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Neuroscience

इथेनॉल बेहोश करने की क्रिया संवेदनशीलता और में रैपिड सहिष्णुता को मापने के लिए एक सस्ती, स्केलेबल व्यवहार परख Published: April 15, 2015 doi: 10.3791/52676

Abstract

शराब का उपयोग करें विकार (एयूडी) एक गंभीर स्वास्थ्य चुनौती है। करने के लिए AUD एक बड़ी वंशानुगत घटक होने के बावजूद, कुछ जीनों असंदिग्ध रूप से उनके एटियलजि में फंसाया गया है। फल मक्खी, ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर, शराब संबंधी व्यवहार अंतर्निहित आणविक आनुवंशिक तंत्र की खोज के लिए एक शक्तिशाली मॉडल है और इसलिए की पहचान करने और AUD को प्रभावित करने वाले जीनों के समारोह को समझने के लिए महान वादा रखती है। अध्ययन के इन प्रकार के लिए ड्रोसोफिला मॉडल का उपयोग मज़बूती से इथेनॉल के लिए व्यवहार प्रतिक्रियाओं को मापने कि assays के की उपलब्धता पर निर्भर करता है। इस रिपोर्ट में मक्खियों में इथेनॉल संवेदनशीलता और तेजी से सहिष्णुता का आकलन करने के लिए उपयुक्त एक परख का वर्णन है। इस परख में मापा इथेनॉल संवेदनशीलता मक्खियों परीक्षण करने के तुरंत पहले भोजन के बिना रखे जाते हैं मात्रा और इस्तेमाल इथेनॉल की एकाग्रता, जैसा कि पहले बताया आनुवंशिक जोड़तोड़ की एक किस्म है, और समय की भी लंबाई से प्रभावित है। इसके विपरीत, इथेनॉल कीइस परख में मापा ensitivity मक्खी हैंडलिंग, मक्खियों का लिंग, और एंटीबायोटिक दवाओं या जी खमीर के साथ मध्यम विकास की पूरकता की ताक़त से प्रभावित नहीं है। Quantitating इथेनॉल संवेदनशीलता के लिए तीन अलग अलग तरीकों सभी अनिवार्य रूप से पृथक इथेनॉल संवेदनशीलता परिणामों के लिए अग्रणी, वर्णित हैं। अपनी समग्र सादगी के साथ संयुक्त इस परख के स्केलेबल प्रकृति, और अपेक्षाकृत कम खर्च के लिए सेट अप ड्रोसोफिला में इथेनॉल संवेदनशीलता और तेजी से सहिष्णुता के छोटे और बड़े पैमाने पर आनुवंशिक विश्लेषण के लिए यह उपयुक्त बनाने के लिए।

Introduction

शराब का उपयोग करें विकार (एयूडी) दुनिया भर में (1 में समीक्षा) एक विशाल स्वास्थ्य समस्या है। एयूडी के विकास ड्राइविंग तंत्र जटिल कर रहे हैं, इन विकारों एक प्रमुख आनुवंशिक घटक है (उदाहरण के लिए, 2)। एयूडी और संरक्षित व्यवहार प्रतिक्रियाओं की बड़ी आनुवांशिकता बेहतर के आणविक आधार को समझने की ओर इथेनॉल संबंधी व्यवहार में विशिष्ट जीन की संलिप्तता की जांच के लिए आनुवंशिक मॉडल जीवों का उपयोग करने में गहरी रुचि उत्पन्न किया है (3,4 में समीक्षा) कई प्रजातियों भर में इथेनॉल के लिए एयूडी। फल मक्खी, ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर, (3,4 में समीक्षा) इथेनॉल संबंधी व्यवहार की आणविक आनुवंशिक तंत्र की खोज के लिए एक प्रमुख मॉडल जीव के रूप में उभरा है। मक्खियों में अध्ययन (5 में समीक्षा) इथेनॉल के लिए व्यवहार प्रतिक्रियाओं में कई संकेत दे रास्ते के लिए भूमिकाओं पर प्रकाश डाला है। दिलचस्प, जीन और रास्ते में से कुछ व्यवहार respons कि प्रभावितमक्खियों में इथेनॉल के लिए तों भी कृंतक इथेनॉल संबंधी व्यवहार और / या मानव एयूडी (जैसे, 14/06) में फंसाया गया है। ड्रोसोफिला मॉडल प्रणाली में उपलब्ध आनुवंशिक उपकरण के सूट के साथ युग्मित प्रजातियों भर में इथेनॉल संबंधी व्यवहार, ड्राइविंग तंत्र के संरक्षण, इथेनॉल के लिए व्यवहार प्रतिक्रियाओं की आनुवंशिकी की जांच के लिए फल मक्खी मॉडल की उपयोगिता को रेखांकित।

संवेदनशीलता 15,16 और मनुष्यों में इथेनॉल के लिए (17 में समीक्षा) सहिष्णुता एयूडी के विकास से जुड़ा हुआ है। इथेनॉल के लिए इन व्यवहार प्रतिक्रियाओं के दोनों (3,4 में समीक्षा) प्रयोगशाला assays के एक किस्म के माध्यम से मक्खियों में मॉडलिंग की जा सकती है। लेखकों के लिए जाना जाता है मक्खी assays के सभी इथेनॉल बेहोश करने की क्रिया से या तो समय पर निर्भर इथेनॉल प्रेरित बेहोश करने की क्रिया / incoordination या समय पर निर्भर वसूली पर आधारित हैं।

