Abstract
beyin nöronları, astrositler, mikroglia ve oligodendrosit dahil olmak üzere dört ana hücre tiplerinin oluşur. Onlar beyinde en bol hücre tipi olmasa da, nöronların en yaygın davranışlar etkileyen oluşumundaki rolleri verilen bu hücre tiplerinin okudu vardır. Beyindeki diğer hücre tipleri, aynı zamanda ürettikleri sinyal molekülleri ile nöronal fonksiyonu ve davranışını etkiler. Sinirbilimciler daha bu etkileşimler nöral fonksiyon ve hastalıkları nasıl etkilediğini anlamak için beyinde hücre türleri arasındaki etkileşimleri anlamak gerekir. Bugüne kadar, protein veya gen ekspresyonunu analiz etmek için en sık kullanılan yöntem, genellikle kan ve hücre tipi için bakılmaksızın tüm doku örneklerinin homojenizasyon kullanmaktadır. Bu yaklaşım geni veya nöral fonksiyon ve davranışlarını etkileyebilir protein ekspresyonu genel değişiklikleri incelemek için bilgilendirici bir yaklaşımdır; Ancak, bu analiz yöntemi hücresinin daha büyük bir anlayış kendisini ödünç değiltipi-özgü gen ifadesi ve nöral fonksiyonu hücre-hücre iletişiminin etkisi. Davranışsal epigenetik Analizi inceliyor büyüyen bir odak alanı olmuştur nasıl deoksiribonükleik asit (DNA) yapısını etkisi, uzun vadeli gen ifadesi ve davranış modifikasyonları; Bireysel nöral hücre tiplerinin belirli genlerin üzerinde mevcut olabilir ayırıcı soy ve böylece epigenetik işaretleri verilen bir hücre türü spesifik şekilde analiz Ancak bu bilgiler, ilgili olabilir. Aşağıda tarif edildiği gibi (FACS) tekniği THP-gen ekspresyonu, protein ifadesi ya da DNA'nın epigenetik değişiklikler daha sonraki analiz için tek tek sinir hücrelerinin izole edilmesi için, basit ve etkili bir şekilde sağlar. Bu teknik aynı zamanda daha sonra, hücre tipi özel analizler için beyinde daha özel nöral hücre tiplerini izole etmek için modifiye edilebilir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Neural Dissociation Kit (P) | Miltenyi Biotec | 130-092-628 | |
| Myelin Removal Beads II | Miltenyi Biotec | 130-096-733 | |
| LS Columns | Miltenyi Biotec | 130-042-401 | |
| QuadroMACS Separator | Miltenyi Biotec | 130-090-976 | |
| MACS MultiStand | Miltenyi Biotec | 130-042-303 | |
| Nylon Mesh Sheet | Amazon | CMN-0074-10YD | 40 inch width, 80 micron size mesh |
| Fc Block / anti-CD32 | BD Biosciences | BDB550270 | reactivity for rat |
| APC-conjugated CD11b antibody | Biolegend | 201809 | reactivity for rat |
| Rabbit anti-GLT1 | Novus Biologicals | NBP1-20136 | reactivity for rat or human |
| PE-conjugated anti-rabbit secondary antibody | eBioscience | 1037259 | secondary antibody for anti-GLT1 |
| FITC-conjugated anti-rat CD90 (Thy1) mouse antibody | Biolegend | 202504 | reactivity for rat |
References
- Schwarz, J. M., Smith, S. H., Bilbo, S. D. FACS analysis of neuronal-glial interactions in the nucleus accumbens following morphine administration. Psychopharmacology. 230 (4), 525-535 (2013).
- Schwarz, J. M., Hutchinson, M. R., Bilbo, S. D. Early-life experience decreases drug-induced reinstatement of morphine CPP in adulthood via microglial-specific epigenetic programming of anti-inflammatory IL-10 expression. J Neurosci. 31 (49), 17835-1523 (2011).
- Herzenberg, L. A., Tung, J., Moore, W. A., Herzenberg, L. A., Parks, D. R. Interpreting flow cytometry data: a guide for the perplexed. Nature Immunology. 7 (7), 681-685 (2006).
- Guez-Barber, D., et al. FACS identifies unique cocaine-induced gene regulation in selectively activated adult striatal neurons. J Neurosci. 31 (11), 4251-4259 (2011).
- Fanous, S., et al. Unique gene alterations are induced in FACS-purified Fos-positive neurons activated during cue-induced relapse to heroin seeking. J Neurochem. 124 (1), 100-108 (2013).
- Liu, Q. R., et al. Detection of molecular alterations in methamphetamine-activated Fos-expressing neurons from single rat dorsal striatum using fluorescence-activated cell sorting (FACS). J Neurochem. 128 (1), 173-185 (2013).
- Guez-Barber, D., et al. FACS purification of immunolabeled cell types from adult rat brain. J Neurosci Methods. 203 (1), 10-18 (2012).
- Nolte, C., et al. GFAP promoter-controlled EGFP-expressing transgenic mice: a tool to visualize astrocytes and astrogliosis in living brain tissue. Glia. 33 (1), 72-86 (2000).
- Okana, M., Bell, D. W., Haber, D. A., Li, E. DNA methyltransferases Dnmt3a and Dnmt3b are essential for de novo methylation and mammalian development. Cell. 99 (3), 247-257 (1999).
- Bogdanović, O., Veenstra, G. J. DNA methylation and methyl-CpG binding proteins: developmental requirements and function. Chromosoma. 118 (5), 549-565 (2009).
- Iwamoto, K., et al. Neurons show distinctive DNA methylation profile and higher inter-individual variations compared with non-neurons. Genome Res. 21 (5), 688-696 (2011).
- Nishioka, M., et al. Neuronal cell-type specific DNA methylation patterns of the Cacna1c gene. Int J Dev Neurosci. 31 (2), 89-95 (2013).
- Kozlenkov, A., et al. Differences in DNA methylation between human neuronal and glial cells are concentrated in enhancers and non-CpG sites. Nucleic Acid Res. 42 (1), 109-127 (2014).
- Russo, S. J., et al. Nuclear factor kappa B signaling regulates neuronal morphology and cocaine reward. J Neurosci. 29 (11), 3529-3537 (2009).
- Bhatt, D., Ghosh, S. Regulation of the NF-κB-Mediated Transcription of Inflammatory Genes. Front Immunol. 5, 71 (2014).
- Okada, S., et al. Flow cytometric sorting of neuronal and glial nuclei from central nervous system tissue. J Cell Physiol. 226 (2), 552-558 (2011).
