Introduction
Muizen zijn afhankelijk van de reukzin voor het navigeren nieuwe omgevingen, het vinden van voedsel, voor de erkenning van andere individuen, en seksueel gedrag 1-3. Het is essentieel dat onderzoekers aangetoond of proefdieren een functionerende reukzin Alvorens gedragstesten dat voedsel, sociale interactie, of geuren bedoeld om een reactie van de muizen op te wekken omvatten. Anosmie of het onvermogen om onderscheid te maken tussen verschillende geuren kunnen leiden tot valse positieven en negatieven in diverse gedragsparadigma's, dus het vermogen van een muis te detecteren en te onderscheiden geuren worden vastgesteld voor andere typen gedragstesten uitgevoerd.
De olfactorische gewenning / dishabituation test werd voor het eerst beschreven in de jaren 1980 4. De test is aangepast voor gebruik in muizen door Drs. Mu Yang en Jacqueline Crawley 5. Dit is een eenvoudige en goedkope test die het mogelijk maakt de onderzoeker om estaBlish dat een muis kan detecteren en onderscheid maken tussen geuren. Naast het testen reukzin deze test kan de onderzoeker de algemene werking van de muis observeren en moet het begin van een test regime worden uitgevoerd. Kwalitatieve waarnemingen met betrekking tot de motoriek van de muis, tekenen van angst, het niveau van de activiteit, en de respons op sociale geuren versus voedsel geuren kunnen nieuwe gebieden waar het testen kunnen worden uitgevoerd signaal.
In deze test worden wattenstaafjes ondergedompeld in verschillende geuren driemaal voorgelegd aan een muis in een rij. Met elke herhaalde presentatie van een geur, zal de muis wennen aan het wattenstaafje, besteden minder tijd aan het onderzoeken van het met elke volgende presentatie. Wanneer een nieuwe geur wordt gepresenteerd, dishabituation optreedt, en een typisch muis zal meer tijd besteden aan het onderzoeken van het staafje, wat aangeeft dat het onderscheid kan maken tussen de huidige en de vorige geuren 5. Deze test wordt toegediend aan een muis per keer en omvat een 45 min acclimation periode gevolgd door 45 min van het testen.
Hoewel deze test is gemakkelijk uit te voeren kan worden gebruikt om geavanceerde vragen muis olfactorische systeem te onderzoeken. Andere populaire tests reukzin, zoals het begraven voedsel test slechts de aanwezigheid of afwezigheid van anosmie stellen. De olfactorische discriminatie en gewenning toets kunnen de onderzoeker om te bepalen of een muis heeft niet alleen het vermogen om geuren te detecteren keuze maken tussen verschillende geuren. Het patroon van gewenning en dishabituation is gebruikt om te tonen dat de nieuwe mutanten kunnen maken tussen geuren 6,7. In een verrassende studie, Fadool en collega's gebruikt complexe mengsels van geuren dat muizen met gen-gerichte schrapping van de Kv1.3 kanaal laten worden "super smellers" die zeer vergelijkbare geuren beter dan normale muizen 8 kunnen discrimineren.
Bij het onderzoek van een nieuw knockout muismodel is het nuttig om Establish de aanwezigheid van normaal gedrag voor basis zintuiglijke taken. Toen vroeg gedaan in een test regime, de discriminatie geur en gewenning test geeft een onderzoeker de mogelijkheid om eventuele ongewone gedrag te observeren. Deze waarnemingen kunnen vals positieve of negatieve resultaten in daaropvolgende tests die worden ingegeven door de kenmerken van de verstorende mutant worden voorkomen. Als onderzoekers blijven sociaal gedrag nagaan welke fundamentele olfactorische werking gecontroleerd steeds belangrijker. Naast onderzoek reukzin in mutantlijnen, kan deze test worden gebruikt om bepaalde zaken als het farmacologisch samenwerkende dosis respons van een dier op sociale geur stimuli vergroot of als de reactie stijgt tot alle geur stimuli pakken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De volwassen mannelijke muizen gebruikt in het volgende experiment werden gegenereerd en ondergebracht bij Baylor University bij een omgevingstemperatuur van 22 ° C, met een 14 uur licht en 10 uur donker (20:00-06:00 uur) dagelijkse cyclus. De muizen kregen ad libitum toegang tot voedsel en water. Alle procedures om de muizen waren in overeenstemming met de National Institutes of Health Richtlijnen voor de Zorg en gebruik van proefdieren en het dier protocol werd goedgekeurd door Baylor University Animal Care en gebruik Comite. De muizen werden getest in de late ochtend / begin van de middag. Voor alle procedures onder de onderzoeker moet handschoenen dragen om geuren te elimineren en besmetting te voorkomen.
1. Voorbereiding van de Non-sociale Geuren
- Bereid verse non-sociale geuren elke dag van het testen.
Opmerking: De onderzoeker moet handschoenen te gebruiken om de geuren te bereiden.- Vul 3 centrifuge buizen met 10 ml water.
- Pipetteer 100 ul van bananen extract in een 15 ml & #160, conische buis en 100 pl amandelextract in een tweede 15 ml conische buis voor een 1: 100 verdunning.
Opmerking: De derde 15 ml buis alleen water bevatten.
2. Voorbereiding van Sociale Geuren
- Bereid nieuwe sociale geuren op de ochtend testen zal plaatsvinden. Verkrijgen sociale geuren uit twee kooien die niet zijn schoongemaakt voor minstens drie dagen en een gelijk aantal muizen bevatten. Verkrijgen sociale geuren uit muizen van hetzelfde geslacht als de proefpersoon.
Opmerking: Dit zijn bij kamertemperatuur worden bewaard en binnen 4-6 uur worden gebruikt om sterke en consistente geur behouden.- Bepalen hoeveel sociale geur wattenstaafjes moeten worden gemaakt: elke muis wordt getest zal worden gepresenteerd met drie swabs van sociale geur 1, en drie uit de sociale geur 2.
- Bereid sociale geuren door vegen een wattenstaafje in een zigzag manier over de bodem van een vuile kooi. Schud het teveel aan beddengoed klampt zich vast aan het uiteinde.
- Store swabs in grote glazen potten met deksels of bekers bedekt met parafilm. Wijst een container voor sociale geur 1 en een tweede voor de sociale geur 2.
- Handhaaf geurbron kooien buiten de experimentele testen kamer.
3. Acclimatisering van de Test Muis
- Trek handschoenen en weeg de muis te testen en plaats individueel in een schone kooi met een draad deksel bovenop de waterfles verwijderd.
- Laat de muis om te wennen aan de nieuwe kooi voor 45 min in een andere kamer dan de testkamer. Zorg ervoor dat er geen ongewone geuren of geluiden in de kamer.
- Als testen duurt ongeveer 45 minuten, wankelen de acclimatisering keer door de invoering van de volgende muis te testen in een schone kooi naar rechts acclimatiseren voordat het testen van de huidige muis.
4. Voorbereiding van de testkamer
- Plaats verse wattenstaafjes, laboratorium tape, de flessen met sociale geur swabs, de buizen van non-sociale geuren, een micropipet, twee timers, en een fles afval met een deksel in de testkamer.
- Zorg ervoor dat de testkamer is redelijk vrij van geuren, harde geluiden en fel licht. Heeft geurende eau de cologne of lotions niet dragen.
Opmerking: De waarnemer mag niet kauwgom of snoep tijdens de testperiode en moeten proberen om hun blootstelling te beperken tot sterke geur voedsel.
5. Testing Procedure
- Breng het gewend muis in zijn kooi in de testkamer en plaats de kooi op de teller op een hoogte die comfortabel is voor het bekijken van zittend.
- Presenteer elke geur 3 keer op rij gedurende 2 minuten per keer. Gebruik de presentatie, zodat kan worden gevonden in tabel 1.
- Pipetteer 50 ul van geurstof in de geur te testen op het uiteinde van het wattenstaafje en-cap de geurbron. Til de draad bovenkant van de kooi en plaats de ongeparfumeerde, houten einde van het staafje in de fles water opening, Pushing de lengte via de onderzijde van de draad op de top. Raak de katoen tip om het even wat, met inbegrip van de vingers, zodat de geur besmetting wordt vermeden.
- Blijf het staafje te trekken door middel van de fles water opening tot ongeveer 1 inch van de katoen eind naar beneden hangt in de kooi. Bevestig het houten uiteinde van het wattenstaafje naar de zijkant van de kooi met behulp van lab tape.
Opmerking: Wees voorzichtig niet te laten het deksel weer op de kooi vallen, waardoor een hard geluid dat de test muis zou verstoren. - Onmiddellijk beginnen timing voor 2 min. Gebruik een timer om de 2 min presentatietijd. Noteer de cumulatieve tijd snuiven de geur tijdens de 2 min trial. Tel snuiven gedrag van het dier met behulp van een aparte stopwatch. Actieve snuiven wordt gedefinieerd wanneer de neus van het dier is gericht op het wattenstaafje met zijn neus ~ 2 cm of dichter bij de tip.
- Na de voltooiing van elke proef, verhogen de draad deksel en verwijder het wattenstaafje door hem naar beneden te trekken via de VNderside van het deksel (dit voorkomt geur besmetting door te voorkomen dat de katoen tip van het aanraken van de draad). Dicht de gebruikte wattenstaafje in een 500 ml fles afval.
- Bereid en steek de volgende wattenstaafje en beginnen timing. Laat ongeveer 1 min tussen elke inter-proces interval. Ga door tot elke geur is drie keer gepresenteerd in een rij, voor 2 min per keer.
- Zodra de muis alle beproevingen heeft voltooid, leeg de fles afval dat de gebruikte wattenstaafjes in een prullenbak buiten de testruimte. Zet de muis aan zijn kooi.
6. Analyse
- Analyseer gegevens voor elke groep per geur conditie met behulp van twee-weg ANOVA gevolgd door Newman-Keuls of een soortgelijke post hoc test om significante gewenning bepalen (minder tijd snuiven opeenvolgende dezelfde geuren), en dishabitutation (meer tijd snuiven een nieuwe geur).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Naar aanleiding van de beschreven protocol werden de resultaten opgenomen met de tien volwassenen (postnatale dag 90-120) mannelijke C57BL / 6J muizen en acht mannelijke FVB mixed-achtergrond stam (postnatale dag 50-70). Het testen werd uitgevoerd door een enkele onderzoeker over meerdere dagen worden uitgevoerd. Elk punt op de grafiek is de gemiddelde tijd onderzoekt een geur.
Wanneer het wattenstaafje gedoopt in water eerst wordt geïntroduceerd, de muizen besteden een groot deel van de tijd onderzoekt deze roman object (Figuur 1: eerste drie data punten). Met elke opeenvolgende presentatie wordt minder tijd besteed onderzoek naar de wattenstaafje, wat aangeeft gewenning. Wanneer een nieuwe geur wordt geïntroduceerd, is er een stijging in tijd onderzoek het staafje, wat aangeeft dat de muizen kan maken tussen de nieuwe geur en de vorige (Figuur 1: Almond gegevenspunten). Ook met de opeenvolgende presentatie wordt minder tijd besteed onderzoek naar de geur. De muizen tonen een significante daling in de tijd snuiven het staafje van water over de drie proeven F (2,18) = 3,8, p <0,05. Ze tonen een vergelijkbaar patroon bij herhaaldelijk aangeboden met de amandel geur F (2,18) = 3,6, p <0,05. Door de derde geur ze nog steeds demonstreren gewenning, maar door dit proces worden de dieren bereiken een vloer effect (Figuur 1: Banana data punten). De vloer effect is wanneer het gedrag zo laag is dat de mogelijkheid om het gedrag willekeurig lager niet betrouwbaar te meten. Ze hebben niet een verandering in de drie studies tonen wanneer voorgesteld met de banaan geur F (2,18) = 2.5, p <0,1. Echter, een tweeweg ANOVA voor 9 presentaties geur vertonen een significant effect in de tijd F (8,72) = 3,8, p <0,001.
Hetzelfde patroon van gewenning en discriminatie kan worden gezien met maatschappelijke geuren als bij de niet-sociale geuren. De muizen meer tijd onderzoekt de maatschappelijke geuren (figuur 2). Er is een significant kortere periode doorgebracht snuiven tHij sociale geur bij alle 6 onderzoeken werden gecombineerd F (2,18) = 6,1, p <0,01. Er was echter een marginaal effect over de eerste drie proeven F (2,18) = 3,0, p = 0,076. Dit suggereert dat er was wat gewenning, maar niet een statistisch significante hoeveelheid vermindering in de tijd snuiven de eerste sociale geur. Er was een significante vermindering van de hoeveelheid tijd die het dier onderzocht sociale geur F (2,18) = 6,1, p <0,01 in de tweede presentatie van een sociaal geur.
We herhaalden de werkwijze een mannelijk FVB mixed-strain achtergrond. Wanneer het wattenstaafje gedoopt in water eerst wordt geïntroduceerd, de muizen besteden een groot deel van de tijd onderzoekt deze roman object (Figuur 3: eerste drie data punten). Met elke opeenvolgende presentatie wordt minder tijd besteed onderzoek naar de wattenstaafje, wat aangeeft gewenning. Wanneer een nieuwe geur wordt geïntroduceerd, is er een stijging in tijd onderzoek het staafje, wat aangeeft dat de muizen kan maken tussen de nieuwe geur eennd de vorige (Figuur 3: Almond datapunten). Ook met de opeenvolgende presentatie wordt minder tijd besteed onderzoek naar de geur. De muizen vertonen een significant kortere periode snuiven het staafje van water via drie trials F (2,14) = 13,3, p <0,001. Ze tonen een vergelijkbaar patroon bij herhaaldelijk aangeboden met de amandel geur F (2, 14) = 12,7, p <0,001. In deze stam was nog steeds een significant verschil in de drie trials. Met het derde geur zij nog demonstreren gewenning (Figuur 3: banaan datapunten) maar vanwege de bodemeffect zij geen verandering in de drie studies tonen wanneer aangeboden met de bananen geur F (2,14) = 3,04, p = 0,08. Echter, een tweeweg ANOVA voor 9 presentaties geur vertonen een significant effect in de tijd F (8,56) = 9,6, p <0,001.
Hetzelfde patroon van gewenning en discriminatie werd niet waargenomen sociale geuren als bij de niet-sociale geuren. Er was geen significantafname van de tijd besteed snuiven de sociale geuren wanneer alle 6 studies werden gecombineerd F (5,35) = 0,16, p = 0,97. De gegevens suggereren dat de muizen niet wennen herhaalde presentaties van twee sociale geuren.
Figuur 1: Gemiddelde tijd besteed onderzoeken niet-sociale geuren voor mannelijke C57BL / 6J muizen Elk datapunt representeert de gemiddelde tijd dat de dieren doorgebracht onderzoek naar de specifieke niet-sociale geur.. De fout balken geven de standaardafwijking van het gemiddelde. Sterretjes (*) geven een significant verschil waar de groep weergeeft gewenning (p <0,05).
Figuur 2:. Gemiddelde tijd onderzoekt social geuren van mannelijke C57BL / 6J-muizen Elk gegevenspunt vertegenwoordigt het gemiddelde tijdstip van het dier spent onderzoek naar de specifieke sociale geur. De fout balken geven de standaardafwijking van het gemiddelde. Sterretjes (*) geven een significant verschil waar de groep weergeeft gewenning (p <0,05).
Figuur 3: Gemiddeld tijd onderzoekt niet-sociale geuren voor mannelijke FVB mixed-achtergrond stam Elk datapunt representeert de gemiddelde tijd dat de dieren doorgebracht onderzoek naar de specifieke niet-sociale geur.. De fout balken geven de standaardafwijking van het gemiddelde. Sterretjes (*) geven een significant verschil waar de groep weergeeft gewenning (p <0,05).
Figuur 4: Gemiddeld tijd besteed onderzoeken sociale geuren voor mannelijke FVB mixed-achtergrond stam Elke data wijzen vertegen.ts de tussentijd het dier doorgebracht onderzoek naar de specifieke sociale geur. De fout balken geven de standaardafwijking van het gemiddelde.
| Geur |
| Water |
| Water |
| Water |
| Amandel |
| Amandel |
| Amandel |
| Banaan |
| Banaan |
| Onbekende sociale geur 1 |
| Onbekende sociale geur 1 |
| Onbekende sociale geur 1 |
| Onbekende sociale geur 2 |
| Onbekende sociale geur 2 |
| Onbekende sociale geur 2 |
Tabel 1
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De informatie in dit document resultaten zijn optimaal voor muizen. De muizen tonen een sterke reactie op een nieuwe geur, dan snel wennen. Eén van de belangrijkste stappen van deze werkwijze is de bereiding van de geuren. De onderzoeker moet grote zorg om de geuren van elkaar isoleren om besmetting te voorkomen. Een ander belangrijk aspect is de presentatie van het wattenstaafje. De onderzoeker moet de beste locatie van het wattenstaafje op te lossen, zodat de muis de tip kunnen onderzoeken, maar niet scheurt aan het uiteinde. Een belangrijk onderdeel van de test is de selectie van geuren. We gepresenteerde drie niet-social geuren maar het zou niet moeilijk zijn om bijkomende geuren bevatten. Een waarschuwing wordt geuren die merkbaar verschillend van elkaar te kiezen. Men kan een "vloer effect" te observeren als gelijkaardige geuren na elkaar worden gepresenteerd. Bovendien kunnen de muizen beginnen hun reactie verminderen wanneer gepresenteerd met te veel nieuwe geuren. Als de onderzoeker wil omvattenANVULLENDE geurtjes dan kan hij / zij willen extra dagen van het testen omvatten. Het duurt ongeveer een uur om elke muis getest. Bovendien moet men de selectie van geuren in controle muizen oplossen voordat ze op te nemen als een experimentele conditie.
De olfactorische gewenning / dishabituation is een belangrijke test op te nemen bij het onderzoeken van sociaal gedrag. De drie kamer sociaal gedrag test wordt vaak gebruikt om tekorten sociaal gedrag in muizen te onderzoeken. Deze test omvat een aandoening waarbij het proefdier onderzoekt een nieuw object en een nieuwe muis die aan verschillende kanten van de kamer onder een beker geplaatst. De test kan ook een toestand waarbij een nieuw muis onder een kop en een andere muis (bekend muis) onder andere beker geplaatst wordt geplaatst. De onderzoeker onderzoekt dan of de experimentele muis kan maken tussen de twee. Aangezien reukzin is de belangrijkste sensorische modaliteit muizen gebruiken om andere muizen 9-11 identificeren, Verminderde reukzin konden hun vermogen om deze taak aantasten. Verminderde reukzin kan leiden tot verkeerde interpretatie van data. Zo kan de onderzoeker op dat de muis niet tijdig te brengen met de nieuwe muis vergeleken met de bekende muis. Dit lijkt aan te tonen bewijs van de sociale tekorten of verminderde sociale geheugen van de muizen getest. Er kan echter een eenvoudiger interpretatie dat het dier het dier niet goed kan detecteren.
De olfactorische gewenning / dishabituation test is nuttig te verduidelijken muismodellen van autisme zijn. Een vaak gebruikt muismodel van autisme is de BTBR T + TF / J (BTBR) muizenstam. Dit is een inteelt stam die sterke geldigheid gezicht naar de drie belangrijkste gedragskenmerken van autisme heeft. Echter, is een zorg geweest of hun tekorten sociaal gedrag vanwege een verminderde olfactorische systeem. Yang en medewerkers onderzochten of de stam BTBR reukzin is aangetast door het gebruik van de Habituation / dishabituation-test 12. Ze gebruikten drie presentaties van water, amandel geur, en banaan geur voor hun nonsocial geuren. Vervolgens gebruikten ze een sociaal geur bereid uit 129 / SvlmJ en B6 muizenstammen. De BTBR stam weergegeven gewenning en dishabituation aan de nonsocial geuren. De muizen aangetoond bewoning om de eerste sociale geur maar dishabituation naar de tweede sociale geur niet tonen. Een mogelijkheid is dat zij niet in staat onderscheid te maken tussen verschillende sociale geuren. Dit zou hun vermogen aantasten in een sociaal gedrag proef gesteld wanneer twee sociale stimuli worden gepresenteerd. Dit is een belangrijke overweging bij het verkennen van verschillende muismodellen van autisme en nieuwe inzichten kunnen geven in wat er is veranderd in deze muizen.
Gewenning en dishabituation zijn basic niet-associatieve mechanismen van leren. Deze leerprincipes zijn aangetoond in vele soorten van complexe en eenvoudige organismen 13,14. Echter, deze mechanismenleren zijn zelden onderzocht in muizen olfactorische gedrag, maar dit systeem is belangrijk om te meten als onderdeel van een grotere batterij van gedragstesten. Deze test is goedkoop te installeren en uit te voeren, vereist slechts één dag van het testen, en een aantal muizen getest kunnen worden binnen één dag. Het belangrijkste doel van deze test is om olfactorische functie te onderzoeken. De resultaten van de test kan helpen verminderen verkeerde interpretatie van sociaal gedrag tests en andere tests, die een geur component bevatten.
