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Developmental Biology

बहुभिन्नरूपी पुरानी गैर anesthetized रिकॉर्डिंग के लिए निकट अवधि भ्रूण भेड़ इंस्ट्रुमेंटेशन

Published: October 25, 2015 doi: 10.3791/52581
Automatic Translation
1, 2, 2, 1, 1, 2, 2, 2,3,4
1Département de sciences cliniques, CHUV, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, 2Département d'obstetriques et de gynécologie, CHU Ste-Justine Research Centre, Université de Montréal, 3Département de neurosciences, CHU Ste-Justine Centre de recherche, Université de Montréal, 4Centre de recherche en reproduction animale (CRRA), Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC

Summary

यह शल्य प्लेसमेंट और कैथेटर और इलेक्ट्रोड, दोहराए रक्त नमूने, पदार्थ इंजेक्शन, bioelectrical गतिविधि की रिकॉर्डिंग के रखरखाव, और vivo इमेजिंग में परमिट क्योंकि लंबे समय से instrumented गैर anesthetized भ्रूण भेड़ मॉडल, स्वास्थ्य और रोग में मानव भ्रूण के विकास का अध्ययन करने के लिए प्रयोग किया जाता है। हम इस मॉडल की स्थापना के लिए आवश्यक प्रक्रियाओं का वर्णन है।

Introduction

पशु मॉडल की एक किस्म प्रयोगशाला मूषक, गैर मानव प्राइमेट और घरेलू जुगाली करने वाले पशुओं सहित सामान्य और समझौता गर्भधारण दोनों के अध्ययन के लिए मौजूद हैं। 1,2,3,4,5 चिरकाल instrumented गर्भवती भेड़ 50 वर्ष के रूप में के लिए बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया गया है ऐसे lipopolysaccharide रूप pathophysiologic उत्तेजनाओं (एलपीएस) के लिए मानव भ्रूण के विकास और प्रतिक्रियाओं की एक मॉडल। 6-10 एलपीएस प्रदर्शन के बाद घावों की वजह से दोनों प्रजातियों में से एक समान maturational प्रोफ़ाइल के लिए है जो periventricular leukomalacia, साथ अपरिपक्व शिशुओं में देखा जाता है कि क्या वास्तव में नकल। 11, 12

अन्य गर्भावस्था जटिलताओं भी इस तरह के प्रसव पूर्व glucocorticoids फेफड़ों के विकास 13-15 और भ्रूण 16,17 पर अंतर्गर्भाशयी विकास प्रतिबंध (IUGR) के प्रभाव को समझने को बढ़ावा देने कि खोज के रूप में बहुत विस्तार से अध्ययन किया गया है।

भ्रूण भेड़ मॉडल के व्यापक उपयोग uniq की वजह से हैदोहराव रक्त नमूने, bioelectrical गतिविधि की रिकॉर्डिंग, बिजली उत्तेजना की और इन विवो ब्रेन इमेजिंग में आवेदन की अनुमति सर्जिकल प्लेसमेंट और कैथेटर और इलेक्ट्रोड के रखरखाव के लिए गैर anesthetized भ्रूण भेड़ की UE ज़िम्मा। कम बार इस्तेमाल किया है, हालांकि 18 टेलीमेटरी, यह भी संभव है अभी तक उच्च मिलावट के कारण प्रारंभिक और रखरखाव लागत के रूप में के रूप में अच्छी तरह से स्थापित करने के लिए। 19

इंस्ट्रूमेंटेशन के कई रूपों के हित के उपायों के आधार पर कर रहे हैं संभव के रूप में इसके अलावा, भ्रूण भेड़ मॉडल बहुत बहुमुखी है। उदाहरण के लिए, यह सप्ताह के दिनों से अधिक रिकॉर्ड करने के लिए संभव है जैसे कि भ्रूण श्वास आंदोलनों, बिजली के मस्तिष्क की गतिविधियों, हृदय की प्रतिक्रियाएं, इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम, अंगों की एक श्रृंखला के लिए क्षेत्रीय रक्त के प्रवाह के प्रवाह जांच या microspheres, आदि के लिए धन्यवाद का उपयोग कर के रूप में वास्तविक समय में बहुभिन्नरूपी संकेतों इस बहुमुखी प्रतिभा, अध्ययन की एक विस्तृत रेंज cardi के विकास सहित आयोजित किया गया हैovascular सिस्टम 20,21, hypothalamo पीयूषिका आधिवृक्क (एचपीए) धुरी 22, विशेष रूप से 24 में मस्तिष्क के विकास को 23 और नींद राज्यों विकास, हाइपोक्सिया का प्रभाव / श्वासावरोध 25, चिकित्सकीय हाइपोथर्मिया 26, सूजन 6-11, दोनों 27 का संयोजन, glucocorticoids 28,29, विरोधी अवसाद 30, ब्रांको-फेफड़े डिसप्लाजिया (बीपीडी) 31,32, पूर्व और प्रसव के दौरान के नाम पर करने के लिए भ्रूण प्रोग्रामिंग 33,34,35,36,37,38,39 या उपन्यास भ्रूण निगरानी तौर तरीकों का विकास जांच के कुछ क्षेत्रों में। 40,41,42,43

प्रस्तुत विधि के समग्र लक्ष्य इस बहुमुखी मॉडल की बुनियादी कार्यान्वयन को दिखाने के लिए है। यह सेलुलर एकीकृत, अंग, और आणविक स्तर पर भ्रूण शरीर विज्ञान और पैथोफ्य्सिओलोजी का अध्ययन तीव्र और जीर्ण प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल की एक विस्तृत विविधता की स्थापना की अनुमति देता है।

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Protocol

जानवरों की देखभाल जानवरों की देखभाल पर कनाडा परिषद और जानवर की देखभाल पर विश्वविद्यालयों डी मॉन्ट्रियल परिषद (प्रोटोकॉल # 10-Rech-1560) द्वारा अनुमोदन के दिशा-निर्देशों का पालन किया। सामग्री और तरीकों का इस्तेमाल किया पर विस्तृत जानकारी तालिका 1 में प्रदान की जाती है।

