Introduction
עכברים תלויים בolfaction לניווט סביבות חדשות, מציאת מזון, להכרה באנשים אחרים, והתנהגות מינית 1-3. זה חיוני כי חוקרים לקבוע אם או לא יש לי חיות ניסוי חוש ריח תפקוד לפני מתן בדיקות התנהגותיות הכוללות מזון, אינטראקציה חברתית, או כל ריחות שנועדו לעורר תגובה מהעכבר. תתרנות או חוסר היכולת להבחין בין ריחות שונים, עלול לגרום לתוצאות חיוביות או שליליים שגויות במגוון רחב של פרדיגמות התנהגות, כך היכולת של עכבר כדי לזהות ולהבחין ריחות יש לקבוע לפני סוגים אחרים של בדיקות התנהגותיות מבוצעים.
מבחן ההתרגלות / dishabituation חוש הריח תואר לראשונה בשנת 1980 4. הבדיקה הותאמה לשימוש בעכברים על ידי בני הזוג. מו יאנג וז'קלין קראולי 5. זוהי בדיקה פשוטה וזולה שמאפשרת לחוקר לestaמלמולים שעכבר יכול לזהות ולהבדיל בין ריחות. בנוסף לבדיקת חוש ריח, בדיקה זו מאפשרת לחוקר לבחון את ההתנהגות הכללית של העכבר וצריך להיעשות מוקדם במשטר בדיקות. תצפיות איכותיות בדבר התנועה של העכבר, סימנים של חרדה, רמת הפעילות, ותגובה לריחות חברתיים לעומת ריחות מזון עשויות לאותת אזורים החדשים שבו בדיקה יכולה להתבצע.
בבדיקה זו, צמר גפן טבול בריחות שונים מוצגים לעכבר שלוש פעמים ברציפות. עם כל הצגה חוזרת ונשנית של ריח, העכבר להרגיל לקלון צמר גפן, מבלה פחות זמן חוקר אותו בכל מצגת שלאחר מכן. כאשר ריח חדש מוצג, dishabituation מתרחש, ועכבר טיפוסי לבלות יותר זמן חוקר את הספוגית, מצביע על כך שהוא יכול להבחין בין הריחות הנוכחיים וקודמים 5. בדיקה זו ניתנת לעכבר אחד בכל פעם וכוללת ACC 45 דקותתקופת limation אחרי 45 דקות של בדיקות.
למרות שבדיקה זו היא קלה לביצועה ניתן להשתמש כדי לחקור שאלות מתוחכמות על מערכת חוש הריח עכבר. בדיקות אחרות פופולריות של olfaction, כגון בדיקת מזון הקבור, פשוט להקים את הנוכחות או עדר של תתרנות. עם זאת, בדיקת האפליה והתרגלות חוש הריח מאפשרת לחוקר כדי לקבוע שעכבר יש את היכולת לזהות ריחות אבל יכול להבחין בין ריחות שונים לא רק. הדפוס של התרגלות וdishabituation נעשה שימוש כדי לקבוע, כי מוטציות חדשות יכולות להפלות בין ריחות 6,7. במחקר מפתיע, Fadool ועמיתיו השתמשו תערובות מורכבות של ריחות להראות עכברים שעם מחיקה ממוקדת-גן של ערוץ Kv1.3 הם "smellers סופר" שיכול להבחין ריחות דומים מאוד טובים יותר מעכברים רגילים 8.
כאשר בוחן מודל עכבר נוקאאוט חדש כדאי establisשעות הנוכחות של התנהגות נורמלית למשימות חושיות בסיסיות. כאשר נעשו בשלב מוקדם במשטר בדיקות, אפליית הריח ובדיקת הרגלה נותנת חוקר את ההזדמנות כדי לבחון כל התנהגויות יוצאות דופן. תצפיות אלה יכולים למנוע תוצאות חיוביות או שליליות כוזבות בבדיקה הבאה שניתן לייחסם לבלבול מאפיינים של המוטציה. כחוקרים ממשיכים לחקור התנהגות חברתית הצורך לוודא תפקוד חוש הריח בסיסי הופך להיות חשוב יותר ויותר. בנוסף לבחינת olfaction בקווים מוטנטים, בדיקה זו יכולה לשמש כדי לענות על שאלות ספציפיות כגון האם טיפול תרופתי ספציפי מגדיל תגובה של בעלי חיים לגירויי ריח חברתיים או אם עליות תגובתם לגירויי כל הריח.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
עכברי הזכרים הבוגרים המשמשים בניסוי הבא נוצרו ושוכנו באוניברסיטה ביילור בטמפרטורת סביבה של 22 מעלות צלזיוס, עם אור 14 שעות ו -10 שעות חשכה (20:00-06:00 HR) מחזור יומי. עכברי גישה כרצונך מודעת מזון ומים היו נתון. כל הנהלים לעכברים היו בעמידה במכון הלאומי לבריאות הנחיות לטיפול והשימוש בחי מעבדה ופרוטוקול בעלי החיים אושרו על ידי אוניברסיטה ביילור טיפול בבעלי חיים ושימוש הוועדה. עכברים נבדקו בבוקר / אחר הצהריים המוקדמים מאוחר. לכל הנהלים מתחת לחוקר צריך ללבוש כפפות כדי למנוע ריחות ולמנוע זיהום.
1. הכנה של ריחות ללא חברתיים
- הכן ריחות הלא-חברתיים טריים בכל יום של בדיקות.
הערה: החוקר צריך להשתמש בכפפות כדי להכין את הריחות.- מלא 3 צינורות צנטריפוגה עם 10 מיליליטר של מים בכל.
- של תמצית בננת פיפטה 100 μl למיליליטר 15 & #160; צינור חרוטי ושל תמצית שקדים 100 μl לתוך צינור חרוטי 15 מיליליטר שני לדילול 1: 100.
הערה: שפופרת 15 מיליליטר השלישי רק תכיל מים.
2. הכנה של ריחות חברתיים
- הכן ריחות חברתיים טריים על בדיקות בוקר תתרחש. להשיג ריחות חברתיים משני כלובים שלא נוקו במשך לפחות שלושה ימים ומכילים מספר שווה של עכברים. להשיג ריחות חברתיים מעכברים מאותו המין כנושא הבדיקה.
שים לב: אלה הם להיות מאוחסנים ב RT ויש להשתמש תוך 4-6 שעות כדי לשמור על ריח חזק ועקבי.- לקבוע כמה להיווצר ריח חברתי צמר גפן צריך: כל עכבר נבדק יוצג עם שלוש ספוגיות מהריח חברתי 1, ושלוש מריח חברתי 2.
- הכן ריחות חברתיים על ידי ניגוב מקלון צמר גפן בצורה זיגזג בחלקו התחתון של כלוב מלוכלך. להתנער כל מצעים עודפים נצמדו לקצה.
- מטליות חנות בצנצנות זכוכית גדולות עם מכסים או בכוסות מכוסות parafilm. לייעד מיכל אחד לריח חברתי 1 ושני לריח חברתי 2.
- לשמור על כלובי מקור ריח מחוץ לחדר הבדיקה הניסיוני.
3. הסתגלות של עכבר המבחן
- שים כפפות ולשקול את העכבר כדי להיבדק ולמקם בנפרד בכלוב נקי עם מכסה חוט על גבי ואת בקבוק המים הוסר.
- אפשר העכבר כדי להסתגל לכלוב החדש במשך 45 דקות בחדר אחר מחדר הבדיקה. ודא שאין ריחות או רעשים חריגים בחדר.
- כבדיקה נמשכת כ -45 דקות, מתנודד הפעמים הסתגלות על ידי הצבת העכבר הבא להיבדק לכלוב נקי להסתגל תקין לפני בדיקת העכבר הנוכחי.
4. הכנת לחדר הבדיקה
- מניחים ספוגיות כותנה טריות, קלטת מעבדה, בקבוקים המכילים דגימות ריח חברתיות, צינורות של nריחות על-חברתי, micropipette, שני השעונים, ובקבוק פסולת עם מכסה בחדר הבדיקה.
- ודא שחדר הבדיקה ללא תשלום סביר של ריחות, רעשים חזקים, ואור בהיר. אל תלבשו קולון או קרמים ריחניים.
הערה: המשקיף לא צריך להיות מסטיק או סוכרייה בתקופת הבדיקה וצריך לנסות להגביל את החשיפה שלהם למזון ריח חזק.
5. בדיקת נוהל
- להביא את העכבר התאקלם בכלוב שלה לחדר הבדיקות ולמקם את הכלוב על הדלפק בגובה שנוח לצפייה תוך כדי ישיבה.
- להציג כל ריח 3 פעמים ברציפות למשך 2 דקות בכל פעם. השתמש כדי המצגת שניתן למצוא בטבלה 1.
- פיפטה 50 μl של odorant בריח להיבדק על קצה מקלון צמר גפן ומחדש כובע מקור הריח. הרם את ראש החוט של הכלוב ולהכניס את הקצה ללא בישום, עץ של הספוגית לפתיחת בקבוק מים, בלדחוףז האורך דרך מהחלק התחתון של החוט לפסגה. הימנע מלגעת בקצה הכותנה לכל דבר, כוללים אצבעות, כך שזיהום הריח הוא נמנע.
- תמשיך לצייר את הספוגית דרך הפתח בקבוק מים עד כ 1 אינץ 'של סוף הכותנה נתקע למטה לתוך הכלוב. להדביק סוף העץ של הספוגית לצד השני של הכלוב באמצעות מעבדה קלטת.
הערה: היזהר לא לתת את המכסה נופלת חזרה אל הכלוב, גרימת רעש חזק שיפריע עכבר המבחן. - מייד תתחיל עיתוי למשך 2 דקות. השתמש טיימר אחד לעת את מצגת 2 דקות. רשום את הזמן המצטבר בילה מרחרח את הריח במהלך משפט 2 דקות. רוזן התנהגות הרחרוח של בעלי החיים באמצעות שעון עצר נפרד. מרחרח פעיל מוגדר כאשר האף של בעלי החיים מכוון לקצה הכותנה עם האף ~ 2 סנטימטר שלה או קרוב יותר לקצה.
- לאחר השלמת כל ניסוי, הרם את המכסה התיל ולהסיר את קלון צמר גפן על ידי משיכתו כלפי מטה דרך האו"םderside של המכסה (זה מונע זיהום על ידי מניעת ריח קצה הכותנה מלגעת בחוט). חותם את הספוגית בשימוש בבקבוק 500 מיליליטר פסולת.
- להכין ולהכניס את הספוגית הבאה ולהתחיל עיתוי. לאפשר כ 1 דקות בין כל מרווח בין משפט. תמשיך עד שכל ריח הוצג שלוש פעמים ברציפות, למשך 2 דקות בכל פעם.
- לאחר העכבר השלים את כל הניסויים, רוקן את בקבוק הפסולת המכיל צמר גפן משמש בפח אשפה מחוץ לחדר הבדיקה. החזר את העכבר לכלוב בבית שלה.
6. ניתוח
- לנתח נתונים עבור כל קבוצה למצב ריח באמצעות דו-כיוונית ANOVA ואחרי ניומן-Keuls או בדיקה דומה פוסט הוק כדי לקבוע התרגלות משמעותית (פחות זמן מרחרחים אותו ריחות רצופים), וdishabitutation (יותר זמן מרחרח ריח חדש).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
בעקבות הפרוטוקול המתואר, תוצאות נרשמו באמצעות עשרה מבוגרים (יום לידה 90-120) זכר C57BL / 6J ושמונה זן גברי FVB מעורב-רקע (יום לידה 50-70). הבדיקה בוצעה על ידי חוקר יחיד על פני ימים רבים. כל נקודה על הגרפים מייצגת את המשך הזמן הממוצע חוקר ריח.
כאשר קלון צמר גפן טבול במים הוצג לראשונה, העכברים לבלות זמן רב בחקירת אובייקט זה רומן (איור 1: שלוש נקודות נתונים הראשונות). עם כל מצגת רצופה, פחות זמן הוא בילה חוקר את הספוגית, המצביע על הרגלה. כאשר ריח חדש הוא הציג, יש uptick בזמן בילה חוקר את הספוגית, מצביע על כך שהעכברים יכולים להפלות בין הריח החדש והקודם (איור 1: נקודות נתונים שקדים). שוב, עם כל הצגה רצופה, פחות זמן הוא בילה חוקר את הריח. העכברים להראות ד משמעותיecrease בזמן מרחרח את הספוגית של מים על שלושה הניסויים F (2,18) = 3.8, p <0.05. הם מראים דפוס דומה כאשר הציגו שוב ושוב עם F ריח שקדים (2,18) = 3.6, p <0.05. על ידי הריח השלישי הם עדיין מפגינים התרגלות אבל על ידי ניסוי זה בעלי החיים מגיעים לאפקט רצפה (איור 1: נקודות נתונים בננה). אפקט הרצפה הוא כאשר ההתנהגות היא כל כך נמוכה שהיכולת למדוד את ההתנהגות כל נמוך היא לא אמין. הם לא מראים שינוי בשלושת הניסויים כאשר מוצגים עם F ריח בננה (2,18) = 2.5, p <0.1. עם זאת, ניתוח שונה דו-כיווני לכל 9 המצגות של ריח להראות השפעה משמעותית לאורך הזמן F (8,72) = 3.8, p <0.001.
אותו הדפוס של התרגלות ואפליה שניתן לראות עם ריחות חברתיים עם הריחות הלא-חברתיים. עם זאת, העכברים לבלות יותר זמן חוקר את הריחות החברתיים (איור 2). יש ירידה משמעותית בזמן בילתה מרחרח tריחות חברתיים הוא כאשר כל 6 הניסויים שולבו F (2,18) = 6.1, p <0.01. עם זאת, לא הייתה השפעה שולית על שלושה הניסויים הראשון F (2,18) = 3.0, p = .076. הדבר מצביע היה קצת התרגלות אבל לא סכום משמעותי סטטיסטי של ירידה בזמן מרחרח את הריח החברתי הראשון. הייתה ירידה משמעותית בכמות הזמן שבעלי החיים נחקרו F הריח החברתי (2,18) = 6.1, p <0.01 במהלך המצגת השנייה של ריח חברתי.
אנו חוזרים על השיטה במתח מעורב-רקע FVB גברי. כאשר קלון צמר גפן טבול במים הוצג לראשונה, העכברים לבלות זמן רב בחקירת אובייקט זה רומן (איור 3: שלוש נקודות נתונים הראשונות). עם כל מצגת רצופה, פחות זמן הוא בילה חוקר את הספוגית, המצביע על הרגלה. כאשר ריח חדש הוא הציג, יש uptick בזמן בילה חוקר את הספוגית, מצביע על כך שהעכברים יכולים להפלות בין הריח החדשND הקודם (איור 3: נקודות נתונים שקדים). שוב, עם כל הצגה רצופה, פחות זמן הוא בילה חוקר את הריח. העכברים להראות ירידה משמעותית בזמן מרחרחת את הספוגית של מים על שלושה הניסויים F (2,14) = 13.3, p <0.001. הם מראים דפוס דומה כאשר הציגו שוב ושוב עם F השקדים הריח (2, 14) = 12.7, p <0.001. בזן זה עדיין היה הבדל משמעותי על פני שלושה הניסויים. על ידי הריח השלישי הם עדיין מפגינים התרגלות (איור 3: נקודות נתונים בננה) אבל בשל השפעת הרצפה הם לא מראים שינוי בשלושת הניסויים כאשר מוצגים עם F ריח בננה (2,14) = 3.04, p = 0.08. עם זאת, ניתוח שונה דו-כיווני לכל 9 המצגות של ריח להראות השפעה משמעותית לאורך הזמן F (8,56) = 9.6, p <0.001.
אותו הדפוס של התרגלות ואפליה לא ראה עם ריחות חברתיים עם הריחות הלא-חברתיים. לא היה משמעותיירידה בזמן מוקדש מרחרחת את הריחות החברתיים כאשר כל 6 הניסויים שולבו F (5,35) = 0.16, p = 0.97. הנתונים מצביעים על כך שהעכברים לא להרגיל למצגות חוזרות ונשנות של שני ריחות חברתיים.
איור 1: הזמן הממוצע בילה חוקר ריחות הלא-חברתיים לזכר עכברי C57BL / 6J כל נקודת נתונים מייצגת את הזמן הממוצע של בעלי החיים בילו חוקרים את הריח הלא-החברתי המסוים.. הברים השגיאה מייצגים את שגיאת התקן של הממוצע. כוכביות (*) מצביעות על הבדל משמעותי שבו הקבוצה מציגה התרגלות (p <0.05).
איור 2:. הזמן הממוצע בילה חוקר ריחות חברתיים לC57BL / 6J עכברי זכרים כל נקודת נתונים מייצגת את ממוצע זמן spen בעלי החייםלא חוקר את הריח החברתי המסוים. הברים השגיאה מייצגים את שגיאת התקן של הממוצע. כוכביות (*) מצביעות על הבדל משמעותי שבו הקבוצה מציגה התרגלות (p <0.05).
איור 3: הזמן הממוצע בילה חוקר ריחות הלא-חברתיים לזן מעורב-רקע FVB זכר כל נקודת נתונים מייצגת את הזמן הממוצע של בעלי החיים בילו חוקרים את הריח הלא-החברתי המסוים.. הברים השגיאה מייצגים את שגיאת התקן של הממוצע. כוכביות (*) מצביעות על הבדל משמעותי שבו הקבוצה מציגה התרגלות (p <0.05).
איור 4: הזמן הממוצע בילה חוקר ריחות חברתיים לזן מעורב-רקע FVB זכר כל הנתונים מצביעים represen.TS בינתיים בעלי החיים בילו חוקרים את הריח החברתי המסוים. הברים השגיאה מייצגים את שגיאת התקן של הממוצע.
| ריח |
| מים |
| מים |
| מים |
| שקדים |
| שקדים |
| שקדים |
| בננה |
| בננה |
| ריח לא מוכר חברתי 1 |
| ריח לא מוכר חברתי 1 |
| ריח לא מוכר חברתי 1 |
| ריח לא מוכר חברתי 2 |
| ריח לא מוכר חברתי 2 |
| ריח לא מוכר חברתי 2 |
טבלת 1
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
התוצאות אמורות במאמר זה הן אופטימליות לעכברים. העכברים להפגין תגובה חזקה לריח רומן, אז להרגיל מהירות. אחד הצעדים המרכזיים בשיטה זו היא ההכנה של הריחות. החוקר צריך לקחת בזהירות רבה כדי לבודד את הריחות מזה על מנת למנוע זיהום. היבט נוסף מפתח הוא ההצגה של מקלון צמר גפן. החוקר צריך לפתור את המיקום הטוב ביותר של קצה הכותנה כך העכבר יכול לחקור את הקצה אבל לא יקרע בקצה. מרכיב חשוב של הבדיקה הוא הבחירה של ריחות. הצגנו שלושה ריחות הלא-חברתיים, אבל זה לא יהיה קשה לכלול ריחות נוספים. אזהרה אחת היא לבחור ריחות שהם שונים באופן ניכר מזו. ניתן להבחין "אפקט רצפה" אם ריחות דומים מוצגים ברצף. בנוסף, העכברים עשויים להתחיל להפחית את תגובתם כאשר מוצגים עם יותר מדי ריחות רומן. אם החוקר רוצה לכלולריחות dditional אז הוא / היא ייתכן שירצו לכלול ימים נוספים של בדיקות. זה לוקח כשעה כדי לבדוק כל עכבר. יתר על כן, יש לפתור את הבחירה של ריחות בעכברי שליטה לפני כולל אותם כתנאי ניסוי.
ההתרגלות / dishabituation חוש הריח הוא מבחן חשוב לכלול כאשר חוקרים התנהגות חברתית. בדיקת ההתנהגות חברתית שלוש הקאמרית משמשת בדרך כלל לבחינת גירעונות התנהגות חברתיות בעכברים. בדיקה זו כוללת מצב שבו החיה הניסיונית חוקרת אובייקט רומן ועכבר רומן אשר ממוקם מתחת לכוס בקצוות שונים של החדר. הבדיקה יכולה לכלול גם מצב שבו עכבר רומן ממוקם תחת כוס אחת ועכבר אחר (עכבר מוכר) ממוקם מתחת לכוס אחרת. החוקר אז בוחן אם העכבר הניסיוני יכול להבדיל בין שתיים. מאז olfaction הוא עכברי אפנות החושיים העיקריים להשתמש בו כדי לזהות עכברים אחרים 9-11, לחוש ריח לקוי עלול לפגוע ביכולת שלהם במשימה זו. olfaction פגום עלול לגרום לפרשנות שגויה של הנתונים. לדוגמא, הנסיין יכול לצפות שהעכבר לא לבלות יותר זמן עם עכבר הרומן בהשוואה לעכבר המוכר. זו עלולה להופיע להפגין ראיות של גירעונות חברתיים או זיכרון חברתי לקוי בעכברים שנבדקו. עם זאת, פרשנות פשוטה יכולה להיות שבעלי החיים לא יכולים לזהות את החיה כמו שצריך.
התרגלות / מבחן dishabituation חוש הריח היה שימושי בהבהרת מודלים עכבר של אוטיזם. אחת מודל עכבר משמש לעתים קרובות לאוטיזם הוא T + TF / י זן עכבר BTBR (BTBR). זהו זן טהור שיש חזק פני תוקף לשלושה מאפיינים התנהגותיים הליבה של אוטיזם. עם זאת, דאגה אחת הייתה אם גירעונות ההתנהגות החברתיים שלהם הם תוצאה של מערכת חוש הריח לקויה. יאנג ועמיתים בודקים האם מתח BTBR פגע olfaction באמצעות habituני מבחן / dishabituation 12. הם השתמשו בשלוש מצגות של מים, ריח שקדים, וריח בננה לריחות לא החברתיים שלהם. לאחר מכן הם השתמשו ריח חברתי שהוכן מ129 / זני SvlmJ ועכבר B6. זן BTBR מוצג התרגלות וdishabituation לריחות לא החברתיים. העכברים הראו מגורים לריח החברתי הראשון אבל לא הראו dishabituation לריח החברתי השני. אפשרות אחת היא שהם לא יוכלו להבדיל בין ריחות חברתיים השונים. זה יכול לפגוע ביכולת שלהם במבחן התנהגות חברתי כאשר שני גירויים חברתיים מוצגים. זהו שיקול חשוב כאשר בוחנים מודלים של עכברים שונים של אוטיזם ויכול לספק תובנות חדשות על מה ששינה בעכברים אלו.
הרגלה וdishabituation מנגנונים שאינם אסוציאטיביים בסיסיים של למידה. עקרונות למידה אלה הוכחו בסוגים רבים של אורגניזמים מורכבים ופשוטים 13,14. עם זאת, מנגנונים אלהשל למידה נחקר לעתים רחוקות בהתנהגות חוש הריח עכבר אבל מערכת זו היא חשובה למדידה כחלק מסוללה גדולה יותר של בדיקות התנהגותיות. בדיקה זו היא זולה להתקנה והפעלה, דורשת רק יום אחד של בדיקות, וניתן לבדוק כמה עכברים בתוך יום אחד. המטרה העיקרית של בדיקה זו היא לבחון תפקוד חוש הריח. התוצאות מהבדיקה יכולות לעזור להפחית את פרשנות שגויה של בדיקות חברתיות התנהגות ובדיקות אחרות הכוללות מרכיב ריח.
כאשר בוחנים את התנהגות עכבר בכל משימה יש כמה שיקולים. הזן של עכבר, המין של בעלי החיים, והזמן של היום הם כל הגורמים שצריכים להיבדק. אם החוקר משתמש בזן מעורב אז ייתכן שיש יותר שונות בחקירת ההתנהגות של ריחות. אנחנו הצגנו נתונים מזן FVB מעורב. הם ביצעו גם בבדיקות הריח הלא-החברתיות (איור 3). אמנם, הם חקרו את הריח החברתי לסכום גבוה oזמן F, הם לא הפגינו התרגלות למצגות חוזרות ונשנות של ריחות חברתיים (איור 4). העכברים ייתכן שיצטרכו לעבור עוד ניסויים כדי להוכיח הרגלה. סיפקנו שיטה כללית שצריכה להיות שימושי עבור רוב הזנים. עם זאת, הגורמים הנ"ל יש לשקול בעת בחינת ההתנהגות של מתח כל בפעם הראשונה. על ידי בחינת הביצועים של בעלי החיים שליטת החוקר ייתכן שיהיה צורך להתאים את הריחות שנבחרו, את מספר הפעמים שהריח מוצג, תנאי התאורה, השעה ביום לבדיקה, והמין של בעלי החיים. זה נכון לגבי כל התנהגות עכבר אחרת ויש לשקול בסוג זה של בדיקות. יש לנו כלל ריחות כי הם בקלות זמינה לרכישה. אם החוקר הוא מודאג שהם לא משתמשים ריחות טהורים ואז הם עשויים לשקול הזמנה מסיגמא אולדריץ. יש להם מאגר של חומרי גלם על 1,600 ארומה. זה יאפשר לחוקר להשתמש ריח טהור אבל העלות עשויה להיותמונע לכמה מעבדות.
יש כמה תנאי בדיקת הניסוי ייתכן שירצה לשקול. בבדיקות רבות החיה התאקלמה לחדרו ייבחן ב. בפרוטוקול זה אנו מורגלים בעלי החיים הניסיוניים בחדר אחד ובדק את זה בשנייה. זה יגרום כמה עוררות כשעברו לחדר החדש. אנחנו ביצענו את ההליך בדרך זו, כי אם כל העכברים הם שוכנו באותו החדר כמו עכברי בדיקות אז כל העכברים יהיו חשופים לריחות רומן. ישנן שתי אפשרויות שהנסיין ייתכן שירצה לשקול. הראשון הוא מה שתארנו לעיל. האחרים הוא להעביר את בעלי החיים לחדר לתת לו להסתגל לחדר ואז להתחיל בבדיקה. לאחר הבדיקה תושלם אז יש לי החיה הבאה להציב בחדר ואז אפשר להסתגל. זה אפשרי, אבל כמעט יכפיל את הזמן של הניסוי. האפשרות השתמשנו הייתה להעביר את הניסויים בבעלי החיים לחדר הבדיקה בלבד במהלך הניסוי. הדבר יביא lזמן בדיקת ESS. יש איזון ביעילות בדיקות ודאגה על עוררות הנגרמות חידוש. הנסיין צריך לקבוע שהיא הטובה ביותר עבור הניסוי שלהם.
בי פרוטוקול זה, ציוני אדם ההתנהגות בזמן אמת, זה הפך להיות פופולרי יותר ויותר ללמוד התנהגות בעלי חיים עם מצלמות כדי לתעד את התנהגותם. ישנם מספר יתרונות לשימוש בהקלטות וידאו של התנהגות בעלי חיים. אחת הוא שחוקר אדם בחדר עשוי להשפיע על התנהגות העכבר. ואכן, מחקר אחד מצא כי יש הנסיין גברי יכול להשפיע על הרגישות לכאב של עכברים שנבדקה 15. חשש נוסף הוא שהתוצאות הן רק מחוקר אחד. באמצעות השימוש בהקלטות וידאו משקיפים מרובים יכולים להבקיע התנהגות. אפשר אז למדוד כמה אמין הניקוד הוא בין משקיפים, שיגרמו למדידות עקביות יותר. יתרון נוסף הוא שמהירות המסגרת של קטעי הווידאו יכולה להיות מופחתת ורשאית פרוvide מדידה מדויקת יותר של ההתנהגות. השימוש במצלמות בקלות יכולה להיות מוחדר בשיטה זו. ההתקנה תהיה תלויה בתצורת חלל מעבדה. החסרון בשימוש במצלמות הוא שזמן הניקוד יגדל באופן משמעותי. דורש שניים או יותר משקיפים להבקיע ההתנהגות יגדיל את הזמן הדרוש כדי להפיק את התוצאות. זה יגדיל את נטל העבודה למעבדה ובמצבים מסוימים עשויים להיות מונע אם הקרנת קווי נוקאאוט רבים. חסרון נוסף הוא שהמצלמה יותר מפעם אחת עשויה להיות נחוצה. המצלמה תהיה בתנוחה קבועה. אם העכבר חוקר את הריח באופן שאוסר על המתבונן לראות את בעלי החיים ולאחר מכן את המשפט ייתכן שיהיה הצורך לבטל אותם. זה פחות דאגה עם אדם שיכול בקלות להתאים את דעתם של בעלי החיים על ידי התאמת קו ראייה שלהם. עם זאת, יכול בקלות להיות מותאמת בשיטה המתוארת בפרוטוקול זה לכולל הקלטות וידאו ללא שינוי משמעותי לפרוטוקול שאנחנו יורדRibe.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mouse cage | Allentown | Standard mouse cage | |
| Wire lid | Allentown | BCU Mouse WBL 2500 | |
| Bedding | Harlan | 7090 Sani-Chips | |
| Cotton swabs | VWR | 89031-270 | 6” wooden handle |
| Banana extract | McCormick | ||
| Almond extract | McCormick | ||
| Laboratory tape | VWR | 89098-062 | |
| Stop watch | VWR | 62374-000 | |
| Nitrile gloves | VWR | 82026 | |
| Timing device | VWR | 61161-350 | |
| 15 ml conical tubes | VWR | 89003-294 | |
| 2 L beakers | Pyrex | 1003 | |
| Parafilm | Parafilm | PM-992 | 4” x 250’ |
| 1 L bottle with cap | VWR | 89000-240 |
References
- Doty, R. L. Odor-guided behavior in mammals. Experientia. 42, 257-271 (1986).
- Restrepo, D., Arellano, J., Oliva, A. M., Schaefer, M. L., Lin, W. Emerging views on the distinct but related roles of the main and accessory olfactory systems in responsiveness to chemosensory signals in mice. Horm Behav. 46, 247-256 (2004).
- Keverne, E. B. Importance of olfactory and vomeronasal systems for male sexual function. Physiol Behav. 83, 177-187 (2004).
- Gregg, B., Thiessen, D. D. A simple method of olfactory discrimination of urines for the Mongolian gerbil, Meriones unguiculatus. Physiol Behav. 26, 1133-1136 (1981).
- Yang, M., Crawley, J. N. Simple behavioral assessment of mouse olfaction. Curr Protoc Neurosci. Chapter 8 (Unit 8 24), (2009).
- Pan, Y. W., Kuo, C. T., Storm, D. R., Xia, Z. Inducible and targeted deletion of the ERK5 MAP kinase in adult neurogenic regions impairs adult neurogenesis in the olfactory bulb and several forms of olfactory behavior. PLoS ONE. 7, e49622 (2012).
- Wesson, D. W., Levy, E., Nixon, R. A., Wilson, D. A. Olfactory dysfunction correlates with amyloid-beta burden in an Alzheimer's disease mouse model. J Neurosci. 30, 505-514 (2010).
- Fadool, D. A., et al. Kv1.3 channel gene-targeted deletion produces 'Super-Smeller Mice' with altered glomeruli, interacting scaffolding proteins, and biophysics. Neuron. 41, 389-404 (2004).
- Arakawa, H., Arakawa, K., Blanchard, D. C., Blanchard, R. J. Scent marking behavior in male C57BL/6J mice: sexual and developmental determination. Behav Brain Res. 182, 73-79 (2007).
- Baum, M. J. Sexual differentiation of pheromone processing: links to male-typical mating behavior and partner preference. Horm Behav. 55, 579-588 (2009).
- Ferguson, J. N., et al. Social amnesia in mice lacking the oxytocin gene. Nat Genet. 25, 284-288 (2000).
- Yang, M., et al. Low sociability in BTBR T+tf/J mice is independent of partner strain. Physiol Behav. 107, 649-662 (2012).
- Best, J. D., et al. Non-associative learning in larval zebrafish. Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).
- Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish. Proc Natl Acad Sci U S A. , (2011).
- Sorge, R. E., et al. Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents. Nat Methods. 11, 629-632 (2014).
