. A fluorescência de células activadas (FACS) técnica descrita a seguir proporciona um modo simples e eficaz para isolar células individuais neural para a análise posterior da expressão de genes, a expressão da proteína, ou modificações de ADN epigenética. Esta técnica também pode ser modificada para isolar tipos de células neurais mais específicos no cérebro para análise de células específicas do tipo subsequente.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Neural Dissociation Kit (P) | Miltenyi Biotec | 130-092-628 | |
Myelin Removal Beads II | Miltenyi Biotec | 130-096-733 | |
LS Columns | Miltenyi Biotec | 130-042-401 | |
QuadroMACS Separator | Miltenyi Biotec | 130-090-976 | |
MACS MultiStand | Miltenyi Biotec | 130-042-303 | |
Nylon Mesh Sheet | Amazon | CMN-0074-10YD | 40 inch width, 80 micron size mesh |
Fc Block / anti-CD32 | BD Biosciences | BDB550270 | reactivity for rat |
APC-conjugated CD11b antibody | Biolegend | 201809 | reactivity for rat |
Rabbit anti-GLT1 | Novus Biologicals | NBP1-20136 | reactivity for rat or human |
PE-conjugated anti-rabbit secondary antibody | eBioscience | 1037259 | secondary antibody for anti-GLT1 |
FITC-conjugated anti-rat CD90 (Thy1) mouse antibody | Biolegend | 202504 | reactivity for rat |
References
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