Bij het onderzoek van de muis gedrag in elke taak zijn er verschillende overwegingen. De stam van de muis, het geslacht van de dieren, en het tijdstip zijn alle factoren die moeten worden onderzocht. Als de onderzoeker gebruikt een gemengde stam dan kan er meer variatie bij het onderzoek gedrag van geuren zijn. We gepresenteerde gegevens uit een gemengde FVB stam. Ze presteerde goed in de niet-sociale geur testen (figuur 3). Hoewel, ze onderzochten de sociale geur voor een grote hoeveelheid of tijd, ze niet gewenning tonen herhaalde presentaties sociale geuren (figuur 4). De muizen kan nodig zijn om meer proeven om gewenning tonen ondergaan. We hebben een algemene werkwijze die bruikbaar is voor de meeste stammen worden verstrekt. Echter, de bovenstaande factoren worden overwogen bij het onderzoek van het gedrag van elke soort voor het eerst. Door het onderzoeken van de prestaties van de controledieren mogelijk dat de onderzoeker de geselecteerde geuren te passen, het aantal keren dat de geur wordt gepresenteerd, de lichtomstandigheden, het tijdstip voor het testen en het geslacht van het dier. Dit geldt voor alle andere muisgedrag en moet worden beschouwd in dit type test. We hebben opgenomen geuren die gemakkelijk verkrijgbaar zijn. Als de onderzoeker is bezorgd dat ze niet gebruikt pure geuren dan kunnen zij overwegen het bestellen van Sigma-Aldrich. Ze hebben een database van meer dan 1.600 aroma grondstoffen. Hierdoor kan de onderzoeker een zuivere geur gebruiken, maar de kosten kunnenonbetaalbaar om een aantal laboratoria.
Er zijn een aantal testcondities de experimentator zou willen overwegen. In vele tests het dier is gewend naar de kamer wordt getest. In dit protocol geacclimatiseerd we het proefdier in een kamer en getest in de andere. Dit zal enige opwinding veroorzaken wanneer verplaatst naar de nieuwe kamer. We voerden de procedure zo omdat als alle muizen ondergebracht in de kamer met het testen muizen worden alle muizen blootgesteld aan de nieuwe geuren. Er zijn twee opties die de experimentator zou willen overwegen. De eerste is wat we hierboven beschreven. De andere is het dier te verplaatsen naar de kamer te laten wennen aan de kamer dan gaan testen. Na het testen is voltooid dan moet de volgende dier geplaatst in de kamer dan toegestaan te acclimatiseren. Dit is mogelijk, maar zou bijna het dubbele van de tijd van het experiment. De optie die we gebruikten was de dierproeven om de testkamer alleen tijdens het experiment te verplaatsen. Dit zou leiden tot less testtijd. Er is een evenwicht in het testen van de efficiëntie en de zorg over de noviteit veroorzaakte opwinding. De experimentator moet bepalen welke het beste is voor hun experiment.
Waarin dit protocol, een persoon scores gedrag real-time maar het is steeds populairder geworden om diergedrag met camera bestuderen om hun gedrag te nemen. Er zijn verscheidene voordelen aan het gebruik van video-opnamen van diergedrag. Een daarvan is dat een mens onderzoeker in de kamer van de muis gedrag kunnen beïnvloeden. Inderdaad, een studie bleek dat het hebben van een mannelijke onderzoeker kan invloed hebben op de pijngevoeligheid van muizen getest 15. Een andere zorg is dat de resultaten slechts op één onderzoeker. Door het gebruik van video-opnamen van meerdere waarnemers kan het gedrag scoren. Men kan vervolgens meten hoe betrouwbaarder de scoring tussen waarnemers, hetgeen zal resulteren in een consistentere metingen. Een ander voordeel is dat de beeldsnelheid van de video kan worden verminderd en kunnen provide een meer nauwkeurige meting van het gedrag. Het gebruik van camera's kunnen gemakkelijk worden geïntroduceerd in deze methode. De opstelling zal afhangen van de laboratoriumruimte configuratie. Het nadeel van het gebruik van camera's is dat de scoring tijd sterk zal toenemen. Waarbij twee of meer waarnemers het gedrag score zal de tijd die nodig is om de resultaten te verhogen. Dit zal de arbeid last verhogen naar het laboratorium en in sommige gevallen prohibitief zijn als screening vele knockout lijnen. Een ander nadeel is dat meerdere camera's nodig zijn. De camera zal in een vaste positie. Als de muis onderzoekt de geur zodanig dat de waarnemer verbiedt dier dan zien de proef moet mogelijk worden geëlimineerd. Dit is minder van een zorg met een persoon die gemakkelijk hun visie van het dier kan aanpassen door het aanpassen van hun lijn van het zicht. Echter, de in dit protocol beschreven methode gemakkelijk worden aangepast om video-opnames behoren zonder belangrijke wijziging van het protocol we DESCRibe.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mouse cage | Allentown | Standard mouse cage | |
| Wire lid | Allentown | BCU Mouse WBL 2500 | |
| Bedding | Harlan | 7090 Sani-Chips | |
| Cotton swabs | VWR | 89031-270 | 6” wooden handle |
| Banana extract | McCormick | ||
| Almond extract | McCormick | ||
| Laboratory tape | VWR | 89098-062 | |
| Stop watch | VWR | 62374-000 | |
| Nitrile gloves | VWR | 82026 | |
| Timing device | VWR | 61161-350 | |
| 15 ml conical tubes | VWR | 89003-294 | |
| 2 L beakers | Pyrex | 1003 | |
| Parafilm | Parafilm | PM-992 | 4” x 250’ |
| 1 L bottle with cap | VWR | 89000-240 |
References
- Doty, R. L. Odor-guided behavior in mammals. Experientia. 42, 257-271 (1986).
- Restrepo, D., Arellano, J., Oliva, A. M., Schaefer, M. L., Lin, W. Emerging views on the distinct but related roles of the main and accessory olfactory systems in responsiveness to chemosensory signals in mice. Horm Behav. 46, 247-256 (2004).
- Keverne, E. B. Importance of olfactory and vomeronasal systems for male sexual function. Physiol Behav. 83, 177-187 (2004).
- Gregg, B., Thiessen, D. D. A simple method of olfactory discrimination of urines for the Mongolian gerbil, Meriones unguiculatus. Physiol Behav. 26, 1133-1136 (1981).
- Yang, M., Crawley, J. N. Simple behavioral assessment of mouse olfaction. Curr Protoc Neurosci. Chapter 8 (Unit 8 24), (2009).
- Pan, Y. W., Kuo, C. T., Storm, D. R., Xia, Z. Inducible and targeted deletion of the ERK5 MAP kinase in adult neurogenic regions impairs adult neurogenesis in the olfactory bulb and several forms of olfactory behavior. PLoS ONE. 7, e49622 (2012).
- Wesson, D. W., Levy, E., Nixon, R. A., Wilson, D. A. Olfactory dysfunction correlates with amyloid-beta burden in an Alzheimer's disease mouse model. J Neurosci. 30, 505-514 (2010).
- Fadool, D. A., et al. Kv1.3 channel gene-targeted deletion produces 'Super-Smeller Mice' with altered glomeruli, interacting scaffolding proteins, and biophysics. Neuron. 41, 389-404 (2004).
- Arakawa, H., Arakawa, K., Blanchard, D. C., Blanchard, R. J. Scent marking behavior in male C57BL/6J mice: sexual and developmental determination. Behav Brain Res. 182, 73-79 (2007).
- Baum, M. J. Sexual differentiation of pheromone processing: links to male-typical mating behavior and partner preference. Horm Behav. 55, 579-588 (2009).
- Ferguson, J. N., et al. Social amnesia in mice lacking the oxytocin gene. Nat Genet. 25, 284-288 (2000).
- Yang, M., et al. Low sociability in BTBR T+tf/J mice is independent of partner strain. Physiol Behav. 107, 649-662 (2012).
- Best, J. D., et al. Non-associative learning in larval zebrafish. Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).
- Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish. Proc Natl Acad Sci U S A. , (2011).
- Sorge, R. E., et al. Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents. Nat Methods. 11, 629-632 (2014).
