Abstract
Il cervello è composto da quattro tipi di cellule primarie, tra cui neuroni, astrociti, oligodendrociti e microglia. Pur non essendo il tipo di cella più abbondante nel cervello, i neuroni sono i più studiati di questi tipi cellulari dato il loro ruolo diretto nella impatto comportamenti. Altri tipi di cellule del cervello impatto anche la funzione e il comportamento dei neuroni attraverso le molecole di segnalazione che producono. I neuroscienziati devono capire le interazioni tra i tipi di cellule del cervello per capire meglio come queste interazioni impatto funzione neurale e la malattia. Ad oggi, il metodo più comune per analizzare proteine o espressione genica utilizza l'omogeneizzazione di campioni di tessuto intere, di solito con il sangue, e senza riguardo per tipo di cellula. Questo approccio è un approccio informativo per l'esame cambiamenti generali del gene o l'espressione di proteine che possono influenzare la funzione e il comportamento nervoso; Tuttavia, questo metodo di analisi non si presta ad una maggiore comprensione delle cellule-tipo-specifica espressione genica e l'effetto di comunicazione cellula-cellula sulla funzione neurale. Analisi dell'epigenetica comportamentali è stata una zona di crescente attenzione che esamina come modificazioni del acido desossiribonucleico (DNA) impatto struttura espressione genica a lungo termine e di comportamento; Tuttavia, queste informazioni possono essere rilevanti solo se analizzato in modo cellula-specifico tipo specificato lineage differenziale e pertanto marcatori epigenetici che possono essere presenti su alcuni geni dei singoli tipi di cellule neuronali. La fluorescenza cellulare attivo (FACS) tecnica descritta di seguito fornisce un modo semplice ed efficace per isolare le cellule neurali singole per la successiva analisi di espressione genica, l'espressione della proteina, o modificazioni epigenetiche del DNA. Questa tecnica può anche essere modificato per isolare più specifici tipi di cellule neuronali nel cervello per l'analisi di cellule-tipo specifico successiva.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Neural Dissociation Kit (P) | Miltenyi Biotec | 130-092-628 | |
| Myelin Removal Beads II | Miltenyi Biotec | 130-096-733 | |
| LS Columns | Miltenyi Biotec | 130-042-401 | |
| QuadroMACS Separator | Miltenyi Biotec | 130-090-976 | |
| MACS MultiStand | Miltenyi Biotec | 130-042-303 | |
| Nylon Mesh Sheet | Amazon | CMN-0074-10YD | 40 inch width, 80 micron size mesh |
| Fc Block / anti-CD32 | BD Biosciences | BDB550270 | reactivity for rat |
| APC-conjugated CD11b antibody | Biolegend | 201809 | reactivity for rat |
| Rabbit anti-GLT1 | Novus Biologicals | NBP1-20136 | reactivity for rat or human |
| PE-conjugated anti-rabbit secondary antibody | eBioscience | 1037259 | secondary antibody for anti-GLT1 |
| FITC-conjugated anti-rat CD90 (Thy1) mouse antibody | Biolegend | 202504 | reactivity for rat |
References
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