Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

الأوكسجين الجلوكوز الحرمان وعودة التأكسج باعتبارها Published: May 7, 2015 doi: 10.3791/52699
Automatic Translation
1,2, 2, 1,2, 1,2
1Department of Surgery, Texas A&M University Health Science Center College of Medicine, 2Department of Surgery, Baylor Scott & White Health

Abstract

ومن المعروف نقص التروية ضخه (IR) إصابة تسهم إسهاما كبيرا في معدلات الاعتلال والوفيات المرتبطة السكتات الدماغية الإقفارية. وتمثل الحوادث الوعائية الدماغية الإقفارية 80٪ من كل السكتات الدماغية. سبب شائع للإصابة IR هو التدفق السريع للسوائل بعد انسداد مزمن / حاد في الدم والمغذيات والأكسجين إلى الأنسجة مما ادى الى تكوين الجذور الحرة.

ويتبع السكتة الدماغية التي كتبها حاجز الدم في الدماغ (BBB) ​​اختلال وظيفي وعائية المنشأ وذمة الدماغ. هيكليا، منعطفات ضيقة (TJS) بين الخلايا البطانية تلعب دورا هاما في الحفاظ على سلامة حاجز الدم في الدماغ (BBB). إصابة IR هو ضرر الثانوية في وقت مبكر يؤدي إلى استجابة التهابية غير محددة. الأكسدة والإجهاد الأيضي التالية التهاب يؤدي تلف في الدماغ الثانوي بما في ذلك نفاذية BBB وتعطيل تقاطع ضيق (TJ) النزاهة.

بروتوكول لدينا ويعرض في المختبر </ م> مثال على الحرمان من الأكسجين الجلوكوز وعودة التأكسج (OGD-R) على الخلايا البطانية دماغ الفئران TJ النزاهة وتشكيل الألياف الإجهاد. حاليا، يتم استخدام عدة تجريبية في النماذج الحية لدراسة آثار الإصابة IR. ولكن لديهم العديد من القيود، مثل التحديات التقنية في أداء العمليات الجراحية، الجينات الجزيئية تعتمد التأثيرات وصعوبة في دراسة العلاقات الميكانيكية. ومع ذلك، قد تساعد في المختبر نماذج في التغلب على كثير من تلك القيود. بروتوكول المعروضة يمكن استخدامها لدراسة مختلف الآليات الجزيئية والعلاقات الآلية لتوفير الاستراتيجيات العلاجية المحتملة. ومع ذلك، فإن نتائج الدراسات في المختبر قد تختلف من مستوى الدراسات المجراة وينبغي تفسيرها بحذر.

Introduction

تم العثور على نقص التروية ضخه (IR) إصابة أن يكون السبب كثرة من مختلف المضاعفات والوفيات الموهنة المرتبطة السكتة الدماغية، واحتشاء عضلة القلب، والصدمات النفسية، وأمراض الأوعية الدموية الطرفية وإصابات في الدماغ 1،2. إصابة IR في الأوعية الدماغية هو ضرر الثانوية في وقت مبكر مما يؤدي إلى الالتهاب و التورم 3. واحدة من المضاعفات الخطيرة التي تحدث نتيجة الأكسدة والإجهاد الأيضي التالية الالتهاب هو فقدان التوازن استتبابي مما يؤدي إلى تكوين الجذور الحرة، وتعديلات في حاجز الدم في الدماغ (BBB) ​​منعطفات ضيقة (TJS) والاوعية الدموية الدقيقة نفاذية 4،5.

حاليا، في النماذج الحية تستخدم لدراسة آثار إصابة IR على BBB تشمل وسط انسداد الشريان الدماغي (MCAO)، microembolism، وراثيا أو خروج المغلوب الحيوانات. ومع ذلك، كل له عيوبه والتقييدات التي ناقشها Hossmann 6. يستخدم MCAO نموذج لدراسة يالحظالخبر من التوتر الأكسدة والاختزال، والتغيرات في مجال الاتصالات صلي من BBB والتفاعل بين الدماغ والخلايا المناعية. ومع ذلك، فإنها تشكل تحديات تقنية مختلفة مثل الحاجة إلى إجراءات المجهرية الدقيقة والصعوبات فيها. Microembolism يكسر الفور أسفل BBB بينما استخدام المعدلة وراثيا أو خروج المغلوب الحيوانات لدراسة نقص التروية الدماغية قد يكون تحديات مثل التأثيرات التي تعتمد على الجينات الجزيئية في تشكيل احتشاء، والتغيرات في تشريح الأوعية الدموية ومتفاوتة وزن الجسم 6. وبالتالي، في المختبر نماذج من نقص التروية وجدت تزايد الاهتمام في الآونة الأخيرة يرجع ذلك أساسا إلى تطبيقها في إجراء الدراسات الميكانيكية للمخدرات. ومع ذلك، فإن نتائج الدراسات في المختبر قد لا تمثل تماما في الدراسة المجراة ويجب أن تفسر بحذر 6.