1. संज्ञाहरण

  1. एक गले नस में एक एकल लुमेन कैथेटर डालें।
  2. शांत भेड़ का उपयोग कर acepromazine (Atravet 10 मिलीग्राम / एमएल) 2 मिलीग्राम नसों के लगभग 30 मिनट के बदले में कोर्टिसोल के स्तर को कम कर देता है, जो प्रक्रिया के साथ जुड़े तनाव कम करने के लिए संज्ञाहरण की प्रेरण से पहले।
  3. डायजेपाम के लिए प्रशासन (डायजेपाम 5 मिलीग्राम / एमएल) 20 मिलीग्राम, ketamine (Ketalar 100 मिलीग्राम / एमएल) 4-5 मिग्रा / किग्रा और Propofol (Propofol 10 मिलीग्राम / एमएल) 0.5 मिलीग्राम करने के लिए 1 / किलो नसों के सामान्य संज्ञाहरण प्रेरित करने के लिए।
  4. एक विस्कॉन्सिन प्रकार ब्लेड के साथ एक कंठदर्शी का उपयोग कर श्वासनली में एक airway विनिमय कैथेटर डालने इंटुबैषेण के साथ सहायता (अतिरिक्त लंबी 350 मिमी ब्लेड बाएं हाथ)। एयरवे विनिमय कैथेटर बंद और श्वासनली में सिलिकॉन अंतःश्वासनलीय ट्यूब (9 से 12 मिमी भीतरी व्यास) स्लाइड। इस तकनीक इंटुबैषेण प्रक्रिया की सुविधा। श्वासनली के दबाव प्रेरित छालों से बचने और भेड़ के सिर करने के लिए ट्यूब fixate को ध्यान से अंतःश्वासनलीय ट्यूब के कफ बढ़ा देते हैं।
  5. संवेदनाहारी मशीन की सांस सर्किट को अंतःश्वासनलीय ट्यूब कनेक्ट और तुरंत यांत्रिक वेंटीलेशन शुरू करते हैं। 35 से 45 एमएमएचजी की सामान्य सीमा के भीतर एक पी सीओ 2 बनाए रखने के लिए वेंटीलेटर सेटिंग्स समायोजित करें।
  6. (; में 1.16 करने के लिए [0.9 x 25 मिमी] [1.1 x 30 मिमी] में 1 22 ग्राम से 20) और प्रत्यक्ष धमनी रक्तचाप पर नजर रखने के लिए गैर अनुरूप ट्यूबिंग से कनेक्ट auricular धमनी में एक कैथेटर डालें।
  7. इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम, प्रत्यक्ष धमनी रक्तचाप, ऑक्सीजन संतृप्ति (एसपीओ 2), Capnography रिकॉर्ड करने के लिए एक मल्टी पैरामीटर शारीरिक मॉनिटर का उपयोग (पी एट सीओ 2), और तापमान हर 5 मिनट। सभी पीएच स्थानांतरणएक केंद्रीय शारीरिक डेटा एकत्रित कंप्यूटर के लिए एक सीरियल केबल के माध्यम से ysiologic डेटा। एक घूम पानी कंबल का उपयोग कर सामान्य शरीर के तापमान को बनाए रखें।
  8. सामान्य संज्ञाहरण के पहले घंटे के लिए 10 मिलीग्राम / किग्रा में एक संतुलित पाली आयनिक समाधान के लिए प्रशासन और फिर 5 एमएल / किग्रा / घंटे के लिए कम।
  9. सिर्फ पूर्व एंटीबायोटिक प्रोफिलैक्सिस के रूप में त्वचा चीरा के लिए भेड़ को trimethoprim-sulfadoxine 5 मिलीग्राम / किग्रा चतुर्थ प्रशासन।
  10. भेड़ और भ्रूण के सभी सर्जिकल जोड़तोड़ के साथ मानक सड़न रोकनेवाला तकनीक का प्रयोग करें।
  11. बैरियर नर्स हर समय EWES। यह भी गैर-शल्य चिकित्सा कर्मियों भी शामिल है। यह। जैसे, Coxiella burnetii के लिए पशुस्थानिक क्षमता को कम हर समय दस्ताने और मास्क (एन 95 प्रकार) का उपयोग करेगा।

शल्य प्रक्रिया के 2. अवलोकन

  1. पेट की मांसपेशियों की क्षति को कम करने के लिनिया अल्बा के माध्यम से थन को तुरंत कपाल कम पेट की दीवार के माध्यम से एक 20 सेमी midline चीरा।
    1. आरcranially अधिक से अधिक वपा etract और गर्भाशय सींग मैन्युअल palpated कर रहे हैं। भ्रूण और उनके आकार की संख्या देख रही सींग की नोक से गर्भाशय के शरीर से प्रत्येक सींग टटोलना। एक से अधिक भ्रूण है, तो मैन्युअल सिर का आकार और कक्षाओं के बीच चौड़ाई के मूल्यांकन के द्वारा बड़े भ्रूण चुनें।
    2. मजबूती से आंशिक रूप से exteriorized गर्भाशय के माध्यम से चुना भ्रूण के सिर पकड़। Metzenbaum कैंची के साथ बड़े वक्रता पर एक 10 सेमी hysterotomy प्रदर्शन करते हैं। सिर पर तुरंत इसे एक हाथ के रूप में अगर बाँझ खारा से भरा एक गैर लेटेक्स बाँझ सर्जिकल दस्ताने डाल दिया। वैकल्पिक रूप से, नम भ्रूण के सिर रखने के लिए सिक्त 4x4s का उपयोग करें। पेट की दीवार को गर्भाशय सुरक्षित।
      1. सही और बाएँ वक्ष अंग अमल और xyphoid प्रक्रिया को गर्भाशय से बाहर धीरे भ्रूण खींच।
    3. एक मानक कटौती डाउन तकनीक का उपयोग कर polyvinyl दाएं और बाएं बाहु नस में कैथेटर और धमनियों डालें। Anoth डालेंभ्रूण के उरोस्थि के लिए अपनी 'अंत fixating द्वारा एमनियोटिक गुहा में एर polyvinyl कैथेटर।
      1. बाँझ कैथेटर ही प्रयोग करें। हम अपने मानक सुविधा में गैस नसबंदी सलाह देते हैं। बाद में रक्त नमूने या दबाव की निगरानी के लिए अनुमति देने के लिए एक डबल पानी निकलने की टोंटी के लिए एक सुई के लिए प्रत्येक कैथेटर और सुई संलग्न।
    4. Manubrium, असिरूप प्रक्रिया को और इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम की निगरानी करने के लिए कंधे (ईसीजी) के प्रत्येक बिंदु के लिए स्टेनलेस स्टील इलेक्ट्रोड सीवन।
    5. गर्भाशय में भ्रूण लौटें। बायीं ओर के एक छोटे चाकू चीरा के माध्यम से सभी कैथेटर और इलेक्ट्रोड से बाहर निकलें।
    6. एक तीन परत बंद का उपयोग कर laparotomy चीरा बंद करें। एक साधारण सतत फैशन में एक सिंथेटिक absorbable monofilament सीवन खासियत 2 के साथ पेट की दीवार सीवन। एक साधारण सतत फैशन में एक सिंथेटिक absorbable लट सिवनी खासियत 0 के साथ चमड़े के नीचे अंतरिक्ष बंद करें। त्वचा चीरा बंद करने के लिए सर्जिकल स्टेनलेस स्टील स्टेपल का प्रयोग करें।
  2. एक 4% chlorhexidine gluconate और 3 मिनट के लिए एक नरम ब्रश के साथ अच्छी तरह से तो एक ब्लेड # 40 स्वच्छ साथ प्रत्येक पक्ष पर दिशा के गुना स्तन ग्रंथि के लिए और साथ उदर पेट xyphoid प्रक्रिया शेविंग द्वारा ऊन निकालें।
    1. Chlorhexidine gluconate 4% पेट के केंद्र से शुरू और 3 मिनट के लिए एक केन्द्रापसारक फैशन में प्रगति के साथ एक मानक बाँझ हाथ धोने को पूरा करें। कीटाणुनाशक साबुन को दूर करने के पेट पर बाँझ खारा डालो। शल्य चिकित्सा की तैयारी के अंतिम चरण के लिए, chlorhexidine gluconate समाधान 2% और isopropyl शराब में 70% की तीन वैकल्पिक मार्ग प्रदर्शन करते हैं।
  3. संज्ञाहरण की गहराई चीरा करने से पहले पर्याप्त है सुनिश्चित करें। पेट की मांसपेशियों की क्षति को कम करने के लिनिया अल्बा के माध्यम से थन करने के लिए सिर्फ कपाल को नाभि से एक मानक laparotomy चीरा।
  4. बाएं पेट की दीवार के ऊपर के साथ पेट में एक लंबा स्पंज संदंश डालेंparacostal क्षेत्र में कैथेटर के लिए योजना बनाई बाहर निकलें साइट के लिए।
    1. यह पता लगाने के लिए और उपयुक्त साइट की पुष्टि कर सकते हैं एक सहायक तक दीवार के खिलाफ संदंश के सुझावों पुश। थोड़ा (1 सेमी) खोलें संदंश के जबड़े और सहायक एक 2 सेमी पूर्ण मोटाई चाकू चीरा बनाते हैं।
    2. , चीरा के माध्यम से संदंश के सुझावों अमल में फिर से खोलने के लिए, और धीरे अंत में उदर पेट चीरा के माध्यम से पेट से बाहर खींच लिया है कि संदंश के साथ कैथेटर समझ। ध्यान से, कुछ समूहों कैथेटर प्रत्यारोपण और फिर उन्हें अमल में। इस intrasurgical भ्रूण ईसीजी निगरानी संभव नहीं है कि खामी है।
  5. भ्रूण की स्थिति और संख्या निर्धारित करने के लिए गर्भाशय टटोलना। अंतर-कर्ण दूरी का उपयोग सबसे बड़ा भ्रूण का निर्धारण करते हैं। बीजपत्र से परहेज, सिर की पीठ पर बड़े वक्रता पर गर्भाशय की दीवार काटकर अलग कर देना।
    1. एक बजे प्राप्त करने के लिए अपरा झिल्ली के माध्यम से एक कुंद-एंडेड प्रवेशनी डालेंनकसीर से मुक्त niotic तरल पदार्थ का नमूना। कैंची का उपयोग अपरा झिल्ली काटकर अलग कर देना।
  6. इस चीरा के माध्यम से भ्रूण के कपाल आधा अमल में। Normothermia बनाए रखने में मदद करने के लिए भ्रूण सिर पर 37 डिग्री सेल्सियस पर बाँझ खारा से भरा एक बाँझ गैर लेटेक्स सर्जिकल दस्ताने रखें।
    1. गर्भाशय से भ्रूण शरीर के ऊपरी हिस्से को हटाने के दौरान, सहायक एमनियोटिक द्रव की हानि को रोकने के लिए है Babcock को पकड़ है। तो, फिर Babcock संदंश का उपयोग, एमनियोटिक द्रव के साथ पेट प्रदूषण को रोकने के लिए त्वचा के लिए भ्रूण झिल्ली और गर्भाशय की दीवार दबाना।
    2. Instrumented और गर्भाशय के अंदर शेष भागों रखने के लिए या क्रमश: (37 डिग्री सेल्सियस) नम और गर्म बाँझ कपड़ा में शामिल होने की जरूरत है कि भ्रूण के शरीर के केवल कुछ हिस्सों को बेनकाब।
  7. बाहु धमनी के लिए जोखिम को सुविधाजनक बनाने और द्विपक्षीय रूप से नस के दोनों वक्ष अंग अपहरण। Antebrachium और देखभाल दोनों की औसत दर्जे का पहलू के साथ काटकर अलग कर देनापूरी तरह से बाहु धमनी और शिरा के आसपास काटना।
  8. दाएं और बाएं बाहु धमनियों और एक मानक कटौती डाउन तकनीक का उपयोग नस बाईं बाहु में polyvinyl कैथेटर डालें।
    1. पोत मुक्त 1 सेमी से अधिक आसन्न ऊतक से catheterized किया जाना है। एक लट सिंथेटिक absorbable खासियत 2-0 सीवन के साथ पोत के बाहर का भाग ligate। पोत के समीपस्थ पहलू पर एक संयुक्ताक्षर Preplace लेकिन खुल रहते हैं।
      1. Castroviejo कैंची का प्रयोग, इसके व्यास का लगभग 30% करने के लिए transversally पोत काटा। आंशिक रूप से समीपस्थ सीवन पर खींच कर रक्त प्रवाह बंद करो। एक समीपस्थ दिशा में कैथेटर डालें।
    2. 8 सेमी proximally या प्रतिरोध का पता चला और फिर थोड़ा वापस खींच रहा है जब तक करने के लिए polyvinyl कैथेटर ऊपर डालें। अस्थायी एक नाड़ी दबाना का उपयोग कैथेटर के समीपस्थ पहलू सुरक्षित है। समीपस्थ और कैथेटर के बाहर पहलू दोनों के चारों ओर एक और सिवनी रखें। एक सहायक लगातार एएसपी हैirating और कैथेटर की प्रत्यक्षता सुनिश्चित करने के लिए कैथेटर निस्तब्धता।
    3. एक सतत सिवनी पैटर्न के साथ, एक खासियत 2-0 लट सिंथेटिक absorbable सीवन का उपयोग भ्रूण त्वचा को बंद करें।
  9. दाएं और बाएं कंधे, manubrium और xyphoid प्रक्रिया करने के लिए, भ्रूण ईसीजी की निगरानी की सुविधा के लिए एक अछूता स्टेनलेस स्टील इलेक्ट्रोड fixate।
  10. उरोस्थि को एमनियोटिक दबाव और नमूना कैथेटर सीवन। इस कैथेटर अपने छोर पर गवाक्षित है।
  11. एक खासियत 2-0 लट सिंथेटिक absorbable सीवन सामग्री का उपयोग भ्रूण की पीठ पर सभी कैथेटर सुरक्षित।
  12. वापस गर्भाशय में भ्रूण के प्रतिस्थापन के लिए पहले, हाइपरटेंशन से बचने के लिए और गर्भाशय छूट प्रदान करने के लिए धीरे-धीरे 15 से अधिक मिनट Clenbuterol 30 माइक्रोग्राम चतुर्थ प्रशासन।
  13. एक सतत पैटर्न के साथ खासियत 4-0 लट सिंथेटिक absorbable सीवन सामग्री का उपयोग भ्रूण झिल्ली सीवन। क्लोस में एक समय में केवल एक कैथेटर या इलेक्ट्रोड शामिलUre एक तंग बंद सुनिश्चित करने के लिए। एक खासियत 0 लट सिंथेटिक absorbable सीवन सामग्री का उपयोग गर्भाशय पेशी परत को बंद करने के Halsted सिद्धांतों का सम्मान एक डबल परत कुशिंग पैटर्न का उपयोग करें। ध्यान से शल्य समुद्री मील गाड़।
  14. वे छोड़ दिया paracostal चीरा से बाहर निकलने के रूप में एक पर्स-स्ट्रिंग सीवन पैटर्न का उपयोग कर, सभी कैथेटर और ईसीजी केबल सुरक्षित।
  15. एक खासियत 2 monofilament सिंथेटिक absorbable सीवन सामग्री का उपयोग करना एक सतत पैटर्न के साथ लिनिया अल्बा सुरक्षित है। खासियत 2-0 एक सतत पैटर्न के साथ सिंथेटिक absorbable सीवन सामग्री लट का उपयोग करते हुए चमड़े के नीचे के ऊतकों को बंद करें। शल्य स्टेपल के साथ त्वचा की परत को सुरक्षित करो।
  16. एमनियोटिक गुहा में एमनियोटिक कैथेटर के माध्यम से नसों और फिर एम्पीसिलीन के 250 मिलीग्राम प्रशासन। गर्म नमक के साथ खो एमनियोटिक तरल पदार्थ बदलें।
  17. बाँझपन बनाए रखने के लिए एक जगह बैग में सभी exteriorized कैथेटर और ईसीजी इलेक्ट्रोड रखें। सभी कैथेटर एक सुरक्षित करने के लिए भेड़ की धड़ के चारों ओर एक stockinette रखेंभेड़ के शरीर के लिए डी इलेक्ट्रोड।
  18. सामान्य संज्ञाहरण बंद करो, और स्वरयंत्रज सजगता सामान्य करने के लिए लौट आए हैं एक बार भेड़ extubate।
  19. वह सामान्य संज्ञाहरण के बाद स्थिर हो जाने के बाद एक चयापचय पिंजरे में भेड़ लौटें। भेड़ प्रयोग की अवधि के लिए चयापचय पिंजरे में निवास करेंगे। भेड़, खड़े लेट जाओ और मां sedating के बिना गैर anesthetized भ्रूण की निगरानी करते हुए libitum विज्ञापन खाने के लिए सक्षम होना चाहिए।
  20. निम्नलिखित तीन दिनों के लिए, prophylactically भेड़ (Trimethoprim sulfadoxine 5 मिलीग्राम / किग्रा) और भ्रूण (एमनियोटिक कैथेटर के माध्यम से नसों और फिर एम्पीसिलीन के 250 मिलीग्राम) के लिए एंटीबायोटिक दवाओं प्रशासन।
  21. भेड़ और भ्रूण दोनों गैस का विश्लेषण करती है खून का उपयोग करने का चयापचय स्थिति का मूल्यांकन।
  22. संभव heparinized खारा की न्यूनतम मात्रा के साथ सभी कैथेटर फ्लश। सावधानी - भ्रूण को जायज़ हेपरिन और तरल पदार्थ की दैनिक खुराक से अधिक नहीं है। तरल पदार्थ भ्रूण अधिभार के लिए यह संभव है। फ्लश धीरे-धीरे एक बारएंटीबायोटिक प्रोफिलैक्सिस के बाद प्रति पंक्ति एक दिन ~ 5 एमएल सोडियम क्लोराइड।
  • डेटा रिकॉर्डिंग और विश्लेषण
    1. शल्य चिकित्सा के दौरान, वैकल्पिक रूप से मातृ एवं भ्रूण ईसीजी और दिल की दर के साथ-साथ मातृ धमनी रक्तचाप और एयरवे प्रेशर (पंजा) लगातार (चित्रा 1) का रिकॉर्ड है। ईसीजी को छोड़कर सभी मातृ डेटा प्राप्त करने के लिए जीवन विंडो मॉनिटर का प्रयोग करें। भ्रूण और मातृ ईसीजी संकेतों के साथ-साथ एनालॉग से डिजिटल कनवर्टर में इन डेटा फीड; 1901 पूर्व एम्पलीफायर में पहली मातृ एवं भ्रूण ईसीजी गुजरती हैं। रिकार्ड निर्माता के सॉफ्टवेयर में सभी डेटा को प्रदर्शित करने और।
    2. (तुरंत पहले धमनी कैथेटर डालने के बाद) और गर्भाशय को बंद करने के बाद भ्रूण सर्जरी के शुरू में रक्त धमनियों गैस विश्लेषण, लैक्टेट, ग्लूकोज के लिए भेड़ और भ्रूण से एक साथ एक 1 एमएल धमनी नमूना ले लो और (प्लाज्मा) में अतिरिक्त दृढ़ संकल्प का आधार ।
    3. पश्चात की वसूली के दौरान, आईएल -6 और TNF-α inflamm को मापने के लिए एक 3 एमएल भ्रूण खून का नमूना लेने के लिएatory प्रोफाइल। अपकेंद्रित्र 4 डिग्री सेल्सियस पर प्लाज्मा (4 मिनट, 4000 XG), छानना और बाद में एलिसा परीक्षण के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर प्लाज्मा की दुकान।
      नोट: सूचना प्रतिनिधि परिणामों के प्रयोजन के लिए, छह दिनों सर्जरी के बाद जानवरों 20 एमएल सोडियम pentobarbital की नसों में इंजेक्शन का उपयोग बलिदान किया गया। भ्रूण के विकास शरीर, मस्तिष्क, जिगर और मातृ वजन द्वारा मूल्यांकन किया गया था। प्रयोगात्मक अवधि की अवधि स्पष्ट रूप से विशेष रूप से अनुसंधान प्रश्न के लिए चुना डिजाइन के आधार पर अलग अलग होंगे और ~ 6 सप्ताह तक पहुँच सकते हैं।
  • साइटोकाइन विश्लेषण (वैकल्पिक कदम)
    1. एक ovine विशेष सैंडविच एलिसा का उपयोग कर प्लाज्मा में साइटोकाइन सांद्रता (आईएल -6, टीएनएफ-α) निर्धारित करते हैं। एकाग्रता में प्री-कोट माउस विरोधी भेड़ मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (कब्जा एंटीबॉडी आईएल -6) या माउस विरोधी गोजातीय मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (TNF-α) हे / N के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर एलिसा प्लेट पर 4 माइक्रोग्राम / एमएल, 3 बार के बाद कपड़े धोने बफर (पीबीएस में 0.05% के बीच 20, PBST) से धो लें।
    2. PBST में 1% BSA के साथ 1 घंटे के लिए प्लेटों को ब्लॉक करें। कपड़े धोने बफर के साथ 3 बार प्लेटें धो लें।
    3. एक धारावाहिक dilutions मानक 7 31.25 की स्नातकोत्तर / एमएल के लिए मानक 1 2,000 के एनजी / एमएल से लेकर तैयार करते हैं, एलिसा मानक के रूप में पुनः संयोजक भेड़ प्रोटीन (आईएल -6, टीएनएफ-α) का प्रयोग करें।
    4. लोड 50 सीरियल पतला प्रोटीन मानकों और अच्छी तरह से प्रति नमूनों की μl और, आरटी पर 2 घंटे के लिए सेते प्लेटें 3 बार धोएं। दो प्रतियों में सभी मानकों और नमूने चलाएँ।
    5. 1 के कमजोर पड़ने पर खरगोश विरोधी भेड़ पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी के 50 μl (पता लगाने एंटीबॉडी आईएल -6) या खरगोश विरोधी गोजातीय पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (TNF-α) को लागू: कुओं में 250 और आरटी पर 30 मिनट के लिए सेते हैं। कपड़े धोने बफर के साथ 5 बार प्लेटें धो लें।
    6. 30 मिनट के लिए: आईजीजी एचआरपी संयुग्मित बकरी विरोधी खरगोश (5,000 कमजोर पड़ने 1) के 50 μl जोड़ें।
    7. अच्छी तरह से प्रति TMB सब्सट्रेट समाधान के 50 μl के साथ सेते हैं।
    8. 2 एन सल्फ्यूरिक एसिड के 25 μl के साथ वांछित समय में रंग विकास प्रतिक्रिया बंद करो।
    9. पीएल पढ़ेंएक 570 एनएम तरंगदैर्ध्य के सुधार के साथ 450 एनएम पर एलिसा प्लेट रीडर पर Ates।
      नोट: हमारी assays में आईएल -6 एलिसा की संवेदनशीलता को 16 स्नातकोत्तर / एमएल, की संवेदनशीलता था टीएनएफ-α एलिसा क्रमश: 13.9 स्नातकोत्तर / एमएल था। सभी assays के लिए, विचरण का इंट्रा-परख और अंतर-परख गुणांकों क्रमश: <5% और <10% थी।
  • सांख्यिकीय आंकड़े
    नोट: सटीक सांख्यिकीय तरीकों अनुसंधान के सवाल पर निर्भर करेगा। यहाँ हम तालिका 2 में रिपोर्ट रक्त गैसों में कोई महत्वपूर्ण मतभेद के लिए परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया तरीकों की रिपोर्ट।
    1. उचित रूप में कई तुलना के लिए समायोजन के साथ पैरामीट्रिक या गैर पैरामीट्रिक परीक्षण के द्वारा पीछा Kolmogorov-स्मिर्नोव परीक्षण का उपयोग सामान्य डेटा वितरण, परीक्षण करें।
    2. उपयोग संबंधित पीओ 2 और ओ 2 शनि मूल्यों अनायास hypoxic थे कि पलटन में भ्रूण की पहचान करने और निर्धारित करने के लिए क्लस्टर विश्लेषण कश्मीर का अर्थ है (पीओ 2 <20 एमएमएचजी पर विचार या feta के रूप में ओ 2 शनि <55%एल हाइपोक्सिया)। 44-48
    3. विश्लेषण के लिए इस तरह के एसपीएसएस के रूप में सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर का प्रयोग करें।
    4. महत्वपूर्ण माना पी <0.05 पर सांख्यिकीय मतभेदों के साथ मतलब ± एसडी के रूप में मौजूद डेटा।

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    Representative Results

    38 गर्भवती समय दिनांकित EWES गर्भ के 128 ± 2 दिन में instrumented थे (डीजीए, ~ 0.88 हमल, अवधि 145 डीजीए) धमनी, शिरापरक और एमनियोटिक कैथेटर और इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम (ईसीजी) बाँझ सामान्य संज्ञाहरण के तहत तकनीक (भेड़ दोनों और भ्रूण के साथ इलेक्ट्रोड के साथ )। जुड़वां गर्भावस्था के मामले में बड़ा भ्रूण छूकर और intertemporal व्यास का आकलन के आधार पर चुना गया था; वैकल्पिक रूप से, instrumented किए जाने की भ्रूण किसी भी संभावित पूर्वाग्रह से बचने के लिए बेतरतीब ढंग से चुना जा सकता है या दोनों भ्रूण instrumented जा सकता है। प्रक्रिया की कुल अवधि 124 ± 27 मिनट था। instrumented जा भ्रूण ऊपरी शरीर के हिस्से को 92 ± 19 मिनट के लिए गर्भाशय के बाहर बने रहे। Instrumented EWES के अधिकांश F2 जानवरों थे। उनकी बांध एफ 1 (सीमा लीसेस्टर * रोमानोव) था और साहब एक हैम्पशायर राम था; - सीमा लीसेस्टर (25%) - रोमानोव (25%) = HABLRV हैम्पशायर (50%): इस प्रकार के रूप में वे पार कर रहे थे।

    प्रतिनिधि मातृ एवं भ्रूण शारीरिकसर्जरी और इंस्ट्रूमेंटेशन के दौरान विशेषताओं चित्र 1 में दिखाया गया है और संज्ञाहरण के दौरान भ्रूण और मातृ व्यवहार के गर्भावधि उम्र के लिए शारीरिक आदर्श के भीतर थे।

    मातृ वजन (1.6 ± 0.5 की दर से, यानी) 75 ± 11 किलो और 38 किया जुड़वा बच्चों में से 21 औसत। 'जुड़वाँ वजन 3,300 ± 740 ग्राम (पी = 0.003) पर कम थी, जबकि शव-परीक्षा के समय (134 ± 3 डीजीए) में instrumented भ्रूण एकमात्र बीच 4090 ± 800 ग्राम वजन। 3300 ± 670 ग्राम पर uninstrumented जुड़वा बच्चों के वजन instrumented जुड़वां (पी = 0.78) का वजन करने के लिए इसी तरह की थी। Instrumented भ्रूण की 18 महिला थे और 20 पुरुष थे।

    सर्जरी और पोस्ट ऑपरेटिव वसूली के दौरान भ्रूण रक्त धमनियों गैसों, ग्लूकोज और एसिड आधार स्थिति की गतिशीलता हम भ्रूण एसिड आधार स्थिति का एक क्रमिक वसूली और जी में थोड़ा परिवर्तन के साथ ऑक्सीजन के एक मध्यम गिरावट मनाया तालिका 1 में रिपोर्ट कर रहे हैंपोस्ट ऑपरेटिव दिनों से lucose और इलेक्ट्रोलाइट्स 1 3 करने के लिए विशेष रूप से, पोस्ट ऑपरेटिव 3 दिन, भ्रूण के 42% धमनी पुलिस के 2 11 एमएमएचजी और 28% की ओ 2 शनि के साथ अनायास hypoxic होना पाया गया है। normoxic क्लस्टर के भ्रूण पीओ 2 22 एमएमएचजी पर केंद्रित है और ओ 2 शनि 56% से कम हो गया था। जुड़वां भ्रूण सिंगलटन भ्रूणों (पी = 0.26) से अधिक नहीं hypoxic थे।

    भ्रूण धमनी आईएल -6 एलिसा पोस्ट ऑपरेटिव वसूली अवधि के दौरान 16 स्नातकोत्तर / एमएल की संवेदनशीलता सीमा से नीचे मूल्यों गाया। इसी तरह, टीएनएफ-α स्तर भी अपरिवर्तित और के साथ 29 स्नातकोत्तर / एमएल पर बहुत कम बनी ~ भी पोस्ट ऑपरेटिव वसूली अवधि के दौरान 13.9 स्नातकोत्तर / एमएल की संवेदनशीलता सीमा से नीचे मूल्यों दिखा जानवरों का 30%।

    चित्र 1
    चित्रा 1. Intrasurgical मातृ और भ्रूण की निगरानी। FHR, भ्रूण की हृदय गति मैंn मिनट (बीपीएम) प्रति धड़कता है; fECG, भ्रूण इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम (वी); पंजा, मातृ सकारात्मक एयरवे प्रेशर (एमएमएचजी); mABP, मातृ धमनी रक्तचाप (एमएमएचजी); MHR, मातृ दिल की दर (बीपीएम); mECG, मातृ ईसीजी (वी)। एक्स अक्ष HH में समय के पैमाने है: मिमी:। एसएस यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

    चित्र 2
    चित्रा 2. उठना, भ्रूण हाइपोक्सिया और शरीर के वजन। पोस्ट ऑपरेटिव 3 दिन में भ्रूण के शरीर के वजन और धमनी पीओ 2 के बीच कोई रिश्ता (स्पीयरमैन आर = 0.326, पी = 0.161) का पता चला था। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

    <टीडी> Bioamp: 1902; एडीसी: micro1401; डाटा अधिग्रहण सॉफ्टवेयर: स्पाइक 2, V7.13 <टीडी> 100 मिलीग्राम / एमएल
    ऐस प्रकाश स्रोत Schott-Fostec
    कैंची विदारक ललित विज्ञान उपकरण 14,060-11
    कोणीय विदारक कैंची ललित विज्ञान उपकरण 15,006-09
    छुरी हैंडल ललित विज्ञान उपकरण 10,003-12 वैकल्पिक विदारक उपकरण
    घुमावदार स्केलपेल ब्लेड # 12 ललित विज्ञान उपकरण 10,012-00 वैकल्पिक विदारक उपकरण
    अस्थि कैंची ललित विज्ञान उपकरण 16,044-10
    एस एंड टी सिवनी बांधने संदंश ललित विज्ञान उपकरण 00,272-13
    ड्यूमॉन्ट एसएस संदंश - angled ललित विज्ञान उपकरण 11,203-25
    लट रेशम सीवन आकार 6-0 Teleflex मेडिकल 07 -30-10
    मेडिकल टेप transpore 3M
    अक्स हाइड्रोक्लोराइड 100 मिलीग्राम / एमएल होस्पिरा एनडीसी 0409 - 2051 - 05 अंतिम करता है 80 मिलीग्राम / किग्रा है
    Tranqui वेद इंजेक्शन (xylazine 100 मिलीग्राम / एमएल) Vecdo एनडीसी 50989 - 234 - 11 अंतिम करता है 10 मिलीग्राम / किग्रा है
    रिएक्टिव नारंगी 14 सिग्मा - एल्ड्रिच आर - 8254
    Ringers समाधान घटक समाधान गैस 95% O2 और 5% सीओ 2, अंतिम पीएच 7.4 के साथ equilibrated है
    सोडियम क्लोराइड सिग्मा - एल्ड्रिच S7653 अंतिम एकाग्रता: 118 मिमी
    पोटेशियम क्लोराइड फिशर साइंटिफिक P217 - 3 अंतिम एकाग्रता: 4.7 मिमी
    कैल्शियम क्लोराइड घihydrate फिशर साइंटिफिक C79 - 500 अंतिम एकाग्रता: 2.5 मिमी
    पोटेशियम फॉस्फेट अकेले आधार फिशर साइंटिफिक पी -285 अंतिम एकाग्रता: 1.2 मिमी
    मैग्नीशियम सल्फेट संयुक्त बेकर जनवरी-00 अंतिम एकाग्रता: 0.57 मिमी
    4- (2-Hydroxyethyl) piperazine-1-ethanesulfonic एसिड (HEPES) फिशर साइंटिफिक बीपी 310-500 अंतिम एकाग्रता: 5.95 छ / एल
    शर्करा सिग्मा - एल्ड्रिच G8270 अंतिम एकाग्रता: 5.5 मिमी
    LifeWindow Digicare बायोमेडिकल प्रौद्योगिकी
    CED bioamplifier और एडीसी इकाइयों कैम्ब्रिज इलेक्ट्रॉनिक डिजाइन लिमिटेड,
    यूनिट 4, विज्ञान पार्क,
    मिल्टन रोड,
    कैम्ब्रिज CB4 0FE
    इंग्लैंड।
    Neurolog एनालॉग सिग्नल bioamplifier Digitimer लिमिटेड
    37 Hydeway
    Welwyn गार्डन सिटी
    हर्टफोर्डशायर, AL7 3BE, इंग्लैंड     		NL108A
    ABL800Flex रेडियोमीटर कनाडा; 200 N5V 4N2 पर एबरडीन डॉ, लंदन,
    Eppendorf 5804R Eppendorf कनाडा; 2810 Argentia रोड, # 2
    मिसिसॉगा, ओंटारियो, L5N 8L2
    गले कैथीटेराइजेशन सेट तीर एरो इंटरनेशनल, इंक, 2400 Bernville रोड, पढ़ना, फिलीस्तीनी अथॉरिटी 19605 संयुक्त राज्य अमरीका
    Atravet 10 मिलीग्राम / एमएल
    डायजेपाम 5mg / मिलीलीटर
    अक्स Ketalar
    Propofol 10 मिलीग्राम / एमएल
    SurgiVeT अंतःश्वासनलीय ट्यूब; स्मिथ मेडिकल एएसडी, इंक सेंट पॉल, MN 55112, संयुक्त राज्य अमेरिका
    RAPI फिट एडेप्टर के साथ खाना बनाना श्वासनली एक्सचेंज कैथेटर कुक क्रिटिकल केयर 750, ब्लूमिंगटन में 47402-0489 यूएसए
    Dispomed वेंटीलेटर Dispomed लिमिटेड, 745 Nazaire-लॉरिन, Joliette, क्यूबेक J6E 0L6
    बी.डी. Insyte-W बेक्टन डिकिंसन, आसव थेरेपी सिस्टम्स इंक, 9450 S STATE ST, सैंडी यूटा 84070 संयुक्त राज्य अमरीका 22 ग्राम से 20; में 1.16 करने के लिए [0.9 x 25 मिमी] में 1 [1.1 x 30 मिमी]
    एडवर्ड्स लाइफसाइंसेज रेफरी: TruWave डिस्पोजेबल दबाव के साथ PX272 दबाव की निगरानी किट
    LifeWindow LW6000 Digicare Biomedical प्रौद्योगिकी 107 वाणिज्य रोड, Boynton Beach, फ्लोरिडा 33426-9365 यूएसए
    Gaymar
    Babcock
    Polyvinyl कैथेटर एससीआई (वैज्ञानिक जिंसों इंक) 2 मीटर
    2-0 Vicryl
    Castroviejo कैंची
    इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम (ईसीजी) LIFYY, Metrofunk केबल संघ, बर्लिन, जर्मनी एकल म्यान में चार तांबा इलेक्ट्रोड, 2 मीटर
    2-हे Vicryl
    3-0 Vicryl
    सार्वजनिक वितरण प्रणाली के द्वितीय खासियत
    Trimethoprim sulfadoxine
    एम्पीसिलीन
    पानी निकलने की टोंटी आर्गन मेडिकल, कैट 041220001A पुरुष Luer ताला के साथ डबल 4 तरह पानी निकलने की टोंटी
    सुई टाइको हेल्थकेयर 8881202389 Monoject एल्यूमीनियम हब कुंद सुई, 22Gx, 0.7mmx 38.1mm: भ्रूण धमनी और शिरापरक कैथेटर के लिए
    सुई टाइको हेल्थकेयर 8881202322 Monoject एल्यूमीनियम हब कुंद सुई, 16Gx, 1.6mmx38.1mm: एमनियोटिक कैथेटर के लिए

    तालिका 1. विशिष्ट अभिकर्मकों / उपकरण।

    सारणी 2
    वह क्लिक करेंयह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए कर रहे हैं।

    सर्जरी और पोस्ट ऑपरेटिव वसूली के दौरान भ्रूण रक्त गैसों, चयापचयों और इलेक्ट्रोलाइट्स की तालिका 2 पूरी सिंहावलोकन। भ्रूण रक्त धमनियों पीएच, पीसीओ 2 (एमएमएचजी), पीओ 2 (एमएमएचजी), ऑक्सीजन संतृप्ति (ओ 2 शनि%), ग्लूकोज (एमजी / डीएल), लैक्टेट (mmol / एल) और इंस्ट्रूमेंटेशन और वसूली समय के विभिन्न बिंदुओं पर समय आधार अतिरिक्त (mmol / एल): भ्रूण सर्जरी की शुरुआत के तुरंत पहले भ्रूण धमनी कैथेटर (गर्भाशय खुला) स्थापित करने के बाद, भ्रूण सर्जरी के अंत (गर्भाशय ,) बंद पोस्ट ऑपरेटिव दिनों 1 से 3 तक यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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    Discussion

    लंबे समय से instrumented गैर anesthetized भ्रूण भेड़: संवेदनाहारी और शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं भ्रूण शरीर विज्ञान और pathophysiology के अध्ययन के लिए एक पशु मॉडल की स्थापना के लिए आवश्यक हैं कि प्रस्तुत कर रहे हैं।

    प्रोटोकॉल के भीतर चार महत्वपूर्ण कदम पर जोर दिया जाना चाहिए। सबसे पहले, मातृ पार्श्व के माध्यम से कैथेटर और इलेक्ट्रोड से गुजर रहा है: यह इस किसी भी आंतरिक अंग चोटों से बचने के लिए एक बार में किया जाता है कि महत्वपूर्ण है। दूसरा, भ्रूण exteriorizing करने से पहले uterotomy ऑपरेटिंग साइट सुरक्षित: इसे रोकने या एमनियोटिक द्रव और गर्भाशय बंद करने से पहले एमनियोटिक झिल्ली के बाद suturing के नुकसान को कम करने के लिए महत्वपूर्ण है। तीसरा, धमनी कैथीटेराइजेशन: भ्रूण भेड़ धमनियों के बारे में 1-2 व्यास में मिमी और एक अनुभवी सर्जन के लिए कैथीटेराइज़ इसलिए मुश्किल नहीं कर रहे हैं; दो सर्जनों की एक टीम प्रक्रिया की कुल लंबाई कम करने के लिए समय बचाने में मदद करता है जो इस कार्य में सबसे अच्छा और तेज करता है। चौथा, सावधान सेकंडuring और पूर्व भ्रूणावरण में भ्रूण लौट रहे हैं और गर्भाशय को बंद करने के लिए एमनियोटिक गुहा में सभी कैथेटर और इलेक्ट्रोड का संगठन: इस आकस्मिक कैथेटर की खींच या कारण सर्जरी के बाद मातृ या भ्रूण आंदोलनों के लिए ईसीजी इलेक्ट्रोड की फाड़ से बचने में मदद करता है।

    इसके बजाय यहां प्रस्तुत दृष्टिकोण के बाहु वाहिकाओं, मन्या कैथीटेराइज़ करने के लिए या ऊरु जहाजों का भी इस्तेमाल किया जा सकता है। चुनाव बारी में अध्ययन डिजाइन से तय किया जाएगा कि समग्र इंस्ट्रूमेंटेशन दृष्टिकोण पर निर्भर करता है। हम भ्रूण गर्भाशय के बाहर खर्च करता है समय को कम करने के लिए और भ्रूण गर्भाशय के बाहर instrumented जा रह जाने की जरूरत है किस हद तक कम करने के लिए सलाह देते हैं। ये विचार प्रस्तुत "न्यूनतम दृष्टिकोण" में instrumented वाहिकाओं के चुनाव के लिए नेतृत्व किया। हम टी भर में कोई आपसी हस्तक्षेप के साथ इंट्रा-धमनी रक्तचाप की निगरानी और धमनियों से रक्त नमूना लेने के लिए अनुमति देने के लिए दोनों पक्षों पर धमनियों catheterizing करने की सिफारिशवह प्रयोग। एक अतिरिक्त लाभ यह दृष्टिकोण का परिचय असफल सुरक्षित अतिरेक है: इस मामले में एक धमनी प्रयोगात्मक अवधि के दौरान अवरुद्ध हो जाता है, नमूना और दबाव की निगरानी रक्त नमूने किया जाता है जब निगरानी में दखल का दोष के साथ एक ही पोत से संभव हो रहे हैं।

    इस पशु मॉडल की एक व्यापक अनुकूलन रोकता है जो तीन सीमाएं हैं। इन सीमाओं को नीचे का सुझाव दिया कुछ संशोधनों के द्वारा संबोधित किया जा सकता है। सबसे पहले, यह जैव सुरक्षा स्तर कुछ न्यायालय में 2 प्रसव के लिए आवश्यकता है। यह एक कमजोर प्रतिरक्षा प्रणाली के साथ मनुष्य में गर्भवती भेड़ों से Coxiella burnetii संक्रमण के लिए एक जोखिम की वजह से है। 49,50 टीकाकरण 51,52 और पीसीआर परीक्षण नहीं है कि यह सुनिश्चित करने के लिए किया जा सकता है इस जोखिम को कम करने के लिए जानवरों और उजागर इंसानों के लिए उपलब्ध है सकारात्मक जानवरों खेत से अनुसंधान सुविधा के लिए दिया जाता है। एक समाधान कई पीसीआर परीक्षण के साथ पशु टीकाकरण गठबंधन करने के लिए किया जा सकता हैपूर्व के प्रजनन के लिए किया योनि swabs से खेत पर सर्जरी के दौरान एमनियोटिक द्रव से पहले प्रसव के लिए और उसके बाद फिर से शुरू करते हैं। यह दूसरों में है के रूप में इस तरह के सावधानियों के साथ, कुछ न्यायालय में अनुसंधान के क्षेत्र में भेड़ का उपयोग सीमित नहीं है। दूसरा, पशु प्रति लागत, कम चार अंकों रेंज में कुछ murine पीटकर उपभेदों के बराबर है। यह एकत्र किया जा सकता है कि आंकड़ों की व्यापक राशि से संबंधित है के रूप में इसे ध्यान में रखते हालांकि, प्रत्येक भ्रूण भेड़ प्रयोग से जानकारी हासिल गैर मानव प्राइमेट के लिए केवल तुलना, मानव की वजह से करने के लिए कहा जा सकता है कि सवाल और अनुवाद की क्षमता भेड़ में अंगों के विकास के समय के लिए। तीसरा, केवल एक साल में कुछ समय के दौरान प्रजनन और पशु उपलब्धता का मुद्दा है। यहाँ तक कि हार्मोनल उपचार के साथ, इस तरह के गर्भधारण की दर और भेड़ के बच्चे (भ्रूण) की जीवन शक्ति के रूप में भेड़ प्रजनन के परिणामों प्राकृतिक प्रजनन मौसम के आसपास संतोषजनक केवल कुछ ही महीने हैं। 53 इसलिए, प्रयोगअल शेड्यूलिंग एक गिरावट और वसंत के मौसम में विभाजित वर्षों के साथ सावधान योजना की आवश्यकता है। एक समाधान के लिए-नवंबर सितंबर और एक अप्रैल-से-जून प्रयोगात्मक 'भेड़ मौसम' की स्थापना के लिए किया जा सकता है। समय प्रत्येक प्रयोगात्मक मौसम के दौरान एकत्र कई डेटा का विश्लेषण करने के लिए यह अनुमति देता है के रूप में यह समस्या है, यह भी एक गुण है।

    मौजूदा तरीकों के संबंध में महत्व के लिए योगदान कारकों की एक संख्या है। प्रस्तुत morphometric, हृदय और रक्त गैस डेटा प्रजातियों 54,55 के लिए सीमा के भीतर थे और मानव प्रजाति 56 के उन लोगों के, इस पशु मॉडल का एक बड़ा लाभ जैसे लगते हैं। एक अपवाद तथापि। मानव ट्विनिंग की तुलना में 57 यह कई गर्भधारण की उच्च दर है एक महत्वपूर्ण जैव चिकित्सा कार्य भ्रूण के विकास पर ट्विनिंग के प्रभावों का अध्ययन कर रहा है, के रूप में भी मॉडल की एक गुण है। पोस्ट के 55,58,59 स्तर बहुत कम आईएल -6 और TNF-α ELISAs द्वारा मापा -operative सूजनएसिड आधार स्थिति की वसूली के साथ संयुक्त भ्रूण शल्य चिकित्सा उपकरण अच्छी तरह से सहन किया है और 72 घंटे के ऑपरेशन के बाद वसूली की अवधि से पहले एक प्रयोग शुरू करने से भ्रूण भेड़ की एक स्थिर आधारभूत हालत सुनिश्चित करने के लिए पर्याप्त है कि संकेत मिलता है। निकट अवधि भ्रूण भेड़ में सहज मध्यम जीर्ण हाइपोक्सिया के उच्च प्रतिशत ऐसे जैसे, IUGR, और इस तरह की सूजन के रूप में प्रसवकालीन अपमान, और के रूप में भ्रूण और प्रसवकालीन विकास पर मानव प्रसव पूर्व हाइपोक्सिया और सूजन की पुरानी प्रभाव, अध्ययन के लिए उन्हें एक दिलचस्प मॉडल renders तीव्र श्वासावरोध। 60,61,62 कई IUGR भेड़ मॉडल, उदाहरण के लिए, कुछ कुछ अपरा embolization द्वारा यह उत्प्रेरण, सहज हाइपोक्सिया पर निर्भर है, इस्तेमाल कर रहे हैं। 16,63-66 दूसरी ओर, गंभीर हाइपोक्सिया से पहले हो सकता है, एक प्रयोग के शुरू करने के लिए यह भी यहाँ के रूप में लंबे समय से hypoxic की प्रतिक्रियाएं एक भ्रूण, जैसे, हृदय या केंद्रीय तंत्रिका प्रणाली अध्ययन किया जा रहे हैं, जहां मामलों में एक बहिष्कार कसौटीफिर से normoxic कर रहे हैं जो उन लोगों से अलग करने के लिए जाना जाता है। 60 अन्य महत्वपूर्ण आवेदन भ्रूण और प्रसव के बाद विकास पर प्रसव पूर्व मातृ तनाव के प्रभाव का अध्ययन किया जाता है। 5,67 अंत में, इस मॉडल के साथ कई उद्धृत प्रकाशनों में देखा जा सकता है, भ्रूण इंस्ट्रूमेंटेशन कर सकते हैं भ्रूण के विकास के निकट अवधि अध्ययन - डीजीए मध्य हमल के लिए इसी 70-135 कहीं ~ से गर्भावधि उम्र की एक विस्तृत रेंज भर में बनाया जा। आगे बढ़ाने गर्भावधि उम्र के साथ, कभी बढ़ती जटिलता के इंस्ट्रूमेंटेशन संभव हो रहे हैं, लेकिन शल्य इंस्ट्रूमेंटेशन जरूरत की अवधि के विचार एक ही भ्रूण से बहुभिन्नरूपी रिकॉर्डिंग की एक संख्या प्राप्त करने की आवश्यकता के खिलाफ तौला जाए।

    प्रस्तुत तकनीक का बहुत आशाजनक भविष्य के अनुप्रयोगों के एक नंबर भेड़-विशिष्ट आणविक जीव विज्ञान अभिकर्मकों और हाल ही में भेड़ जीनोम अनुक्रमण की बढ़ती संख्या से ली गई है। ये हाल के घटनाक्रम आगे इस एनिमा को बढ़ावा दिया हैएल मॉडल एकीकृत शरीर विज्ञान के लिए (ईपीआई) जीनोम से संगठन के विभिन्न तराजू, पर स्वस्थ और रोग मानव भ्रूण के विकास को समझने के लिए एक बहुत ही होनहार और शक्तिशाली तरीका हो सकता है। 68 69-74

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    Materials

    Name Company Catalog Number Comments
    ACE Light source Schott-Fostec A20500
    Dissecting scissors Fine Science Tools 14060 - 11
    Angled dissecting scissors Fine Science Tools 15006 - 09
    Scalpel handle Fine Science Tools 10003 - 12 alternating dissecting tool
    Curved scalpel blades #12 Fine Science Tools 10012 - 00 alternating dissecting tool
    Bone scissors Fine Science Tools 16044 - 10
    S & T suture tying forceps Fine Science Tools 00272 - 13
    Dumont SS forceps - angled Fine Science Tools 11203 - 25 
    Braided silk suture size 6-0 Teleflex Medical 07 - 30  - 10
    Medical Tape transpore 3M
    Ketamine hydrochloride 100 mg/ml Hospira NDC 0409 - 2051 - 05 Final Does is 80 mg/kg
    Tranqui Ved Injection (xylazine 100 mg/ml) Vecdo NDC 50989 - 234 - 11 Final Does is 10 mg/kg
    Reactive orange 14 Sigma - Aldrich R - 8254
    Ringers Solution Components Solution is gas equilibrated with 95% O2 and 5% Co2, final pH 7.4
    Sodium chloride Sigma - Aldrich S7653 Final Concentration: 118 mM
    Potassium chloride Fisher Scientific P217 - 3 Final Concentration: 4.7 mM
    Calcium chloride dihydrate Fisher Scientific C79 - 500 Final Concentration: 2.5 mM
    Potassium phosphate monobasic Fisher Scientific P -285 Final Concentration: 1.2 mM
    Magnesium sulfate J.T. Baker Jan-00 Final Concentration: 0.57 mM
    4-(2-Hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulfonic acid (HEPES) Fisher Scientific BP 310 - 500 Final Concentration: 5.95 g/L
    Glucose Sigma - Aldrich G8270 Final Concentration: 5.5 mM
    LifeWindow Digicare Biomedical Technology
    CED bioamplifier and ADC units Cambridge Electronic Design Limited,
    Unit 4, Science Park,
    Milton Road,
    Cambridge CB4 0FE
    ENGLAND.    		 Bioamp: 1902; ADC: micro1401; Data acquisition software: Spike 2, V7.13
    Neurolog analog signal bioamplifier Digitimer Ltd
    37 Hydeway
    Welwyn Garden City
    Hertfordshire, AL7 3BE, England    		 NL108A
    ABL800Flex Radiometer Canada; 200 Aberdeen Dr, London, ON N5V 4N2
    Eppendorf 5804R Eppendorf Canada; 2810 Argentia Road, #2
    Mississauga, Ontario, L5N 8L2
    Arrow Jugular Catheterization Set Arrow International, Inc., 2400 Bernville Road, Reading, PA 19605 USA
    Atravet 10 mg/ml
    Diazepam 5 mg/ml
    Ketamine Ketalar 100 mg/ml
    Propofol 10 mg/ml
    SurgiVeT Endotracheal Tubes; Smiths Medical ASD, Inc. St. Paul, MN 55112, USA
    Cook Airway Exchange Catheter with RAPI-FIT Adapters Cook Critical Care 750, Bloomington IN 47402-0489 USA
    Dispomed Ventilator Dispomed Ltd., 745 Nazaire-Laurin, Joliette, Quebec J6E 0L6
    BD Insyte-W Becton Dickinson, Infusion Therapy Systems Inc., 9450 S State St, Sandy Utah 84070 USA 22 to 20 G; 1 in [0.9 x 25 mm] to 1.16 in [1.1 x 30 mm]
    Edwards Lifesciences Ref: PX272 Pressure monitoring kit with TruWave Disposable Pressure
    LifeWindow LW6000 Digicare Biomedical Technology 107 Commerce Road, Boynton Beach, FL 33426-9365 USA
    Gaymar
    Babcock
    Polyvinyl catheters SCI (Scientific Commodities Inc.) 2 meters
    2-0 Vicryl
    Castroviejo scissors
    electrocardiogram (ECG) LIFYY, Metrofunk Kabel-Union, Berlin, Germany four copper electrodes in single sheath, 2 meters
    2-O Vicryl
    3-0 Vicryl
    PDS II USP
    Trimethoprim sulfadoxine
    Ampicillin
    Stopcock Argon Medical, Cat 041220001A Double 4-way Stopcock with male luer lock
    Needles Tyco Healthcare 8881202389 Monoject aluminum hub blunt needles, 22Gx, 0.7mmx 38.1mm: for fetal arterial and venous catheters
    Needles Tyco Healthcare 8881202322 Monoject aluminum hub blunt needles, 16Gx, 1.6mmx38.1mm: for amniotic catheters

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    References

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