Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Färgning Insekter för Behavioral Analyser: den parningsbeteende hos bedövade Published: April 22, 2015 doi: 10.3791/52645

Abstract

Parnings experiment med Drosophila har i hög grad bidragit till förståelsen av sexuell selektion och beteende. Experiment kräver ofta enkla, enkla och billiga metoder för att skilja mellan individer i en rättegång. En standardteknik för detta är CO 2 anestesi och sedan märka eller Vingklippning varje fluga. Detta är dock invasiv och har visats påverka beteendet. Andra tekniker har använt färgning för att identifiera flugor. I denna artikel presenteras en enkel och icke-invasiv metod för märkning Drosophila som gör att de kan identifieras individuellt inom experiment, med hjälp av karamellfärg. Denna metod används i prövningar där två hanar konkurrerar att para sig med en hona. Färgning tillät snabb och enkel identifiering. Det fanns emellertid en viss skillnad i styrkan av färgn över de tre testade arterna. Data presenteras som visar färgen har en lägre påverkan på parningsbeteende än CO2 i Drosophila MelanoGaster. Effekterna av CO2 anestesi visar sig bero på arter av Drosophila, med D. pseudo och D. subobscura visar ingen påverkan, medan D. melanogaster hanar hade minskat parning framgång. Metoden färgämne som presenteras är tillämplig på ett brett spektrum av experimentell design.

Introduction

Under de senaste decennierna har det ökat intresse för hur sexuell selektion och konkurrens mellan manlig påverkan på evolutionen 1,2. Experiment på parningsbeteende har spelat en viktig roll i att utveckla och testa teorier om sexuell selektion 3,4. I synnerhet forskning med hjälp arter av släktet Drosophila, har starkt bidragit till förståelsen av sexuell selektion och beteende. Det är emellertid viktigt att undersöka om vanligen använda tekniker kan artificiellt förspänna resultaten av standardparningsexperiment 5,6.

Anestesi används ofta för hantering och identifiering i experiment 7. Exempelvis flugor vanligen samlas före parning, eller sorteras i genotyper eller experimentella behandlingar med koldioxid (CO 2) bedövningsmedel. I experiment där två eller flera personer måste särskiljas, är det vanligt att söva den fltalet och klipp en del av vingen av för att identifiera varje individ eller behandlingsgrupp 5,8. Det är viktigt dock att förstå hur CO 2 behandling påverkar beteendet. Effekten av CO 2 anestesi har undersökts i Drosophila melanogaster där hannar utsatt för CO2 tog betydligt längre tid att para sig och totalt hade lägre parning framgång än icke-nedsövd män eller män bedövades med hjälp exponering för kyla 5. Denna effekt observerades både när anestesi applicerades på dagen för experimentet och när flugor gavs en dag för att återhämta sig. Dock var denna studie begränsad endast undersöker prövningar där en enda hane presenterades för varje hona 5. Ett mer realistiskt scenario är att en kvinnlig att stöta flera hanar 9,10, vilket gör konkurrensen mellan hanar, vilket kan göra det möjligt att upptäcka mer subtila förluster av manliga kondition på grund av anestesi. Användningen av CO2 anestesi har ocksåsv visat sig minska fruktsamhet och livslängd vuxna D. melanogaster när de utsätts strax efter eclosion, vilket är vanligt vid insamling oskuld flyger 11.

Ett alternativ till CO 2 anestesi är att markera flugor genom att mata dem mat färgad med färgämnet 4,6,10,12,13. Detta färgämne in tarmarna i farten och är synlig genom buken, vilket gör färgade flugor ska skiljas från ofärgade flugor, eller från flugor märkta med en annan färg. Metoder skiljer sig i hur detta kan tillämpas: läggs direkt till livsmedelsindustrin 12, via färgat kompletterande jäst pasta 6, eller via exponering för en roman färgade livsmedel substrat 13. Dessa tekniker märkning tycks visa någon effekt på parning prestanda 4,6. Men ett papper direkt undersöker effekterna av samma karamellfärg på vuxna D. melanogaster hittat en stark minskning av livslängden 14. Tidigare arbete har också fokuserat almOST helt på D. melanogaster, både när det gäller effekterna av CO 2 anestesi 5,11 och karamellfärg 14 metoder. För närvarande finns det inte mycket information om hur CO2 anestesi eller användning av tarm färg påverkar parningsbeteende andra Drosophila.