وقد أثر معاكس تركيزات الأكسجين المنخفضة على الطبقات الوحيدة الخلية البطانية ونفاذية الاوعية الدموية الدقيقةيدرسها اوجاوا 7. واستخدمت الخلايا البطانية الفئران الاوعية الدموية الدقيقة في الدماغ (RBMECs) لتطوير في المختبر BBB. وقد تم تكييف الحرمان من الأكسجين الجلوكوز وعودة التأكسج (OGD-R) تقنية الواردة في هذا البروتوكول من الدراسات التي زولويتا وآخرون وتشو وآخرون 8،9. عرضنا الخلايا البطانية الدماغ لOGD-R عن طريق وضعها في غرفة نقص الأكسجة / نقص الأكسجين تحتوي على 0٪ O 2، 5٪ CO 2 و 95٪ N 2. تم تقييم الخلايا في وقت لاحق لإجراء تعديلات في TJ النزاهة والإجهاد تشكيل الألياف باستخدام توطين المناعي ووضع العلامات رودامين phalloidin على التوالي. يتم تنفيذ تلطيخ المناعي للنطيقة النطيقة-1 (ZO-1) لتحديد سلامة TJ، كما ZO-1 هو غشاء السقالات المهم المرتبط بالبروتين TJ. يحدد وضع العلامات رودامين Phalloidin الأكتين الخيطية (و -actin) في الهيكل الخلوي الخلية، وهو مؤشر واضح على أكتين تشكيل الألياف التوتر في الخلايا البطانية.

<ص الطبقة = "jove_content"> الهدف من هذه الطريقة هو توفير نظرة ثاقبة تطوير OGD-R كما في المختبر نموذج IR لدراسة BBB الخلايا البطانية TJ النزاهة وتشكيل الألياف الإجهاد و الأكتين. فإن النتائج توفر معلومات حول مصير البروتين TJ، ZO-1 وتشكيل الألياف الإجهاد التالية OGD-R. وفهم هذه العلاقات إتاحة الفرصة لتحديد الآليات الجزيئية الكامنة التي يتم تشغيلها بعد OGD-R وتطوير الاستراتيجيات العلاجية المحتملة لتعزيز تعطل BBB بعد العلاج OGD-R.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. البذر من الخلايا البطانية

  1. الحصول على الثقافات الأولية في RBMEC من الكبار الفئران سبراغ داولي (أو الحصول عليها تجاريا).
  2. زراعة RBMECs في 100 سم فبرونيكتين (50 ميكروغرام / مل) أطباق بتري المغلفة باستخدام الفئران الدماغ المتوسط ​​نمو الخلايا البطانية. تغيير المتوسطة كل يومين، حتى يتم التوصل confluency.
  3. على الوصول إلى 80-90٪ confluency، وغسل بلطف الخلايا في 5 مل الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) التي تدور. ثم يتم فصل الخلايا عن طريق تعريضهم ل1 مل باب الحارة 0.25٪ trypsin- حمض ethylenediaminetetraacetic (EDTA) حل، معايرتها إلى 37 درجة مئوية.
  4. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة 2-5 دقائق حتى يتم فصل الخلايا وتفرقوا.
    ملاحظة: اضغط على طبق ثقافة لفصل الخلايا. عرض الخلايا تحت المجهر للتأكد من مفرزة كاملة من الخلايا من سطح الطبق.
  5. إضافة وسائط 5 مل الكامل إلى طبق بتري من أجل تحييد التربسين.ماصة من المتوسط ​​تحتوي على خلايا منفصلة وأنه جمع في أنبوب الطرد المركزي 15 مل. .
  6. أجهزة الطرد المركزي وسائل الإعلام التي تحتوي على الخلايا البطانية في 220 x ج لمدة 5 دقائق.
  7. نضح طاف والحفاظ على بيليه تحتوي على cells.Suspend بيليه إلى 3-5 العذبة مل دماغ الفئران المتوسطة نمو الخلايا البطانية عن طريق خلط بلطف صعودا ونزولا مع خلايا ماصة سيتم ثم تحسب باستخدام عداد الخلية الآلي أو عدادة الكريات.
  8. نقل تعليق الخلية في فبرونيكتين (50 ميكروغرام / مل) المكسوة مسبقا والمحمولة 8 نظام الشرائح غرفة معقمة بشكل جيد، 0.7 سم 2 / جيد مع كثافة البذر تتراوح ما بين 10،000-15،000 الخلايا لكل بئر. تنمو الخلايا عند 37 درجة مئوية حتى يتم تحقيق التقاء
    ملاحظة: للحصول على أداء البقع الغربية أو تجارب أخرى، وخلايا يمكن زراعتها في 10 سم أطباق زراعة الخلايا أو أطباق خاصة حسب ما تقتضيه التجربة.

2. الأوكسجين والجلوكوز الحرمان عودة التأكسج في المختبرنموذج

ملاحظة: لقد تم تكييف البروتوكول التالي من زولويتا وآخرون. 1997؛ وقال تشو H وآخرون. 2012 8،9.

  1. استخدام نظام زراعة الخلايا نقص الأكسجة لدراسة آثار من OGD-R على RBMECs في (انظر الشكل 1). إعداد ومعايرة نظام زراعة الخلايا نقص الأكسجة قبل البدء في التجربة، وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
  2. إزالة الشرائح غرفة متموجة (الخطوة 1.8) من C حاضنة 37 درجة. استبدال المتوسطة كاملة في الشريحة الغرفة مع غير المؤكسج، لا الجلوكوز، معدلة المتوسطة النسر Dulbecco و(DMEM) ووضعها في غرفة نقص الأكسجة مع 95٪، N 2 و 5٪ CO 2 لمدة 2 ساعة عند 37 درجة مئوية، لتمثل حالة OGD.
  3. نقل الخلايا إلى حاضنة مع O 2، 5٪ CO 2 95٪ عند 37 درجة مئوية، وقدمت مع دماغ الفئران الخلايا البطانية المتوسطة كاملة الطازجة واحتضان لمدة ساعة 1 آخر عند 37 درجة مئوية.
    ملاحظة: تمثل هذه الخطوة حالة عودة التأكسج.
  4. استخدام الشرائح الغرفة لتوطين المناعي ووضع العلامات رودامين phalloidin (انظر القسم 3).

3. المناعي توطين ZO-1 و F صفها -actin عن طريق الرودامين Phalloidin

  1. كشف الشرائح غرفة تحتوي على الطبقات الوحيدة RBMEC إلى 100 ميكرولتر من وسائل الإعلام أوبتي-MEM / انخفاض المصل / جيد لمدة 1 ساعة. تغسل الشرائح الغرفة 3 مرات في 100 ميكرولتر من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS، ودرجة الحموضة 7،0-7،2).
  2. إصلاح الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من بارافورمالدهيد 4٪ في برنامج تلفزيوني (الرقم الهيدروجيني 7،0-7،2) لمدة 15 دقيقة ويغسل الشرائح غرفة لمدة 3 مرات أكثر في برنامج تلفزيوني (الرقم الهيدروجيني 7،0-7،2).
  3. Permeabilize الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من 0.5٪ تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني، (درجة الحموضة 7،0-7،2) لمدة 15 دقيقة أخرى. منع مع 100 ميكرولتر من 2٪ ألبومين المصل البقري (BSA) في برنامج تلفزيوني لمدة ساعة. بعد هذه الخطوة إما خلايا وصمة عار / التسمية إما لZO-1 أو -و الأكتين.
    1. لالمناعي ستاining احتضان الخلايا مع الأجسام المضادة الأولية المضادة للأرنب ضد ZO-1 في 1: 150، الذي أعد في 2٪ BSA-PBS لO / N عند 4 درجات مئوية. غسل الخلايا 3 مرات في برنامج تلفزيوني، (درجة الحموضة 7،0-7،2). احتضان مع 100 ميكرولتر من فلوريسئين ثيوسيانات (FITC) -tagged المضادة للأرنب الضد الثانوية لمدة 1 ساعة على RT.
    2. لوضع العلامات رودامين Phalloidin، بعد حظر، كشف الخلايا إلى 100 ميكرولتر من رودامين phalloidin في 1:50 التخفيف، وأعد في 2٪ BSA-PBS، لمدة 20 دقيقة.
    3. غسل الخلايا من تلطيخ المناعي ووضع العلامات رودامين phalloidin في برنامج تلفزيوني، (درجة الحموضة 7،0-7،2). جبل الدوائر باستخدام وسائل الإعلام المتصاعدة التي تحتوي مكافحة تتلاشى كاشف مع دابي.
  4. تصور الخلايا باستخدام 60 X المياه عدسة غمر ويتم فحص الخلايا في طائرة البصرية واحدة تحت المجهر متحد البؤر.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

تعرض الخلايا المستزرعة على فبرونيكتين المكسوة مسبقا والمحمولة الشرائح غرفة نونك الثاني لOGD-R عن طريق وضع في نموذج 110 غرفة Biospherix ProOx. بعد إخضاع الخلايا لOGD-R، تم تجهيزها لZO-1 موصلي تلطيخ باستخدام تقنية المناعي كما هو مبين في الشكل (2) وتجميع هيكل الخلية مما يدل F-أكتين تشكيل الألياف الإجهاد باستخدام التسمية وصمة عار رودامين phalloidin كما هو مبين في الشكل (3). الخلايا التي كانت تحكم لم يتعرض OGD-R أظهرت سلامة صلي مستمرة بينما أظهرت الخلايا البطانية تعرض لOGD-R تقاطعات متقطعة، مما يدل على فقدان TJ سلامة الشكل 2. وأظهرت الخلايا السيطرة التي لم تخضع للعلاج OGD-R لا أو أدنى و الألياف الإجهاد -actin تشكيل بينما أظهرت الخلايا البطانية تعرض لOGD-R زيادة تكوين و الألياف الإجهاد -actin تشير إلى التغييرات في هيكل الخلية الأكتين التجمع الشكل (3). ممثل rint بإذن من المرجع # 13

الشكل 1
الشكل 1. تكوين نموذجي من نقص الأكسجة نظام ProOx نموذج 110. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

الرقم 2
الرقم 2. المناعي توطين البروتين مفرق ضيق (TJP) ZO-1 إظهار تعطيل منعطفات ضيقة التالية OGD-R في RBMECs، كما يتضح من السهام البيضاء. مقياس بار = 10 ميكرون. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الشكل.

"> الشكل (3)
الشكل 3. الرودامين Phalloidin وصفها لو تشكيل -actin الألياف الإجهاد إظهار التغييرات في هيكل الخلية الجمعية بعد OGD-R في RBMECs، كما يتضح من السهام البيضاء مقياس بار = 10 ميكرون. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

OGD-R لتكون نموذجا في المختبر لإصابة نقص التروية ضخه تم راسخة لدراسة الخلايا العصبية 10،11. هناك أيضا الدراسات التي تبين تأثير OGD على الخلايا البطانية الدماغ وتغييرات في النفاذية وTJ سلامة 9. ومع ذلك، تظهر دراستنا تأثير OGD وكذلك عودة التأكسج، وهو تمثيل أقرب للإصابة ضخه الدماغية في الجسم الحي في الظروف التي تحدث بعد السكتة الدماغية.