इथेनॉल संवेदनशीलता और आर के आनुवंशिकी पर हमारे समूह से पिछले एक लेख मेंड्रोसोफिला में apid सहिष्णुता, मक्खियों की इथेनॉल वाष्प प्रेरित बेहोश करने की क्रिया के आधार पर एक व्यवहार परख 18 इस्तेमाल किया गया था। इस परख में परीक्षण लाइव वयस्क स्थानांतरित द्वारा शुरू किया गया था सेलूलोज एसीटेट प्लग के शीर्ष (यानी, गैर-मक्खी की ओर) के लिए इथेनॉल, उनका कहना है एक सेलूलोज़ एसीटेट प्लग के साथ शीशियों में मक्खियों को फँसाने, खाद्य शीशियों खाली करने के लिए संज्ञाहरण के बिना मक्खियों, और एक सिलिकॉन डाट साथ मक्खियों, सेलूलोज़ एसीटेट प्लग और इथेनॉल युक्त शीशी सील (18 का संदर्भ, चित्रा S3 में योजनाबद्ध देखें)। मक्खियों के विभिन्न समूहों का प्रतिनिधित्व एकाधिक शीशियों इस परख के throughput बढ़ाने, समानांतर में मूल्यांकन किया गया। शीशियों एक गुमनाम कोड दिए गए थे और प्रयोगकर्ताओं बेहोश करने की क्रिया के आकलन में अनायास ही पूर्वाग्रह को रोकने के लिए इलाज के समूह को अंधा कर दिया था। एक मानक प्रयोग में, शीशियों में एक 30 सेकंड वसूली के बाद, प्रत्येक शीशी में बेहोश मक्खियों की संख्या की गिनती और converte किया गया था, 6 मिनट के अंतराल पर धीरे टैप किए गए थे और मक्खियोंप्रतिशत सक्रिय मक्खियों के लिए डी। मक्खियों आंतरिक इथेनॉल 18 और बेहोश करने की क्रिया (इस रिपोर्ट में CF संदर्भ में 18 और चित्रा 1 ए और 1 बी) में प्रगतिशील बढ़ जाती है, जिससे एक समय पर निर्भर फैशन में सेलूलोज एसीटेट प्लग से इथेनॉल वाष्प अवशोषित। इस परख में बेहोश करने की क्रिया सक्रिय चलने या (ii) के साथ या उनके पंख फड़फड़ा बिना उनकी पीठ पर झूठ बोल के अभाव में मक्खियों (मैं) खड़े के रूप में परिभाषित किया गया था। यहाँ, इस इथेनॉल बेहोश करने की परख विस्तार से वर्णन किया गया है, इसे का उपयोग करने के लिए प्रासंगिक आगे परिचालन अनुकूलन प्रदान की जाती है, और परख मक्खी बेहोश करने की संवेदनशीलता पर खाना पूरकता विकल्पों के योगदान को संबोधित करने के लिए प्रयोग किया जाता है।

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Protocol

परख पहले 1. दिवस

  1. संक्षिप्त (1-5 मिनट) सीओ 2 के तहत 11 (एकल सेक्स) के समूह में ताजा भोजन शीशियों में मक्खियों लीजिए।
  2. मक्खियों एक पर्यावरण नियंत्रित अंतरिक्ष में भोजन शीशियों में (आमतौर पर 25 डिग्री सेल्सियस, 60% सापेक्ष आर्द्रता, 12 घंटा / प्रकाश अंधेरे चक्र) हे / एन ठीक करने के लिए अनुमति दें।
  3. योजना बनाई प्रयोग के लिए उपयुक्त अंतिम एकाग्रता (ओं) को शुद्ध करने के लिए (≥18 MΩ) पानी में शुद्ध (100%) इथेनॉल गिराए द्वारा इथेनॉल समाधान (एस) तैयार करें। समाधान (एस) आर टी ओ / एन पर लौटने के लिए अनुमति दें।
    नोट: इथेनॉल के कमजोर पड़ने एक्ज़ोथिर्मिक है।

परख की 2. दिवस

  1. मक्खियों के प्रत्येक शीशी परीक्षण किया जा करने के लिए, एक साफ, खाली भोजन शीशी (मैं) तैयार; यानी, परीक्षण शीशी, (द्वितीय) एक नया सेलूलोज एसीटेट प्लग, (iii) सिलिकॉन डाट और (iv) इथेनॉल समाधान (3 टेबल देखें) के 1 मिलीलीटर।
  2. 55-65% करने के लिए 20-25 डिग्री सेल्सियस तक तापमान और सापेक्ष आर्द्रता का समायोजन करके परीक्षण के कमरे तैयार करें।
  3. एक अन्य कार्यकर्ता हैशीशियों के प्रत्येक समूह के लिए एक अनूठा कोड आवंटित करने और बाद के लिए कोड दर्ज करते हैं। कुछ मिनट के लिए acclimate करने के लिए परीक्षण के कमरे में मक्खियों के साथ कोडित शीशियों रखें।
  4. 2.3 से मक्खी की शीशियों पर कोड मैच के लिए खाली परीक्षण शीशियों लेबल।
  5. 1 टेबल के समान एक स्प्रेडशीट में स्तंभों में कोड (एक स्तंभ / शीशी) दर्ज करके एक हार्ड कॉपी के परीक्षण के प्रवेश का निर्माण।
  6. एक गाइड के रूप में परीक्षण के प्रवेश का प्रयोग, परीक्षण के कमरे में सरणियों मिलान में मक्खियों और खाली परीक्षण शीशियों के साथ कोडित खाद्य शीशियों की व्यवस्था।
    नोट: परीक्षण करने के लिए शीशियों का एक उचित अधिकतम संख्या 24 है (यानी, 4 शीशियों प्रत्येक के 6 सेट)।
  7. स्थानांतरण का मिलान नहीं हुआ / लेबल वाले खाली परीक्षण शीशियों में खाद्य शीशियों से मक्खियों और सेलूलोज एसीटेट प्लग शीशी में सबसे ऊपर नीचे 2 सेमी कर रहे हैं जब तक तुरंत परीक्षण शीशियों में सेलूलोज एसीटेट प्लग डालें।
  8. इसके बाद, कंपित एक मिनट के अंतराल पर एक सेट के रूप में चार शीशियों में से प्रत्येक पंक्ति को संभाल।
  9. समय 0 आकलन के लिए, अलग-अलग डब्ल्यू प्रत्येक शीशी काबूith अंगूठे और तर्जनी, शीशी के नीचे करने के लिए मक्खियों दस्तक 30 सेकंड प्रतीक्षा करें और फिर मृत / स्थिर हैं कि मक्खियों की संख्या गिनने के लिए मेज पर धीरे तीन बार नल। समय पर हार्डकॉपी के परीक्षण के प्रवेश में 0 मिनट प्रत्येक शीशी के लिए स्थिर / मृत मक्खियों की संख्या रिकॉर्ड।
  10. टाइमर समय 0 पर लगातार ऊपर की गिनती शुरू किया और तुरंत चार शीशियों की पहली पंक्ति / सेट के लिए शीशियों में सेलूलोज एसीटेट प्लग करने के लिए इथेनॉल के 1 मिलीलीटर जोड़ने लगते हैं। वे परीक्षण किया जाएगा क्रम में 5 सेकंड के अंतराल पर शीशियों में सेलूलोज एसीटेट प्लग करने के लिए इथेनॉल के 1 मिलीलीटर जोड़ें। इथेनॉल सेलूलोज़ एसीटेट प्लग भर में समान रूप से अवशोषित कर लेता है तो यह है कि एक परिपत्र गति में सेलूलोज एसीटेट प्लग करने के लिए इथेनॉल जोड़ें। इथेनॉल सेट में सभी चार परीक्षण शीशियों में जोड़ दिया गया है, यह सील करने के लिए प्रत्येक शीशी में एक सिलिकॉन प्लग डालें।
  11. टाइम्स 1, 2, 3, 4 और 5 मिनट में, क्रमशः 4 शीशियों के दूसरे, तीसरे, चौथे, पांचवें और छठे सेट करने के लिए इथेनॉल के 1 मिलीलीटर जोड़ें। बाद सिलिकॉन stoppers डालने जारी रखें4 शीशियों के प्रत्येक सेट करने के लिए इथेनॉल जोड़ने।
  12. समय 6 मिनट पर, अंगूठे और तर्जनी के साथ प्रत्येक शीशी लोभी शीशी के नीचे करने के लिए मक्खियों दस्तक करने के लिए मेज पर धीरे तीन बार दोहन, 30 सेकंड इंतज़ार कर रही है और फिर गिनती और की कुल संख्या रिकॉर्डिंग से चार शीशियों के पहले सेट का परीक्षण बेहोश कर रहे हैं कि मक्खियों। स्कोर कि वे (मैं) शीशी के फर्श पर खड़े लेकिन साथ या उनके पंख फड़फड़ा बिना उनकी पीठ पर चलना या (ii) झूठ मत बोलो अगर बेहोश रूप में मक्खियों।
  13. तालिका 2 में अनुसूची का उपयोग कर 5 सेकंड के अंतराल पर सेट के भीतर प्रत्येक शीशी संभाल लेना।
  14. पहले सेट के लिए किया गुना 7, 8, 9, 10 और 11 मिनट पर, क्रमशः शीशियों, के, दूसरे तीसरे, चौथे, पांचवें और छठे सेट का परीक्षण करें।
  15. समय 12 मिनट पर 2.12 में वर्णित के रूप में, फिर चार शीशियों के पहले सेट का परीक्षण और क्रमश: 13, 14, 15, 16 और 17 मिनट में शीशियों के दूसरे, तीसरे, चौथे, पांचवें और छठे सेट का परीक्षण जारी है।
  16. सब मक्खियों एस रहे हैं जब तक 2.12 के रूप में वर्णित परीक्षण मक्खियों जारी रखेंedated।
  17. हार्ड कॉपी के परीक्षण के प्रवेश में प्रत्येक शीशी में मक्खियों की कुल संख्या दर्ज करें। मक्खियों की कुल संख्या से समय 0 पर स्थिर / मृत मक्खियों सेंसर करते हैं।
  18. समय (एक्स अक्ष) बनाम% सक्रिय मक्खियों (वाई अक्ष) के रूप में प्रत्येक मूल्यांकन समय-बिंदु पर प्रतिशत सक्रिय मक्खियों और साजिश डेटा की गणना। बहुपद या sigmoidal वक्र फिट बैठता तीसरे क्रम से बेहोश करने की क्रिया समय 50 मूल्यों (ST50, 50% बेहोश करने की क्रिया के लिए समय) interpolating या वक्र के तहत क्षेत्र की गणना के द्वारा इथेनॉल बेहोश करने की क्रिया quantitate।
  19. डीकोड शीशियों से डाटा संकलन और सांख्यिकीय विश्लेषण प्रदर्शन (जैसे, एक तरह से एनोवा Bonferroni एकाधिक तुलना परीक्षण) के साथ प्रयोगात्मक डिजाइन के लिए के रूप में उपयुक्त।

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Representative Results

इस इथेनॉल बेहोश करने की परख से कच्चे डेटा इथेनॉल वाष्प जोखिम समय के एक समारोह के रूप में बेहोश कर रहे हैं कि मक्खियों की संख्या रहे हैं। कच्चे डेटा समय के एक समारोह के रूप में प्रतिशत सक्रिय मक्खियों को परिवर्तित कर रहे हैं (प्राथमिक डेटा 1A आंकड़े, बी, डी - एफ)। वक्र फिट बैठता से प्राथमिक आंकड़ों से इथेनॉल बेहोश करने की क्रिया के लिए संवेदनशीलता प्रक्षेप के माध्यम से, बेहोश करने की क्रिया समय 50 (ST50) के रूप में वक्र (नीलामी) के तहत बेहोश या AEA बनने के लिए मक्खियों का 50% के लिए आवश्यक समय quantitated जा सकता है। इससे पहले (औसत आर 2 = 0.934, एन = 24, चित्रा 1 ए) के रूप में की उम्मीद sigmoidal घटता प्राथमिक कुछ हद तक बेहतर डेटा (औसत आर 2 = 0.997, एन = 24 फिट हालांकि 18 तीसरे क्रम बहुपद घटता है, अच्छी तरह से प्राथमिक डेटा फिट रिपोर्ट; चित्रा 1 बी)। वक्र फिट बैठता से ST50 मूल्यों को निर्धारित करने के लिए एक विकल्प के रूप में, प्राथमिक आंकड़ों से इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता भी क्षेत्र के रूप में quantitated किया जा सकता हैवक्र (नीलामी,% सक्रिय मक्खियों समय एक्स) (चित्रा 1C) के तहत। quantitation के इन तीन तरीकों से परिणाम एक दूसरे के साथ बहुत अच्छी तरह से सहसंबंधी (पियर्सन आर 2 ≥0.998, एन = 24) और इकाइयों ST50 (न्यूनतम) और एयूसी (सक्रिय% के लिए जरूरी अलग कर रहे हैं, हालांकि, अनिवार्य रूप से पृथक (चित्रा 1C) कर रहे हैं ) एक्स समय गुज़र जाता है। आदि सभी गणना के बारे में विवरण का उपयोग किया था स्प्रेडशीट, इसी लेखक की ओर से उपलब्ध हैं। ST50 (या एयूसी) के उच्च और कम मूल्यों पा लिया और क्रमशः, बेहोश करने की क्रिया इथेनॉल के लिए संवेदनशीलता बढ़ाया संकेत मिलता है कि ध्यान दें। पिछली रिपोर्ट 18 के साथ स्थिरता के लिए, तीसरे क्रम बहुपद वक्र फिट बैठता से निकाली गई ST50 मूल्यों इस study.Importantly के शेष के दौरान इस्तेमाल किया गया, परख एससीबी में Cnx14D (चित्रा -1) और परिवर्तन के खिलाफ आरएनएआई के प्रभाव का पता लगाता है (चित्रा 1E) , अरु और hppy (चित्रा 1F), 18 में रिपोर्ट और लेख मूल रूप से इन आनुवंशिक जोड़तोड़ 7,19-22 के प्रभाव का वर्णन के रूप में> Clic और NPFR1 इथेनॉल संवेदनशीलता पर (डेटा नहीं दिखाया गया है)।

इस परख के नियमित प्रयोग के दौरान, इथेनॉल के 2 मिलीलीटर के साथ गीला सेलूलोज एसीटेट प्लग के साथ शीशियों का दोहन सेलूलोज एसीटेट जिससे संभावित मक्खियों 'मुक्त बदल रहा है, कुछ व्यक्तिगत प्रयोगों () नहीं दिखाया में कुछ शीशियों के नीचे की ओर यात्रा करने के लिए प्लग का कारण अंतरिक्ष और इथेनॉल वाष्प की एकाग्रता। साथ ही, लगभग 0.25 मिलीग्राम इथेनॉल के अलावा तरल इथेनॉल के लिए खुल गए थे इन assays में मक्खियों की संभावना है कि ऊपर उठाने, वे इथेनॉल के 2 मिलीलीटर (2A चित्रा) के साथ गीला कर रहे थे जब सेलूलोज एसीटेट प्लग का (यानी, ओर उड़ान भरने के लिए) नीचे पहुंच गया वाष्प इथेनॉल के लिए। Cellulos के नीचे माइग्रेशन 2 मिलीलीटर 1 मिलीलीटर से सेलूलोज़ एसीटेट प्लग में इथेनॉल की मात्रा का सफाया घटानाजोरदार दोहन () नहीं दिखाया है और यह भी सेलूलोज एसीटेट प्लग (2A चित्रा) के पैंदा पर इथेनॉल समाधान के measureable मात्रा का सफाया करने के बाद भी परख के दौरान ई एसीटेट प्लग। मक्खियों के बेहोश करने की क्रिया भी 1 मिलीलीटर (- सी चित्रा 1 ए) की तुलना में कम मात्रा के साथ इस्तेमाल किया इथेनॉल की मात्रा के प्रति संवेदनशील था। इथेनॉल के 1 मिलीलीटर का प्रयोग इसलिए परख के दौरान मक्खियों के लिए एक निरंतर खुली जगह बनाए रखने में मदद करता है और तरल इथेनॉल किया जाता रहा है कि नहीं है सुनिश्चित करता है। मक्खियों इसलिए संभवतः इस परख में एक वाष्प के रूप में पूरी तरह से इथेनॉल के लिए सामने आ रहे हैं। (यानी, 85% (खंड / खंड) इथेनॉल के 1 मिलीलीटर से वाष्प) और [एक] मक्खियों डब्ल्यू पुराने 1-5 दिन जब तक अन्यथा इंगित यहां बताया बाद के सभी अध्ययनों में इस्तेमाल किया गया 85% इथेनॉल का एक मिलीलीटर।

24 शीशियों के साथ प्रयोगों में, मक्खियों प्रयोगकर्ता का आकलन करने के लिए अनुमति देने के लिए 6 मिनट के अंतराल पर धीरे उपयोग किया जाता है (यानी, के माध्यम से चक्र) एक उचित निर्धारित schedul पर सभी शीशियोंई। कम शीशियों और 5 मिनट के अंतराल का उपयोग करते हुए नियंत्रण मक्खियों के साथ पढ़ाई से ST50s 6 मिनट के अंतराल के साथ पढ़ाई से ST50s के बराबर थे (डेटा) नहीं दिखाया। मक्खियों से पहले प्रत्येक शीशी में मक्खियों के बेहोश करने की स्थिति का निर्धारण करने के लिए अनुक्रम में चार शीशियों का एक सेट करने के लिए नल प्रयोगकर्ता के समय की अनुमति दोहन के बाद बेहोश करने की क्रिया के लिए 30 सेकंड के लिए मूल्यांकन कर रहे हैं। प्रभाव इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता, पुरुष और महिला नियंत्रण मक्खियों में ST50 मूल्यों दोहन के बाद ताक़त या वसूली समय दोहन में मतभेद बहुत तेजी से (हार्ड) सामान्य रूप से (रेगुलर) उपयोग किया जा रहा है, जबकि मापा गया था या अगर यह निर्धारित करने के लिए एक मानक 30 सेकंड या उससे अधिक समय के 60 सेकंड के बाद वसूली। दोहन ​​ताक़त (चित्रा 2 बी) और वसूली समय (चित्रा -2) नियंत्रण पुरुषों या महिलाओं में ST50 मूल्यों पर कोई औसत दर्जे का प्रभाव नहीं पड़ा।

एंटीबायोटिक्स मक्खी भोजन माध्यम में बैक्टीरिया विकास को दबाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। एंटीबायोटिक दवाओं के साथ भोजन माध्यम की पूरकता इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता को प्रभावित करता है, तो यह निर्धारित करने के लिए,ST50 मूल्यों (; टेट्रासाइक्लिन, 20 माइक्रोग्राम प्रति मिलीग्राम /;, एम्पीसिलीन माइक्रोग्राम प्रति मिलीग्राम / 100 chloramphenicol, 125 माइक्रोग्राम प्रति / एमएल) उपस्थिति या तीन एंटीबायोटिक दवाओं के अभाव में एक पीढ़ी के लिए पाला मक्खियों में मापा गया। इन तीन एंटीबायोटिक दवाओं पर पालन मक्खियों इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता (चित्रा 2 डी) पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा।

मक्खियों खाली भोजन करने के लिए स्थानांतरित कर रहे हैं शीशियों और इसलिए पूर्व बेहोश करने की परख में इथेनॉल वाष्प से अवगत कराया जा रहा है ~ 5 मिनट-तुरंत के लिए भोजन और पानी से वंचित हैं। समय मक्खियों की राशि परख प्रभावों इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता की शुरुआत से पहले खाली भोजन शीशियों में रखा जाता है, तो यह निर्धारित करने के लिए, मक्खियों 6 घंटा (सामान्य से कम से कम 70 गुना) और फिर ST50 मूल्यों मापा गया के लिए भूखे थे। छह घंटे के लिए भुखमरी काफी पुरुष और महिला दोनों नियंत्रण मक्खियों (चित्रा 2 ई) में ST50s कमी हुई। ST50 पर भुखमरी के प्रभाव (इन प्रयोगों में 9-14%) अपेक्षाकृत छोटा था, समय की राशि विशेष मक्खियोंएन डी खाली शीशियों में परख में इथेनॉल वाष्प को उजागर किया जा रहा करने के लिए पहले एक प्रयोग के भीतर और भी प्रयोगों के बीच समूहों में वर्दी आयोजित किया जाना चाहिए।

प्रयोगशाला मक्खी भोजन लाइव खमीर के साथ पूरक किया जा सकता है (उदाहरण के लिए, 18,20,23,24) संतान के उत्पादन को बढ़ावा देने के लिए। संतान की कुल संख्या 20 दिनों से अधिक का उत्पादन हालांकि उदाहरण के लिए, खाद्य शीशियों, पहले गर्मी की मौत हो खमीर या कोई जीना खमीर (D10-D11, सफेद सलाखों, चित्रा 3A तुलना) के साथ उन लोगों की तुलना में वयस्कों का उत्पादन (Saccharomyces cerevisiae) लाइव खमीर के साथ पूरक लाइव और गर्मी को मार डाला खमीर (चित्रा 3) के साथ पूरक शीशियों में पृथक किया गया था। खमीर उपज मक्खी भोजन पर इथेनॉल के सार्थक मात्रा में रहते हैं कि संभावना को संबोधित करने के लिए, खाद्य माध्यम में (मैं) इथेनॉल, मक्खियों (ii) इथेनॉल, और मक्खियों में (तीन) इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता पर लाइव खमीर के प्रभाव को मापा गया। खाद्य मध्यम लाइव खमीर निहित उप के साथ पूरकगर्मी मारे गए या कोई खमीर (3B चित्रा) के साथ पूरक भोजन की तुलना में इथेनॉल के stantial मात्रा में। फिर भी, नियंत्रण मक्खियों, जी के साथ पूरक मध्यम पर हो मारे गए या कोई खमीर आंतरिक इथेनॉल (चित्रा -3 सी) के अपरिज्ञेयता कम सांद्रता था। इसके अलावा, इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता गर्मी मारे गए या लाइव खमीर (चित्रा 3 डी) के साथ पूरक मध्यम पर हो नियंत्रण मक्खियों में पृथक किया गया था।

चित्र 1
1. (एसी) बेहोश करने की क्रिया परख डेटा विश्लेषण विकल्प चित्रा। डब्ल्यू नियंत्रण [एक] महिलाओं (1118 isogenic डब्ल्यू, ब्लूमिंगटन इंडियाना ड्रोसोफिला स्टॉक केंद्र शेयर # 5905) 85% (खंड / खंड) इथेनॉल का संकेत दिया संस्करणों से वाष्प से अवगत कराया गया। (ए) बेहोश करने की क्रिया समय पाठ्यक्रम डेटा तीसरे के साथ फिट आदेश के polynomials। (बी)बेहोश करने की क्रिया समय पाठ्यक्रम डेटा sigmoidal घटता के साथ फिट। वक्र के तहत (बाएं वाई अक्ष) ST50 तीसरे क्रम के polynomials से interpolated मूल्यों और sigmoidal घटता या (दाएं वाई अक्ष) क्षेत्र के रूप में quantitated (सी) इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता (नीलामी,% सक्रिय मक्खियों) समय एक्स। इथेनॉल की मात्रा है, लेकिन नहीं विश्लेषण विधि, प्रभावित इथेनॉल संवेदनशीलता (दो तरह एनोवा; मात्रा का असर, पी <.0001; विश्लेषण विधि, एन एस के प्रभाव; एन = 8 / समूह; 1/100 तब्दील नीलामी डेटा अंतर में लिए खाते में से मूल्यों की भयावहता)। (लोमो) प्रतिनिधि समय पाठ्यक्रम डेटा। (डी) नियंत्रण (तंत्रिका तंत्र (elav-Gal4 / v5597) पा इथेनॉल संवेदनशीलता सापेक्ष में Cnx14D आरएनएआई की अभिव्यक्ति v5597 / + और ​​elav-Gal4 / + )। (8.128 अरु) के सीबी (एससीबी Vol2) और अरु (ई और एफ) उत्परिवर्तन बढ़ाया इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता और hppy का उत्परिवर्तन (hppyKG5537) नियंत्रण की तुलना में इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता पा लिया। ST50 18 मूल्यों के रूप में एफई में डाटा पहले से सूचित किया गया है।

चित्र 2
बेहोश करने की परख में संचालन मानकों के चित्रा 2. आकलन। सेलूलोज एसीटेट प्लग के नीचे 2 मिमी में इथेनॉल के (ए) की राशि। * Bonferroni; इथेनॉल की मात्रा एक नकली 60 मिनट प्रयोग (एक तरह से एनोवा, पी <.0001 के दौरान सेलूलोज एसीटेट प्लग के नीचे 2 मिमी में चले गए कि इथेनॉल की मात्रा पर एक महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ा सेलूलोज एसीटेट प्लग के सबसे ऊपर के लिए जोड़ा एकाधिक तुलना परीक्षण, 2 मिलीलीटर बनाम 0 और 1 मिलीलीटर, पी <0.05 एन = 4)। इथेनॉल। सेलूलोज एसीटेट प्लग के द्रव्यमान में एक परिवर्तन के रूप में quantitated (बी) न तो मक्खियों की शीशियों दोहन की ताक़त के दौरान परीक्षण (हार्ड, नियमित) और न ही लिंग परीक्षण किया गया था प्रभावित ST50s (दो-Wप्र एनोवा; , एन एस दोहन के प्रभाव; सेक्स, एन एस के प्रभाव; एन = 12) (सी) न तो दोहन और न ही सेक्स ST50s (दो तरह एनोवा पर ​​महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ा के बाद वसूली समय;। वसूली समय, एन एस के प्रभाव, सेक्स, एन एस के प्रभाव;। एंटीबायोटिक दवाओं के एन = 6) (डी) समावेशन मध्यम विकास में, (एटीसी एम्पीसिलीन, टेट्रासाइक्लिन और chloramphenicol) ST50s पर कोई समग्र प्रभाव नहीं पड़ा है, लेकिन ST50 (दो तरह एनोवा पर सेक्स का एक प्रभाव था, एटीसी, एन एस के प्रभाव, सेक्स, पी के प्रभाव = 0.001; बातचीत , एनएस;। भुखमरी के एन = 6) (ई) के प्रभाव इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता पर। ST50s सामान्य रूप से (फेड) तंग आ मक्खियों की तुलना में 6 घंटा (भूखे) के लिए भोजन और पानी से वंचित मक्खियों में काफी कम थे; पुरुषों और महिलाओं में ST50s समग्र पृथक किया गया (दो तरह एनोवा, भुखमरी का असर, पी <.0001, सेक्स, एन एस के प्रभाव; N = 12; * Bonferroni एकाधिक तुलना परीक्षण, पुरुषों और महिलाओं में भुखमरी का असर, पी <0.05) ।


चित्रा विकास, इथेनॉल सामग्री और बेहोश करने की संवेदनशीलता पर लाइव खमीर 3. प्रभाव। कोई खमीर (कोई वाई) के साथ पूरक खाद्य मध्यम युक्त शीशियों से (ए) वयस्क संतान, गर्मी मार डाला खमीर (वाई किल्ड) या जी खमीर (लाइव वाई)। व्हाइट सलाखों, दिन 10-11 के दौरान उभरते वयस्क संतान; ग्रे सलाखों, दिन 12-20। सब (10-20) दिन, पी <.0001; दिनों 10-11, पी <.0001; दिनों 12-20, पी = 0.0002; एन = 5 कुल मिलाकर, खमीर उपचार एक महत्वपूर्ण संतान उत्पादन (एक तरह ANOVAs पर प्रभाव नहीं पड़ा )। सब (10-20) के दिनों के दौरान उत्पादित संतान की कुल संख्या किल्ड वाई के साथ शीशियों से अधिक से अधिक था और कोई वाई (Bonferroni एकाधिक तुलना परीक्षण, पी <0.05) की तुलना में वाई जीते। दिनों 10-11 के दौरान, लाइव वाई के साथ शीशियों वाई मारे गए और मारे गए वाई के साथ शीशियों कोई y से अधिक संतान (सफेद सलाखों, Bonferroni एकाधिक तुलना परीक्षण, पी <0.05) का उत्पादन अधिक से अधिक संतान का उत्पादन किया। दिनों 12-20 के दौरान, वाई शीशियोंवें। वाई कोई वाई या लाइव वाई के साथ शीशियों से अधिक संतान (ग्रे सलाखों, Bonferroni एकाधिक तुलना परीक्षण, पी <0.05) का उत्पादन किल्ड खाद्य माध्यम में (बी) इथेनॉल के साथ नहीं शीशियों की तुलना में लाइव वाई के साथ पूरक शीशियों में काफी अधिक था वाई और मार डाला वाई (एक तरह से एनोवा, पी <.0001, एन = 5; Bonferroni एकाधिक तुलना परीक्षण, पी <0.05) (सी) [एक] मादा मक्खियों काफी खमीर के साथ पूरकता से प्रभावित नहीं था w में आंतरिक इथेनॉल (एक। -way एनोवा, एन एस, एन = 5-10)। बी और सी में इथेनॉल सामग्री वर्णित 18 के रूप में निर्धारित (डी) ST50 मूल्यों में काफी पुरुष या [एक] (दो तरह एनोवा डब्ल्यू महिला में खमीर के साथ मध्यम विकास की पूरकता से प्रभावित नहीं थे;। खमीर, एन एस के प्रभाव; प्रभाव सेक्स, एनएस की; N = 12)।

शीशी → 1 2 3 4 5 6 7 8
कोड →
कुल # →
0 मिनट
6 मिनट
12 मिनट
18 मिनट
24 मिनट
30 मिनट
36 मिनट
42 मिनट
48 मिनट
54 मिनट
60 मिनट

तालिका 1: विशिष्ट परीक्षण प्रवेश। प्रोटोकॉल 2.5 कदम देखें।

शीशी ठोकर आकलन
1 6 मिनट 0 सेकंड 6 मिनट 30 सेकंड
2 6 मिनट 5 सेकंड 6 मिनट 35 सेकंड
3 6 मिनट 10 सेकंड 6 मिनट 40 सेकंड
4 6 मिनट 15 सेकंड 6 मिनट 45 सेकंड

तालिका 2:। ठेठ दोहन और परीक्षण अनुसूची प्रोटोकॉल कदम 2.13 देखें।

सामग्री / उपकरण का नाम कंपनी सूची की संख्या टिप्पणियाँ / विवरण
खाद्य शीशियों VWR 89092-772 संकीर्ण
Flugs गेनेसी / flystuff.com 49-102 संकीर्ण
सिलिकॉन डाट फिशर साइंटिफिक 09-704-1l # 4
इथेनॉल Pharmaco-Aaper 111000200 200 सबूत

तालिका 3: सामग्री।

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Discussion

Reproducibly सार्थक phenotypes के quantitate कि सीधा assays के व्यवहार के विश्लेषण के लिए महान मूल्य के हैं। यहाँ वर्णित काम ड्रोसोफिला में इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता और तेजी से सहिष्णुता को मापने के लिए एक परख के कई व्यावहारिक पहलुओं पते। इस काम का नहीं ध्यान केंद्रित हालांकि, व्यवहार विश्लेषण के एक अध्ययन के भीतर परीक्षण विषयों के लिए पर्यावरण और आनुवंशिक पृष्ठभूमि निरंतर बनाए रखने के द्वारा मदद कर रहे हैं। इसके अलावा, की तुलना में आम तौर पर पाला और पक्ष द्वारा साइड परीक्षण किया मक्खियों के समूहों के बीच किया जाना चाहिए। यह अंत करने के लिए, इस काम में अलग-अलग प्रयोगों के भीतर सभी मक्खियों ही आनुवंशिक पृष्ठभूमि थी और वर्दी पर्यावरण की स्थिति मानक खाद्य माध्यम के साथ (25 डिग्री सेल्सियस, 60% सापेक्ष आर्द्रता, 12 घंटा / प्रकाश अंधेरे चक्र) के तहत कंधे से कंधा मिलाकर उनका पालन कर रहे थे (10 % खाद्य मध्यम स्पष्ट रूप से चालाकी से किया गया था जिसमें उन प्रयोगों के लिए छोड़कर सुक्रोज, 3.3% cornmeal, 2% खमीर और 1% अगर)।

ETHयहाँ वर्णित anol बेहोश करने की परख सस्ती और वाणिज्यिक स्रोतों (3 टेबल) से आसानी से उपलब्ध हैं, जो सभी से बहुत कुछ सामग्री (प्लास्टिक शीशियों, सेलूलोज़ एसीटेट प्लग, सिलिकॉन Stoppers और इथेनॉल), की आवश्यकता है। इस इथेनॉल बेहोश करने की परख करने के लिए और (जैसे, 6,20,25-27, व्यापक 3,28 में समीक्षा) जैसा कि पहले बताया तरीकों के आधार पर एक बड़ी हद तक समान है। इन assays के सभी इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता को मापने के लिए उपयोगिता हालांकि, परख के फायदे यहाँ वर्णित (मैं) मक्खियों, (द्वितीय) मक्खियों कि कम संभावना कपास या अन्य सामग्री में उलझ बन सकता परख के दौरान तरल इथेनॉल के संपर्क में नहीं हैं शामिल परख के दौरान परीक्षण शीशी में, (iii) की क्षमता समानांतर में मक्खियों के कई समूहों का परीक्षण, और (iv) प्राथमिक डेटा सेट से इथेनॉल संवेदनशीलता का उद्देश्य मात्रा का ठहराव के लिए तीन विकल्प हैं। साथ में, इन फायदों को काफी हद तक था, पेय इथेनॉल कि मक्खियों संभावना खत्मटी इथेनॉल जिससे उनके समग्र हरकत क्षमताओं बाधा मक्खियों की बाहरी सतह को गीला कर सकता है, और परख में मक्खियों की है कि प्रदर्शन के परीक्षण के वातावरण में सामग्री entangling के साथ जुड़े कठिनाइयों से चकित किया जा सकता है। साथ ही, इन फायदों परख की समग्र throughput और reproducibility वृद्धि हुई है। इसके अलावा, इस परख में मापा इथेनॉल संवेदनशीलता की अभिव्यक्ति से प्रभावित नहीं है सफेद अंतर्जात या ट्रांसजेनिक मार्कर मिनी सफेद, 18 सामान्यतः ड्रोसोफिला आनुवंशिक विश्लेषण में इस्तेमाल किया ट्रांसजीन और आनुवंशिक पृष्ठभूमि के साथ पढ़ाई के लिए उपयुक्त बना रही है।

कई महत्वपूर्ण मापदंडों इथेनॉल बेहोश करने की क्रिया assays से विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए नियंत्रित किया जाना चाहिए। जांच की जा रही विकास पर्यावरण और दबाव की आनुवंशिक पृष्ठभूमि (ऊपर देखें) को नियंत्रित करने के अलावा, मात्रा और इथेनॉल की एकाग्रता पाठ्यक्रम के इथेनॉल sensitivi के quantitation के लिए अत्यंत महत्वपूर्ण हैंTy। पानी में इथेनॉल के कमजोर पड़ने एक्ज़ोथिर्मिक है कि ध्यान दें। नतीजतन, पतला इथेनॉल समाधान से पहले बेहोश करने की क्रिया assays के दीक्षा के लिए आरटी को संतुलित करने की अनुमति दी जानी चाहिए। जांच की जा रही समूहों में वर्दी बनाया जाना चाहिए कि एक अतिरिक्त पैरामीटर मक्खियों बेहोश करने की परख शुरू करने से पहले खाली भोजन शीशियों में रखे जाते हैं कि समय की लंबाई है। दो अतिरिक्त मानकों को भी नियंत्रित किया जाना चाहिए। शीशी प्रति मक्खियों की संख्या आदर्श होना चाहिए (क) सभी शीशियों और समूहों में एक ही है, (ख)

एक आसानी से जल्दी से गिना जा सकता है कि संख्या, और (ग) अपेक्षाकृत चिकनी बेहोश करने की समय-पाठ्यक्रमों के लिए अनुमति देने के लिए एक बहुत बड़ी संख्या है। ग्यारह शीशी हमारी प्रयोगशाला में अच्छी तरह से काम करता है और एक सुझाव दिया प्रारंभिक बिंदु है / मक्खियों। विचार करने के लिए एक अंतिम पैरामीटर बेहोश करने की क्रिया assays में इस्तेमाल किया मक्खियों की उम्र है। 1-10 दिन पुराने मक्खियों में इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता पर उम्र का कोई प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रभाव (नहीं दिखाया डेटा) पाया गया है हालांकि, युवा उम्र से मिलान पशुओं के उपयोग के लिए लगता हैमक्खियों 29,30 में उम्र से संबंधित व्यवहार में बदलाव पर बड़े साहित्य दी उचित।

यहाँ वर्णित मापदंडों की श्रेणियों का उपयोग करते हुए नियंत्रण मक्खियों का परीक्षण जब अन्य मानकों में कम से कम, बेहोश करने की क्रिया assays में के रूप में महत्वपूर्ण नहीं लगती। सेक्स, दोहन की शक्ति, दोहन से वसूली समय है, और मक्खी एंटीबायोटिक दवाओं (एम्पीसिलीन, टेट्रासाइक्लिन और chloramphenicol) के साथ भोजन या जी खमीर की पूरकता यहाँ वर्णित के रूप में मापा इथेनॉल संवेदनशीलता को बदल नहीं है। इसी तरह, तीसरे क्रम बहुपद घटता, प्राथमिक बेहोश करने की समय-कोर्स डेटा से sigmoidal घटता से प्रक्षेप, या नीलामी के दृढ़ संकल्प से प्रक्षेप द्वारा इथेनॉल संवेदनशीलता quantitating अनिवार्य रूप से पृथक व्याख्याओं की ओर जाता है। सेक्स का कोई प्रभाव लगातार यहाँ वर्णित अध्ययन में देखा गया है, कई ड्रोसोफिला आनुवंशिक पृष्ठभूमि में इथेनॉल संवेदनशीलता पर सेक्स के प्रभाव 31 सूचित किया गया है। इस प्रकार, यह सेक्स प्रभाव थे कि संभव हैबस यहां इस्तेमाल किया आनुवंशिक w में विचरण [एक] पृष्ठभूमि से नकाबपोश। वैकल्पिक रूप से, यह ड्रोसोफिला में व्यवहार प्रतिक्रियाओं पर मापने सेक्स प्रभाव के रूप में अभी तक अज्ञात परख या विकास की स्थिति की आवश्यकता है कि संभव है। किसी भी मामले में, सिफारिश किसी भी समूह के लिंग सहित बेहोश करने की क्रिया assays के, में संभव के रूप में समान रूप में स्पष्ट रूप से तुलना की जा रही सभी मापदंडों बनाने के लिए है।

लाइव खमीर मक्खी भोजन में इथेनॉल की खासी मात्रा में उत्पादन को देखते हुए, यह जीना खमीर के साथ भोजन की पूरकता मक्खियों में आंतरिक इथेनॉल में वृद्धि नहीं था कि कुछ हद तक आश्चर्य की बात थी। एक संभावित व्याख्या यह इथेनॉल भोजन की सतह भर में समान रूप से उत्पादन किया है और इसलिए चुनिंदा कोई या इथेनॉल की अपेक्षाकृत कम मात्रा के साथ भोजन निगलना सकता है मक्खियों नहीं है। अतिरिक्त अध्ययन यह निष्कर्ष के लिए इस और अन्य संभावित व्याख्या को संबोधित करने के लिए आवश्यक हो जाएगा।

परख describ के लिए संशोधन की एक बड़ी संख्याएड यहाँ प्रयोग किया जा रहा है के लक्ष्यों के आधार पर संभव हो रहे हैं। उदाहरण के लिए, शीशियों की संख्या प्रत्येक शीशी में परीक्षण मक्खियों की संख्या, एकाग्रता और इथेनॉल की मात्रा, इथेनॉल जोखिम की अवधि का इस्तेमाल किया, एक प्रयोग में परीक्षण किया है, बेहोश करने की क्रिया आकलन, उम्र और मक्खियों के लिंग के बीच समय अंतराल का परीक्षण किया , बेहोश करने की क्रिया के लिए और मानदंडों सब एक व्यक्ति प्रयोगशाला की आवश्यकताओं के अनुरूप करने के लिए संशोधित किया जा सकता है। सिफारिश के शुरू में परख सीखने जब चार शीशियों में से एक या दो समूहों के साथ शुरू करते हैं और फिर इस परियोजना के लिए आवश्यक throughput प्रदान करता है कि शीशियों की संख्या का उपयोग करने के लिए पैमाने पर है। अप्रत्याशित रूप से कम या लंबी ST50s यह है कि परीक्षण मक्खियों संज्ञाहरण टाइम्स, संज्ञाहरण हे / एन से उबरने के लिए अनुमति दी गई थी (1-5 मिनट) कम करने के लिए किए गए सुनिश्चित करने के लिए अच्छा अभ्यास हो जाएगा, मनाया जाना चाहिए, कम से कम 10 दिन पुराने थे, गया शारीरिक रूप से, इथेनॉल समाधान द्वारा गीला नहीं थे निपटने के दौरान क्षतिग्रस्त नहीं है, और हरकत दोष नहीं था।

परख उपायों इथेनॉल बेहोश करने की संवेदनशीलता ही है और इसलिए बनाया गया है या इथेनॉल के लिए अन्य व्यवहार प्रतिक्रियाओं का आकलन करने के लिए अनुकूल नहीं है। मक्खियों में सभी ज्ञात इथेनॉल व्यवहार मानदंड की तरह, इस परख काफी हद तक सामान्य हरकत क्षमताओं को मक्खियों की आवश्यकता है और इसलिए का परीक्षण नहीं किया जाना चाहिए बिगड़ा हरकत के साथ जीनोटाइप। परख की एक और सीमा शीशी में इथेनॉल वाष्प की एकाग्रता संभवतः सेलूलोज एसीटेट प्लग से दवा volatilizes के रूप में लगातार बढ़ रहा है कि है। मक्खियों 'आंतरिक इथेनॉल सब में समय के साथ उत्तरोत्तर बढ़ जाता है हालांकि इथेनॉल व्यवहार assays मक्खी, यह मक्खियों को इथेनॉल वाष्प की एक निश्चित एकाग्रता पहुंचाने इस परख से परिणाम की स्थिरता में सुधार सकता है कि संभव लगता है। इथेनॉल वाष्प की एक निश्चित एकाग्रता देने के लिए एक विधि अभी तक परख यहाँ वर्णित पैमाने पर इस्तेमाल किया जा करने की अनुमति होगी कि पहचान नहीं की गई है।

इथेनॉल बेहोश करने की क्रियायहाँ वर्णित परख इथेनॉल संवेदनशीलता और तेजी से सहिष्णुता 18 का आनुवांशिक विश्लेषण के लिए अच्छी तरह से अनुकूल है। विकास पर्यावरण, आनुवंशिक पृष्ठभूमि, एकाग्रता और इथेनॉल की मात्रा, समय मक्खियों की राशि खाली भोजन शीशियों में खर्च करते हैं, और प्रयोग किया जाता मक्खियों की संख्या और उम्र सभी नियंत्रित किया जाना चाहिए। इन मानकों को पर्याप्त रूप से नियंत्रित कर रहे हैं मान लिया जाये, बेहोश करने की परख दोनों रिवर्स के लिए उपयुक्त हो सकता है और व्यवहार प्रतिक्रियाओं ड्रोसोफिला में इथेनॉल के लिए आणविक आधार की जांच कि आनुवंशिक दृष्टिकोण अग्रेषित करना चाहिए।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
food vials VWR 89092-772 narrow
Flugs Genesee/flystuff.com 49-102 narrow
silicone stopper Fisher Scientific 09-704-1l #4
ethanol Pharmaco-Aaper 111000200 200 proof

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Sandhu, S., Kollah, A. P., Lewellyn, L., Chan, R. F., Grotewiel, M. An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila. J. Vis. Exp. (98), e52676, doi:10.3791/52676 (2015).

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