Följande studien utvärderar effekten av CO 2 anestesi på parningsbeteende tre arter av Drosophila (D. melanogaster, D. pseudo, och D. subobscura). Effekten av att samla flugor på CO2 undersöktes i både singel och två manliga parning prövningar. Effekten av CO 2 har också visat sig variera i D. melanogaster 5 och så olika latens perioder mellan exponering för CO2 och parning testades. En alternativ märkningsmetod för anestesi och vingklippning: användningen av livsmedelsfärger att färga flugorna utvärderas också.

Protocol

1. Beredning av Fly mat med karamellfärg

  1. Ta en vanlig Drosophila injektionsflaska med ca 20 ml av mat i botten (Figur 1). Använd följande recept för mat blandning med användning av en L kokande vatten: 10 g agar, 85 g dextros, 60 g majsmjöl, 40 g jäst, och rör om i 5 min av sjudande. Tillsätt 25 ml 10% nipagen När blandningen har svalnat till 75 ° C.
  2. Efter det att maten har svalnat och stelnat lägg två droppar (cirka 0,5-1 ml) av blå livsmedelsfärg till toppen av maten och fördelas över hela ytan av ampullen (figur 1). Använd en annan färg färgämne om så önskas.
  3. Låt mat för två dagar i kylskåpet så att färgämnet absorberas av det översta lagret av livsmedel; Detta undviker mycket fukt skadar flugorna under mognadsperioden. Lägg en liten bit vävnad papper om mycket fukt är fortfarande ett problem att utplåna upp extra fukt och därefterta bort den.
  4. Överföring flyger till maten antingen individuellt eller i grupp.
    Obs: Flugor kommer att få tarm färgning inom 1 dag släpps ut på maten. Alternativt fullt mogna flugorna på färgade maten före experimentet (ökad dödlighet under mognadsperioden observerades inte från exponering för livsmedelsfärg).
  5. Kontrollera att de färgade flugor kan lätt skiljas från de icke-färgade flugor. Om de inte kan särskiljas, upprepa steg 1,1-1,4 med användning av antingen en högre koncentration av färgämne, eller en annat färgämne.

2. Två Manliga Parnings Trials Använda Food Coloring

  1. För att producera avkomma, ställa in flera flaskor innehållande par av kvinnliga och manliga flugor (små grupper av män och kvinnor är också lämpliga, även noga med att undvika trängsel av larver). Låt honorna att lägga ägg och flytta flugor till nya flaskor var 5 - 7 dagar. Förvara injektionsflaskor vid en lämplig temperatur för arten av intresse (22 ° C feller D. pseudo och D. subobscura och 25 ° C under D. melanogaster).
  2. Innan samla experimentella flugor bort alla flugor från uppsamlings flaskorna vid en viss tid innan samla hanar och honor för att säkerställa att de kommer att vara oskulder (D. melanogaster - 6 timmar vid 25 ° C, D. pseudo - 18 timmar vid 22 ° C, och D. subobscura - 24 h vid 22 ° C).
    Obs: Om flugor är inte oskuld detta kommer partiskhet deras beteende i parningsförsök 15.
    1. Store och mogna män individuellt i standard 75 x 20 mm plastflaskor (innehållande ~ 20 ml av mat). Detta undviker de negativa effekterna på manlig parningsbeteende och fitness sett i vissa arter när hanar hålls i grupp 16.
    2. Exponera hälften av hanarna till önskad behandling (CO 2 anestesi i detta fall). Använd en CO2 matta eller peka för att exponera flugorna under erforderlig tid. Butiks hälften av males i varje behandling på färgat mat tills parningen äger rum. Detta kommer att göra dem visuellt urskiljbara under parningsförsök.
    3. För överföring flugor använda en aspirator 17. Märk varje flaska för att identifiera både behandling och färgstatus av den manliga. Här använder fyra behandlingar (anestesi, icke-färgad = G-NC, anestesi, färgad = GC, ingen bedövning, ofärgat, NG-NC, och ingen anestesi, färgad, NG-C).
  3. Överför nyligen framkommit honor i färska livsmedel flaskor att mogna som grupper av 10.
  4. Tillåt flugor att mogna till sammankopplings ålder (D. melanogaster - 3 dagar, D. pseudo - 5 dagar, D. subobscura - 7 dagar 18 Store flyger vid en lämplig temperatur för arten som studeras (t.ex. 22 ° C för D. . pseudo och D. subobscura och 25 ° C för D. melanogaster).
  5. Flytta honor till enskilda flaskor (fortsaining ~ 20 ml mat) 1 dygn före parning rättegång för acklimatisering till parning flaskan. Märk dessa flaskor så att flaskor kan differentieras. Var noga med att förblinda experimentet genom att använda neutralt märkning (dvs 1-150) så det är inte möjligt att gissa identitet flugorna i någon flaska.
    Obs: Den person som släpper flugorna i varje flaska måste veta identiteten på flugorna som placeras i varje flaska som de kommer att notera vilken behandling var färgade. Dock bör observatören som klockor parningen inte vet sin identitet. För att göra detta minst två praktiker kommer att behövas, en för att ställa upp och en att observera.
  6. Börja de mötande prövningar mellan 10-12 AM eller vid en tidpunkt som sammanfaller med det ljus som kommer fram i ljuset / mörker-cykel flugorna utsätts för ("gryning" för flugorna). Lägg två manliga flugor till varje parning flaska (innehållande en enda kvinnlig fluga) med en sug. Se till att de två hanarna är från olika behandlingar (bedövning ellerkontroll) och att man har tarm färgning för att göra det möjligt att skilja dem från varandra, och notera vilken hane färgas.
  7. Om kopulation inträffar, registrera status av den manliga som kompisar (färgad eller icke - färgad). Om försöken sista under 2 timmar, antar honan inte para sig.
    OBS: 2 tim är lämplig för dessa arter, men andra Drosophila kan behöva mer eller mindre tid.

3. Single Man Parning Trials

  1. För ensamstående manliga prövningar, upprepa protokoll 2 med två ändringar:
    1. I steg 2.3 inte hålla hanar på färgat mat.
    2. I steg 2.7, lägger bara en enda hane till varje flaska.
  2. I steg 2.8, registrera den tid flugan läggs till flaskan, den tid de passande startar och tiden parningen färdiga bör registreras. Från dessa värden, beräkna parning framgång, latens, och varaktighet.

4. Dataanalys

  1. Använd lämplig statistik paket för analys. Om uppgifterna är normala och har bara två behandlingar, använd t-test eller motsvarande Gener Linear Model (GLM). För två manliga experiment, använda binomial test eller en binomial GLM som finns tillgängliga i alla grundläggande statistik paket.
    Anmärkning: För de exempeldata, alla analyser som utförts i R-version 3.0.3 19.
  2. Kontrollera uppgifterna parning latens och parning varaktighet för normalitet, genom att avsätta frekvens histogram för latens och varaktighet för varje behandling 20, och med hjälp av ett test för normalitet som Shapiro-Wilk. Om det inte är normalt, omvandla det, eller använda icke-parametriska motsvarande statistik 20.
    Anmärkning: För de exempeldata från de enskilda manliga experimenten log omvandling uppfyller kraven i normalitet och lika varianser.
  3. Om uppgifterna kan normalis, att använda t-test undersöka skillnader mellan parning latens och varaktighet i de enskilda manliga parning prövningar när två behandlingar 21. Om flera behandlingar används,prova en variansanalys (ANOVA) 20. Om uppgifterna inte kan normalis, prova motsvarande icke-parametriska tester 21.
  4. Använd binomial test för att testa för en effekt av antingen karamellfärg eller CO 2 anestesi på parnings framgång konkurrerande hanar 20. Om flera behandlingar används, vilket är fallet med exempeldata, använd en GLM med binomial fel struktur 21.
  5. För de två manliga prövningar i exemplet uppgifter, använd GLMS med binomial strukturer fel. En GLM sökte färg som en responsvariabel (färgad = 0 och ofärgat = 1) med arter, gas status och gasbehandling monteras som förklarande variables.One GLM sökte CO2 som en responsvariabel (gasade = 0 och inte-gasade = 1) med arter, färgstatus och gasbehandling monterade. I varje fall, producerar maximal modellen, och utföra modell förenkling baserad på AIC 20.

Representative Results

Två manliga parning prövningar - Effekten av CO 2 anestesi på parningsbeteende

Den bästa modellen fann att förklara variationen i effekten av CO 2 anestesi innehöll arter som en faktor (med D. pseudo och D. subobscura smält när de visade inga skillnader mellan varandra). I D. pseudo och D. subobscura det inte fanns någon signifikant effekt av CO 2 anestesi på parning framgång i två manliga studier (Z 1589 = 0,087, P = 0,931). För D. melanogaster, män som utsätts för CO 2 anestesi hade signifikant lägre parning framgång (Z1,589 = 2,467, P = 0,014). Det fanns också en signifikant interaktion mellan arter och behandling (χ 2 1589 = 6.83, P = 0,009) med en större effekt ses när D. melanogaster utsattes för gas vid insamling eller 1 dag före försöken (tabell 1). However, D. melanogaster hanar utsatt för CO2 två dagar innan den experimentella studien visade inte en effekt av CO2.

Två manliga parning prövningar - Effekten av tarm färg på parningsbeteende

Modell förenkling visade ingen signifikant effekt av karamellfärg upptäcks för någon av de tre arterna (P> 0,1). När behandling eller gas status ingick i analysen var dessa inte heller signifikant (P> 0,1). Proportionerna av framgångsrika parningar för färgade flugor över behandlingar visas i tabell 2. Skillnaden i färg mellan flugor hålls på färgat och ofärgat mat kan ses i figur 1. Intensiteten av tarmkaramellfärg var större i D. pseudo och D. subobscura än i D. melanogaster.

Enstaka parningsförsök - Effekten av att använda CO 2 anestesi på mrande beteende

Det fanns ingen skillnad i parning latens för någon av de tre arterna när CO 2 anestesi användes för att samla in nyligen dykt vuxna. En effekt hittades för parning varaktighet i D. subobscura när det utsattes för CO2 två dagar före parning prövningar (figurer 2 och 3, tabell 2).

Figur 1
Figur 1. Fotografera visar Flaskor av färgat och Non Färgat Fly Mat (A) och styrkan i Intestinal Coloration i Male D. Subobscura (B).

Figur 2
Figur 2. Medelvärde och 95% konfidensintervall för Copulation Latency för de tre djurslag i Single Man Trials, när Hanar var sövad (ljusa staplar) eller inte nedsövd (mörka staplar) när Collected som Virgins innan könsmognad.

Figur 3
Figur 3. Medelvärde och 95% konfidensintervall för Copulation Varaktighet för tre djurslag i Single Man Trials, då Hanar sövdes (ljusa staplar) eller ej nedsövd (mörka staplar) när Collected som Virgins innan könsmognad.

Behandling Arter Antal försök No. flugor färgad som parade p-värde No. flugor gasade som parade p-värde
Insamling på CO2 D. mel 73 36 1 27 0,0344
D. PSE 79 41 0,8221 44 0,3682
D. sub 71 40 0,3425 33 0,6353
Utsatt till CO 2 18 timmar före D. mel 57 28 1 19 0,0163
D. PSE 65 32 1 31 0,8043
D. sub 68 38 0,3961 35 0,9036
Utsatt till CO 2 2dagar. D. mel 56 19 0,0222 32 0,3497
D. PSE 70 32 0,5504 33 0,7202
D. sub 56 29 0,8939 26 0,6889 </ Td>

Tabell 1. Resultat från två manliga Choice Experiment i alla arter och behandlingar som undersökts.

Arter Trait df t-värde p-värde
D. melanogaster Latens 58 1,379 0,174
Varaktighet 58 1.243 0,221
D. pseudo Latens 109 0,419 0,676
Varaktighet 109 0,436 0,664
D. subobscura Latens 83 0,098 0,922
Varaktighet 83 1,767 0,081

Tabell 2. Resultat från Single Parnings Experiment Undersöka effekten av samlingen på CO2 Anestesi på Parning Latency och varaktighet. Tester utfördes på tre arter av Drosophila (D. melanogaster, D. pseudo och D. subobscura).

Discussion

Dessa data visar att effekten av CO2 anestesi är inkonsekvent mellan arter, med två av tre arter som visar liten påverkan. Våra resultat tyder på märkning med livsmedelsfärg hade en lägre påverkan på manlig parning framgång än CO 2 anestesi för D. melanogaster. Dessa experiment visar att livsmedelsfärger kan lätt och billigt kan användas för att märka flugor för parning analyser involverande multipla hanar.

Av de tre modell Drosophila arter undersökas, bara D. melanogaster visade en effekt av CO 2 anestesi på parning prestanda i en konkurrenssituation. Däremot ingen av arterna visade en effekt av samlingen på gas i enstaka parning prövningar i form av parnings latens, i motsats till tidigare resultat för D. melanogaster 5. Effekten av konkurrens kan därför lyfta mer subtila fitness effekter av CO 2 anestesi, som endast detekterbaraenligt situationer där det finns hane-hane konkurrens. Exponering vid tidig samling och en dag före rättegången ha en negativ effekt på förmågan hos hanar av D. melanogaster att få en parning. Exponering två dagar före rättegången men inte visade någon effekt. Både D. pseudo och D. subobscura visade inte någon effekt av exponering för gas i någon av försöken. En förklaring är att D. melanogaster var sårbart för tidig exponering för CO2 eftersom det måste samlas tidigare i livet (0-6 tim gammalt) än de andra arterna att säkerställa hanar är nyproducerade. Följaktligen manliga D. melanogaster i denna ålder kan vara mer känsliga som nagelbanden av flugan fortfarande härdning, jämfört med de andra arter som har haft längre för deras nagelband att hårdna. I allmänhet stöder denna idén att effekterna av CO 2 anestesi är artspecifika och utredare bör lämpligt testa effekten i sina djurslag. Currently, majoriteten av arbetet på effekten av CO 2 anestesi har genomförts på Drosophila melanogaster 5,11,22 och kan därför inte vara lämpligt att gälla andra besläktade arter.

Den alternativa icke-invasiv metod presenteras för differentiera flugor är livsmedelsfärg. Resultaten tyder på denna behandling hade ingen effekt på över alla arter undersökas. Men medan dess användning var framgångsrik i att tillhandahålla en billig och väl synlig markör för att skilja mellan individer bör det noteras att färgämnet var lättare att urskilja i D. pseudo och D. subobscura än i D. melanogaster. Föregående författare har använt flera färger (röd, grön och blå) 4,6. Vi hittade blå färg för att vara det enklaste att skilja på alla arter, särskilt D. pseudo och D. subobscura. Använda flera färger skulle potentiellt tillåta mer komplexa experiment med många individuellt märkta flies. Men preliminära tester av olika färgämnen är viktigt, eftersom vissa livsmedelsfärger misslyckas att färga flugorna, möjligen som rötas när konsumeras. Andra färgämnen kan ha toxiska effekter och minska överlevnaden av flugorna, och bör undvikas 14). Alternativa mat färgmetoder som använder dyrare fläckar har också använts för att pröva tarm integriteten för D. melanogaster 23. Dessa kan utgöra ett alternativ, även om dyrare, färgning metod 23.

Färgämnet Metoden är lika snabb som CO2 vingklippning som flugor kan lagras på färgade mat från samlingen. Upptag av maten var snabb (~ 3 h), så förvaring O / N på färgad mat skulle också vara tillräckligt för att markera flugor, som används i andra studier 6. Dock är längden på färg relativt korta (~ 4-5 timmar) jämfört med vingklippning (permanent) eller fluorescerande damm-märkning (10-12 dagar) 24. Som Drosophila artervarierar i utseende, kommer olika färgämnen vara mer eller mindre effektiva för olika arter, och som vissa stammar (t.ex. knock-out mutanter) kan vara sårbara för förändringar i kost, all användning av färgämne kräver ett preliminärt test av dess effektivitet särskilt om längre långvarig exponering för färgämnen kan vara giftiga 14. I motsats till studien av Kalaw et al. 14, fann vi ingen signifikant dödlighet efter lagring i flera dagar på färgade livsmedel för D. melanogaster (3 dagar), D. pseudo (5 dagar), eller D. subobscura (7 dagar), förmodligen på grund av skillnaden i färg som används.

Det kritiska steget för framgångsrik användning av färgämnet tekniken är steg 1,5, validera att den valda färgen fungerar bra med art och stam som används. En alternativ teknik innebär att tillämpa färgade damm på utsidan av flugan före användning i fältförsök 24. Denna metod har använts för att spåra individer i fält på grund to varaktighet märkning och hur lätt massmärkning flyger 24. Även om vi inte har uttryckligen testat denna metod i parningsförsök, skulle det vara viktigt att undersöka eventuella effekter som damm kan ha på sinnena viktiga i parning, särskilt i Drosophila 25, 26. I arter, men där tarm färgning inte är möjligt, dessa metoder kan vara lämpliga.

Sammanfattningsvis fann vi att i två av de tre testade arterna (D. pseudo och D. subobscura) sågs ingen effekt hittas av antingen CO 2 anestesi eller karamellfärg på parningsförmåga hanar. För D. melanogaster en negativ effekt på CO2 anestesi upptäcktes, men karamellfärg påverkade inte parning framgång i denna art. Sammantaget ger färgämnet metoden en enkel och billig icke-invasiv metod för att identifiera individuella Drosophila som är likvärdig eller bättre än metoder som kräver CO 2 anestesi. Detär sannolikt denna metod skulle fungera i en rad arter.

Disclosures

Författarna förklarar att de inte har några konkurrerande ekonomiska intressen.

Acknowledgments

Vi vill tacka Alex Hitchen och Meg Booth för deras hjälp med parningsförsök. Detta arbete stöddes av NERC bidrag NE / H015604 / 1 till TP.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Plastic tubing Fisher Scientific TWT-200-061G Other tubing may be suitable however it must fit within a 1ml pipette tip.
Fine mesh Any haberdashery - Fine curtain mesh is suitable
1 ml pipette tips VWR 83007-376 Various brands of pipette tips would be suitable
Plastic Vials Sarstedt 58.49 Larger vials or bottles could also be used.
Cotton Balls Lewis Medical Solutions 28170 The size of cotton will vary depending on the size of vials used
Blue Food colouring Thesugarcraftcompany - Other dye colours and brands can have variable results.
CO2 Tank BOC BOC 40VK
Sharpie Markers Steadtler Lumocolor 313 S Various colours can be used, but Lumocolor S give an excellent combination of durability and fineness
Stopwatch Salter SL3920 Any stopwatch with a good digital display would be fine

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Parker, G. A. Sperm competition and its consequences in insects. Biological Reviews. 45, 525-567 (1970).
  2. Hosken, D. J., Stockley, P., Tregenza, T., Wedell, N. Monogamy and the battle of the sexes. Annual Review of Entomology. 54, 361-378 (2009).
  3. Chapman, T., Liddle, L., John, K., Wolfner, M., Partridge, L. Female cost of mating caused by males accessory gland fluids. Nature. 373, 241-244 (1995).
  4. Avent, T. D., Price, T. A. R., Wedell, N. Age-based female preference in the fruit fly Drosophila pseudoobscura. Animal Behaviour. 75, 1413-1421 (2008).
  5. Barron, A. Anaesthetising Drosophila. for behavioural studies. Journal of Insect Physiology. 46, 439-442 (2000).
  6. Moeers, A. O., Rundle, H. D., Whitlock, M. C. The effects of selection and bottlenecks on male mating success in peripheral isolates. The American Naturalist. 153, 437-444 (1999).
  7. Ashburner, M., Thompson, J. N. The laboratory culture of Drosophila. The Genetics and Biology of Drosophila. Ashburner, M., Wright, T. R. F. 2a, Academic Press. London. 1-109 (1978).
  8. Powell, J. Progress and Prospects in Evolutionary Biology: The Drosophila Model. , Oxford University Press. Oxford. (1997).
  9. Moore, A. J., Moore, P. J. Balancing sexual selection through opposing mate choice and male competition. Proceedings of the Royal Society of London, series B-Biological Sciences. 266, 711-716 (1999).
  10. Hollocher, H., Ting, C., Pollack, F., Wu, C. Incipient speciation by sexual isolation in Drosophila melanogaster.: Variation in Mating preference and Correlation between sexes. Evolution. 51, 1175-1181 (1997).
  11. Perron, J. M., Huot, L., Corrivault, G. W., Chawla, S. S. Effects of carbon dioxide anaesthesia on Drosophila melanogaster. Journal of Insect Physiology. 18, 1869-1874 (1972).
  12. Wu, C. I., et al. Sexual isolation in Drosophila melanogaster : A possible case of incipient speciation. Proceedings of the National academy of sciences. 92, 2519-2523 (1995).
  13. Melcher, C., Pankratz, M. J. Candidate gustatory interneurons modulating feeding behaviour in the Drosophila brain. PLoS Biology. 3, e305 (2005).
  14. Kalaw, V., Drapeau, M. D., Long, A. D. Effects of food coloring on longevity and viability of Drosophila melanogaster. Dros. Inf. Serv. 85, 128-129 (2002).
  15. Friberg, U. Male perception of female mating status: its effect on copulation duration, sperm defence and female fitness. Animal Behaviour. 72, 1259-1268 (2006).
  16. Lizé, A., Price, T. A. R., Heys, C., Lewis, Z., Hurst, G. D. D. Extreme cost of rivalry in a monandrous species male − male interactions result in failure to acquire mates and reduced longevity. Proceedings of the Royal Society of London, series B-Biological Sciences. 281, 20140631 (2014).
  17. Yeh, S. -D., Chan, C., Ranz, J. M. Assessing differences in sperm competitive ability in Drosophila. Journal of Visualized Experiments. (78), e50547 (2013).
  18. Holman, L., Freckleton, R. P., Snook, R. R. What use is an infertile sperm? A comparative study of sperm-heteromorphic Drosophila. Evolution. 62, 374-385 (2008).
  19. R: A Language and Environment for Statistical Computing. , R Foundation for Statistical Computing. (2011).
  20. Crawley, M. J. Statistics: An introduction using R. , Wiley-Blackwell. Oxford, UK. (2005).
  21. Dytham, C. Choosing and Using Statistics: A Biologist's Guide. , Wiley-Blackwell, Oxford, UK. (2010).
  22. Kaiser, M. Influence of anaesthesia by carbon dioxide on hatching time and weight at eclosion in Drosophila melanogaster. Drosophila Information Service. 76, 92-93 (1995).
  23. Rera, M., et al. Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila. PGC-1 homolog. Cell Metabolism. 14, 623-634 (2011).
  24. Crumpacker, D. W. The use of micronized fluorescent dusts to mark adult Drosophila pseudoobscura. American Midland Naturalist. 91, 118-129 (1974).
  25. Jallon, J. M. A few chemical words exchanged by Drosophila during courtship and mating. Behaviour genetics. 14, 441-478 (1984).
  26. Liimatainen, J. O., Jallon, J. M. Genetic analysis of cuticular hydrocarbons and their effect on courtship in Drosophila virilis and D. lummei. Behaviour Genetics. 37, 713-725 (2007).

Tags

Neurovetenskap anestesi uppvaktning bananfluga individuell märkning individuell märkning hane-hane konkurrens mate val kompis konkurrens parning latens vingklippning
Färgning Insekter för Behavioral Analyser: den parningsbeteende hos bedövade<em&gt; Drosophila</em
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Verspoor, R. L., Heys, C., Price, T. More

Verspoor, R. L., Heys, C., Price, T. A. R. Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila. J. Vis. Exp. (98), e52645, doi:10.3791/52645 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter