Introduction
Filamentous कवक विकास की प्रक्रिया के अध्ययन के लिए उत्कृष्ट मॉडल प्रणालियों रहे हैं। वे सस्ते खेती, संतान और आनुवंशिक पहुंच के उच्च संख्या की तरह कई प्रयोगात्मक लाभ प्रदान करते हैं। अंतिम बिंदु विभिन्न सेलुलर तंत्र के लिए तो दूर तक uncharacterized जीनों के महत्व की जांच की अनुमति देते हैं कि transformants के निर्माण के लिए विशेष रूप से प्रासंगिक है। Filamentous कवक अधिशेष और / या बेकार सेल घटकों को हटाने के लिए माइटोकॉन्ड्रियल अखंडता और भोजी को बनाए रखने के लिए और बनाए रखने के लिए कई तत्वों और न्यायपालिका प्रोटीन, माइटोकॉन्ड्रियल गतिशीलता की गिरावट के लिए प्रोटीज गतिविधि की तरह सेलुलर गुणवत्ता नियंत्रण रास्ते के तंत्र की व्याख्या के लिए महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है भुखमरी 1,2,3 के समय में सेल व्यवहार्यता।
Filamentous कवक 2 में भोजी के अध्ययन के लिए उपलब्ध कई प्रयोगात्मक तकनीकों हैं: रिक्तिकाएं (i) जांच मैंप्रोटिएजों संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी 4 से हिचकते हैं जब एफ वे घने autophagic निकायों होते हैं, (द्वितीय) फ्लोरोसेंट रंजक monodansyl कैडवराइन का उपयोग करके प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी 5,6 और acidified autophagosomal संरचनाओं (iii) का पता लगाने के माध्यम से GFP-Atg8 foci की निगरानी के द्वारा autophagosomes के दृश्य 7।
इधर, भोजी अध्ययन के लिए पेनिसिलियम chrysogenum बढ़ के एक उपन्यास विधि प्रस्तुत किया है। मुख्य तत्व बस agarose निष्फल नल के पानी में भंग 1% के होते हैं जो 'भुखमरी पैड' है। अतिरिक्त यौगिकों (जैसे, तनाव, मैला ढोने वालों, भोजी modulators के) के रूप में लंबे समय तक वे ऑटो प्रतिदीप्ति प्रदर्शित नहीं करते के रूप में पैड करने के लिए जोड़ा जा सकता है। पैड एक उथले केंद्रीय गुहा होते हैं कि खुर्दबीन स्लाइड में स्थित है। एक बीजाणु निलंबन के साथ या छोटे फुई टुकड़े के साथ या तो टीका में इस पैड। ब्याज के तनाव sporulat करने में विफल रहता है तो बाद की सलाह दी जाती हैकुशलतापूर्वक ई (जैसे, Δ atg1 उपभेदों 8)। स्लाइड नमूने की सुखाना को रोकने के लिए (ये आसानी से खाली विंदुक टिप बॉक्स का उपयोग करके निर्माण किया जा सकता है) और कमरे के तापमान पर incubated गीला कक्षों में तैनात हैं। पी chrysogenum इन शर्तों के तहत कुछ दिनों के लिए विकसित करने के लिए सक्षम है। भोजी फंगल भोजी के लिए एक सकारात्मक मार्कर है जो vacuolar इज़ाफ़ा द्वारा microscopically मनाया जा सकता है। इस योगदान, एक पी में chrysogenum तनाव (विस्कॉन्सिन 54-1255) ने अपनी सी टर्मिनल 'एसकेएल' अनुक्रम 9 से peroxisomes को लक्षित है कि हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन है कि रूपों का इस्तेमाल किया जाता है। इसलिए यह peroxisomes की गिरावट नजर रखने के लिए संभव है। यह उचित स्थानीयकरण संकेतों का उपयोग करके भी सेल (जैसे, माइटोकॉन्ड्रिया) के अन्य डिब्बों लेबल करने के लिए और उनके गिरावट का विश्लेषण करने के लिए संभव है। पी से डेटा यद्यपि chrysogenum Ws54-1255 (GFP-एसकेएल) यह निश्चित रूप से संभव है, यहां प्रस्तुत किया हैअन्य filamentous कवक के लिए भी 'भुखमरी पैड' विधि का उपयोग करने के लिए (जैसे, Neurospora अक्षम्य, Sordaria macrospora, Aspergillus प्रजातियों, आदि)।
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Protocol
पी के 1. तैयारी chrysogenum भुखमरी प्रयोगों के लिए
- पी हैं ब्याज की chrysogenum तनाव चावल ('हरे चावल') पर रखा जाता है, एक 1.5 मिलीलीटर microcentrifuge ट्यूब में फुई sporulating के साथ कवर 2-3 चावल के दाने जगह है। 500 μl YGG (10 जी / एल KCl, 20 ग्राम / एल ग्लूकोज, 10 ग्राम / एल खमीर नाइट्रोजन बेस के साथ, 5 ग्राम / एल कश्मीर 2 HPO 4, 20 ग्राम / एल खमीर निकालने) के साथ भरें।
- बीजाणुओं कुशलता से चावल से अलग कर सकते हैं ताकि 30 सेकंड के लिए ट्यूब भंवर।
- कमरे के तापमान पर एक दिन (जैसे, के बीच 20 और 25 डिग्री सेल्सियस) के लिए ट्यूब सेते हैं।
- बाँझ पानी के नल में इस बीजाणु निलंबन की एक 1/50 कमजोर पड़ने को तैयार है, अच्छी तरह मिक्स।
- पी हैं ब्याज की chrysogenum तनाव एक अगर प्लेट (जैसे, YGG अगर प्लेट) पर रखा जाता है, 400 μl बाँझ पानी के नल और लगभग 100 मिलीग्राम जीएल युक्त एक 1.5 मिलीलीटर microcentrifuge ट्यूब में फुई के छोटे से टुकड़े के लिए स्थानांतरणएक बाँझ दांत लेने या विंदुक टिप का उपयोग करके गधा मोती।
- भंवर 2 मिनट के लिए ट्यूब इतना है कि फुई खंडित हो जाता है। तुरंत ट्यूब की सामग्री का उपयोग करें।
पी की खेती के लिए 2. तैयारी के चरण भुखमरी पैड पर chrysogenum
- एक गर्म थाली पर स्विच और लगभग 60 डिग्री सेल्सियस के लिए यह निर्धारित किया है।
- एक माइक्रोवेव ओवन में समाधान खाना पकाने के द्वारा पानी का दोहन एमएल 100 में agarose के 2 जी भंग। इस समाधान हीटिंग के बाद पूरी तरह से स्पष्ट है कि अपना ध्यान रखना। यदि ऐसा नहीं है agarose पूरी तरह भंग कर रहा है, जब तक इसे फिर से पकाना। Agarose समाधान उपयोग करने से पहले लगभग 60 डिग्री सेल्सियस के लिए शांत हो जाओ।
- 400 μl बाँझ नल प्रत्येक (कोई अतिरिक्त यौगिकों जोड़ा) पानी या के साथ (नमूनों की संख्या के आधार पर 2-4,) 1.5 मिलीलीटर microcentrifuge ट्यूब भरें 400-X μl (2.5 कदम में यौगिक समाधान के μl एक्स के अलावा) और उन्हें जगह कम से कम 1 मिनट के लिए हीटिंग थाली पर इतना है कि वाटएर अंदर गर्म हो जाता है।
- कम से कम 1 मिनट के लिए हीटिंग थाली पर एक केंद्रीय गुहा होते हैं कि खुर्दबीन स्लाइड रखें।
- 1.5 मिलीलीटर microcentrifuge ट्यूब और भंवर संक्षेप में हल करने के लिए agarose के 400 μl 2% जोड़ें। यदि चाहें तो इस कदम के बाद, अतिरिक्त यौगिकों (यानी, 1 माइक्रोन rapamycin) जोड़ें। यह किया जाता है, तो भंवर प्रत्येक अतिरिक्त पदार्थ ट्यूब pipetted है संक्षिप्त के बाद। समय से पहले दृढ़ीभवन को रोकने के लिए हीटिंग की मेज पर वापस ट्यूबों रखो।
नोट: microcentrifuge ट्यूब में कुल मात्रा 800 μl होना चाहिए।
भुखमरी पैड युक्त खुर्दबीन स्लाइड 3. तैयारी
- (अभी भी हीटिंग प्लेट पर स्थित है), जो माइक्रोस्कोप स्लाइड की गुहा में agarose समाधान के पिपेट 140 μl। यदि संभव हो तो बुलबुले बनाने से बचने की कोशिश करें।
- इसके तत्काल बाद agarose समाधान पर एक कवर पर्ची जगह है।
नोट: यह एक सपाट सतह में परिणाम होगा। - माइक्रो रखोलगभग चार मिनट के लिए प्रयोगशाला बेंच पर गुंजाइश स्लाइड agarose पैड जमना करने की अनुमति है।
- ध्यान से एक अंगूठे या तर्जनी की मदद से इसे बंद फिसलने से agarose पैड से coverslip के हटाने के लिए (संक्रमण से बचने के लिए दस्ताने पहनते हैं!)।
- सुखाना को रोकने के लिए एक गीला चेंबर में पैड के साथ खुर्दबीन स्लाइड रखें। सिफारिश: अभी पिपेट सुझावों के आयोजन के लिए डालने की है कि एक खाली टिप बॉक्स का उपयोग करें। नीचे कवर किया जाता है तो यह है कि बॉक्स के लिए बाँझ पानी जोड़ें। डालने पर खुर्दबीन स्लाइड प्लेस और बॉक्स को बंद करें।
4. पी के साथ भुखमरी पैड inoculating chrysogenum और ऊष्मायन
- 1/50 बीजाणु (संस्कृतियों चावल पर बड़े हो रहे थे तो) कमजोर पड़ने या भुखमरी पैड के केन्द्र पर (संस्कृतियों एक अगर प्लेट पर बड़े हो रहे थे तो) फुई टुकड़े युक्त undiluted समाधान के 5 μl के पिपेट 5 μl।
- इस के रूप में कार्य करता है (गीला चैम्बर बंद और एक प्लास्टिक की थैली में लपेटभुखमरी पैड के सुखाना के खिलाफ अतिरिक्त सुरक्षा)। बहुत ज्यादा अन्यथा टीका बूंदों परेशान किया जाएगा क्योंकि बॉक्स स्थानांतरित करने के लिए नहीं सावधान रहना होगा।
- नमूनों का विश्लेषण करने से पहले कम से कम 20 घंटे के लिए आरटी पर लिपटे बॉक्स की दुकान।
नमूने के 5. सूक्ष्म विश्लेषण
- ऊष्मायन के 20 घंटे के बाद नमूनों सूक्ष्म विश्लेषण के लिए तैयार कर रहे हैं; सूखी टिशू पेपर पर खुर्दबीन स्लाइड डाल (नीचे गीला हो जाता है)।
- भुखमरी पैड पर पानी की एक छोटी मात्रा (सीए 50 μl) पिपेट। पैड पर एक coverslip रखो और अधिशेष पानी बाहर निचोड़। एक टिशू पेपर के साथ अधिशेष पानी निकाल दें।
- प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का अवलोकन मेज पर खुर्दबीन स्लाइड रखो। फुई विकास का अवलोकन प्राप्त करने के लिए, एक 20x उद्देश्य का उपयोग करें। Hyphae में GFP का स्थानीयकरण के अध्ययन के लिए प्रयोग करें 63X या 100X उद्देश्यों। के लिए नमूने का विश्लेषण नहीं करते नमूना के क्रमिक सुखाना रोकने के क्रम मेंअब से 15 मिनट गीला चेंबर में उन्हें वापस डालने से पहले।
- (40 घंटा और विकास के 60 घंटे के बाद, उदाहरण के लिए) नियमित अंतराल पर 5.3 दोहराएँ।
नोट: नमूना गीला चेंबर में वापस रखा जा सकता है। यह यह फुई विकास को प्रभावित नहीं करता है के रूप में coverslip के दूर करने के लिए आवश्यक नहीं है।
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Representative Results
पी में peroxisome गिरावट ऊपर विस्तृत प्रोटोकॉल की उपयोगिता प्रदर्शित करने के लिए chrysogenum तनाव Ws54-1255 (GFP-एसकेएल) का विश्लेषण किया गया था। इस तनाव में GFP-एसकेएल आमतौर पर peroxisomes 9 में आयात किया जाता है। नमूना प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के माध्यम से विश्लेषण किया जाता है जब यह कई गोलाकार आकृति की उपस्थिति में यह परिणाम है। भोजी होता है, तो रिक्तिकाएं बढ़ाना। GFP-एसकेएल भोजी (pexophagy) द्वारा रिक्तिकाएं में शामिल हो जाता है। कारण GFP के रिक्तिका प्रोटिएजों से गिरावट के लिए प्रतिरोधी है तथ्य यह है कि यह इन अंगों 10 लेबल। इसलिए रिक्तिकाएं करने के लिए इस तनाव, रिक्तिका इज़ाफ़ा और GFP-एसकेएल के स्थानीयकरण में भोजी (pexophagy) के अवलोकन के लिए दो मापदंडों सुविधा प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा निगरानी कर रहे हैं।
ऊष्मायन के 20 घंटा में, GFP के रिक्तिकाएं (चित्रा 1) में कभी नहीं देखा गया है। इसके अलावा, रिक्तिका इज़ाफ़ा जगह नहीं ले रही है। हालांकि, विकास GFP लेबल रिक्तिकाएं के 40 घंटा मेंसक्रिय (चित्रा 1) बनने के लिए भोजी (pexophagy) का संकेत है, hyphae में से कुछ में दिखाई देने लगते हैं। विकास के 60 घंटा में GFP लेबल रिक्तिकाएं की राशि आगे बढ़ गया है। एक नकारात्मक नियंत्रण पी के एक Δ atg1 उत्परिवर्ती के रूप में chrysogenum (Δ atg1 (GFP-एसकेएल)) (चित्रा 2) का उपयोग किया गया था। न तो बढ़े और न ही GFP लेबल रिक्तिकाएं इस तनाव में देखा जा सकता है। एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में, भोजी उत्तेजक दवा rapamycin (चित्रा 3) का इस्तेमाल किया जाता है। विकास के 40 घंटे के बाद GFP लेबल रिक्तिकाएं दिखाई देने लगते हैं। 60 घंटा में, hyphae पूरी तरह से विशाल GFP युक्त रिक्तिकाएं (चित्रा 3) के साथ भर रहे हैं। यह निष्कर्ष, उम्मीद के रूप में, बड़े पैमाने पर भोजी यहाँ जगह लेता है कि इंगित करता है। सामूहिक रूप से, इन परिणामों प्रयोगात्मक सेट अप की वैधता प्रदर्शित करता है।
चित्रा 2:। भुखमरी पैड पर खेती के दौरान Δ atg1 में GFP-एसकेएल (GFP-एसकेएल) का स्थानीयकरण संकेत समय पर, भुखमरी पैड पर हो संस्कृतियों प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग विश्लेषण किया गया। प्रतिनिधि छवियाँ हर समय बिंदु के लिए दिखाए जाते हैं। उज्ज्वल क्षेत्र संगत क्षेत्रों प्रत्येक प्रतिदीप्ति नीचे दिखाई जाती हैंचैनल छवि। स्केल सलाखों: 10 माइक्रोन। 
चित्रा 3:। भोजी की प्रेरण के लिए rapamycin के साथ इलाज Ws54-1255 (GFP-एसकेएल) में GFP-एसकेएल का स्थानीयकरण 1 माइक्रोन rapamycin के साथ पूरक भुखमरी पैड पर हो संकेत समय संस्कृतियों में प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग विश्लेषण किया गया। प्रतिनिधि छवियाँ हर समय बिंदु के लिए दिखाए जाते हैं। इसी उज्ज्वल क्षेत्र क्षेत्रों प्रत्येक प्रतिदीप्ति चैनल छवि नीचे दिखाई जाती हैं। व्हाइट "वी": GFP-एसकेएल peroxisome गिरावट का संकेत रिक्तिकाएं के लिए स्थानीय। स्केल सलाखों: 10 माइक्रोन।
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Discussion
यहाँ प्रस्तुत विधि पी में भोजी के सुविधाजनक और प्रतिलिपि प्रस्तुत अध्ययन की अनुमति देता है chrysogenum। उदाहरण के लिए, यह है कि वे इस कवक या नहीं की भोजी प्रतिक्रिया नियमन करने में सक्षम हैं कि क्या विभिन्न यौगिकों की प्रभावकारिता स्क्रीनिंग के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। rapamycin के साथ परिणाम टो संकेतन के निषेध पी में भोजी की एक स्पष्ट प्रेरण की ओर जाता है कि दिखाना chrysogenum भी अन्य जीवों 11 के लिए प्रदर्शन किया गया है, जो।
यह और अधिक परिष्कृत सूक्ष्मदर्शी (जैसे, लेजर confocal सूक्ष्मदर्शी स्कैनिंग) में विश्लेषण के लिए भुखमरी पैड पर हो mycelia उपयोग करने के लिए संभव है। यह नमूना उद्देश्य (उलटा माइक्रोस्कोप) से ऊपर के उद्देश्य से नीचे लगाया जाता है कि क्या कोई फर्क नहीं पड़ता। कुछ डिब्बों के लिए लक्षित विभिन्न फ्लोरोसेंट प्रोटीन भोजी के दौरान विभिन्न अंगों के भाग्य (जैसे, माइटोकॉन्ड्रिया पर नजर रखने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है -> mitophagy; अंतःप्रद्रव्य Reticulum -> ईआर-phagy, आदि)।। सारांश में, यहाँ वर्णित तकनीक microscopically कवक 12 के अध्ययन के लिए तरीकों में से स्पेक्ट्रम फैली हुई है।
प्रोटोकॉल आम तौर पर सीधा और प्रयोग करने में आसान है। हालांकि, यह भुखमरी पैड कलाकृतियों और कोशिका मृत्यु में परिणाम होगा इस रूप में सुखाना कभी नहीं है कि बहुत महत्वपूर्ण है। इसलिए यह दृढ़ता से (मैं) अभी भी तरल agarose समाधान युक्त खुर्दबीन स्लाइड हीटिंग थाली से तुरंत हटा रहे हैं (कदम 3.3), (ii) के एक फ्लैट सतह बनाने के लिए कवर पर्ची एक के बाद भुखमरी पैड से हटा दिया जाता है कि सुझाव दिया है कि विश्लेषण नहीं जब 5 मिनट (3.3 और 3.4 कदम) की अधिकतम (iii) खुर्दबीन स्लाइड हमेशा गीला कक्ष में रखा जाता है कि (3.5 कदम और 5.4) और (iv) सूक्ष्म विश्लेषण अधिक से अधिक 15 मिनट के लिए नहीं ले करता है कि (कदम 5.3)। एक अन्य महत्वपूर्ण पहलू भुखमरी पैड पर pipetted बीजाणुओं या फुई वाला टुकड़े के शुरू राशि बहुत अधिक नहीं होना चाहिए याबहुत कम है। यह आसानी से बाँझ पानी के नल का उपयोग करके शेयर के कमजोर पड़ने से नियंत्रित किया जा सकता है। 1.1.3 में वर्णित 1/50 कमजोर पड़ने पी के लिए अच्छी तरह से काम करता है बीजाणु निलंबन chrysogenum। यह हमारे कवक के साथ उपयोग करने के लिए सिफारिश की कमजोर पड़ने है लेकिन कुछ समायोजन की आवश्यकता हो सकती है।
विधि की एक सीमा है कि यह अधिक से अधिक 15 मिनट के लिए समय चूक इमेजिंग प्रयोगों के लिए उचित नहीं है। यह गीला कक्ष से निकाल दिया जाता है एक बार इस भुखमरी पैड का क्रमिक सुखाना की वजह से है। अब अवलोकन टाइम्स की जरूरत है, तो यह इस पैड के मध्य क्षेत्रों में कुछ सुखाना को रोकने नहीं है, हालांकि भुखमरी पैड के किनारे करने के लिए बाँझ पानी के नल की छोटी मात्रा में जोड़ने के लिए संभव है। एक और सीमा विधि सख्ती से मात्रात्मक नहीं है। कोशिकीय जीवों में यह सेल प्रति घटनाओं स्कोर करने के लिए संभव है (उदाहरण के लिए, रिक्तिका में GFP युक्त कोशिकाओं की राशि)। इसके विपरीत, पी chrysogenum एक filamentous कवक characte है के रूप मेंएक बहुकोशिकीय वास्तुकला द्वारा rized। प्रकोष्ठों कोशिका द्रव्य और organelles के पारित होने की अनुमति देता है कि एक केंद्रीय ताकना होते हैं जो septae द्वारा विभाजित हैं। इसलिए नमूने केवल 'मात्रात्मक अर्ध' का विश्लेषण किया जा सकता है (उदाहरण के लिए, रिक्तिकाएं के लिए स्थानीय GFP युक्त hyphae की संख्या)। महत्व प्राप्त करने के लिए यह (निश्चित समय बिंदु और लेकिन और अधिक परीक्षण किया हालत के अनुसार कम से कम 80 बेहतर है) का विश्लेषण किया hyphae की संख्या काफी अधिक है कि बहुत महत्वपूर्ण है।
भोजी के अध्ययन के लिए भुखमरी पैड का उपयोग आसानी से अन्य filamentous कवक में उपयोग के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। इसलिए यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल केवल पी तक सीमित नहीं है chrysogenum। यह भी यानी yeasts के एकल celled कवक, के साथ के लिए यह अनुकूल करने के लिए संभव होना चाहिए। उच्च जीवों (जैसे, नेमाटोड) करने के लिए प्रोटोकॉल के हस्तांतरण शायद अधिक विशिष्ट रूपांतरों की आवश्यकता है। यह इस काम में वर्णित विधि भी पाता है या नहीं यह देखने के लिए दिलचस्प हो जाएगाअन्य क्षेत्रों में इसके उपयोग।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Microscope slides with central cavity | Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany | H884.1 | These can be used multiple times after cleaning. |
| Glass beads | Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany | A553.1 | Diameter: 0.25 - 0.50 mm |
References
- Fischer, F., Hamann, A., Osiewacz, H. D. Mitochondrial quality control: an integrated network of pathways. Trends Biochem. Sci. 37 (7), 284-292 (2012).
- Pollack, J. K., Harris, S. D., Marten, M. R. Autophagy in filamentous fungi. Fungal Genet. Biol. 46 (1), 1-8 (2009).
- Scheckhuber, C. Q., Osiewacz, H. D. Podospora anserina: a model organism to study mechanisms of healthy ageing. Mol. Genet. Genomics. 280 (5), 365-374 (2008).
- Pinan-Lucarré, B., Iraqui, I., Clavé, C. Podospora anserina target of rapamycin. Curr. Genet. 50 (1), 23-31 (2006).
- Kikuma, T., Ohneda, M., Arioka, M., Kitamoto, K. Functional analysis of the ATG8 homologue Aoatg8 and role of autophagy in differentiation and germination in Aspergillus oryzae. Eukaryot. Cell. 5 (8), 1328-1336 (2006).
- Pinan-Lucarré, B., Balguerie, A., Clavé, C. Accelerated cell death in Podospora autophagy mutants. Eukaryot. Cell. 4 (11), 1765-1774 (2005).
- Veneault-Fourrey, C., Barooah, M., Egan, M., Wakley, G., Talbot, N. J. Autophagic fungal cell death is necessary for infection by the rice blast fungus. Science. 312 (5773), 580-583 (2006).
- Bartoszewska, M., Kiel, J. A., Bovenberg, R. A., Veenhuis, M., van der Klei, I. Autophagy deficiency promotes beta-lactam production in Penicillium chrysogenum. Appl. Environ. Microbiol. 77 (4), 1413-1422 (2011).
- Meijer, W. H., et al. Peroxisomes are required for efficient penicillin biosynthesis in Penicillium chrysogenum. Appl. Environ. Microbiol. 76 (17), 5702-5709 (2010).
- Cubitt, A. B., Heim, R., Adams, S. R., Boyd, A. E., Gross, L. A., Tsien, R. Y. Understanding, improving and using green fluorescent proteins. Trends Biochem. Sci. 20 (11), 448-455 (1995).
- Jung, C. H., Ro, S. H., Cao, J., Otto, N. M., Kim, D. H. mTOR regulation of autophagy. FEBS Lett. 584 (7), 1287-1295 (2010).
- Hickey, P. C., Read, N. D. Imaging living cells of Aspergillus in vitro. Med. Mycol. 47, Suppl 1. S110-S119 (2009).