ومن المعروف أن ظروف نقص الأوكسجين الدماغية للحث على التهاب في الجهاز العصبي المركزي، مما يؤدي إلى BBB تعطل عن طريق زيادة نفاذية paracellular وذمة وعائية المنشأ (4). إصابة ضخه هي عملية معقدة جدا وحيوية، التي يوجد فيها إنتاج أنواع الاكسجين التفاعلية المفرط، ونضوب ATP، وارتفاع في البوتاسيوم خارج الخلية، وإطلاق سراح من الناقلات العصبية مثير، البطانية وتورم الخلايا العصبية، وتفعيل الخلايا المناعية. وهذا، بدوره جauses تفعيل مختلف مسارات التهابات، مما أدى إلى خلوى الإنتاج، وتحريض nucleases والبروتياز، مما أدى إلى وذمة، وكلها تظهر لتنشيط مختلف caspases، مما يؤدي إلى اختلال سلامة BBB 5،12. الخلايا البطانية عرضة بشكل خاص للإصابة الدماغية، وذلك بسبب وجود أعداد كبيرة من الميتوكوندريا. ترتبط الخلايا البطانية المجاورة لبعضها البعض من خلال منعطفات ضيقة تحتفظ بها البروتينات تقاطع ضيق.

يظهر ZO-1 للعب دورا هاما في الحفاظ على سلامة TJ من قبل تفاعلها مع غيرها من البروتينات مفرق ضيق و   الجمعية الأكتين هيكل الخلية. أيضا، والتنظيم الدقيق للأكتين الهيكل الخلوي هو أساسي للعديد من العمليات التنموية والفسيولوجية بما في ذلك التصاقات خلية خلية. في الخلايا البطانية، وجدت الأكتين تشكيل الألياف الإجهاد لتترافق مع ضعف الحاجز وفرط النفوذية 13،14. رودامين phalloiالدين تقنية وضع العلامات المستخدمة في هذه الدراسة لمراقبة تشكيل الألياف الإجهاد و الأكتين هو دراسة نقطة النهاية. ومع ذلك، والتصوير الديناميكي والمباشر لتشكيل ألياف الإجهاد يمكن أيضا أن يؤديها كما يتضح من دوجيت وبريسلين 15.

وتؤكد الدراسة الحالية مجورلي مساهمة ZO-1 نحو BBB سلامة تقاطع ضيق. ومع ذلك، وغيرها من الجزيئات تقاطع ضيق مثل claudin-5، occludin، جزيئات الالتصاق صلي (JAM) وغيرها، ويمكن أيضا أن تستخدم كعلامات لدراسة BBB ضيقة سلامة تقاطع التالية OGD-R. في هذه الدراسة، قمنا بتوظيف توطين المناعي ووضع العلامات و الأكتين كأسلوب النوعية لتحديد سلامة تقاطع ضيق. ومع ذلك، يمكننا أيضا دراسة الخصائص المهمة الأخرى من BBB مثل القياس الكمي للنفاذية باستخدام علامات الفلورسنت والمقاومة الكهربائية transendothelial (طير).

قدمت تقنية OGD-R في هذه الدراسة باستخداملا يمكن إلا أن نظام Biospherix استخدامها للدراسات نقص الأكسجين / نقص الأكسجين عند تركيز ثابت من الأكسجين. ومع ذلك، لا يمكننا أن نوظف هذا النظام لدراسة تأثير تركيزات الأكسجين متفاوتة على الخلايا البطانية. لدراسة الآثار المترتبة على تركيزات مختلفة من الأكسجين في الخلايا البطانية نحن بحاجة إلى توظيف النماذج الأخرى المتاحة مناسبة لهذا الغرض.

هذه التقنية يمكن استخدامها لدراسة العلاقات الميكانيكية بين مختلف الأحداث الخلوية والجزيئية التي تنظم BBB فرط النفوذية وسلامة TJ. وفهم لهم تقديم رؤية لتطوير استراتيجيات الجزيئية المختلفة للتخفيف BBB اضطراب ونفاذية الاوعية الدموية الدقيقة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

ونحن نعترف سكوت وبرنامج المنح البحثية مستشفى الأبيض للحصول على الدعم المالي وتكساس A & M مركز العلوم الصحية كلية طب المختبرات المتكاملة التصوير لاستخدام المجهر ليزر متحد البؤر. ونحن نعترف السيد غلين كراير للمساعدة في تحرير مخطوطة.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Proox model 110 Biospherix Model 110
DMEM, no glucose Gibco, Life technologies 11966-025
Rhodamine Phalloidin Life technologies R415
ZO-1 Rabbit Polyclonal Antibody Life technologies 617300
Nunc Lab Tek II-CC 8 well sterile, glass slides  Thermo scientific 177402
FITC-tagged anti-rabbit secondary antibody  Santa cruz sc-2090
DPBS 1X Thermo scientific SH 30028.03 Any other PBS available can be used

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Eltzschig, H. K., Eckle, T. Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation. Nat Med. 17 (11), 1391-1401 (2011).
  2. Kalogeris, T., Baines, C. P., Krenz, M., Korthuis, R. J. Cell biology of ischemia/reperfusion injury. Int Rev Cell Mol Biol. 298, 229-317 (2012).
  3. Yang, X., et al. Lycium barbarum polysaccharides reduce intestinal ischemia/reperfusion injuries in rats. Chem Biol Interact. 204 (3), 166-172 (2013).
  4. Kaur, C., Ling, E. A. Blood brain barrier in hypoxic-ischemic conditions. Curr Neurovasc Res. 5 (1), 71-81 (2008).
  5. Khatri, R., McKinney, A. M., Swenson, B., Janardhan, V. Blood-brain barrier, reperfusion injury, and hemorrhagic transformation in acute ischemic stroke. Neurology. 79 Suppl 1. (13), S52-S57 (2012).
  6. Hossmann, K. A. Experimental models for the investigation of brain ischemia. Cardiovasc Res. 39, 106-120 (1998).
  7. Ogawa, S., Gerlach, H., Esposito, C., Pasagian-Macaulay, A., Brett, J., Stern, D. Hypoxia modulates the barrier and coagulant function of cultured bovineendothelium. Increased monolayer permeability and induction of procoagulant properties. J Clin Invest. 85 (4), 1090-108 (1990).
  8. Zulueta, J. J., Sawhney, R., Yu, F. S., Cote, C. C., Hassoun, P. M. Intracellular generation of reactive oxygen species in endothelial cellsexposed to anoxia-reoxygenation. Am J Physiol. 272 (5 Pt 1), L897-L902 (1997).
  9. Zhu, H., et al. Baicalin reduces the permeability of the blood-brain barrier during hypoxia in vitro by increasing the expression of tight junction proteins in brain microvascular endothelial cells. J Ethnopharmacol. 141 (2), 714-720 (2012).
  10. Abramov, A. Y., Scorziello, A., Duchen, M. R. Three distinct mechanisms generate oxygen free radicals in neurons and contribute to cell death during anoxia and reoxygenation. J Neurosci. 27 (5), 1129-1138 (2007).
  11. Gundimeda, U., et al. Green tea polyphenols precondition against cell death induced by oxygen-glucose deprivation via stimulation of laminin receptor, generation of reactive oxygen species, and activation of protein kinase Cepsilon. J Biol Chem. 287 (41), 34694-34708 (2012).
  12. Mehta, S. L., Manhas, N., Raghubir, R. Molecular targets in cerebral ischemia for developing novel therapeutics. Brain Res Rev. 54 (1), 34-66 (2007).
  13. Alluri, H., et al. Reactive Oxygen Species-Caspase-3 Relationship in Mediating Blood-Brain Barrier Endothelial Cell Hyperpermeability Following Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation. Microcirculation. 21 (2), 187-195 (1111).
  14. Sun, H., Breslin, J. W., Zhu, J., Yuan, S. Y., Wu, M. H. Rho and ROCK signaling in VEGF-induced microvascular endothelial hyperpermeability. Microcirculation. 13 (3), 237-247 (2006).
  15. Doggett, T. M., Breslin, J. W. Study of the actin cytoskeleton in live endothelial cells expressing GFP actin. J Vis Exp. (57), (2011).

Tags

الطب، العدد 99، الحرمان من الأكسجين الجلوكوز وعودة التأكسج، إصابة نقص التروية، ضخه، حاجز الدم في الدماغ والخلايا البطانية الدماغ، منعطفات ضيقة، المناعي،
الأوكسجين الجلوكوز الحرمان وعودة التأكسج باعتبارها<em&gt; في المختبر</em&gt; الإسكيمية-ضخه من الإصابات نموذج لدراسة الدم في الدماغ الحاجز الجنسي لدى الرجال
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Alluri, H., Anasooya Shaji, C.,… More

Alluri, H., Anasooya Shaji, C., Davis, M. L., Tharakan, B. Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction. J. Vis. Exp. (99), e52699, doi:10.3791/52699 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter